專利名稱：一種桑葉主要活性成分的提取方法及其提取物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種桑葉主要活性成分提取的方法，及其提取物在防治糖尿病及其并發(fā)癥、肥胖和治療病 毒性感冒方面的應(yīng)用，屬于植物化學(xué)以及中藥現(xiàn)代化、糖尿病防治領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種以糖代謝紊亂為主要癥狀群的漸進(jìn)性的內(nèi)分泌病，基本病理生理是體內(nèi)胰島素分泌功能 相對(duì)不足或絕對(duì)不足或胰島素受體功能異常等原因，引起代謝紊亂，包括糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水及電解質(zhì) 等。 一般表現(xiàn)為高血糖、糖尿及高脂血癥，嚴(yán)重病例可發(fā)生酮性酸血癥，甚至循環(huán)衰減和昏迷而危及生命。 糖尿病共分四類，其中最多的II型糖尿病占糖尿病總數(shù)的90-95%。
活動(dòng)少、肥胖以及老齡化導(dǎo)致II型糖尿病快速增加。據(jù)報(bào)道，我國糖尿病患者在1993年為2.5 %， 1996 年3.21%， 1998年3.8%，上升到現(xiàn)在的5%以上，增長速度逐年加快。據(jù)估算，目前我國糖尿病患者已達(dá) 5000萬人，并以每年新增100萬人的速度增加。
桑葉是衛(wèi)生部公布的藥食兩用的中藥，在民間早有應(yīng)用，常用于和其他中藥組方治療消渴癥即糖尿病。 現(xiàn)代研究闡明了桑葉治療糖尿病的部分機(jī)理。由日本學(xué)者首先發(fā)現(xiàn)的桑葉中的多羥基生物堿具有和糖類似 的結(jié)構(gòu)，能夠可逆抑制小腸中的二糖水解酶-a-葡萄糖苷酶的活性，減緩葡萄糖進(jìn)入血液，降低餐后血糖。 這類生物堿具有和目前臨床使用的阿卡波糖類似的結(jié)構(gòu)和作用機(jī)理。同時(shí)，研究證明，a-糖苷酶抑制劑還 具有抗肥胖、抗病毒的治療作用。另外，有大量文獻(xiàn)報(bào)道黃酮、多糖和糖蛋白也具有降血糖的活性。綜合 已有研究成果，證明桑葉的主要活性成分是生物堿、黃酮、多糖。
公開號(hào)為CN1338275A的中國專利公開了 "具有a-糖苷酶抑制劑活性的中藥提取物、其制備方法及 用途"，該專利涉及了從中藥桑葉、桑枝、桑白皮和桑椹中制備總生物堿并用于糖尿病。公開號(hào)為 CN1250246C的專利公開了 "具有a-糖苷酶抑制活性的藥物組合物及其用途"，該專利涉及了中藥桑葉、 桑枝、桑白皮和桑椹中制備的總生物堿與外加的黃酮類化合物槲皮素、兒茶素及茶多酚的組合物在治療糖 尿病、高血脂、抗氧化和抗衰老藥物中的應(yīng)用。公開號(hào)為CN1850166A的專利公開了桑葉有效成分桑葉多 糖和桑葉生物堿組合物的制備方法，申請(qǐng)?zhí)枮镃N"1981814A的專利公開了 "一種桑葉提取物及其在制備糖 尿病藥物中的應(yīng)用和制備方法"涉及了從桑葉中提取總黃酮和總生物堿以一定比例混合后制備成為可防治 治糖尿病及其并發(fā)癥的制劑。公開號(hào)為CN1742803A公開了一種采用大孔吸附樹脂和陽離子交換樹脂連續(xù) 使用的方式來提取黃酮和生物堿。上述方法是近年來桑葉抗糖尿病成分有代表性的提取方法。但是，這些 方法存在一定的不足或者桑葉有效成分提取利用不完全，或者工藝過程較繁瑣，不能通過一次吸附分離 全部主要有效成分。
針對(duì)上述不足，我們發(fā)明了一種桑葉的高效、經(jīng)濟(jì)的提取方法，可通過一次提取過程，即將桑葉主要的活性成分生物堿、黃酮和多糖全部提取出來，而且只需要采用一種樹脂，工藝簡(jiǎn)單，成本低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所采取的方法是利用具有離子交換和吸附功能的大孔陽離子交換樹脂作為吸附劑來吸附有效 成分生物堿和黃酮，可一次性吸附該兩種活性成分，同時(shí)通過甲醇或乙醇沉淀獲得多糖。本發(fā)明只需要采 用一種樹脂，通過一次提取過程，就可達(dá)到以前使用兩種樹脂的效果，將桑葉的三類主要活性成分生物堿、 黃酮和多糖全部提取出來。樹脂的再生也更加省時(shí)省力。更不需要采用其他復(fù)雜、成本較高的工藝。整個(gè) 提取分離工藝除了甲醇或乙醇外，不使用其它易燃易爆的有機(jī)溶劑，無環(huán)境污染，安全無毒，利于規(guī)?；?提取生產(chǎn)。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采ffl了以下技術(shù)方案
1) 提取以桑葉為原料，用水或含水的乙醇或甲醇加熱提??；
2) 醇的回收用甲醇或乙醇水提取時(shí)，減壓回收甲醇或乙醇，得到含水的溶液；
3) 吸附水提取液通過大孔強(qiáng)酸型或弱酸型吸附和交換樹脂，活性成分被吸附在樹脂上。
4) 洗脫先用甲醇/水或乙醇/水溶液作洗脫劑，洗脫液濃縮得到黃酮類成分；然后用氨水洗脫，濃縮 得到生物堿類成分；
5) 步驟3)的樹脂通過液濃縮后用甲醇或乙醇沉淀，沉淀物即為多糖。
6) 將上述的黃酮、生物堿和多糖濃縮液混合后千燥，即得到桑葉的有效成分產(chǎn)品。 提取用的乙醇或甲醇的濃度，其范圍介于5-95%，用量為5-15倍。加熱溫度介于30-100°C。 所用的大孔吸附和交換樹脂，主要采用具有吸附和交換功能的強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂，如D72樹脂，
也可使用弱酸型大孔吸附樹脂。用量為原料重量的0.5-5倍。
洗脫用的乙醇或甲醇的濃度，其范圍介于10-95%,用量為l-10個(gè)柱體積。氨水的濃度介于0.5 /0-15%， 用量為l-10個(gè)柱體積。
干燥方法為真空干燥、噴霧干燥或冷凍干燥。
由上述方法制備而成的桑葉提取物，主要活性成分為從桑葉直接提取山的生物堿、黃酮和多糖組成， 而非另外加入的類似成分。該桑葉提取物不加輔料即可以直接作為沖劑使用；或者加入可食用的輔料，如 淀粉、微晶纖維素、糊精、蔗糖、乳糖、維生素C、擰檬酸和亞硫酸鈉中的任意一種或幾種，制備成片劑、 膠囊或口服液等劑型，作為藥品或功效食品用于防治糖尿病及其并發(fā)癥、防治肥胖癥和治療病毒性感冒。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，提取制備工藝簡(jiǎn)單，主要活性成分能一次全部得到，安全，易于操作，不需要高 溫高壓等特殊設(shè)備，成本低。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但是不局限于所列舉的例子。 實(shí)施例1桑葉10kg，剪碎，用水煮沸30分鐘提取2次，每次50L。提取液靜置冷卻到室溫，取上層清液通過 D72樹脂柱(柱體積10L)， 10L水洗后用20L乙醇洗脫，然后用1%的氨/乙醇水(含乙醇70%)溶液30L洗 脫。氨水乙醇洗脫液回收到無氨后，加入之前的20L乙醇洗脫液，回收至3L體積，得到流浸膏。
樹脂通過液蒸去大部分水至3L后，加入7L乙醇沉淀。離心除去上清液，與上面的流浸膏混合，真空 干燥，粉碎，得到黃色粉末300g，收率3%。
取桑葉提取物100g，加入淀粉3000g,微晶纖維素30g,以50%乙醇制粒，壓片得片劑，每片0.6g， 其中含提取物20mg，相當(dāng)于桑葉0.7g。
實(shí)施例2
桑葉10kg,剪碎，用50%乙醇/水煮沸30分鐘提取2次，每次50L。提取液濃縮回收乙醇后，加水100L 稀釋，然后通過D72樹脂柱(柱體積IOL)。按照實(shí)施例1所述的方式處理，得到黃色粉末400g，收率4%， 即為本發(fā)明所指的桑葉提取物。
上述桑葉提取物的a -葡萄糖苷酶抑制活性的測(cè)試
a -葡萄糖苷酶溶液用Wister大鼠的空腸制備，然后測(cè)定蛋白濃度。將桑葉提取物用水配制成0.05g/ml 的溶液備用。樣品組加空腸勻漿50nl、蔗糖50pl、備檢樣品50jxl (終濃度為5ng/nl)、 PBS50pl。陽性對(duì) 照用拜唐蘋，終濃度為0.5pg4U。另外設(shè)置一個(gè)空白組，其中的糖苷酶被高溫滅活。標(biāo)準(zhǔn)組其他成分相同， 只是不加樣品或拜糖蘋。上述每組平行作7管，準(zhǔn)備完畢后37'C孵育25分鐘。孵育結(jié)束后加入O.lmol/L 的Na2C03 200^1中止反應(yīng)。每管取樣50pl，按血糖檢測(cè)試劑盒提供的方法測(cè)定所生成葡萄糖的量。
抑制率=(1-(拜糖蘋組葡萄糖濃度-空白組葡萄糖濃度)/ (標(biāo)準(zhǔn)組葡萄糖濃度-空白組葡萄糖濃度) )X 100%
根據(jù)上面公式，計(jì)算得到實(shí)施例1和2提取物的a -葡萄糖苷酶抑制率分別為90%和88%。
權(quán)利要求
1. 一種桑葉提取方法，其特征在于只需要采用一種樹脂，通過一次提取過程，可將桑葉的三類主要活性成分生物堿、黃酮和多糖全部提取出來。
2、 一種全部提取桑葉生物堿、黃酮和多糖的方法如下1) 提取以桑葉為原料，用水或含水的乙醇或甲醇加熱提?。?) 醇的回收用甲醇或乙醇水提取時(shí)，減壓回收甲醇或乙醇，得到含水溶液；3) 吸附水提取液通過大孔強(qiáng)酸型或弱酸型交換樹脂，活性成分被吸附在樹脂上；4) 洗脫先用甲醇/水或乙醇/水溶液作洗脫劑，洗脫液濃縮得到黃酮類成分；然后用氨 水洗脫，濃縮得到生物堿類成分；5) 步驟3)的樹脂通過液濃縮后用甲醇或乙醇沉淀，沉淀即為多糖；6) 將上述的黃酮、生物堿和多糖混合干燥，即得到桑葉的有效成分產(chǎn)品。
3、 權(quán)利要求2中，提取用的溶液中乙醇或甲醇的濃度范圍介于5-95%，用量為5-15倍，加 熱提取溫度為30-100°C;洗脫用的乙醇或甲醇的濃度，其范圍介于10-95%，氨的含量介 于0.5%-15%。
4、 權(quán)利要求2中所用的大孔強(qiáng)酸型或弱酸型交換樹脂，主要采用具有吸附和交換功能的大孔 強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂，如D72樹脂，也可使用弱酸型大孔吸附樹脂。
5、 一種桑葉主要活性成分的提取物，通過權(quán)利要求2、權(quán)利要求3、權(quán)利要求4的方法得到， 其特征在于主要活性成分由從桑葉提取出的生物堿、黃酮和多糖構(gòu)成。
6、 通過權(quán)利要求2、權(quán)利要求3、權(quán)利要求4得到的桑葉提取物，可直接作為沖劑使用，也 可加入食用輔料如淀粉、微晶纖維素、糊精、蔗糖、乳糖、維生素C、檸檬酸和亞硫酸鈉 中的任意一種或幾種，作為制備防治糖尿病及其并發(fā)癥、防治肥胖和治療病毒性感冒的藥 品或功效食品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種桑葉主要活性成分的提取方法及其提取物用途，屬于植物化學(xué)以及中藥現(xiàn)代化、糖尿病防治領(lǐng)域。其特征在于只需要采用一種樹脂，通過一次提取過程，可將桑葉的三類主要活性成分生物堿、黃酮和多糖全部提取出來，工藝簡(jiǎn)單，成本低。其制備方法包括提取、吸附、洗脫、干燥等步驟。用這種方法制備的提取物，主要活性成分為從桑葉直接提取出的生物堿、黃酮和多糖組成。該提取物不加輔料即可作為沖劑直接使用，或者加入可食用的輔料，如淀粉、微晶纖維素、糊精、蔗糖、乳糖、維生素C、檸檬酸和亞硫酸鈉中的任意一種或幾種，作為藥品或功效食品用于防治糖尿病及其并發(fā)癥、防治肥胖癥和治療病毒性感冒。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101278977SQ20081002709
公開日2008年10月8日 申請(qǐng)日期2008年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月31日
發(fā)明者吳新榮, 孫澤群, 王明奎, 蔣琳蘭, 蔡紹暉 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院成都生物研究所;廣州潤興生物科技有限公司