專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種替曲朵辛(河豚毒素)藥品室溫穩(wěn)定的制造方法及其用途
背景技術(shù)：
：用替曲朵辛作為主要活性成分生產(chǎn)的注射用替曲朵辛制劑系從天然產(chǎn)物中開(kāi)發(fā)出的一種新藥。替曲朵辛(tetrodotoxin)，在化學(xué)結(jié)構(gòu)上屬于氨基氫化喹唑啉類(lèi)化合物，化學(xué)名為八氫-12-(羥甲基)-2-亞氨基-5,9:7,10a-二甲撐基-10a氫-[l,3]-二氧橋-[6,5-d]-嘧啶-4,7,10,ll,12-五醇。其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為替曲朵辛(TTX)替曲朵辛(TTX)最早是從河飩魚(yú)(FuguSpp)分離提取出。目前已知河飩目(Fugu)河飩科(Tetrodontidae),刺飩科(Triodntiadae)，翻車(chē)魚(yú)科(Molidae),三刺河飩科(Triodntiade)，幾乎所有近百種河飩魚(yú)中都含有替曲朵辛，除河飩目種的河飩魚(yú)外，也有報(bào)道蝦虎魚(yú)、蠑螈、箭毒蛙、章魚(yú)地、貝類(lèi)、螺類(lèi)、蟹類(lèi)、鱉類(lèi)、藻類(lèi)和菌類(lèi)等均有替曲朵辛(TTX)。從天然水生生物提取替曲朵辛國(guó)內(nèi)最早由中國(guó)人民解放軍藥物化學(xué)研究所完成，其提取工藝1982年獲得國(guó)家發(fā)明二等獎(jiǎng)[1]。目前已知替曲朵辛是自然界中存在不多的一種非蛋白質(zhì)神經(jīng)毒素之一，幾十年來(lái)它一直在神經(jīng)藥理學(xué)和肌肉生理學(xué)等研究領(lǐng)域中被廣泛使用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，替曲朵辛是一種高度選擇的神精細(xì)胞膜鈉離子通道阻斷劑。替曲朵辛的生物活性極強(qiáng)，平均體重50Kg的成人，肌肉注射300pg-500ng即可使人至死。也許正是因?yàn)樘媲湫翗O其強(qiáng)的毒性，才使它從發(fā)現(xiàn)到藥用經(jīng)過(guò)了100多年的歷程。從1993年起，發(fā)明人及所在的公司，就發(fā)現(xiàn)了替曲朵辛的戒毒[2]、鎮(zhèn)痛、排除人體內(nèi)抗生素殘留物[3]等藥用效果，現(xiàn)在己證實(shí)替曲朵辛是一種治療效果顯著，用藥安全的藥品。但是在研制替曲朵辛的制劑中，因?yàn)樘媲湫磷⑸湟簩?duì)溫度非常敏感，容易隨溫度升高而發(fā)生差向異構(gòu)體或降解反應(yīng)。所以目前研制的替曲朵辛注射用制劑，都不能保存在室溫下，而需要放在低溫4-6'C條件下保存，這給藥廠的生產(chǎn)、貯存、運(yùn)輸、裝卸、批發(fā)、零售和醫(yī)院、診所臨床上使用，增加了許多不方便。為了能更好的使用替曲朵辛藥品為人類(lèi)的健康做出貢獻(xiàn)，必須要研制出一種安全穩(wěn)定，室溫下能長(zhǎng)期貯藏的藥品制劑。本發(fā)明就是研制出了一種可以使替曲朵辛藥品在室溫下長(zhǎng)期保存的制劑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，使用本發(fā)明組合物生產(chǎn)的藥品制劑可以在室溫(40°C)以下長(zhǎng)期保存，不需要保存在冰箱中冷藏。為藥品的生產(chǎn)，貯存，運(yùn)輸和臨床、診所醫(yī)生用藥提供了極為方便使用的制劑。
發(fā)明內(nèi)容藥用替曲朵辛制劑，因?yàn)槠渖锘钚愿?，用量?.l-10(^g，所以均采用是注射劑型，這種注射劑，因?yàn)樘媲湫帘旧淼奈锢硖匦?，都必須使用有機(jī)酸及其鹽或者是緩沖液做助溶劑。在酸性或堿性條件下，替曲朵辛?xí)S溫度的升高而發(fā)生降解。從表l結(jié)果可以看出，替曲朵辛的枸櫞酸鹽溶液在40'C放置一個(gè)月后，替曲朵辛的含量開(kāi)始下降，有關(guān)物質(zhì)超過(guò)3.5%，到三個(gè)月后，其制劑中替曲朵辛標(biāo)示含量下降到90.3%，有關(guān)物質(zhì)超過(guò)9.0%。六個(gè)月后，其制劑中替曲朵辛標(biāo)示含量下降到88.1%，有關(guān)物質(zhì)超過(guò)11.7%。從表2結(jié)果可以看出，替曲朵辛的枸櫞酸鹽溶液在4'C放置三個(gè)月其制劑中替曲朵辛含量幾乎沒(méi)有變化，對(duì)比結(jié)果說(shuō)明替曲朵辛制劑的水溶液與溫度的變化有相關(guān)性。表l替曲朵辛枸櫞酸鹽溶液在4(TC穩(wěn)定性試驗(yàn)(061110)試驗(yàn)條件貯藏時(shí)間外觀檢'3(%)有關(guān)物質(zhì)(%)備注恒溫箱40'C0天一個(gè)月三個(gè)月六個(gè)月無(wú)色澄明液體無(wú)色澄明液體無(wú)色澄明液體無(wú)色澄明液體99.895.590.388.10.13.59.511.7HPLC測(cè)定外標(biāo)法<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>醫(yī)藥用替曲朵辛(tetrodotoxin河豚毒素)純度在85%-105%(標(biāo)示量)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)研究見(jiàn)本發(fā)明人專(zhuān)利CN2007101439995，是一種白色粉未或無(wú)定型結(jié)晶，熔點(diǎn)在220'C以上變黑，易溶于有機(jī)酸，如醋酸，枸櫞酸，酒石酸等，極微溶于水，不溶于有機(jī)溶劑，其毒性小鼠LDs。為7.0-10.0Pg/kg，在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿溶液中其化學(xué)結(jié)構(gòu)容易發(fā)生降解反應(yīng)，生成2-氨基-6-羥甲基-8-羥基喹唑啉或2-氨基-6-甲基喹唑啉。替曲朵辛在固態(tài)時(shí)是以(I)存在，可以室溫長(zhǎng)期保存，4(TC以下對(duì)其影響不大。但是將替曲朵辛溶解于酸性水溶液時(shí)，替曲朵辛的化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生互變異構(gòu)體，(II)是替曲朵辛的內(nèi)酯，(III)是替曲朵辛的4-表河豚毒素，(IV)是替曲朵辛的脫水產(chǎn)物，(V)是替曲朵辛的降解產(chǎn)物河豚酸，這些變化都是因?yàn)樘媲湫寥芤簩?duì)熱不穩(wěn)定衍變的。在制備替曲朵辛注射液或凍干粉制劑時(shí)，需要將替曲朵辛溶解成液體，這個(gè)過(guò)程中易發(fā)生替曲朵辛降解反應(yīng)。從替曲朵辛的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析在室溫條件下不穩(wěn)定是因?yàn)槠浠瘜W(xué)結(jié)構(gòu)中有容易發(fā)生差向異構(gòu)化的官能團(tuán)，如替曲朵辛結(jié)構(gòu)中4-位碳和6-位碳上的羥基容易發(fā)生差向異構(gòu)化使替曲朵辛轉(zhuǎn)變?yōu)?-表(III)和6-表河豚毒素或者在酸性水溶液條件下，4-表河豚毒素容易進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成4，9-脫水河豚毒素(IV)和河豚酸等衍生物(V)。0(IV)替曲朵辛在酸性溶液中的相互轉(zhuǎn)化(I)替曲朵辛，(II)河豚毒素內(nèi)酯，(III)4-表河豚毒素，(IV)4，9-脫水替曲朵辛，(V)河豚酸根據(jù)相似相溶的原理及立體結(jié)構(gòu)化學(xué)的構(gòu)象關(guān)系，同時(shí)考慮到醫(yī)藥上允許使用的藥用輔料原則，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)使用糖類(lèi)成分，如葡萄糖、果糖、乳糖、雙糖、多糖或氨基酸類(lèi)成分，如天冬氨酸、谷氨酸等藥用輔料和有機(jī)酸及其鹽的緩沖劑，如枸櫞酸與枸櫞酸鈉，枸櫞酸鹽，醋酸與醋酸鈉，醋酸鹽，硼酸與碳酸鈉，酒石酸與酒石酸鈉，磷酸鹽緩沖劑和醫(yī)藥用甘露醇共同組合制備替曲朵辛制劑，有顯著的穩(wěn)定替曲多辛的作用。表3，是使用乳糖、枸櫞酸及枸櫞酸鈉緩沖液和甘露醇作穩(wěn)定劑制成的注射用替曲朵辛冷凍干燥粉制劑，表4，是使用天冬氨酸((L-Aspartieacid)、枸櫞酸及枸櫞酸鈉緩沖液和甘露醇作穩(wěn)定劑制成的注射用替曲朵辛冷凍干燥粉制劑。從長(zhǎng)期穩(wěn)定性考査試驗(yàn)結(jié)果，可以得出的結(jié)論，使用本發(fā)明的組合物制成的替曲朵辛注射液可以在室溫條件下長(zhǎng)期保存。5表3乳糖甘露醇(1:1)和枸櫞酸及枸櫞酸鈉緩沖液制備注射用替曲朵辛制劑_長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究(061201)_試驗(yàn)條件lt藏時(shí)間外觀檢查有關(guān)物質(zhì)備注(%)(%)表4天冬氨酸、甘露醇(4%)和枸櫞酸及枸櫞酸鈉緩沖液制備注射用替曲朵辛制劑_H期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究(061202)_試驗(yàn)條件E:藏時(shí)間外觀檢査有關(guān)物質(zhì)備注(%)(%)表5，是使用乳糖、枸櫞酸及枸櫞酸鈉緩沖液和甘露醇作穩(wěn)定劑制成的替曲朵辛注射液制劑，表6，是使用谷氨酸、枸櫞酸及枸櫞酸鈉緩沖液和甘露醇作穩(wěn)定劑制成的替曲朵辛注射液制劑。從長(zhǎng)期考査實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，使用本發(fā)明組合物制成的注射用替曲朵辛制劑可以在室溫條件下長(zhǎng)期保存。表5乳糖甘露醇(1:1)和枸櫞酸及枸櫞酸鈉緩沖液制備替曲朵辛注射液制劑_長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究(061203)_試驗(yàn)條件ie藏時(shí)間外觀檢査Wl有關(guān)物質(zhì)備注(%)(%)白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末105.40.5103.20.7101.61,099.91,599.11.998.52.197.82.397.52.496.82.5恒溫(濕度65土5)o天白色塊狀或粉末106.50.2平均溫度25±2°Cl個(gè)月白色塊狀或粉末105.40.5平均溫度25土2'C2個(gè)月白色塊狀或粉末103.81.0平均溫度25±2°C3個(gè)月白色塊狀或粉末102.71.2平均溫度25±2°C4個(gè)月白色塊狀或粉末100.91.5平均溫度25±2°C5個(gè)月白色塊狀或粉末99.71.8平均溫度25±2'C6個(gè)月白色塊狀或粉末99.11.9平均溫度25±2'C9個(gè)月白色塊狀或粉末98.42.1平均溫度25±2°C12個(gè)月白色塊狀或粉末98.02,3白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末A色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末103,10.1102.40.4100.80.8100.11.299.81.599.51.998.12.297.42.497.02.6恒溫(濕度65士5)平均溫度25±2°C平均溫度25±2°C平均溫度25±2°C平均溫度25土2'C平均溫度25±2°C平均溫度25±2'C平均溫度25±2'C平均溫度25±2'C恒溫(濕度65士5)平均溫度25±2°C平均溫度25土2'C平均溫度25±2'C平均溫度25土2'C平均溫度25士2'C平均溫度25士2'C.平均溫度25士2'C平均溫度25±2°C定態(tài)法法法法法法法法BI夕夕夕夕夕夕夕夕定l法法法法法法法法L一16一不l不l不l不一不一A一不夕夕夕夕夕夕夕夕皿法法法法法法法法p夕夕夕夕夕夕夕外天月月月月月月月月5月月月月月月月月^個(gè)個(gè)個(gè)個(gè)個(gè)個(gè)個(gè)<123456921替曲朵辛注射液在室溫條件下不穩(wěn)定，在專(zhuān)利CN1568999A中對(duì)河豚毒素溶液的不穩(wěn)定性也有論述，該專(zhuān)利申請(qǐng)保護(hù)的是一種替曲朵辛與助溶劑有機(jī)酸和穩(wěn)定劑二糖的冷凍干燥粉制劑，該專(zhuān)利認(rèn)為加入單糖不穩(wěn)定，只有加入雙糖和聚糖可以提高替曲朵辛的穩(wěn)定性并研究了用河豚毒素藥品制成的冷凍干燥粉制劑。觀察了其在4(TC和12個(gè)月的長(zhǎng)期穩(wěn)定性，證明河豚毒素制成冷凍千粉后可以在室溫條件下長(zhǎng)期保存。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)使用有機(jī)酸溶解替曲朵辛加入乳糖或蔗糖無(wú)論是制備成凍干粉還是注射液制劑，在室溫條件下保存替曲朵辛制劑，效果不理想。其原因是單獨(dú)使用有機(jī)酸溶解替曲朵辛，在1^=3.0時(shí)加入乳糖后，有機(jī)酸容易與乳糖或甘露醇繼續(xù)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，從而導(dǎo)致藥品中的有關(guān)物質(zhì)增加，結(jié)果在一定時(shí)間內(nèi)藥品變?yōu)椴缓细癞a(chǎn)品，這是因?yàn)橛袡C(jī)酸如果不用緩沖液調(diào)節(jié)其酸性，其酸性容易使乳糖和甘露醇繼續(xù)發(fā)生降解，從而影響到替曲朵辛制劑的穩(wěn)定，對(duì)比實(shí)驗(yàn)見(jiàn)表7。在表ll列出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中配方1與配方4的對(duì)比研究中，也可以觀察出如果制劑僅僅加入有機(jī)酸和乳糖其穩(wěn)定性不如有機(jī)酸緩沖液。我們的研究發(fā)現(xiàn)要使替曲朵辛制劑在室溫下穩(wěn)定必須使用有機(jī)酸的緩沖劑再加入糖類(lèi)或氨基酸類(lèi)的藥用輔料和甘露醇共同按特定比例組合，才能達(dá)到在室溫條件下穩(wěn)定替曲朵辛的效果。用本發(fā)明的組合配方制備的制劑，無(wú)論是液體還是凍干粉在室溫條件下穩(wěn)定，室溫長(zhǎng)期保存仍然符合藥用要求，見(jiàn)表8-9。表7替曲朵辛有機(jī)酸與替曲朵辛有機(jī)酸緩沖液凍干粉制劑40'C高溫下穩(wěn)定性對(duì)比研究(061210)替曲朵辛20.cmg替曲朵辛10.OPg乳糖20mg乳糖20呢配方1枸櫞酸10.O^g配方2甘露醇20mg(濕度65士5'C)(裙度65±5'C)枸櫞酸21.OMg枸櫞酸鈉29.OUg檢査項(xiàng)目標(biāo)示量90-110《3%檢査項(xiàng)目標(biāo)示量90-110《3%考査考杳考査考查時(shí)間條件含量有關(guān)物質(zhì)時(shí)間條件含量有關(guān)物質(zhì)恒溫(%)(%)恒溫(%)(%)(天)天040。C108.40.30鄰'c106.50.4540°C97.63.5540。C101.21.51040°C93.25.41040'C99.8.9本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)注射用替曲朵辛制劑在室溫穩(wěn)定性的藥物組合配方的關(guān)鍵技術(shù)特征是使用有機(jī)酸緩沖液溶解替曲朵辛后再加入糖和甘露醇按(1:1)最佳比例，才能制備成一種室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛制劑或者使用有機(jī)酸緩沖液溶解替曲朵辛后再加入氨基酸和甘露醇(4-5%)也可以制備成一種室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛制劑，這種制劑可以是替曲朵辛注表6谷氨酸、tJ露醇(5%)和枸櫞酸及枸櫞酸鈉緩沖液制備替曲朵辛注射液制劑_長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究(061204)_試驗(yàn)條"Slt藏時(shí)間外觀檢査有關(guān)物質(zhì)備注(%)(%)白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色St狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末白色塊狀或粉末108.30.3107.40.5105.81.0104.71.2103.91.4102.01.6101.11.9100.42.1跳02.5恒溫(濕度65士5)(平均溫度25士2'C1平均溫度25士2'C2平均溫度25士2'C3平均溫度25士2'C4平均溫度25土2X:5平均溫度25士2。C6平均溫度25士2'C9平均溫度25土2'C12^法法法法法法法法g呢瑜術(shù)^浙JJ,L夕夕夕夕夕夕夕外F孑天月月月月月月月月射液或注射用替曲朵辛凍干粉制劑，見(jiàn)表10-11。從替曲朵辛(tetrodotoxin)的化學(xué)結(jié)構(gòu)中可以看出替曲朵辛有二個(gè)羥基是最不穩(wěn)定的官能團(tuán)，4-位碳和6-位碳上羥基，在酸性水溶液中，替曲朵辛(I)與(II)為互變差向異構(gòu)體；(II)與(III)為互變差向異構(gòu)體，如果隨溫度的升高，4-表河豚毒素(III)，會(huì)降解成4,9-脫水河豚毒素(IV)，4，9-脫水河豚毒素(IV)隨時(shí)間和溫度的變化會(huì)進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成河豚酸(V)。因此在制備替曲朵辛溶液制劑中，首先是要控制住4-位碳和6-位碳上的羥基不使其發(fā)生差向異構(gòu)化。我們對(duì)替曲朵辛立體結(jié)構(gòu)的分析后，發(fā)現(xiàn)糖中的醛羰基氧原子(R—^一R1)或雙糖中醚甙氧原子(gaf"0"9lu)和氨基酸上的羰基(Rf^—&)有穩(wěn)定4-位碳和6-位碳上的羥基不使其發(fā)生差向異構(gòu)化的作用，其原理是糖中醛羰基中的裸氧原子，有兩個(gè)負(fù)電子，氧原子上提供的兩個(gè)負(fù)電子與4-位碳上、6-位碳上的羥基和相鄰位上碳原子上的氫原子在溶液狀態(tài)下正好形成一個(gè)穩(wěn)定構(gòu)形式的6園環(huán)氫健，進(jìn)一步的觀察還可以看到在溶液狀態(tài)下，能與輔料形成6園環(huán)氫鍵的還有胍基上的氫原子。按本發(fā)明配方制備的制劑的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究，證明本發(fā)明中使用糖的醛羰基和氨基酸的羰基是穩(wěn)定替曲朵辛的最佳選擇物，見(jiàn)替曲朵辛與輔料形成6園環(huán)氫鍵的相互作用。替曲朵辛與輔料形成6園環(huán)氫鍵的相互作用本發(fā)明輔料與替曲朵辛組合制備的溶液制劑是以氫健形成的液體制劑，所用輔料能防止替曲朵辛結(jié)構(gòu)發(fā)生各種差向異構(gòu)化和降解反應(yīng)。同時(shí)它又不影響活性成分和輔料自身的活性作用，使用本發(fā)明的組合物無(wú)論是制備成注射用替曲朵凍干粉還是制備成替曲朵辛注射液，都能達(dá)到室溫穩(wěn)定替曲朵辛和藥品長(zhǎng)期保存的效果。本發(fā)明所述的一種室溫穩(wěn)定的替曲朵辛注射用制劑，即可以是注射液，也可以是注射用冷凍干燥粉，按照上述組合的方式制造成醫(yī)藥用替曲朵辛制劑，就是一種可以在室溫下長(zhǎng)期貯藏的藥品。本發(fā)明所述替曲朵辛為醫(yī)藥用其含量在85-105%(標(biāo)示量)，替曲朵辛也可以是替曲朵辛的衍生物，如4,9-脫水河豚毒素，河豚毒素內(nèi)酯，4-表河豚毒素，6-表河豚毒素，4,9-脫羥基河豚毒素，6-表-4,9-脫羥基河豚毒素，ll-脫氧河豚毒素，4-表-ll-脫羥基河豚毒素，8-0-半琥珀酸鹽河豚毒素，11-甘氨酸河豚毒素，11-去甲-6-表河豚毒素，河豚酸，氨基河豚毒素，甲基河豚毒素等。這類(lèi)活性成可以從生物中提取，如河飩目(Fugu)河飩科(Tetrodontidae),刺飩科(Triodntiadae)，翻車(chē)魚(yú)科(Molidae)，三刺河飩科(Triodntiade)，蝦虎魚(yú)、蠑螈、箭毒蛙、章魚(yú)地、貝類(lèi)、螺類(lèi)、蟹類(lèi)、鱉類(lèi)和藻類(lèi)等，也可以是人工合成物[5]或者是生物發(fā)酵提取物[61。本發(fā)明使用替曲朵辛或其衍生物及其鹽為活性成分，其余為藥用輔料的組合物有糖、甘露醇和枸櫞酸及其枸櫞酸鈉緩沖液或者是氨基酸、甘露醇和枸櫞酸及其枸櫞酸鈉的緩沖劑。其中糖可以選則，果糖，乳糖，雙糖和多糖等藥用輔料糖類(lèi)；氨基酸可以選則，L-或D-或DL-天冬氨酸，谷氨酸等藥用輔料氨基酸類(lèi)；緩沖液可以選則，有機(jī)酸緩沖劑，如枸櫞酸與枸櫞酸鈉，枸櫞酸鹽，醋酸與醋酸鈉，醋酸鹽，硼酸與碳酸鈉，酒石酸與酒石酸鈉，磷酸鹽緩沖劑和醫(yī)藥用甘露醇共同組合制備替曲朵辛制劑。本發(fā)明中藥用活性成份替曲朵辛每單位劑量為1-50化；糖類(lèi)的藥用輔料單位每劑量為10-50mg;有機(jī)酸和其鹽的緩沖劑每單位劑量為5-250化；醫(yī)藥用甘露醇每單位劑量為10-50mg或者藥用活性成份替曲朵辛每單位劑量為l-50Pg;氨基酸類(lèi)的藥用輔料每單位劑量為10-5004g;有機(jī)酸和其鹽組合的緩沖劑每單位劑量為5-250Pg;醫(yī)藥用甘露醇每單位劑量為40-60mg。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)在這種條件下，加入助溶劑后替曲朵辛水溶液的PH值正好是4.0-6.0之間，也是人體注射使用的最佳PH值。以上所述的室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛制劑，除用于治療人類(lèi)疾病，如戒除成癮類(lèi)藥物依賴(lài)癥[2]，鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜，麻醉，排除人體體內(nèi)抗生素藥物殘留物[3]等外，還可用于清除養(yǎng)殖生物、動(dòng)物體內(nèi)抗生素類(lèi)藥物的殘留物[6]及其毒素[7]。與現(xiàn)有技術(shù)相比，(1)替曲朵辛注射液必須在冷藏(4-6°C)條件下貯存，否則將會(huì)影響到替曲朵辛制劑的質(zhì)量，使產(chǎn)品達(dá)不到藥用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。這種條件下的制劑給生產(chǎn)，藥品運(yùn)輸，醫(yī)生用藥都帶來(lái)了極大不方便。(2)使用有機(jī)酸和輔料乳糖組合配制的凍干粉制劑，因?yàn)闆](méi)有控制酸性的有機(jī)酸仍然會(huì)破壞活性成分和輔料并不能不能保證替曲朵辛制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性和藥品安全性。本發(fā)明所取得的技術(shù)實(shí)質(zhì)性的進(jìn)步是1、科學(xué)合理的篩選出最佳組合物及其配比，使用有機(jī)酸緩沖液即解決了替曲多辛不溶解水的困難，又緩沖了酸對(duì)輔料或活性成分的破壞，加入糖或氨基酸類(lèi)藥用輔料又保證了替曲朵辛制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性。用本發(fā)明組合物配比生產(chǎn)的注射用制劑，可以在室溫條件下長(zhǎng)期貯藏，為工廠的生產(chǎn)，醫(yī)藥運(yùn)輸、批發(fā)，節(jié)約了成本。2、科學(xué)合理的組合物及配比，制備出室溫穩(wěn)定的注射液，其劑型可以是注射液或者是注射用凍干粉，為醫(yī)院、診所醫(yī)生用藥提供了可選擇的產(chǎn)品。3、用本發(fā)明組合物生產(chǎn)注射用替曲朵辛制劑，質(zhì)量穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，檢測(cè)分析快速靈敏，有工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的價(jià)值，可滿(mǎn)足社會(huì)的需求。實(shí)施方案一、注射用替曲朵辛制備工藝將替曲朵辛及其衍生物用枸櫞酸和枸櫞酸鈉緩沖液溶解后，加入乳糖或天門(mén)冬氨酸(80°C)和甘露醇后再加入注射用水到標(biāo)定量，用無(wú)菌過(guò)濾法滅菌，用緩沖液調(diào)PH值為4.0-6.5，HPLC法測(cè)替曲朵辛含量，當(dāng)其質(zhì)量符合制劑標(biāo)準(zhǔn)后，定量灌裝于西林瓶中，半加塞，凍干，升華，再干燥，壓塞、封口。即可得到室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛凍干燥粉制劑。1、注射用替曲朵辛凍干粉組合物配方替曲朵辛5.OMgB、替曲朵辛10.o化枸櫞酸10.5Mg枸櫞酸21.OMg枸櫞酸鈉14.5Pg枸櫞酸鈉29.0化蔗糖20rag乳糖20mg甘露醇20rag甘露醇20rag注射用水1.0-2.Oml注射用水1.0-2.00ml替曲朵辛10.04gD、替曲朵辛10.OPg枸櫞酸21.(mg枸櫞酸21.(￥g枸櫞酸鈉29.cmg枸櫞酸鈉29.OHg果糖甘露醇注射用水20mg20mg1.0-2.0mlL-天冬氨酸甘露醇注射用水lOOPg40mg1.0-2.00mlE、替曲朵辛10.O^g2i.cmg29.OKglOO^g40mgF、替曲朵辛10.O^g21.Ol^g29.O^g50mg枸櫞酸枸櫞酸鈉D-天冬氨酸甘露醇注射用水1.0-2.Oml枸櫞酸枸櫞酸鈉谷氨酸甘露醇注射用水1.0—2.00ml2、實(shí)施例2.1、取枸椽酸10.5mg和其鈉鹽14.5mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛5mg攪拌10min,加入蔗糖20g，甘露醇20g，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)PH值=6.0，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，105.5%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，4(TC預(yù)凍，從-40'C凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按替曲朵辛藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱(chēng)A配方。2.2、取枸櫞酸21mg和其鈉鹽29mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛10mg攪拌10min,加入乳糖20g,甘露醇20g，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)1^值=5.9，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，108.P/。，灌入2ml西林瓶，每瓶lml，半加塞，-40°(:預(yù)凍，從-4(TC凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按替曲朵辛藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考查，稱(chēng)B配方。2.3、取枸櫞酸210mg和其鈉鹽290mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛10mg攪拌10min,加入果糖200mg，甘露醇200mg，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)PH值=6.1，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，106.5%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，-40'C預(yù)凍，從-4(TC凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按替曲朵辛藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考查，稱(chēng)C配方。2.4、取枸櫞酸21mg和其鈉鹽29mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛10mg攪拌10min,加入L-天冬氨酸100mg,甘露醇40g，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)PH值=5.8，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，104.8%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，-40"預(yù)凍，從-40'C凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按替曲朵辛藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱(chēng)D配方。2.5、取枸櫞酸21mg和其鈉鹽29mg用注射用水lOOOml將其溶解，加入替曲朵辛10mg攪拌10min，加入D-天冬氨酸100mg,甘露醇40g，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)PH值=5.9,用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，101.5%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，-4(TC預(yù)凍，從-40。C凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按替曲朵辛藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考查，稱(chēng)E配方。2.6、取枸櫞酸21mg和其鈉鹽29mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛10mg攪拌10min,加入谷氨酸100mg,甘露醇50g，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)ffl值=5.8，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，103.2%，灌入2ml西林瓶，每瓶1.0ml，半加塞，-40°(:預(yù)凍，從-40'C凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按替曲朵辛藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱(chēng)F配方。A、B、C、D、E、F制劑穩(wěn)定性研究見(jiàn)表8c<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>替曲朵辛注射液制備工藝將替曲朵辛及其衍生物用枸櫞酸和枸櫞酸鈉緩沖液溶解后，加入糖或氨基酸(80°C)和甘露醇，再加入注射用水到標(biāo)定量，用無(wú)菌過(guò)濾法滅菌，用緩沖液調(diào)PH值為4.0-6.5,HPLC法測(cè)替曲朵辛含量，當(dāng)制劑符合其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，定量灌裝于安瓿瓶中，封口。即可得到室溫穩(wěn)定的替曲朵辛注射液制劑。替曲朵辛注射液組合物配方a、替曲朵辛枸橡酸枸櫞酸鈉蔗糖甘露醇注射用水5.0化10.5Pg14.5Pg20mg20mg1.0-2.0mlb、替曲朵辛枸櫞酸枸櫞酸鈉乳糖甘露醇注射用水10.Opg21.OPg29.OPg20mg20mg1.0—2.O(Mc、替曲朵辛枸櫞酸枸櫞酸鈉果糖甘露醇注射用水10.OPg21.OPg29.OPg20mg20mg1.0—2.Omld、替曲朵辛枸櫞酸枸櫞酸鈉L-天冬氨酸甘露醇注射用水10.0化21.OPg29.OPg100Pg40mg1.0-2.OOmle、替曲朵辛枸櫞酸枸櫞酸鈉D-天冬氨酸甘露醇注射用水10.OPg21.O^g29.OP10(￥g50mg1.0—2.Oml4、實(shí)施例4.1、取枸櫞酸10.5mg和其鈉鹽14.5mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛5mg攪拌10min，加入蔗糖20g，甘露醇20g，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)PH值=6.1，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，109.5%，灌入lml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱(chēng)a配方。4.2、取枸櫞酸21rag和其鈉鹽29mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛10mg攪拌10min，加入乳糖20g,甘露醇20g，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)1^值=5.8，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，105.W，灌入lml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱(chēng)b配方。4.3、取枸櫞酸21mg和其鈉鹽29mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛10mg攪拌10min,加入果糖20g,甘露醇20g，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)PH值二6.3，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，102.7%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考查，稱(chēng)c配方。4.4、取枸櫞酸21mg和其鈉鹽29mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛10mg攪拌10rain,加入L-天冬氨酸100mg，甘露醇40g，繼續(xù)攪拌15min，測(cè)TO值=5.5，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，101.8%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱(chēng)d配方。4.5、取枸櫞酸21mg和其鈉鹽29mg用注射用水1000ml將其溶解，加入替曲朵辛10mg攪拌10min,加入D-天冬氨酸100mg，甘露醇50g,繼續(xù)攪拌15min，測(cè)PH值5.6,用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)替曲朵辛含量，外標(biāo)法計(jì)算，106.9%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶1.0ml，封口按替曲朵辛注射液藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱(chēng)e配方。a、b、c、d、e制劑穩(wěn)定性研究見(jiàn)表9。表9替曲朵辛有機(jī)酸緩沖液注射劑制劑長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究(070102)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>按本發(fā)明實(shí)施的結(jié)果，證實(shí)用本發(fā)明配方生產(chǎn)的注射用替曲朵辛制劑，在室溫條件下貯存12個(gè)月后，其替曲朵辛的含量和有關(guān)物質(zhì)都符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，用本發(fā)明配方生產(chǎn)的制劑是一種室溫條件下可以長(zhǎng)期貯存的制劑。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>參考文獻(xiàn)河北漁業(yè)1982年(Z1)期，P49ZL95190556.2，DE69529156T2,EP0750909B1,RU2168331C2,US55846975A1CN200610168171Toxicon1985,23,271-276Y.Kishietc,J.Amer.Chem.Soc.，94，9217(1972).CN1552884ACN200610138719.7CN200610150511.權(quán)利要求1.一種室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物制劑，其特征在于它含有藥用活性成分河豚毒素(tetrodotoxin，中國(guó)藥典稱(chēng)為替曲朵辛)和醫(yī)藥用輔料糖或氨基酸、甘露醇、枸櫞酸和枸櫞酸鈉緩沖液組成。所述的替曲朵辛為醫(yī)藥用含量在85-105％(標(biāo)示量)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物制劑，其特征在于所述的替曲朵辛包括天然或者是人工合成的衍生物或修飾物河豚毒素內(nèi)酯，4-表或6-表河豚毒素，如4,9-脫水河豚毒素，6-表-4，9-脫水河豚毒素，河豚酸，氨基河豚毒素，甲氧基或乙氧基河豚毒素及其藥用鹽等。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物制劑，其特征在于組合物中使用的藥用輔料是含有糖類(lèi)成分，如葡萄糖、果糖、乳糖、雙糖、多糖和有機(jī)酸及其鹽的緩沖劑，如枸櫞酸與枸櫞酸鈉，枸櫞酸鹽，醋酸與醋酸鈉，醋酸鹽，硼酸與碳酸鈉酒石酸與酒石酸鈉，磷酸鹽緩沖劑和醫(yī)藥用甘露醇共同組合而成。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物制劑，其特征在于組合物中使用的藥用輔料是氨基酸類(lèi)成分，如D-或L-或DL-天冬氨酸(D-或L-或DL-Aspartieacid)、谷氨酸和有機(jī)酸及其鹽的緩沖劑，如枸櫞酸與枸櫞酸鈉，枸櫞酸鹽，醋酸與醋酸鈉，醋酸鹽，硼酸與碳酸鈉，酒石酸與酒石酸鈉，磷酸鹽緩沖劑和醫(yī)藥用甘露醇共同組合而成。5.根據(jù)權(quán)利要求1，3，所述室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物制劑，其特征在于藥用活性成份替曲朵辛每單位劑量1-5(Hxg;糖類(lèi)的藥用輔料每單位劑量10-50mg;有機(jī)酸和其鹽的緩沖劑每單位劑量5-250Pg;醫(yī)藥用甘露醇每單位劑量10-50mg。6.根據(jù)權(quán)利要求l，4所述室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物制劑，其特征在于藥用活性成份替曲朵辛每單位劑量l-50Pg:氨基酸類(lèi)的藥用輔料每單位劑量10-500jig;有機(jī)酸和其鹽組合的緩沖劑每單位劑量5-250Pg;醫(yī)藥用甘露醇每單位劑量40-60mg。7.根據(jù)權(quán)利要求1,3，4所述的室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物制劑，其特征在于這種組合物溶液的PH值為4.0-6.0。8.根據(jù)權(quán)利要求1-7所述的室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物制劑，其特征在于所述的替曲朵辛藥物制劑，可以制備成替曲朵辛注射用冷凍干燥粉末或注射液，制劑可以用于肌肉內(nèi)、皮下或者靜脈注射、滴注、透皮或者口服給藥等。9.一種如權(quán)利要求1-8所述的室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛制劑的制備方法，其特征在于(1)將替曲朵辛及其衍生物用枸櫞酸和枸櫞酸鈉緩沖液溶解后，加入糖或氨基酸(8(TC)和甘露醇，再加入注射用水到標(biāo)定量，用無(wú)菌過(guò)濾法滅菌，用緩沖液調(diào)？11值為4.0-6.0,測(cè)替曲朵辛含量，當(dāng)其質(zhì)量符合制劑標(biāo)準(zhǔn)后，定量灌裝于安瓿瓶中，封口。即可得到室溫穩(wěn)定的替曲朵辛注射液制劑。(2)將替曲朵辛及其衍生物用枸櫞酸和枸櫞酸鈉緩沖液溶解后，加入乳糖或天門(mén)冬氨酸(80'C)和甘露醇后再加入注射用水到標(biāo)定量，用無(wú)菌過(guò)濾法滅菌，用緩沖液調(diào)PH值為4.0-6.5，測(cè)替曲朵辛含量，當(dāng)其質(zhì)量符合制劑標(biāo)準(zhǔn)后，定量灌裝于西林瓶中，半加塞，凍干，升華，再干燥，壓塞、封口。即可得到室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛凍干燥粉制劑。10.根據(jù)權(quán)利9要求所述的一種室溫穩(wěn)定的注射用替曲朵辛組合物，其特征在于所述的藥用活性成分替曲朵辛制劑含有糖或氨基酸的藥用輔料、有機(jī)酸及其鹽組合的緩沖劑和醫(yī)藥用甘露醇共同組合成的藥物制劑，是用于治療人類(lèi)多種疾病，如戒除成癮類(lèi)藥物依賴(lài)癥，鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜，安眠，麻醉，排除人體體內(nèi)抗生素藥物殘留物或與其它類(lèi)藥物共同使用而增加其它藥物的療效等，還可用于清除養(yǎng)殖生物、動(dòng)物體內(nèi)抗生素類(lèi)藥物的殘留物及生物毒素。全文摘要本發(fā)明涉及替曲朵辛(河豚毒素Tetrodotoxin)及其衍生物藥品生產(chǎn)。特別是涉及替曲朵辛藥品制劑中穩(wěn)定性的組合物。本發(fā)明提供了一種使替曲朵辛類(lèi)成分在制劑產(chǎn)品中穩(wěn)定的制備方法，其制備方法是將替曲朵辛與有機(jī)酸緩沖液和藥典允許使用的輔料共同組合，按特定的比例制造出注射用替曲朵辛制劑。用本發(fā)明組合物的制造方法生產(chǎn)的注射用替曲朵辛制劑，可以在室溫條件下長(zhǎng)期貯存，解決了替曲朵辛制劑在室溫條件下不穩(wěn)定的問(wèn)題。文檔編號(hào)A61P25/36GK101554368SQ20081008891公開(kāi)日2009年10月14日申請(qǐng)日期2008年4月7日優(yōu)先權(quán)日2008年4月7日發(fā)明者邱芳龍申請(qǐng)人:深圳市宏錦天生物科技有限公司