專利名稱：：治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說，本發(fā)明是一種治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：小兒(0-14歲)外感咳嗽，主要是指西醫(yī)所稱急性氣管-支氣管炎，是小兒常見的一種呼吸系統(tǒng)疾病，約占兒科門診人數(shù)的70-80%。西醫(yī)認(rèn)為，本病是由病毒細(xì)菌感染、物理化學(xué)刺激或過敏反應(yīng)引起的氣管-支氣管粘膜急性炎癥反應(yīng)，以咳嗽、咳痰為主要癥狀；發(fā)病急，多見于寒冷季節(jié)或氣候突變之時或過度勞累之后，幼兒發(fā)病率高于成人[l]。第五次全國人口普查結(jié)果表明，我國0~14歲人口占總?cè)丝诘谋戎貫?2.89%，總數(shù)為29650萬人，據(jù)統(tǒng)計每10個兒童中就有1個患有咳嗽疾病。積極治療多于短期內(nèi)恢復(fù)，若遷延不愈或反復(fù)發(fā)作可演變成慢性支氣管炎，難以治愈。對該病的治療，西醫(yī)以對癥處理為主，如干咳者使用止咳藥，咯痰者使用祛痰劑，發(fā)熱、身痛者使用解熱鎮(zhèn)痛藥。如有細(xì)菌感染，酌用抗生素，而抗生素濫用又可引發(fā)耐藥性。加之兒童的臟器比較容易受損，故化學(xué)止咳藥、中西結(jié)合止咳藥與抗生素的過度使用對兒童危害較大。而中醫(yī)治療小兒外感咳嗽具有明顯優(yōu)勢對患兒進(jìn)行整體辨證，制定個體化治療方案，標(biāo)本兼治，療效顯著，藥性緩和，副作用小，藥效方面除了治療功能外還具有調(diào)養(yǎng)并促進(jìn)健康發(fā)育的營養(yǎng)功能，深受患兒及其家屬喜愛；但是目前小兒外感咳嗽治療多以自擬方、專方加減治療或中成藥治療，尚缺少系統(tǒng)基礎(chǔ)研究，且其證型復(fù)雜，難以準(zhǔn)確進(jìn)行辨證論治。因此，研制專門用于治療小兒外感咳嗽的中藥新藥是目前兒科呼吸系統(tǒng)疾病亟待解決的問題。針對上述目前小兒外感咳嗽治療現(xiàn)狀和存在問題，課題組以名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方為基礎(chǔ)，將中醫(yī)辨證與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)辨病相結(jié)合，研制出療效好、副作用少，服用方便、價格經(jīng)濟(jì)的小兒咳嗽治療藥物，從而滿足社會需求，并帶來較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題就在于克服現(xiàn)有治療兒童咳嗽的西藥效果不理想，而且有一定的副作用的缺陷，提供一種治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物及其制備方法，它治療兒童咳嗽療效顯著、純度高、副作用小。為解決上述問題，本發(fā)明釆用如下技術(shù)方案本發(fā)明一種治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物，它所含的活性成分的制備原料重量份配比為牛蒡子70130份、桑葉70130份、川貝母1545份、薄荷4080份、板藍(lán)根60120份、荊芥穗4080份、炒枳殼40~80份、前胡4080份、紫菀40120份、甘草2080份。優(yōu)選地，本發(fā)明所含的活性成分的制備原料重量份配比為牛蒡子IOO份、桑葉100份、川貝母33.3份、薄荷66.7份、板藍(lán)根83.3份、荊芥穗66.7份、炒枳殼66.7份、前胡66.7份、紫菀83.3份、甘草50份。本發(fā)明所述復(fù)方藥物通常為口服劑型，優(yōu)選劑型為糖漿劑。本發(fā)明同時公開了一種治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物的制備方法，它包括以下步驟a:薄荷、荊芥穗、炒枳殼、前胡揮發(fā)油的提??；b:牛蒡子等提取制備；c:川貝的提取制備d:成品藥的制備。本發(fā)明方法中所述揮發(fā)油的提取步驟為薄荷、荊芥穗、炒枳殼、前胡加6倍水，浸泡l小時，回流提取揮發(fā)油4小時，所得揮發(fā)油備用，蒸餾后的水溶液另器收集。本發(fā)明方法中所述牛蒡子等提取制備為a步，所得藥渣與牛蒡子等其余五味藥材加水10倍、8倍、8倍，煎煮3次，每次2小時、1.5小時、1.5小時，合并煎液，濾過；b步，濾液與a步水溶液合并，濃縮至相對密度為1.10-1.12(60~75°C)的清膏，放冷至室溫，邊攪拌邊緩緩加入乙醇，使含醇量達(dá)60%,靜置12小時，濾取上清液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.20-1.22(60~75°C)的清膏。5本發(fā)明方法中所述川貝提取步驟為川貝母粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法(中國藥典2005年版一部附錄I0)，用70%乙醇作溶劑，浸漬48小時后進(jìn)行滲漉，收集約0.84倍初漉液，另器保存，繼續(xù)滲漉，收集4倍滲漉液，濃縮至適量，加入初漉液，混合，繼續(xù)濃縮至每mL含lg藥材的流浸膏，備用。本發(fā)明方法中所述糖漿劑的制備步驟為所得清膏加入蔗糖液(蔗糖600g，加水300ml,煮沸30分鐘，再加入苯甲酸鈉lg,溶解)，混合均勻，濾過，濾液與川貝母流浸膏混合，放冷，加入含等量揮發(fā)油的乙醇溶液，隨加隨攪拌，加水至1000ml，攪勻，即得。本發(fā)明所述每毫升糖漿含牛蒡苷不得少于20.Omg。本發(fā)明藥物的服藥方法為口服。本發(fā)明中，牛蒡子，味辛苦，性寒，歸肺胃經(jīng)，具有疏散風(fēng)熱、透疹利咽、解毒消腫之功效。用于風(fēng)熱感冒，咽喉腫痛，麻疹不透，癰腫瘡毒，瘁腮喉痹。桑葉，味苦甘，性寒。歸肺、肝經(jīng)。功能疏散風(fēng)熱，清肺潤燥，平肝明目。用于風(fēng)熱感冒，頭痛咳嗽，肺熱燥咳，肝陽眩暈，目赤昏花，涼血止血。川貝母，味苦甘，性微寒。歸肺、心經(jīng)。功效清熱化痰，潤肺止咳，散結(jié)消腫。用于虛勞咳嗽，肺熱燥咳，瘰疬瘡腫及乳癰，肺癰。薄荷，味辛，性涼，歸肺肝經(jīng)。具有疏散風(fēng)熱，清利頭目，利咽，透疹，疏肝解郁之功效。用于風(fēng)熱感冒，溫病初起，頭痛目赤，咽喉腫痛，麻疹不透，風(fēng)疹瘙癢，肝郁氣滯，胸悶脅痛。板藍(lán)根，味苦，性寒，歸心、胃經(jīng)。具有清熱解毒、涼血利咽之功效。主要用于溫?zé)岵“l(fā)熱、頭痛、喉痛，或溫毒發(fā)斑、^腮、癰腫雍毒、丹毒，大頭瘟疫等多種熱毒熾盛之癥。荊芥，味辛，性微溫。歸肺、肝經(jīng)。具有祛風(fēng)解表，透疹消瘡，止血之功效。用于外感表證，感冒發(fā)熱，頭痛，咳嗽，咽喉腫痛，麻疹不透，風(fēng)疹瘙癢，瘡瘍初起有表證，吐衄下血。枳殼，味苦辛，性微寒。歸脾、胃、大腸經(jīng)。具有破氣除痞，化痰消積之功效。用于食積證、胃腸熱結(jié)氣滯證，痰滯胸脘痞滿，胸痹結(jié)胸。前胡，味苦辛，性微寒。歸肺經(jīng)。功能散風(fēng)清熱，降氣化痰。用于風(fēng)熱咳嗽，痰熱喘滿，咯痰黃稠。紫菀，甘潤苦泄，辛溫不燥，主于肺經(jīng)，長于潤肺下氣，開肺郁，化痰濁而止咳逆。甘草，味甘，性平。歸心、肺、脾、胃經(jīng)。具有益氣補(bǔ)中、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛與調(diào)和藥性之功?！侗静菡?甘草得中和之性，有調(diào)補(bǔ)之功，故毒藥得之解其毒剛藥得之和其性，表藥得之助其外，下藥得之緩其速隨氣藥人氣隨血藥人血，無往不可，故稱國老"。以上論述表明，上述諸藥合用，可有效治療小兒外感咳嗽之風(fēng)熱犯肺證型。本發(fā)明針對兒童咳嗽是屬風(fēng)熱犯肺者。癥狀表現(xiàn)為小兒外感咳嗽屬風(fēng)熱犯肺者。證見咳嗽不爽，痰黃粘稠，不易咯出，口渴咽痛，鼻流濁涕，伴有發(fā)熱頭痛，惡風(fēng)，微汗出，舌質(zhì)紅，苔薄黃，脈浮數(shù)。方用牛蒡子，桑葉，薄荷，荊芥穗，前胡共奏清熱宣肺、止咳化痰之功，紫菀，前胡，桑葉，牛蒡子，川貝清熱化痰，潤肺止咳，板藍(lán)根，牛蒡子利咽解毒，涼血止痛，佐積殼于前諸宣發(fā)藥中，能降肺氣，使肺氣條達(dá)。甘草調(diào)和諸藥為使。諸藥相伍，使上焦風(fēng)熱得以疏散，肺氣得以條達(dá)，則表證解，咳嗽止。本方乃滋而散者，滋而不膩，涼散而不寒遏，正中風(fēng)熱外襲肺衛(wèi)，內(nèi)客肺絡(luò)，灼傷津液而出現(xiàn)的咳嗽，痰白或黃，身熱諸癥。本發(fā)明化裁古方，組合成一種治療兒童咳嗽的中藥新藥，配伍精當(dāng)，作用確切，臨床療效顯著。本發(fā)明處方較小，生產(chǎn)工藝先進(jìn)，利于工業(yè)化生產(chǎn)。具體實(shí)施方式實(shí)施例1a:揮發(fā)油的提取薄荷80克、荊芥穗80克、炒枳殼80克、前胡80克，加1920mL水，浸泡l小時，回流提取揮發(fā)油4小時，得揮發(fā)油約1.6mL備用，蒸餾后的水溶液另器收集。b:牛蒡子等提取制備為a步所得藥渣與牛蒡子130克、桑葉130克、板藍(lán)根120克、紫菀120克、甘草8O克五味藥材加水9000mL、7200mL、7200mL水，煎煮3次，每次2小時、1.5小時、1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與a步水溶液合并，濃縮至相對密度為1.10~1.12(60~75°C)的清膏約964g,放冷至室溫，邊攪拌邊緩緩加入乙醇，使含醇量達(dá)60%,靜置12小時，濾取上清液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.20~1.22(60~75°C)的清膏約408g。c:川貝母提取步驟為川貝母45克粉碎成粗粉，用70%乙醇作溶劑，浸漬48小時后進(jìn)行滲漉，收集約38mL初漉液，另器保存，繼續(xù)滲漉，收集180mL倍滲漉液，濃縮至適量，加入初漉液，混合，繼續(xù)濃縮至45mL的流浸膏，備用。d:糖漿劑的制備步驟為b所得清膏加入蔗糖液(蔗糖600g,加水300ml,煮沸30分鐘，再加入苯甲酸鈉lg，溶解)，混合均勻，濾過，濾液與川貝母流浸膏混合，放冷，加入含等量揮發(fā)油的乙醇溶液，隨加隨攪拌，加水至1000ml,攪勻，即得。實(shí)施例2a-.揮發(fā)油的提取薄荷40克、荊芥穗40克、炒枳殼40克、前胡40克，加960mL水，浸泡l小時，回流提取揮發(fā)油4小時，得揮發(fā)油約0.8mL備用，蒸餾后的水溶液另器收集。b:牛蒡子等提取制備為a步所得藥渣與牛蒡子70克、桑葉70克、板藍(lán)根60克、紫菀40克、甘草20克五味藥材加水4200mL、3336mL、3360mL水，煎煮3次，每次2小時、1.5小時、1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與a步水溶液合并，濃縮至相對密度為1.10~1.12(60~75°C)的清膏約471g，放冷至室溫，邊攪拌邊緩緩加入乙醇，使含醇量達(dá)60%,靜置12小時，濾取上清液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.20~1.22(60~75°C)的清膏約199g。c:川貝母提取步驟為川貝母15克粉碎成粗粉，用70y。乙醇作溶劑，浸漬48小時后進(jìn)行滲漉，收集約12.7mL初漉液，另器保存，繼續(xù)滲漉，收集180mL倍滲漉液，濃縮至適量，加入初漉液，混合，繼續(xù)濃縮至15mL的流浸膏，備用。d:糖漿劑的制備步驟為b所得清膏加入蔗糖液(蔗糖600g,加水300ml,煮沸30分鐘，再加入苯甲酸鈉lg,溶解)，混合均勻，放冷，加入含等量揮發(fā)油的乙醇溶液，隨加隨攪拌，加水至1000ml，攪勻，即得。實(shí)施例3a:揮發(fā)油的提取薄荷66.7克、荊芥穗66.7克、炒枳殼66.7克、前胡66.7克，加1920mL水，浸泡l小時，回流提取揮發(fā)油4小時，得揮發(fā)油約1.3mL備用，蒸餾后的水溶液另器收集。b:牛蒡子等提取制備為a步所得藥渣與牛蒡子100克、桑葉100克、板藍(lán)根83.3克、紫菀83.3克、甘草50克五味藥材加水6834mL、5467mL、5467mL水，煎煮3次，每次2小時、1.5小時、1.5小時，合并煎液，濾過，濾液與a步水溶液合并，濃縮至相對密度為1.10-1.12(60~75°C)的清膏約766g,放冷至室溫，邊攪拌邊緩緩加入乙醇，使含醇量達(dá)60y。，靜置12小時，濾取上清液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.20-1.22(60-75°C)的清膏約324g。c:川貝母提取步驟為川貝母33.3克粉碎成粗粉，用70%乙醇作溶劑，浸漬48小時后進(jìn)行滲漉，收集約28mL初漉液，另器保存，繼續(xù)滲漉，收集133raL倍滲漉液，濃縮至適量，加入初漉液，混合，繼續(xù)濃縮至45mL的流浸膏，備用。d:糖漿劑的制備步驟為b所得清膏加入蔗糖液(蔗糖600g,加水300ml,煮沸30分鐘，再加入苯甲酸鈉lg,溶解)，混合均勻，濾過，濾液與川貝母流浸膏混合，放冷，加入含等量揮發(fā)油的乙醇溶液，隨加隨攪拌，加水至1000ml，攪勾，即得。實(shí)施例4本發(fā)明藥物的藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果1試驗(yàn)材料1.1試驗(yàn)動物KM小鼠，雌雄兼用；Wistar大鼠，雌雄兼用；青島市實(shí)驗(yàn)動物和動物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號SCXK魯20030010;豚鼠，雌雄各半，山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。1.2試驗(yàn)藥品受試藥小兒止咳糖漿，由青島海川創(chuàng)新生物天然藥物研究中心提供,批號050815。陽性對照藥兒童咳液，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號4154352。2試驗(yàn)內(nèi)容2.1小兒止咳糖漿止咳作用研究2.1.1小兒止咳糖漿對小鼠氨水引咳的影響1]2.1.1.1動物分組、給藥取KM小鼠50只，雌雄各半，體重(20±2)g,稱重標(biāo)記，按體重隨機(jī)分為常水組、兒童咳液組(陽性藥)及小兒止咳糖漿大、中、小劑量組，每組10只，各給藥組按表示1所示劑量灌胃給藥，其中，兒童咳液組劑量相當(dāng)于兒童臨床用藥量的8倍，小兒止咳糖漿大、中、小劑量組給藥劑量分別相當(dāng)于兒童臨床用藥量的16倍、8倍、4倍；常水組灌胃等量常水。每天灌胃l次，連續(xù)7天，各組動物飲食飲水不限。2.1.1.2指標(biāo)測定于末次給藥后lh，將小鼠置于500mL燒杯內(nèi)，以400mmHg恒壓降濃氨水(25-28°/。，NH3.H20)均勾的噴入燒杯內(nèi)，噴霧5s,觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。2.1.1.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7土s表示，以SPSSll.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。2.1.1.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表1。表l小兒止咳糖漿對小鼠氨水引咳的影響(I±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與常水組比較，'尸<0.05,"PO.Ol。結(jié)果顯示，與常水組比較，兒童咳液組小鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)差異均有顯著性意義(代O.05、代0.05);小兒止咳糖漿大劑量組小鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)差異均有顯著性意義(代O.01、代0.05);小兒止咳糖漿中劑量組小鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)差異均有顯著性意義(代O.05、代O.05);小兒止咳糖漿小劑量組小鼠咳嗽潛伏期、鼠咳嗽次數(shù)，差異無顯著性意義。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿大、中劑量對小鼠氨水引咳有較顯著的止咳作用，可以顯著延長小鼠咳嗽潛伏期，減少小鼠咳嗽次數(shù)。2.1.2小兒止咳糖漿對小鼠二氧化硫引咳的影響"2.1.2.1動物分組、給藥取KM小鼠50只，雌雄各半，體重(20士2)g,稱重標(biāo)記，按體重隨機(jī)分組、給藥(均同2.1.1)每天灌胃1次，連續(xù)7天，各組動物飲食飲水不限。2.1.2.2指標(biāo)測定于末次給藥后lh,將小鼠置于250mL廣口瓶內(nèi)，注入6mLS02致咳，觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。2.1.2.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7土s表示，以SPSSll.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。2.1.2.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表2。表2小兒止咳糖漿對小鼠S02引咳的影響(7±S)組別劑量動物數(shù)/只咳嗽潛伏期/s咳嗽次數(shù)/次常水組等體積1037.5±14.08924.4±7.027兒童咳液9.14mL.mL—11061.0土26.25r14.7土4.27(T大劑量"Sg-kg-11065.6士21.839"13.5±4,552**中劑量4.91g-kg"1054.7±21.187*15,1±6.262**小劑量2.46g-kg—11044.9±19.94716.4土7.245*注與常水組比較，><0.05,"PO.Ol。結(jié)果顯示，與常水組比較，兒童咳液組小鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)差異均有顯著性意義(代O.05、代0.01);小兒止咳糖漿大劑量組小鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)差異均有顯著性意義(代O.05、代0.01);小兒止咳糖漿中劑量組小鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)差異均有顯著性意義(代O.05、代O.05);小兒止咳糖漿小劑量組小鼠咳嗽次數(shù)差異有顯著性意義(代O.05)。11結(jié)果表明，小兒止咳糖漿對小鼠S02引咳有較顯著的止咳作用，可以顯著延長小鼠咳嗽潛伏期，減少小鼠咳嗽次數(shù)。2.2小兒止咳糖漿化痰作用研究2.2.1小兒止咳糖漿對小鼠氣管酚紅排泄的影響3]2.2.1.1動物分組、給藥取KM小鼠50只，雌雄各半，體重(20士2)g,稱重標(biāo)記，按體重隨機(jī)分組、給藥(均同2.1.1)每天灌胃l次，連續(xù)7天。2.2.1.2指標(biāo)測定于末次給藥前將小鼠禁食16h,末次給藥后30min小鼠腹腔注射2.5%酴紅生理鹽水溶液0.5mL,注射酚紅30min后將小鼠脫頸推處死，分離支氣管，于甲狀軟骨下處氣管軟骨間將磨平的7號針頭插入氣管內(nèi)約0.3cm,用絲線結(jié)扎固定，用lraL注射器如入lmL5y。NaHC(V溶液沖洗，然后吸出，再用5%NaHCOr溶液同上沖洗，如此反復(fù)三次，每次1mL,合并3次沖洗液，離心取上清液，于545nm下測定吸光度，根據(jù)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線計算酚紅排泄量。酴紅標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0273+0.14733x(y為酚紅濃度，x為吸光度，R=0.999)2.2.1.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以I土s表示，以SPSS11.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。2.2.1.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表3。表3小兒止咳糖漿對小鼠氣管酚紅排泄的影響(7±S)組別劑量動物數(shù)/只酴紅濃度/^g'mi;1常水組等體積100.0604±0.0165兒童喧液9.14mL-mL-1100.0730±0.0146大劑量9.83g-kg1100.0727±0.0150中劑量4.91g-kg1100.0712±0.0168小劑量2.46g.kg—1100.0780士0.0154"1注與常水組比較，><0.05。結(jié)果顯示，與常水組比較，兒童咳液、小兒止咳糖漿大劑量、小兒止咳糖漿中劑量組小鼠酚紅排泄量，差異無顯著性意義；小兒止咳糖漿小劑量可以顯著增加小鼠酚紅排泄量(代o.05)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿小劑量顯著增加小鼠氣管酚紅排泄量，有較好的化痰作用。2.2.2小兒止咳糖漿對大鼠氣管痰液分泌的影響4]2.2.2.1動物分組、給藥取Wistar大鼠40只，雌雄各半，體重(200士20)g,稱重標(biāo)記，按體重隨機(jī)分組(同2.1.1)，每組8只，各組大鼠按表4所示劑量灌胃給藥，其中兒童咳液灌胃劑量相當(dāng)于臨床兒童用藥的5倍，小兒止咳糖漿大、中、小劑量分別相當(dāng)于臨床兒童用藥的IO倍、5倍、2.5倍，常水組灌胃等量常水。每天灌胃l次，連續(xù)7天，各組動物飲食飲水不限。2.2.2.2指標(biāo)測定于末次給藥后lh，各組大鼠以戊巴比妥鈉(45ragkg—麻醉后仰位固定，解剖分離氣管，在甲狀軟骨下緣正中插入已知重量的毛細(xì)管使氣管分泌液沿毛細(xì)管上升，收集60min內(nèi)氣管分泌痰液量(以100g體重計)。2.2.2.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7士s表示，以SPSSll.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。2.2.2.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表4。表4小兒止咳糖漿對大鼠氣管痰液分泌的影響()組別劑量動物數(shù)/只痰液分泌量/xl0—3常水組等體積81.002±0.211兒童咳液5.71mL-mU181.156±0.220大劑量6.14g-kg"81.238±0.209*中劑量3.07g-kg-181,282±0.257*小劑量1.54g-kg—181.198±0.209注與常水組比較，><0.05。結(jié)果顯示，與常水組比較，小兒止咳糖漿大、中劑量組大鼠氣管痰液分泌量差異均有顯著性意義(代O.05、代0.05);小兒止咳糖漿小劑量組大鼠氣管痰液分泌量，差異無顯著性意義。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿大、中劑量顯著增加大鼠氣管痰液分泌量，有較好的化痰作用。2.3小兒止咳糖漿對磷酸組胺致豚鼠哮喘的影響512.3.1動物分組、給藥挑選體重為150-200g的豚鼠，雌雄兼用，將豚鼠放入噴霧裝置內(nèi)，以0.1%的磷酸組胺，恒壓噴霧，每只豚鼠接受噴霧50s,觀察2min內(nèi)豚鼠出現(xiàn)喘息抽搐的潛伏期，挑選潛伏期〈150S的豚鼠36只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將挑選出的合格豚鼠36只，隨機(jī)分為6組，每組6只，分組為常水組、氨茶堿組、兒童咳液組及小兒止咳糖漿大、中、小劑量組，按表6所示劑量灌胃給藥，其中常水組灌胃等量常水，氨茶堿及兒童咳液均相當(dāng)于兒童臨床劑量5倍，小兒止咳糖漿大、中、小劑量分別相當(dāng)于兒童臨床劑量10倍、5倍、2.5倍，每天灌胃1次，連續(xù)7天，各組動物進(jìn)食進(jìn)水不限。2.3.2指標(biāo)測定末次灌胃lh后噴霧引喘，觀察并記錄豚鼠從接受噴霧開始到抽搐趺倒的潛伏期，分別觀察記錄各組豚鼠的引喘潛伏期。2.3.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7士s表示，以SPSS11.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。2.3.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表5。表5小兒止咳糖漿對豚鼠哮喘的影響(Z±S)劑量動物數(shù)引喘潛伏期(組別藥前/只藥后常水組等體積683,833±23,59282.167±26,873氨茶堿0.15g-kg-1679.167±19.984143.833±44.161*兒童咳液5.71mL.mL-1682扁±22.83088.500±24.189大劑量6.14g-kg"676.833±21.63782.667±21.482中劑量3,07g'kg-'680.167±14.82590.167±35,454小劑量1.54由"679.000±24.51984.500±22.079注與常水組比較，><0.05。結(jié)果顯示，與常水組比較，小兒止咳糖漿對豚鼠引喘潛伏期差異無顯著性意義。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿對磷酸組胺致豚鼠哮喘無顯著平喘作用。2.4小兒止咳糖漿鎮(zhèn)痛作用研究2.4.1小兒止咳糖漿對熱板致痛小鼠痛閾的影響[6]2.4.1.1動物分組、給藥取熱板篩選合格雌性KM小鼠(55°C±0.5"C，5s-30s內(nèi)舔后足者)50只，體重(20±2)g,按體重隨機(jī)分組(同2.1.1),各組小鼠灌胃給藥前測定熱板痛閾值2次，取平均值作為基礎(chǔ)痛閾值，每天灌胃給藥l次，劑量同2.1.1,連續(xù)7天，各組小鼠進(jìn)食進(jìn)水不限。2.4.1.2指標(biāo)測定分別于末次給藥后30min、60min、90min測定各組小鼠熱板痛閾值1次，痛閾超過60s小鼠迅速取出以免燙傷，痛閾值以60s計。2.4.1.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7土s表示，以SPSS11.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn),比較差異顯著性。2.4.1.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表6。表6小兒止咳糖漿對熱板法致痛小鼠痛閾值的影響(I±S，n=10)組別劑量藥前痛閾值/s藥后30min/s藥后60min/s藥后90min/s常水組等體積14.636±5扁16.724±7.12712.559±3.57111.417±4.384兒童咳液9.14mL.mi;114.800±5.33117.925±3.36417.556±6,351*15.705±6.714大劑量9.83g-kg-115.027±5.16919.024±5.49316.172±4.27017.270±6.903*中劑量4.91g-kg"14.744±5.18115細(xì)±6.23716.764±6.46416.410±6.846小劑量2.46g-kg—114.868±4.83118.989±4,09416.794±5,167*11.458±4.403注與常水組比較，*尸<0.05。結(jié)果顯示，與常水組比較，兒童咳液組小鼠給藥后60min痛閾值差異有顯著性意義(代O.05);小兒止咳糖漿大劑量組給藥后90min痛閾值差異有顯著性意義(代O.05);小兒止咳糖漿小劑量組小鼠給藥后60min痛閾值差異有顯著性意義(代O.05)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿大、小劑量顯著延長小鼠熱板痛閾值，有較好的鎮(zhèn)痛作用。2.4.2小兒止咳糖漿對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響72.4.2.1動物分組、給藥取KM小鼠50只，雌雄各半，體重(20±2)g,按體重隨機(jī)分組(同前)，各組小鼠灌胃給藥或常水(劑量同前)，每天灌胃給藥l次，連續(xù)7天，各組動物進(jìn)食進(jìn)水不限。2.4.2.2指標(biāo)測定末次給藥后30min，各鼠腹腔注射O.6%醋酸0.lmL/10g，即刻觀察，記錄小鼠出現(xiàn)第1次扭體反應(yīng)的時間(即扭體潛伏期)及15min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)。2.4.2.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7土s表示，以SPSSll.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn),比較差異顯著性。扭體鎮(zhèn)痛率=(常水組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù))/常水組平均扭體次數(shù)xiooy。2.4.2.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表7。表7小兒止咳糖漿對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響(I±S)組別劑量動物數(shù)/只扭體潛伏期/s扭體/次鎮(zhèn)痛率/o/c常水組等體積10213.4±55.44439.7±12.667一兒童咳液9.14mL.mL-110251.5±74.28423.7±9.878*'40,3大劑量9.83g'kg-'10228.4±49.49826.1土10.713'34.3中劑量4.91g-kg"10227,5±61.84827.7±9,044*30.2小劑量2.46g-kg"10259.4±90.41021.0土10.424"47.1注與常水組比較，><0.05。結(jié)果顯示，與常水組比較，兒童咳液組小鼠扭體次數(shù)差異有顯著性意義(代O.05);小兒止咳糖漿大劑量、中劑量、小劑量組小鼠扭體次數(shù)差異均有顯著性意義(代O.05、代0.05、、線Ol)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿大、中、小劑量可顯著減少小鼠扭體次數(shù)，有較好的鎮(zhèn)痛作用。2.5小兒止咳糖漿抗炎作用試驗(yàn)2.5.1小兒止咳糖漿對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響"12.5.1.1動物分組、給藥取KM小鼠50只，雄性，體重(20士2)g,按體重隨機(jī)分組(分組同前)，各組小鼠灌胃給藥(劑量同前)，常水組灌胃等量常水，每天灌胃1次，連續(xù)7天。2.5.1.2指標(biāo)檢測末次灌胃給藥或常水lh后，各小鼠右耳前后兩面涂布0.02mL二甲苯致炎，4h后處死小鼠剪下雙耳以9mm(直徑)打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重，計算腫脹率。腫脹率=(右耳片重一左耳片重)/左耳片重2.5.1.3指標(biāo)檢測數(shù)據(jù)結(jié)果以7土s表示，以SPSSll.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn),比較差異顯著性。腫脹抑制率=(常水組平均耳腫脹率—給藥組平均耳腫脹率)/常水組平均耳腫脹率xiooy。2.5.1.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表8。表8小兒止咳糖漿對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(7±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注與常水組比較，**尸<0.01;與陽性藥比較A尸O.Q5。結(jié)果顯示，與常水組比較，小兒止咳糖漿大、中、小劑量組小鼠耳廓腫脹率差異均有顯著性意義(代O.01、代O.05、尸〈0.05);與陽性藥組相比，小兒止咳糖漿大劑量組小鼠耳廓腫脹率差異均有顯著性意義(代O.05)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿對二甲苯致小鼠耳廓腫脹具有較好的抑制作用。2.5.2小兒止咳糖漿對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)管通透性增高的影響912.5.2.1動物分組、給藥取KM小鼠50只，雌雄各半，體重(20±2)g,按體重隨機(jī)分組(分組同前)，各組小鼠灌胃給藥(劑量同前)，常水組灌胃等量常水，每天灌胃l次，連續(xù)7天，各組小鼠飲食飲水不限。2.5.2.2指標(biāo)檢測末次灌胃后lh，各組小鼠尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)0.lmL10g—1(以體重計)，隨即腹腔注射O.6%醋酸溶液0.lmL'10g—、20min后脫頸推處死，剪開腹部皮膚，用6mL生理鹽水分?jǐn)?shù)次洗滌腹腔，收集洗滌液，合并后加生理鹽水至10mL，以3000rpm離心15min,取上清液于分光光度計590nra處測定吸光度值。2.5.2.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7士s表示，以SPSSll.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。抑制率=(常水組平均吸光度值-給藥組平均吸光度值)/常水組平均吸光度值xiooy。2.5.2.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表9。表9小兒止咳糖漿對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)管通透性增髙的影響(I±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注與常水組比較，*尸<0.05,P<0.01。結(jié)果顯示，與常水組比較，兒童咳液組及小兒止咳糖漿大、中、小劑量組吸光度差異均有顯著性意義(均代G.01)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿可明顯降低醋酸所致的小鼠腹腔毛細(xì)管通透性增高，減少其炎癥滲出。2.5.3小兒止咳糖漿對角叉菜膠致小鼠足腫脹的影響[1°2.5.3.1動物分組、給藥取KM小鼠50只，雄性，體重(20±2)g按體重隨機(jī)分組(同前)。各組小鼠灌胃給藥(劑量同前)，常水組灌胃等量常水。每天灌胃1次，連續(xù)7天。各組小鼠飲食飲水不限。2.5.3.2指標(biāo)檢測末次灌胃給藥或常水后lh，每只小鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠(0.03mL/只)，4h后沿踝關(guān)節(jié)剪下左右兩側(cè)足，稱重，計算腫脹率和腫腫^度=(右足重一左足重)/左足重2.5.3.3數(shù)據(jù)處理結(jié)果以Z土s表示，采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。2.5.3.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表10。表io小兒止咳糖漿對角叉菜膠致小鼠足腫脹度的影響(T±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注與常水組比較，'代O.05;與兒童咳液組比較，AA0.05。結(jié)果顯示，與常水組比較，小兒止咳糖漿大劑量組小鼠足腫脹率差異有顯著性意義(代O.05);與兒童咳液組比較，小兒止咳糖漿大劑量組小鼠足腫脹率差異有顯著性意義(代O.05)。結(jié)果表明，小兒止咳大劑量糖漿可以顯著抑制角叉菜膠致小鼠足腫脹。2.6小兒止咳糖漿解熱作用試驗(yàn)2.6.1小兒止咳糖漿對新鮮啤酒酵母致大鼠發(fā)熱的影響[112.6.1.1動物分組、給藥取Wistar大鼠，雌雄各半，體重(200g±20)g,每日測體溫(肚溫)2次，連續(xù)3天，選取體溫波動不超過O.3'C的大鼠50只，分成5組，10只/組，以實(shí)驗(yàn)日測得的大鼠2次體溫的均值作為各組大鼠藥前基礎(chǔ)體溫，各組大鼠分組、給藥(同2.2.2)，每天1次，連續(xù)給藥7天，各組大鼠飲食飲水不限。2.6.1.2指標(biāo)檢測給藥第7天，藥前測量各組大鼠肛溫作為基礎(chǔ)體溫，然后各組大鼠背部皮下注射10°/。的新鮮啤酒酵母懸液3mL/kg致熱，致熱6h后灌胃給藥，分別于給藥后O.5h、lh、2h、4h、8h測量各組大鼠的體溫1次。2.6.1.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7士s表示，以SPSSll.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。2.6.1.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表11。表ll小兒止咳糖漿對新鮮啤酒酵母致大鼠發(fā)熱的影響(,n=io)組別藥前體溫/'c藥后0.5h/。C藥后lh/。C常水組37,740±0.46139.345±0.22439.214±0.220陽性藥37,777±0.48039.030±0.403'39.002±0.192*大劑量37.814±0.37239.020士0.388'38,859±0.28廣中劑量37.686±0.32639.112士0.260'38.955±0.305*小劑量37.805±0.37539.113±0.40738.978±0.252*注與常水組比較，*><0.05,"尸<0.01。續(xù)表11組別藥后2h/'C藥后4h/'C致熱8h/。C常水組38.911±0.28338.676±0.47038.348±0.325陽性藥38.673±0.37138.572±0.35638.282±0.436大劑量38.685±0,33138.305±0.232*38.245±0.229中劑量38.727±0.34638.437±0.30538.215±0.227小劑量38.767±0.26538.452±0.30938.287±0,301結(jié)果顯示，與常水組比較，陽性藥組大鼠給藥后0.5h、lh體溫差異均有顯著性意義(均代O.05);小兒止咳糖漿大劑量組給藥后0.5h、lh、4h體溫差異有顯著性意義(代O.05、代O.01、代O.05);小兒止咳糖漿中劑量組大鼠給藥后0.5h、lh體溫差異有顯著性意義(均代O.05);小兒止咳糖漿劑量組大鼠給藥后lh體溫差異有顯著性意義(代O.05)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿可以顯著抑制10%新鮮啤酒酵母致熱大鼠體溫升高，有較好解熱作用。2.6.2小兒止咳糖漿對2，4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱的影響[1212.6.2.1動物分組、給藥取Wistar大鼠，雄性，體重(200±20)g,每日測體溫(肛溫)1次，連續(xù)3天，實(shí)驗(yàn)日測體溫2次，選取體溫波動不超過O.3'C的大鼠50只，分成5組，10只/組，給藥(分組、給藥同2.2.2)。以實(shí)驗(yàn)日測得的大鼠2次體溫的均值作為各組大鼠藥前基礎(chǔ)體溫。連續(xù)灌胃7天，每天1次，各組大鼠飲食飲水不限。2.6.2.2指標(biāo)檢測末次灌胃給藥后lh，各組大鼠背部皮下注射O.15%2,4-二硝基苯酚溶液lmL/100g體重致熱，分別于致熱后O.5h、1.Oh、1.5h、2.Oh、2.5h、3h測量各組大鼠的體溫。2.6.2.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7土s表示，以SPSSll.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn),比較差異顯著性。2.6.2.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表12。表12小兒止咳糖漿對2，4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱的影響(7±S，n=10)組別基礎(chǔ)致熱0.5h致熱1.0h致熱1.5h/°C/。C/。C/°C常水組38.224±0.29239.030±0.23139.201±0.24939.076±0.184陽性藥38.202±0.26538.987±0.26639.111±0.29439.047±0.444大劑量38.200±0.20639.085±0.27439.023±0.23239,046±0.307中劑量38.264±0.37938細(xì)±0.33338.997±0,27338.821士0.180"小劑量38.298±0,30138.869±0.22338.768士0.26一38.772土0.242"注與常水組比較，'尸<0.05,"尸O.Ol，"'尸O.OOl。續(xù)表12組別致熱2.0h/。C致熱2.5h/'C致熱3.0h〃C常水組38.943±0.19038.728±0,26638.738±0.197陽性藥38.834±0.45738.776±0,37438,680±0.305大劑量38.753±0.22938.764±0,32838.663±0.339中劑量38.679±0.261*38.578土0.24438.509±0.307小劑量38.531±0.279***38.636±0,16638.640±0.127結(jié)果顯示，與常水組比較，小兒止咳糖漿中劑量組大鼠致熱后1.5h、2.0h體溫差異有顯著性意義(代O.01、線05);小兒止咳糖漿小劑量組大鼠致熱后l.Oh、L5h、2.0h體溫差異有非常顯著性意義(代O.OOl、代O.01、代O.001)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿中、小劑量可以顯著抑制2,4-二硝基苯酚致熱大鼠體溫升高。2.7小兒止咳糖漿的抑菌作用2.7.1小兒止咳糖漿的體外抑菌作用13]2.7.1.1最低抑菌濃度(MIC)的測定2.7.1.1.1藥物配制受試藥物小兒止咳糖漿制成0.256g/mL(生藥含量)的溶液，103.4kpa高壓滅菌20rain，藥液以試管二倍稀釋法用營養(yǎng)肉湯和10。/。小牛血清營養(yǎng)肉湯(培養(yǎng)乙型溶血性鏈球菌)稀釋為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25mg/mL10個不同濃度的藥液各2mL,另取肉湯對照、細(xì)菌對照、藥液對照，以上操作均在無菌條件下進(jìn)行。2.7.1.1，2原菌液制備分別取各菌株1金耳，接種于2mL的肉湯培養(yǎng)基中(鏈球菌、肺炎球菌接種于10°/。小牛血清營養(yǎng)肉湯中)，37'C恒溫培養(yǎng)24h。2.7.1.1.3MIC測定取各菌株的原菌液以滅菌生理鹽水稀釋至濃度約為107CFU/mL,分別取各細(xì)菌稀釋液0.lmL加入各自的10支藥液管及細(xì)菌陽性對照管中，各管37。C恒溫培養(yǎng)24h后，觀察細(xì)菌的生長狀況，培養(yǎng)后培養(yǎng)管呈現(xiàn)澄明，為無菌生長，出現(xiàn)渾濁，為有菌生長，以無菌生長的最低藥物濃度為最小抑菌濃度(MIC),結(jié)果見表13。_表13小兒止咳糖漿對細(xì)菌的MIC測定_菌株株數(shù)兒童咳液/mg，mL—1小兒止咳糖漿/mgTiiL—1MICMICMIC90MICMICMIC90鏈球菌臨床1032-6432-6449.1816-3216_3221.41標(biāo)準(zhǔn)13216金葡菌臨床1064-12864-12898.3616-3216_3224.59標(biāo)準(zhǔn)16416肺炎球菌臨床1032-6432-6452.7116-3216_3221.41標(biāo)準(zhǔn)13216綠膿桿菌臨床1064-12864-12885.6332-6432-6450.91結(jié)果顯示，小兒止咳糖漿對乙型溶血性鏈球菌的MIC為16-32mg.m1/1,MIC90為21,41mg'ml/1;小兒止咳糖漿對金黃色葡萄球菌的MIC為16-32mgmL-、MIC90為24.59mg.mL-、小兒止咳糖漿對肺炎球菌的MIC為16-32mg.mL—、MIC90為21.41mg.mL-、小兒止咳糖漿對綠膿桿菌的MIC為32-64mg.ml/1,MIC90為50.91mgmL_1。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿對乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、綠膿桿菌均有較好的體外抑制作用。2.7.1.1.4最低殺菌濃度(MBC)的測定測出MIC后，依次將未見細(xì)菌生長各管培養(yǎng)物分別吸取0.1ml加入2個瓊脂營養(yǎng)平皿(乙鏈球菌、肺炎球菌以血瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng))上，37。C培養(yǎng)18h，計數(shù)平皿上平均菌落數(shù)小于5個的最小藥物濃度即為最低殺菌濃度(MBC),結(jié)果見表14;22_表14小兒止喚糖漿MBC測定_菌株株數(shù)兒童咳液/mg'mL—1小兒止咳糖漿/n^mL—MBCMBCMBC90MBCMBCMBC90鏈球菌臨床1032_6432--6456.4916_3216-3224,76標(biāo)準(zhǔn)13216金葡菌臨床1064-12864-128109.9016-6416_6457.68標(biāo)準(zhǔn)16432肺炎球菌臨床1032-6432--6457.2816-3216-3227.47標(biāo)準(zhǔn)13216綠膿桿菌臨床1064-12864_128111.4332_6432_6458.08結(jié)果顯示，小兒止咳糖漿對乙型溶血性鏈球菌的MBC為16-32mg.mL—、MBC90為24.76mg.mL—、小兒止咳糖漿對金黃色葡萄球菌的MBC為16-64mg.ml/1,MBC90為57.68mgmL—、小兒止咳糖漿對肺炎球菌的MBC為16-32mg.mL—、MBC90為27.47mg.mL—、小兒止咳糖漿對綠膿桿菌的MBC為32—64mg.ml/1,MBC90為58.08mgmL—1。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿對乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、綠膿桿菌均有較好的體外殺滅作用。2.7.2小兒止咳糖漿的體內(nèi)抑菌作用[14]2.7.2.1試驗(yàn)菌株本試驗(yàn)共選用臨床分離菌株3種，乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌和肺炎球菌，均為青島巿巿立醫(yī)院的臨床菌株。2.7.2.2預(yù)試試驗(yàn)將乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌分別取l金耳接種于各自2mL肉湯培養(yǎng)基中，放37'C孵箱增菌18h后，以5%干酵母混懸液10倍倍比稀釋為10—'、10—2、10-3、10—4、10—5等不同的濃度，取KM小鼠，體重20±2g,雌雄兼有，每濃度組5只，每只腹腔注射0.5mL稀釋的菌液，觀察4天內(nèi)小鼠死亡狀況，實(shí)驗(yàn)治療選取使小鼠死亡率80-100%的菌液濃度感染。2.7.2.3試驗(yàn)治療取KM小鼠，雌雄各半，體重20士2g,隨機(jī)分組，每株細(xì)菌設(shè)5組，10只/組(分組給藥同2.1.1)，以預(yù)試選定的菌液濃度對小鼠腹腔注射0.5mL菌液感染，于注射細(xì)菌前一天灌胃給藥，上午、下午各一次，以及注射菌液后lh、6h分別灌胃給藥一次，然后觀察4天內(nèi)小鼠的死亡只數(shù)，計算死亡率、保護(hù)率，組間卡方檢驗(yàn)，結(jié)果見表15-17;保護(hù)率(％)=(常水組死亡率-給藥組死亡率)/常水組死亡率xiooy。表15小兒止咳糖漿對乙型溶血性鏈球菌感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)作用組別劑量動物數(shù)/只死亡數(shù)/只死亡率/%保護(hù)率/%常水等體積1010100一兒童咳液9.14mL-rnL-11066040.0大劑量9.83g-kg1104*4060.0中劑量4.91g-kg"105*5050,0小劑量2.46g-kg—1105*5050.0注與常水組比較，><0.05,"><0.01。結(jié)果顯示，與常水組比較，小兒止咳糖漿大、中、小劑量組死亡率差異均有顯著性意義(均代O.05)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿對乙型溶血性鏈球菌致小鼠體內(nèi)感染死亡有顯著保護(hù)作用。表16小兒止咳糖漿對金黃色葡萄球菌感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)作用組別劑量/g'kg-'動物數(shù)/只死亡數(shù)/只死亡率/%保護(hù)率/%常水等體積10990一兒童咳液9.14mL-mL—1105044.4大劑量9.83g-kg1103*3066.7中劑量4.91g-kg"1044055.6小劑量2,46g-kg"1055044.4注與常水組比較，><0.05,"PO.Ol。結(jié)果顯示，與常水組比較，小兒止咳糖漿大劑量組死亡率差異有顯著性意義(代O.05)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿大劑量對金黃色葡萄球菌致小鼠體內(nèi)感染死亡有顯著保護(hù)作用。表17小兒止咳糖漿對肺炎球菌感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)作用組另'J劑量/g'kg-1動物數(shù)/只死亡數(shù)/只死亡率/%保護(hù)率/%常水等體積10990一兒童咳液9.14mL-mL-11044055.6大劑量9.83g,kg-1103*3066.7中劑量4.91g-kg1105044.4小劑量2.46g,kg"1055044.4注與常水組比較，*><0.05,"尸O.Ol。結(jié)果顯示，與常水組比較，小兒止咳糖漿大劑量組死亡率差異有顯著性意義(剖.05)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿大劑量對肺炎球菌致小鼠體內(nèi)感染死亡有顯著保護(hù)作用。2.8小兒止咳糖漿對免疫作用影響試驗(yàn)2.8.1小兒止咳糖漿對小鼠單核吞噬細(xì)胞的影響""2.8.1.1動物分組給藥取KM小鼠50只，雌雄各半，體重(20士2)g,按體重隨機(jī)分組(同2.1.1),各組小鼠灌胃給藥或常水(劑量同2.1.1)，每天灌胃給藥l次，連續(xù)7天，各組動物進(jìn)食進(jìn)水不限。2.8.1.2指標(biāo)檢測各組小鼠于末次給藥后30min,每鼠尾靜脈注射10%印度墨汁生理鹽水液O.lmL/10g,分別于注射后2min、20min用定量毛細(xì)管由小鼠眼眶后靜脈叢取血20uL,滴于0.ly。的碳酸鈉溶液中搖勻，置紫外-可見分光光度計650nm處測吸光度A值，另以0.1%的碳酸鈉溶液做空白對照。處死小鼠，分別稱肝、脾重量，計算碳粒廓清指數(shù)K和校正碳粒廓清指數(shù)oc。K=(kgA「l。gA2)/(t廠t丄)，a=JT3x體重/(肝重+脾重)2.8.1.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以(I±s)表示，以SPSS11.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。2.8.1.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表18。表18小兒止晐糖漿對小鼠單核吞噬細(xì)胞的影響(7±S):<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>結(jié)果表明，與常水組比較，小兒止咳糖漿大組小鼠碳粒廓清指數(shù)K值和校正廓清指數(shù)a值差異有顯著性意義(代G.01、代Q.05)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿大劑量可以顯著提高小鼠碳粒廓清指數(shù)及校正廓清指數(shù)。2.8.2小兒止咳糖漿對小鼠血清溶血素的影響16]2.8.2.1動物分組、處理、給藥取KM小鼠50只，雌雄各半，體重20士2g，隨機(jī)分為5組(分組、給藥同2.1.1),第1天給藥后，各組小鼠腹腔注射5。/。生理鹽水雞紅細(xì)胞混懸液0.2raL進(jìn)行免疫，繼續(xù)給藥6天，各組動物進(jìn)食進(jìn)水不限。2.8.2.2指標(biāo)檢測末次給藥后lh,各組小鼠摘眼球取血，離心，取血清用生理鹽水稀釋100倍，取稀釋血清lmL，與5%雞紅細(xì)胞懸液0.5mL、10°/。補(bǔ)體0.5mL混合，在37'C恒溫箱中保溫30min后，(TC冰水中終止反應(yīng)，離心，取上清液于紫外-可見分光光度計540nm處比色，測吸光度，另設(shè)不加血清的空白對照，取其上清液做調(diào)零標(biāo)準(zhǔn)。2.8.2.3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)結(jié)果以7士s表示，以SPSS11.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析，組間t檢驗(yàn)，比較差異顯著性。2.8.2.4試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果見表16。平均提高率=(給藥組平均吸光度-常水組平均吸光度)/常水組平均吸光度x100%表16小兒止咳糖漿對小鼠溶血素水平的影響()組另'J劑量/g，kg-1動物數(shù)/只吸光度平均提高率/%常水等體積101.435±0.433—兒童咳液9.14mL.mL"101.553±0.4808.223大劑量9.83g-kg'101,893土0,360'31.916中劑量4.91g-kg-1101,804±0,309*25,714小劑量2.46g-kg—1101.787±0.38624.530注與常水組比較，><0.05,結(jié)果顯示，小兒止咳糖漿大、中劑量組與常水組比較，差異有非常顯著性意義(代O.05)。結(jié)果表明，小兒止咳糖漿大、中劑量可以顯著提高小鼠血清溶血素水平。本發(fā)明治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物，具有療效顯著、藥味少、純度高、副作用小的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明藥物的制備方法具有提取率高、純度高、搡作簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。26本發(fā)明不局限于上述最佳實(shí)施方式，任何人在本發(fā)明的啟示下得出的其他任何與本發(fā)明相同或相近似的產(chǎn)品，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1、一種治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物，其特征在于，它所含的活性成分的制備原料重量份配比為牛蒡子70～130份、桑葉70～130份、川貝母15～45份、薄荷40～80份、板藍(lán)根60～120份、荊芥穗40～80份、炒枳殼40～80份、前胡40～80份、紫菀40～120份、甘草20～80份。2、如權(quán)利要求l所述的治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物，其特征在，于它所含的活性成分的制備原料重量份配比為牛蒡子100份、桑葉100份、川貝母33.3份、薄荷66.7份、板藍(lán)根83.3份、荊芥穗66.7份、炒枳殼66.7份、前胡66.7份、紫菀83.3份、甘草50份。3、如權(quán)利要求l或2所述的治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物，其特征在于該藥物為藥劑學(xué)上的口服劑型。4、如權(quán)利要求3所述的治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物，其特征在于所述的口服劑型為糖漿劑。5、一種權(quán)利要求4所述的治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟a:薄荷、荊芥穗、炒枳殼、前胡揮發(fā)油的提取；b:牛蒡子等提取制備；c:川貝的提取制備；d:成品藥的制備。6、如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述揮發(fā)油的提取步驟為薄荷、荊芥穗、炒積殼、前胡加6倍水，浸泡1小時，回流提取揮發(fā)油4小時，所得揮發(fā)油備用，蒸餾后的水溶液另器收集。7、如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述牛蒡子等提取制備為a步，所得藥渣與牛蒡子等其余五味藥材加水10倍、8倍、8倍，煎煮3次，每次2小時、1.5小時、1.5小時，合并煎液，濾過；b步，濾液與a步水溶液合并，濃縮至相對密度為1.10-1.12(60~75°C)的清膏，放冷至室溫，邊攪拌邊緩緩加入乙醇，使含醇量達(dá)60%,靜置12小時，濾取上清液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.20-1.22(60~75°C)的清膏。8、如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述川貝母提取步驟為川貝母粉碎成粗粉，照流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，用70%乙醇作溶劑，浸漬48小時后進(jìn)行滲漉，收集約0.84倍初漉液，另器保存，繼續(xù)滲漉，收集4倍滲漉液，濃縮至適量，加入初漉液，混合，繼續(xù)濃縮至每mL含lg藥材的流浸膏，備用。9、如權(quán)利要求7或8所述的制備方法，其特征在于，所述糖槳劑的制備步驟為所得清膏加入蔗糖液，混合均勻，濾過，濾液與川貝母流浸膏混合，放冷，加入含等量揮發(fā)油的乙醇溶液，隨加隨攪拌，加水至1000ml，攪勻，即得。10、如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述每毫升糖漿含牛蒡苷不少于20.Orag。全文摘要本發(fā)明公開了一種治療兒童咳嗽的復(fù)方藥物及其制備方法，它所含的活性成分的制備原料重量份配比為牛蒡子70～130份、桑葉70～130份、川貝母15～45份、薄荷40～80份、板藍(lán)根60～120份、荊芥穗40～80份、炒枳殼40～80份、前胡40～80份、紫菀40～120份、甘草20～80份。它的制備方法包括以下步驟a薄荷、荊芥穗、炒枳殼、前胡揮發(fā)油的提??；b牛蒡子等提取制備；c川貝的提取制備d成品藥的制備。它治療兒童咳嗽療效顯著、純度高、副作用小。制備方法提取率高、純度高、操作簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號A61K36/8966GK101607032SQ200810100459公開日2009年12月23日申請日期2008年6月16日優(yōu)先權(quán)日2008年6月16日發(fā)明者朱鴻龍申請人:朱鴻龍