專利名稱：：桑根酮c的提取精制方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物化學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及桑根酮c(sanggenonC)的新活性，尤其涉及從桑白皮中提取和精制具有高效酪氨酸酶抑制活性的有效成分，及其在化妝品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：在人和動植物體內(nèi)，黑色素的生物合成都是發(fā)生在含有酪氨酸酶的一系列黑色素細胞中。酪氨酸酶(tyrosinase)是黑色素生物合成中必不可少的關(guān)鍵酶，黑色素細胞中的酪氨酸在酪氨酸酶的催化下，逐步生產(chǎn)多巴、多巴醌，最終形成黑色素(Robb,D.A.，1984.Co卯erProteinsandCopperEnzymes.CRCPress,Boraraton,FL,pp.207-241)。當酪氨酸酶的合成量和催化活力升高，體內(nèi)黑色素合成增多時，將導(dǎo)致皮膚色斑及黑色素瘤的形成。而通過抑制酪氨酸酶活性可以限制黑色素的形成，改善皮膚的色素沉著。為治療和預(yù)防黑色素過多而引發(fā)的皮膚病，各種各樣的酪氨酸酶抑制劑應(yīng)運而生。目前使用的酪氨酸酶抑制劑主要有對苯二酚(氫醌)、L-抗壞血酸(維生素C)、曲酸、超氧化物歧化酶(SOD)和熊果普等化合物。對苯二酚(氫醌)及其衍生物刺激性大，易引起皮膚過敏和引發(fā)皮膚色素異常癥等副作用；L-抗壞血酸(維生素C)、曲酸及其衍生物存在著化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，易變色，難于被皮膚吸收等缺陷；熊果苷作為一種天然的美白劑，得到了廣泛的應(yīng)用，但其對酪氨酸酶抑制且價格高。因此尋找有效且對人體無毒副作用的酪氨酸酶抑制劑已成為藥學(xué)和化妝品行業(yè)研究的趨向，具有良好的發(fā)展前景。桑白皮，別名桑根皮、白桑皮、根皮，系?？浦参飝J/ari^a/^9L.除去外皮的根皮。桑白皮性寒味甘，入肺、脾二經(jīng)，歷來具有降血壓、利尿利瀉、殺菌消炎、止咳、抗浮腫、鎮(zhèn)靜抗驚厥、降血糖、抗病毒、抗癌、抗氧化等作用。而在1996年，韓國學(xué)者發(fā)表了對近100種植物萃取物對酪氨酸酶的抑制作用的研究證實了桑科植物的有效性(LT.LEE.Biologicalscreeningof100plantextractsforcosmeticuse(I):inhibitoryactivitiesoftyrosinaseandD0PAauto-oxidation.InternationalJournalofCosmeticScience,1997,19:291-298.0),此后國內(nèi)外也進行了研究探討，但是都只局限于驗證酪氨酸酶抑制作用效果，關(guān)于桑白皮中主要的酪氨酸酶抑制效果最好的化合物還沒有確定和制備出來。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是在于提供一種桑根酮C的提取精制方法與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的桑根酮C的提取精致方法，包括以下步驟1)將桑白皮用50~80%的乙醇，于4070。C回流提取23次，得到的浸膏；2)用乙酸乙酯萃取浸膏2~4次，得到乙酸乙酯萃取物；3)將酸乙酯萃取物用體積比為8:92~15:85的曱醇和二氯曱烷混合液，作為洗脫劑進行硅膠柱層析分離，再經(jīng)制備色譜精制得到桑根酮C，具有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)式，經(jīng)高效液相色譜分析其純度在90%以上。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>本發(fā)明所提供的桑根酮C具有顯著的酪氨酸酶抑制活性，應(yīng)用于化妝品中。本發(fā)明確定了桑白皮中抑制酪氨酸最有效的成分桑根酮C;本發(fā)明提供的提取精制方法流程簡單，桑根酮c的純度達9oy。以上，具有顯著的酪氨酸酶抑制活性，運用于化妝品行業(yè)具有非常廣闊的發(fā)展前景。以下結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明作進一步描述。具體實施方式實施例I桑根酮c的提取和精制1)將5kg桑白皮用65°/。的乙醇在5(TC回流提取2次，得到1.2kg浸膏；.2)浸膏加水后用乙酸乙酯萃取兩次，得到38.5g乙酸乙酯萃取物；3)乙酸乙酯萃取物再用甲醇和二氯曱烷混合液作為洗脫劑進行硅膠柱層析分離，層析條件為曱醇和二氯曱烷(配比為8:92~15:85)進行梯度洗脫，得到7.23g高效酪氨酸酶抑制劑，經(jīng)制備色譜精制得到6.53g淡黃色粉末狀化合物，與FeCl廣EtOH顯紫紅色。紅外光譜(KBr壓片)顯示有羥基(3421.8cnT1),共軛羰基(1629.4cm-1)，環(huán)氧鍵(1261.lcnf1,799.lcm一1)，雙鍵(1680~1620cm—1處的吸收被羰基吸收峰掩蓋，838.7cm—0等特征吸收峰。紫外光譜顯示在220，230,280,305nm處有最大吸收。質(zhì)譜結(jié)果顯示分子離子峰m/z為708(M+)。以上數(shù)據(jù)和化合物"C-麗R、'H-麗R所示數(shù)據(jù)與已發(fā)表的文獻數(shù)據(jù)一致(No隨aT,FukaiT，HanoY,etal.StructureofSanggenonC,Anaturalhypotensivediels-alderadductfroraChinesecrudedrug"SANG-BAI-PI，，(morusrootbarks)[J].Heterocycles，1981，16(12):2141-2148.),鑒定其為桑根酮C。II桑根酮C對酪氨酸酶抑制活性的測定L-酪氨酸和酪氨酸酶為Sigma化學(xué)公司產(chǎn)品。i式馬會方法1)將桑根酮C用蒸餾水溶解，制成濃度為0.3mg/mL的溶液；2)按表1準確吸取桑根酮C溶液、磷酸鹽緩沖溶液(0.05M，pH=6.8)和濃度為0.lmg/ml的L-酪氨酸溶液(L-酪氨酸作為底物)，充分混合，加入酪氨酸酶溶液(70U/mL)，于37。C水浴中保持lOmin后，在475nm處測定吸光度，共進行4組試驗；63)利用4組反應(yīng)液的吸光度，按下式計算酪氨酸酶的相對抑制率I(W,結(jié)果如表2所示。IU)=1-(C-D)/(A-B)，(A、B、C、D為各對應(yīng)溶液體系在475nm下的吸光度值)。以熊果苦對酪氨酸酶抑制活性為對比熊果苷對酪氨酸酶抑制活性的測定同步驟1)、2)和3)，其對酪氨酸酶的相對抑制率1(%)如表2所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表1溶液體系組成表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2酪氨酸酶抑制活性m桑根酮c的新活性在化妝品中的應(yīng)用美白護月夫霜1)按處方進行備料桑根酮C:0.15g(純度大于90%)硬脂酸15g鯨蠟醇6.5g羊毛酯1.5g丙二醇20g三乙醇胺lg十二烷基硫酸鈉0.8g對羥基苯曱酸乙酯0.15g蒸餾水100ml2)取羊毛酯、鯨蠟醇和硬脂酸混合，置于燒杯中加熱熔化，得到油相；3)取桑根酮C、丙二醇、三乙醇胺、十二烷基硫酸鈉、對羥基苯曱酸乙酯和蒸餾水混合，置于燒杯中加熱溶解，得到水相；4)在7(TC左右，邊攪拌邊將油相加到水相中，攪拌至冷凝，即得美白護膚霜。最后應(yīng)說明的是以上實施例僅用以說明本發(fā)明而并非限制本發(fā)明所描述的技術(shù)方案；因此，盡管本說明書參照上述的實施例對本發(fā)明已進行了詳細的說明，但是，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，仍然可以對本發(fā)明進行修改或等同替換；而一切不脫離發(fā)明的精神和范圍的技術(shù)方案及其改進，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當中。權(quán)利要求1、一種桑根酮C的提取精致方法，其特征在于，包括以下步驟1)將桑白皮用50～80％的乙醇，于40～70℃回流提取2～3次，得到的浸膏；2)用乙酸乙酯萃取浸膏2～4次，得到乙酸乙酯萃取物；3)將酸乙酯萃取物用體積比為8∶92～15∶85的甲醇和二氯甲烷混合液，作為洗脫劑進行硅膠柱層析分離，再經(jīng)制備色譜精制得到純度為90％以上的桑根酮C。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑根酮C的應(yīng)用，其特征在于，桑根酮C作為酪氨酸酶抑制劑應(yīng)用于化妝品中。全文摘要桑根酮C的提取精制方法及其應(yīng)用屬于藥物化學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域?，F(xiàn)有酪氨酸酶抑制劑存在刺激性大、有副作用、化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定、皮膚不易吸收，價格高等問題。本發(fā)明通過將桑白皮用50～80％的乙醇，于40～70℃回流提取2～3次，得到的浸膏，再用乙酸乙酯萃取浸膏2～4次；萃取物用體積比為8∶92～15∶85的甲醇和二氯甲烷混合液，作為洗脫劑進行硅膠柱層析分離，再經(jīng)制備色譜精制得到具有抑制酪氨酸活性的，純度為90％以上的桑根酮C。本發(fā)明確定了桑白皮中抑制酪氨酸最有效的成分桑根酮C，通過本發(fā)明方法提取精制的桑根酮C純度為90％以上，具有顯著的酪氨酸酶抑制活性，運用于化妝品行業(yè)具有非常廣闊的發(fā)展前景。文檔編號A61K8/30GK101565422SQ20081010497公開日2009年10月28日申請日期2008年4月25日優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日發(fā)明者爽吳,袁其朋申請人:北京化工大學(xué)