一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法，包括如下具體步驟：豆?jié){樣品離心取上清液，經(jīng)濾膜過濾后加入正己烷溶液中，于渦旋混合儀中震蕩脫脂，吹干剩余的正己烷溶液；之后加入丙酮溶液，超聲處理后加入高壓釜中，高壓提取后大孔樹脂震蕩吸附，收集洗脫液，加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去溶劑，得到大豆異黃酮提取物。本發(fā)明通過將高壓浸提與有機(jī)溶液萃取相結(jié)合的方法提取豆?jié){中的大豆異黃酮，在浸提前對提取液進(jìn)行超聲預(yù)處理，超聲波的輻射壓強(qiáng)可以增大物質(zhì)分子運(yùn)動頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而加速目標(biāo)分子進(jìn)入溶劑，促進(jìn)提取的進(jìn)行，本發(fā)明能夠快速提取大豆異黃酮樣品，為豆?jié){中大豆異黃酮含量測定提供了一種行之有效的檢測手段。
【專利說明】
一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于食物安全檢測行業(yè)中的一種樣品提取方法，特別是涉及一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]大豆異黃酮是存在于大豆等豆科植物中的一類重要生物活性物質(zhì)。近來研究發(fā)現(xiàn)，大豆異黃酮具有抗癌、防治動脈硬化、抗炎等多種藥理作用。從大豆異黃酮中分離得到的染料木素，其結(jié)構(gòu)與17-β雌二醇的結(jié)構(gòu)相似，能與內(nèi)源性雌激素受體結(jié)合，發(fā)揮雌激素效應(yīng)，同時又沒有雌二醇的副作用，被人們稱為植物雌激素。大豆異黃酮是一種混合物，主要為兩類:苷元及其葡萄糖苷。
[0003]豆?jié){作為中國人喜食的豆制品，富含蛋白質(zhì)和鈣、鐵、磷、鋅等幾十種礦物質(zhì)以及維生素Α、維生素B等多種維生素。豆?jié){中蛋白質(zhì)的含量比牛奶的還要高，另外豆?jié){中還含有卵磷脂、大豆皂甙、大豆異黃酮等有防癌健腦意義的特殊保健因子。近年來我國政府提出了一系列政策和措施以促進(jìn)大豆和大豆制品的生產(chǎn)及推廣。特別是“國家大豆行動計劃”和“學(xué)生飲用豆奶工程”的實(shí)施，對我國大豆和大豆制品的生產(chǎn)與利用起到了積極的作用。我國居民飲用豆?jié){方式主要有家庭自磨豆?jié){及市售豆?jié){粉沖制等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法，通過將高壓浸提與有機(jī)溶液萃取相結(jié)合的方法在浸提前對提取液進(jìn)行超聲預(yù)處理，保證提取樣品的可靠性，為豆?jié){中大豆異黃酮含量測定提供了一種行之有效的檢測手段。
[0005]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0006]—種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法，包括如下具體步驟:
[0007]S1、豆?jié){樣品離心取上清液，經(jīng)濾膜過濾后得到豆?jié){粗提樣品；
[0008]S2、取SI中得到的豆?jié){粗提樣品，加入正己烷溶液中，將該正己烷懸液加入渦旋混合儀中震蕩脫脂，吹干剩余的正己烷溶液；
[0009]S3、取S2中脫脂后的豆?jié){粗提樣品加入丙酮溶液，固液比為1:15，將該有機(jī)懸液超聲處理20min，超聲功率800-1200W;
[0010]S4、將S3中制備的超聲處理后的丙酮有機(jī)懸液加入高壓釜中，高壓提取后得到丙酮提取液；
[0011]S5、稱取大孔樹脂加入S4中得到的丙酮提取液中，震蕩吸附2-4h，之后用蒸餾水洗滌大孔樹脂，過濾后加入丙酮溶液洗脫震蕩l_2h，收集洗脫液，將所述洗脫液加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去溶劑，得到大豆異黃酮提取物；
[0012]S6、采用紫外分光光度法測定S5中得到的大豆異黃酮提取物中大豆異黃酮的含量。
[0013]進(jìn)一步地，所述SI中離心速率為8000-12000r/min，離心時間為30_60min。
[0014]進(jìn)一步地，SI中所述濾膜為0.1-0.18μηι。
[0015]進(jìn)一步地，所述S2中豆?jié){粗提樣品與正己烷溶液固液比為1:1O。
[0016]進(jìn)一步地，所述S4中高壓提取壓力為14atm個大氣壓，高壓提取時間為1-1.5h。
[0017]進(jìn)一步地，所述S5中大孔樹脂與丙酮提取液固液比為1:15。
[0018]本發(fā)明具有以下有益效果:
[0019]本發(fā)明通過將高壓浸提與有機(jī)溶液萃取相結(jié)合的方法提取豆?jié){中的大豆異黃酮，在浸提前對提取液進(jìn)行超聲預(yù)處理，超聲波的輻射壓強(qiáng)可以增大物質(zhì)分子運(yùn)動頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而加速目標(biāo)分子進(jìn)入溶劑，促進(jìn)提取的進(jìn)行，本發(fā)明能夠快速提取大豆異黃酮樣品，保證提取樣品的可靠性，為豆?jié){中大豆異黃酮含量測定提供了一種行之有效的檢測手段。
[0020]當(dāng)然，實(shí)施本發(fā)明的任一產(chǎn)品并不一定需要同時達(dá)到以上所述的所有優(yōu)點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0021]本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0022]實(shí)施例1
[0023]S1、取豆?jié){樣品于25°C條件下以8000r/min離心30min，取上清液經(jīng)Ο.?μπι濾膜過濾，得到豆?jié){粗提樣品；
[0024]S2、取SI中得到的豆?jié){粗提樣品，加入正己烷溶液中，固液比為1:1O，將該正己烷懸液加入至渦旋混合儀中震蕩脫脂I次，吹干剩余的正己烷溶液；
[0025]S3、取S2中脫脂后的豆?jié){粗提樣品加入丙酮溶液，固液比為1:15，將該有機(jī)懸液于25°C條件下超聲處理20min，超聲功率800w;
[0026]S4、將S3中制備的超聲處理后的丙酮有機(jī)懸液加入高壓釜中，于14atm個大氣壓下提取lh，得到丙酮提取液；
[0027]S5、稱取大孔樹脂加入S4中得到的丙酮提取液中，固液比為1:15，震蕩吸附2h，之后用蒸餾水洗滌大孔樹脂，過濾后加入丙酮溶液洗脫震蕩Ih，收集洗脫液；
[0028]將所述洗脫液加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去溶劑，得到大豆異黃酮提取物；
[0029]S6、采用紫外分光光度法測定S5中得到的大豆異黃酮提取物中大豆異黃酮的含量；
[0030]所述紫外分光光度法包括如下步驟:稱取5mg干燥至恒重的染料木素，用0.0lmol/L NaOH配置樣品溶液50mL。分別取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL樣品溶液，加入0.0ImoI/L NaOH稀釋至1mL，以0.0lmol/L NaOH溶液為空白溶液，放入紫外分光光度計中測量27Inm處吸光度，以染料木素濃度(yg/mL)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0031]稱取S5中得到的大豆異黃酮提取物20mg加入0.01mol/L NaOH配置成50mL樣品溶液，放入紫外分光光度計中測量271nm處吸光度，計算大豆異黃酮的含量。
[0032]實(shí)施例2
[0033]S1、取豆楽樣品于25°C條件下以12000r/min離心60min，取上清液經(jīng)0.18μηι濾膜過濾，得到豆?jié){粗提樣品；
[0034]S2、取SI中得到的豆?jié){粗提樣品，加入正己烷溶液中，固液比為1:1O，將該正己烷懸液加入至渦旋混合儀中震蕩脫脂3次，吹干剩余的正己烷溶液；
[0035]S3、取S2中脫脂后的豆?jié){粗提樣品加入丙酮溶液，固液比為1:15，將該有機(jī)懸液于25°C條件下超聲處理20min，超聲功率1200w;
[0036]S4、將S3中制備的超聲處理后的丙酮有機(jī)懸液加入高壓釜中，于14atm個大氣壓下提取I.5h，得到丙酮提取液；
[0037]S5、稱取大孔樹脂加入S4中得到的丙酮提取液中，固液比為1:15，震蕩吸附4h，之后用蒸餾水洗滌大孔樹脂，過濾后加入丙酮溶液洗脫震蕩2h，收集洗脫液；
[0038]將所述洗脫液加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去溶劑，得到大豆異黃酮提取物；
[0039]S6、采用紫外分光光度法測定S5中得到的大豆異黃酮提取物中大豆異黃酮的含量；
[0040]所述紫外分光光度法包括如下步驟:稱取5mg干燥至恒重的染料木素，用0.0lmol/L NaOH配置樣品溶液50mL。分別取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL樣品溶液，加入0.01mol/L NaOH稀釋至1mL，以0.0lmol/L NaOH溶液為空白溶液，放入紫外分光光度計中測量27Inm處吸光度，以染料木素濃度(yg/mL)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0041 ] 稱取S5中得到的大豆異黃酮提取物30mg加入0.0lmol/L NaOH配置成50mL樣品溶液，放入紫外分光光度計中測量271nm處吸光度，計算大豆異黃酮的含量。
[0042]實(shí)施例3
[0043]S1、取豆楽樣品于25°C條件下以10000r/min離心45min，取上清液經(jīng)0.15μηι濾膜過濾，得到豆?jié){粗提樣品；
[0044]S2、取SI中得到的豆?jié){粗提樣品，加入正己烷溶液中，固液比為1:1O，將該正己烷懸液加入至渦旋混合儀中震蕩脫脂2次，吹干剩余的正己烷溶液；
[0045]S3、取S2中脫脂后的豆?jié){粗提樣品加入丙酮溶液，固液比為1:15，將該有機(jī)懸液于25°C條件下超聲處理20min，超聲功率100w;
[0046]S4、將S3中制備的超聲處理后的丙酮有機(jī)懸液加入高壓爸中，于14atm個大氣壓下提取I.2h，得到丙酮提取液；
[0047]S5、稱取大孔樹脂加入S4中得到的丙酮提取液中，固液比為1:15，震蕩吸附3h，之后用蒸餾水洗滌大孔樹脂，過濾后加入丙酮溶液洗脫震蕩I.5h，收集洗脫液；
[0048]將所述洗脫液加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去溶劑，得到大豆異黃酮提取物；
[0049]S6、采用紫外分光光度法測定S5中得到的大豆異黃酮提取物中大豆異黃酮的含量；
[0050]所述紫外分光光度法包括如下步驟:稱取5mg干燥至恒重的染料木素，用0.0lmol/L NaOH配置樣品溶液50mL。分別取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL樣品溶液，加入0.01mol/L NaOH稀釋至1mL，以0.0lmol/L NaOH溶液為空白溶液，放入紫外分光光度計中測量27Inm處吸光度，以染料木素濃度(yg/mL)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0051 ] 稱取S5中得到的大豆異黃酮提取物25mg加入0.01mol/L NaOH配置成50mL樣品溶液，放入紫外分光光度計中測量271nm處吸光度，計算大豆異黃酮的含量。
[0052]本發(fā)明通過將高壓浸提與有機(jī)溶液萃取相結(jié)合的方法提取豆?jié){中的大豆異黃酮，在浸提前對提取液進(jìn)行超聲預(yù)處理，超聲波的輻射壓強(qiáng)可以增大物質(zhì)分子運(yùn)動頻率和速度，增加溶劑穿透力，從而加速目標(biāo)分子進(jìn)入溶劑，促進(jìn)提取的進(jìn)行，本發(fā)明能夠快速提取大豆異黃酮樣品，保證提取樣品的可靠性，為豆?jié){中大豆異黃酮含量測定提供了一種行之有效的檢測手段。
[0053]以上內(nèi)容僅僅是對本發(fā)明所作的舉例和說明，所屬本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替代，只要不偏離發(fā)明或者超越本權(quán)利要求書所定義的范圍，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1.一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法，其特征在于，包括如下具體步驟: 51、豆?jié){樣品離心取上清液，經(jīng)濾膜過濾后得到豆?jié){粗提樣品； 52、取SI中得到的豆?jié){粗提樣品，加入正己烷溶液中，將該正己烷懸液加入渦旋混合儀中震蕩脫脂，吹干剩余的正己烷溶液； 53、取S2中脫脂后的豆?jié){粗提樣品加入丙酮溶液，固液比為1:15，將該有機(jī)懸液超聲處理 20min，超聲功率800-1200W; 54、將S3中制備的超聲處理后的丙酮有機(jī)懸液加入高壓釜中，高壓提取后得到丙酮提取液； 55、稱取大孔樹脂加入S4中得到的丙酮提取液中，震蕩吸附2-4h，之后用蒸餾水洗滌大孔樹脂，過濾后加入丙酮溶液洗脫震蕩l_2h，收集洗脫液，將所述洗脫液加入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中除去溶劑，得到大豆異黃酮提取物； 56、采用紫外分光光度法測定S5中得到的大豆異黃酮提取物中大豆異黃酮的含量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法，其特征在于:所述SI中離心速率為8000-12000r/min，離心時間為30-60min。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法，其特征在于:S1中所述濾膜為 0.1-0.18μηι。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法，其特征在于:所述S2中豆?jié){粗提樣品與正己烷溶液固液比為1:10。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法，其特征在于:所述S4中高壓提取壓力為14a tm個大氣壓，高壓提取時間為1-1.5h。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆?jié){中大豆異黃酮的檢測方法，其特征在于:所述S5中大孔樹脂與丙酮提取液固液比為I: 15。
【文檔編號】G01N21/33GK106053373SQ201610649299
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年8月9日 公開號201610649299.2, CN 106053373 A, CN 106053373A, CN 201610649299, CN-A-106053373, CN106053373 A, CN106053373A, CN201610649299, CN201610649299.2
【發(fā)明人】林松
【申請人】安徽青松食品有限公司