專利名稱：：黃花菜及黃花菜總黃酮的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥及其有效部位的新用途，特別涉及黃花菜及黃花菜總黃酮新用途及其制備方法。技術(shù)背景黃花菜又名"金針菜"、"一日百合"，俗稱忘憂草。屬百合科萱草屬植物，具有豐富的營養(yǎng)成份。其主要化學(xué)成分有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物，還有多種維生素、生物堿、苷、黃酮類、胡蘿卜素、揮發(fā)油、鞣質(zhì)以及無機礦物鈣、磷。據(jù)《中藥大辭典》記載黃花菜含有生物堿0.7%，苷1.8%，黃酮類0.75%,p-胡蘿卜素O.36%。明代李時珍在《本草綱目》中稱其有安神醒腦、增智寬胸、美容養(yǎng)血、解熱消毒、除煩通乳之功效。現(xiàn)代研究黃花菜具有補腦健智、化癡止血、通絡(luò)止痛、抗菌消炎等功效。其中黃花菜總黃酮是其重要有效成分之一，它具有增強免疫力、活血化瘀、保肝抗炎、抗菌抗病毒、抑制腫瘤、清除氧自由基和抑菌作用等多種功能。目前對黃花菜總黃酮的提取研究很少，而對其應(yīng)用研究未見報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明第一個目的在于公開了黃花菜的新用途。本發(fā)明第二個目的在于公開黃花菜總黃酮的新用途。本發(fā)明第三個目的在于公開黃花菜總黃酮的制備方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的黃花菜在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。黃花菜在制備升高腦皮質(zhì)中的5-羥色胺藥物中的應(yīng)用。黃花菜在制備升高腦皮質(zhì)中的去甲腎上腺素藥物中的應(yīng)用。黃花菜在制備升高腦皮質(zhì)中的多巴胺藥物中的應(yīng)用。黃花菜在制備升高腦皮質(zhì)中的5-羥基吲哚乙酸藥物中的應(yīng)用。黃花菜在制備拮抗利血平藥物中的應(yīng)用。黃花菜總黃酮在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。黃花菜總黃酮在制備升高腦皮質(zhì)中的5-羥色胺藥物中的應(yīng)用。黃花菜總黃酮在制備升高腦皮質(zhì)中的去甲腎上腺素藥物中的應(yīng)用。黃花菜總黃酮在制備升高腦皮質(zhì)中的多巴胺藥物中的應(yīng)用。黃花菜總黃酮在制備升高腦皮質(zhì)中的5-羥基吲哚乙酸藥物中的應(yīng)用。黃花菜總黃酮在制備拮抗利血平藥物中的應(yīng)用。黃花菜總黃酮可以按照現(xiàn)有技術(shù)的方法制備，本發(fā)明同時提供了一種制備黃花菜總黃酮的方法步驟1:將黃花菜60-95%乙醇加熱回流提取1-4次，每次0.5-l小時，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏A,殘渣I;步驟2:殘渣I用20-80。/a乙醇加熱提取l-4次，每次20-60min,過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏B;步驟3:將浸膏A用蒸餾水稀釋后過濾，通過大孔樹脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用20%-95%乙醇洗脫2-6倍柱體積，分別回收乙醇，得到樣品1;步驟4:將浸膏B用蒸餾水稀釋后過濾，通過大孔樹脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，先后用20%-95%乙醇洗脫2-6倍柱體積，分別回收乙醇，得到樣品2。步驟5:混合步驟3、步驟4的樣品制得黃花菜總黃酮。所述制備黃花菜總黃酮的方法優(yōu)選為步驟1:將黃花菜95°/乙醇浸泡過夜，95%乙醇加熱才是取3次，每次O.5-l小時，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏A,殘渣I5步驟2:殘渣I用60%乙醇加熱提取2次，每次40min，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏B;步驟3:將浸膏A用蒸鎦水稀釋后過濾，通過已處理好的AB-8大孔樹脂柱，蒸憤水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇，得到樣l;步驟4:將浸膏B用蒸餾水稀釋后過濾，通過已處理好的AB-8大孔樹脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇，得到樣2;本發(fā)明黃花菜總黃酮還可以按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，例如膠嚢劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液、丸劑等制劑。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時加入藥學(xué)可接受的輔料，例如填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧曱基纖維素鈉等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括甜味劑及各種香精；防腐劑包括尼泊金類、苯曱酸、苯曱酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括PEG6000,PEG4000，蟲蠟等。經(jīng)藥理試驗證明本發(fā)明黃花菜及黃花菜總黃酮具有抗抑郁作用，能顯著提高大鼠腦皮質(zhì)的5-HT、NE、DA含量和海馬的5-HT、NE含量，與模型組比較有顯著差異(PW.05-0.01),給藥28天后，與正常組相比，模型組大鼠的Open-Field法水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)明顯減少，差異具有顯著性(P〈0.01)，與;f莫型組相比，黃花菜或黃花菜總黃酮膠嚢劑大、中、小劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠的0pen-Field法水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)均有增加，具有顯著性差異(P<0.05-0.01);給藥28天后，與;f莫型組相比，黃花菜或黃花菜總黃酮膠嚢劑大、中、小劑量組大鼠蔗糖溶液消耗量增加，差異具有顯著性(P<0.05-0.01);與模型組相比，黃花菜或黃花菜總黃酮膠嚢劑大、中、小劑量組大鼠的強迫性游泳期間的不動時間顯著減小，具有顯著性差異(P〈0.01)。黃花菜或黃花菜總黃酮膠嚢劑大、中、小劑量能顯著拮抗利血平所致的體溫下降作用和小鼠眼瞼下垂及運動不能的作用(P<0.05-0.01)。下述實驗例通過黃花菜按照實施例1的方法制備的寧心解郁膠嚢藥理試驗進一步說明本發(fā)明。實驗例1寧心解郁膠嚢對大鼠慢性應(yīng)激抑郁癥的治療作用試驗?zāi)康尼娪寐跃C合應(yīng)激法建立抑郁大鼠模型，觀察中藥寧心解郁月交嚢的抗抑郁作用。受試藥物寧心解郁膠嚢千粉，批號，北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院提供。鹽酸氟西汀，產(chǎn)品批號A126471,分裝批號051020,生產(chǎn)廠美國EliLillyandCompanyLimited,分裝廠禮來蘇洲制藥有限公司。去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)、3，4-二羥基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、5-羥基p引咮乙酸(5-HIAA)、3,4-二羥基卞胺(DHBA)，以上為SIGMA公司產(chǎn)品。二正丁胺(上?；瘜W(xué)試劑采購站進口分裝)，B-8離子對試劑(天津化學(xué)試劑二廠)，甲醇(優(yōu)級純，北京化工廠)，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。數(shù)據(jù)處理所有實驗數(shù)據(jù)以x±s表示。計量數(shù)據(jù)由SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行方差分析及組間抬r驗。實驗動物SPF級Sprague-Dawiey(SD)大鼠，體重250-300g，雌雄各半，動物許可證編號SCXK(京)2002-0003，北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供。飼養(yǎng)條件動物進入動物實驗室后，大鼠每籠放養(yǎng)5只，飼養(yǎng)3天后啟用；正常組大鼠每籠放養(yǎng)5只，模型組、寧心解郁膠嚢高劑量組、寧心解郁膠嚢中劑量組、寧心解郁膠嚢低劑量組、鹽酸氟西汀組的大鼠均單籠飼養(yǎng)。動物室光照充足，通風(fēng)和空調(diào)設(shè)備良好，室溫控制在23-25°C,相對濕度為40-70%。實驗室按常規(guī)定期消毒。慢性應(yīng)激抑郁模型的建立將大鼠置于晝夜節(jié)律光照條件下，自由進食進水，飼養(yǎng)3天以適應(yīng)環(huán)境，每日觸摸動物以適應(yīng)實驗人員的操作。大鼠適應(yīng)環(huán)境后隨機分為空白對照組(以下簡稱空白組)、抑郁模型組(以下簡稱模型組)。模型組根據(jù)文獻均單籠飼養(yǎng)，以慢性不可預(yù)見性的刺激，配合孤養(yǎng)，各種剌激因子按隨機方法在28d內(nèi)應(yīng)用，包括冰水游泳(4。C,5min)，熱刺激(45。C,5min),搖晃(頻率160次/分，3min)，夾尾(lmin)，晝夜顛倒(24h)，每日給予一種刺激,每種刺激累計使用4次，順序隨機，使動物不能預(yù)料刺激的發(fā)生，給予28天刺激后，進行0penField行為學(xué)測定、大鼠強迫游泳實驗和糖水消耗實驗，以評價模型組大鼠的慢性應(yīng)激抑郁模型是否成功，造模成功的大鼠隨機分為模型組、寧心解郁膠嚢高劑量組、寧心解郁膠嚢中劑量組、寧心解郁膠嚢低劑量組、鹽酸氟西汀組。使各組大鼠的0penFie1d行為學(xué)、大鼠強迫游泳實驗和糖水消耗實驗的實驗結(jié)果盡量大致一致，做為給藥前的指標。開始給藥后，每隔2天再接受一次不同應(yīng)激刺激，刺激方式及程度與造才莫時相同，直至實驗結(jié)束。給藥方法給予28天刺激后，隨機分為模型組、寧心解郁膠嚢高劑量組、寧心解郁膠嚢中劑量組、寧心解郁膠嚢低劑量組、鹽酸氟西汀組。依"實驗動物與人按體表面積比等效量換算比率"可算出各動物的等效劑量，作為中劑量。寧心解郁膠嚢的大劑量為122.31mg/kg體重，中劑量為40.77mg/kg體重，低劑量劑量為13.59mg/kg體重；西藥組給予鹽酸氟西汀，劑量為3.6mg/kg體重，均按lml/100g體重的濃度灌胃給藥，模型組給予生理鹽水lml/100g體重。共灌胃28天。實驗指標觀察1、Open-Field行為學(xué)測定在給予28天刺激后及給藥后28天用Open-field法觀察各組大鼠行為的變化。根據(jù)文獻自制OpenField觀察箱，直徑90cm,高40cm，周壁為黑色，將底面按扇形分成面積相等的25格。以大鼠穿越底面格子數(shù)為水平得分，動物穿越l格(3爪以上跨入)為1分；以大鼠雙足離開地面次數(shù)為垂直得分，動物雙足離開底面為標志，無"^侖動物站立多長時間直至》文下雙足為1分。每只動物每次進行一次測定，時間為5min。利用攝像裝置記錄其行為的變化，分析結(jié)果。2、大鼠強迫游泳實驗在給予28天刺激后及給藥后28天后，據(jù)文獻將大鼠放入內(nèi)徑20cm，高40cm的玻璃圓缸內(nèi)，每釭1只，缸內(nèi)水深24cm,水溫28-29。C，(每缸水僅用l次)，連續(xù)觀察5min,累計大鼠在水中停止掙扎，呈漂浮直立狀態(tài)，僅有偶爾的肢體運動以保持頭部浮在水面的持續(xù)時間即不動時間。(此實驗前一天每只大鼠預(yù)游15min,隨后取出放于燈下纟察干放入籠中。)3、糖水消耗實驗在給予28天刺激后及給藥后28天后，進行糖水消耗實驗。在進行糖水消耗實驗時每只大鼠加l%蔗糖溶液100ml，同時所有大鼠進行禁食，計算大鼠lh飲用l%蔗糖溶液的量。4、皮質(zhì)和海馬單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的測定取材方法斷頭處死動物后，剝離出全腦，在水上迅速分離出前額皮質(zhì)和海馬，稱質(zhì)量后置l.5ml的凍存管中用液氮快速冷凍后，放入-80。C水箱保存至測定。樣品的處理才艮據(jù)腦組織質(zhì)量不同加入不同體積的溶液每100mg腦組織加入lml組織處理液(0.15mmol/L腦04和2ng/|u1的DHBA25jul，冰浴條件下超聲勻漿30s，然后在15000轉(zhuǎn)/分，4'C離心20min,上清液用于神經(jīng)遞質(zhì)測定。神經(jīng)遞質(zhì)檢測采用高效液相色鐠系統(tǒng)(HPLC)-電化學(xué)檢測器(ECD)檢測單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其主要代謝產(chǎn)物的濃度，包括NE，DOPAC,DA，5-HIAA，HVA，5-HT。取上清液IOn1進樣測定，各神經(jīng)遞質(zhì)含量以ng/g組織濕質(zhì)量計算。色譜條件色譜條件Nova-pakC18色譜柱(4mmx150鵬，5jam);流動相50mmo14寧檬酸-醋酸鈉緩沖液pH3.5(內(nèi)含1.OmmolL—1B-8離子對試劑，1.8國lL—1二正丁胺，0.3腿ol.L—1EDTA二鈉，4%甲醇)，流速l.OmL.mirf\玻璃碳工作電極，抬r測池電壓為+0.75V;3，4-二羥千胺DHBA為內(nèi)標物，樣品中各主要組分用內(nèi)標法進4亍定量。實驗結(jié)果1.寧心解郁膠嚢對大鼠腦皮質(zhì)的5-HT、NE、DA、5-HIAA、HVA和DOPAC含量的影響沖莫型組大鼠腦皮質(zhì)的5-HT、NE、DA、5-HIAA和D0PAC含量與正常組比較顯著降低(P〈0.01);寧心解郁膠嚢大劑量組大鼠腦皮質(zhì)的5-HT、NE、DA和5-HIAA與模型組比較含量顯著升高(P<0.05-0.01)，寧心解郁膠嚢大劑量組大鼠腦皮質(zhì)的DOPAC含量與模型組比較有升高趨勢，但差異無顯著性(P〉0.05),寧心解郁膠嚢中劑量組大鼠腦皮質(zhì)的5-HT和NE與模型組比較含量顯著升高(P<0.01)，寧心解郁膠嚢中劑量組大鼠腦皮質(zhì)的M、DOPAC和5-HIAA含量與模型組比較有升高趨勢，但差異無顯著性(P>0.05)，寧心解郁膠嚢小劑量組大鼠腦皮質(zhì)的5-HT、NE和5-HIAA含量與沖莫型組比較有升高趨勢，但差異無顯著性(P〉0.05)，見表1-3。表l寧心解郁膠嚢對抑郁大鼠腦皮質(zhì)5-HT和5-HIAA含量的影響(ng/g,;±s)組別n5-HT5-HIAA正常組162903.26±177.67*1525.07±129.91*才莫型組141608.96±94.75896.89±50.56寧心解郁膠嚢大劑量組152487.57±240.58*1071.81±100.18*寧心解郁膠囊中劑量組162413.89±243.42*908.10±62.43寧心解郁膠囊小劑量組162058.93±221.561057.70±103.58鹽酸氟西汀組132646.28±242.93*1305.27±111.21*注與才莫型纟且比較*P<0.01;**P<0.05表2寧心解郁膠嚢對抑郁大鼠腦皮質(zhì)DA和DOPAC含量的影響(ng/g,;±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表3寧心解郁膠嚢對抑郁大鼠腦皮質(zhì)NE和HVA含量的影響(ng/g,x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注與才莫型纟且比豐交*P<0.01;**P<0.052.寧心解郁膠嚢對大鼠海馬的5-HT、NE、DA、5-HIAA、HVA和D0PAC含量的影響;溪型組大鼠海馬的5-HT、NE和DA含量與正常組比專交顯著降低(P〈0.01),其5-HIAA、DOPAC和HVA含量與正常組比較有降低趨勢，但差異無顯著性(PX).05);寧心解郁膠嚢大、中劑量組大鼠海馬的5-HT和NE與模型組比較含量顯著升高(P<0.05-0.01),寧心解郁膠嚢小劑量組大鼠海馬的5-HT和NE含量與模型組比較有升高趨勢，但差異無顯著性(P〉0.05)，見表4-6。表4寧心解郁膠嚢對抑郁大鼠海馬5-HT和5-HIAA含量的影響(ng/g，S±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注與才莫型癥且比4交*P<0.01;**P<0.05表5寧心解郁膠嚢對抑郁大鼠海馬DA和DOPAC含量的<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>正常組16682.67±164.27*55.56±11.62模型組14171.58±52.2834.69±5.75寧心解郁膠嚢大劑量組15118.81±18.5917.99±3.54寧心解郁膠囊中劑量組16134.88±27.6646.83±4.80寧心解郁膠嚢小劑量組16153.51±36.9538.55±6.02鹽酸氟西汀組13380.11±182.3649.21±15.37注與才莫型纟且比4交*P<0.01;**P<0.05表6寧心解郁膠嚢對抑郁大鼠海馬NE和HVA含量的影響(ng/g，x±s)組別nNEHVA正常組161572.84±77.87*1424.97±373..89模型組141144.49±98.321104.83±373..01寧心解郁膠嚢大劑量組151402,69±62.37**267.25±255.71**寧心解郁膠囊中劑量組161388.83±83,60**505.10±258.37寧心解郁膠嚢小劑量組161341.78±87.5428.84±5.04*鹽酸氟西汀組131279.01±103.8354.32±15,.44*注與才莫型癥且比4交*P<0.01;**P<0.053.寧心解郁膠嚢對大鼠Open-field行為的影響給藥前，才莫型組、寧心解郁膠嚢大、中、小劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠的Open-Fie1d法水平穿越^各it、豎立次數(shù)無顯著性差異(P<0.G5)，但與正常組比較都有顯著性差異(P<0.01);給藥28天后，與正常組相比，模型組大鼠的Open-Field法水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)明顯減少，差異具有顯著性(PW.01)，與^t型組相比，寧心解郁膠嚢大、中、小劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠的Open-Field法水平穿越格數(shù)、豎立次數(shù)均有增加，具有顯著性差異(P<0.G5-0.01),與同組的給藥前比較，寧心解郁膠嚢大、中劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠的Open-Field法水平穿越才各^t、豎立次llt明顯增加，具有顯著性差異(P復(fù)05-0.01)。見表7。表7寧心解郁膠嚢對抑郁大鼠Open-field行為的影響(;±s)豎立次數(shù)水平穿越格數(shù)組另ijn--------------------------------------------------------給藥前給藥后給藥前給藥后正常組1616.88±1.0016.50±0.93*84.50±4.2686.69±3.90*4莫型組1411.43土0.63A9，71±0.4755.43±4.67A50.50±4.53*寧心解郁膠囊大劑量組1611.13土0.55A13.75±0.76*#57.50土4.64A73.69±3.95*#寧心解郁膠嚢中劑量組1611.38土0.48厶13.38±0.68*##57.44±3.80A76.50±3.69*#寧心解郁月交囊小劑量組1611.44土0.53A11.88±0.58**58.56土4.13A63.44±3.76**鹽酸氟西汀組1311.38±0.61A14.23±0.82*#53.62±4.90A67.08±3.81*##注與正常組比較AP<0.01與才莫型纟且比專支*P<0.01;**P<0.05與同組的給藥前比豐支#P<0.01;##P<0.054.寧心解郁膠嚢對大鼠糖水消耗量的影響18給藥前，模型組、寧心解郁膠嚢大、中、小劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠蔗糖溶液消耗量比較差異無顯著性(P<0.05)，但與正常組比較都有顯著性差異(P<0.01)，給藥28天后，與正常組相比，模型組大鼠蔗糖溶液消耗量明顯減少，差異具有顯著性(P〈0.Ol)，與;f莫型組相比，寧心解郁膠嚢大、中、小劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠蔗糖溶液消耗量增加，差異具有顯著性(P〈0.05-0.01),與同組的給藥前比較，寧心解郁膠嚢大、中劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠蔗糖溶液消耗量增加，差異具有顯著性(P〈0.01，P<G.05)。見表8。表8寧心解郁膠嚢對抑郁大鼠糖水消耗量的影響(ml，；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注與正常組比較AP〈0.01與才莫型組比4交*P<0.01;**P<0.05與同組的給藥前比4交#P<0.01;##P<0.055.寧心解郁膠嚢對大鼠強迫性游泳游泳的影響給藥前，模型組、寧心解郁膠嚢大、中、小劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠在強迫性游泳期間的不動時間，無顯著性差異(P〉0.05),但與正常組比較都有明顯增加，都有顯著性差異(P<0.05-0.01);給藥28天后，與正常組相比，模型組大鼠在強迫性游泳期間的不動時間顯著增加，具有顯著性差異(P<0.01)，與模型組相比，寧心解郁膠嚢大、中、小劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠在強迫性游泳期間的不動時間顯著減小，具有顯著性差異(P〈0.01)，與同組的給藥前比較，寧心解郁膠嚢大、中劑量組和鹽酸氟西汀組大鼠蔗糖溶液消耗量增加，差異具有顯著性(P<0.05—0.01)。見表。表9寧心解郁膠嚢對抑郁大鼠強迫性游泳游泳的影響(s,S±<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>試驗?zāi)康牟捎美睫卓箤嶒炑芯繉幮慕庥裟z嚢的抗抑郁作用。藥物及制劑寧心解郁月交嚢干粉，北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院提供。鹽酸氟西汀，產(chǎn)品批號A126471,分裝批號051020，生產(chǎn)廠美國EliLillyandCompanyLimited,分裝廠禮來蘇洲制藥有限/〉司。利血平注射液，上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司，批號050601，數(shù)據(jù)處理實驗數(shù)據(jù)均以x±s表示，數(shù)據(jù)處理采用組間比較t檢驗。崢眼不能及運動不能觀測的組間比較采用x2檢驗實驗動物SPF級ICR，雌雄各半，小鼠，18~20g，北京維通利華實驗動物中心提供，合格證號SCXK(京)2002-2003。實驗方法l.分組及給藥動物隨才幾分為正常組、陽性藥組、治療組。正常組予生理鹽水；陽性藥組利血平拮抗實驗給予百憂解(5.2mg/kg)，治療組分為寧心解郁膠嚢大、中、小劑量組(分別為176.67、58.89、19.63mg/kg)。每組20只小鼠，灌胃給藥，2次ld,連續(xù)7d。2.拮抗利血平實驗?zāi)┐谓o藥lh后，腹腔注射利血平2.5mg/kg，分別進行以下實驗及指標觀測。2.1肛溫的觀測腹腔注射利血平3、5h后，將體溫計探頭插入肛門約lcm測量膽溫，記錄各組數(shù)據(jù)。2.2崢眼不能的觀測腹腔注射利血平lh后，觀察小鼠不能崢眼的個數(shù),計算百分率。2.3運動不能的觀測腹腔注射利血平lh后，將小鼠放入直徑為7.5cm的圓圈內(nèi)觀察15s，計算各組小鼠出圏率。結(jié)杲1.寧心解郁膠嚢對利血平所致小鼠體溫下降的影響模型組皮下注射利血平后表現(xiàn)為體溫下降，與正常對照組比較均有顯著性差異(P<0.01);寧心解郁月交嚢組大、中、小劑量能顯著拮抗利血平所致的小鼠體溫下降(P<0.05)，結(jié)果見表l。表1寧心解郁膠嚢對利血平抑郁大鼠體溫的影響(。C，S土s)組別11基礎(chǔ)體溫三小時體溫五小時體溫正常組2337.97±0.4237.,86±1,1037.76±1.36**模型組2238.15±0.4732.,83±1.23A32.45±1.20A寧心解郁膠囊大劑量組2337.96±0.4533.70±1.65△**33.33±1.82△**寧心解郁膠嚢中劑量組2138.16±0.5534.99±0.64△*33.98±1.29A*寧心解郁膠嚢小劑量組1938.00±0.4435.41±1.26厶*35.86±1.29A*鹽酸氟西汀組2037.88±0.6633.38±1.36△32.87±1.39△注與正常組比較AP〈0.01;與才莫型組比4交*P<0.01,**P<0.052.寧心解郁膠嚢對利血平所致小鼠眼瞼下垂的拮抗作用模型組皮下注射利血平后表現(xiàn)為明顯的眼瞼下垂，不能睜眼，與正常對照組比較均有顯著性差異；寧心解郁膠嚢組大、中、小劑量能顯著拮抗利血平所致的眼瞼下垂(P<0.05-)，結(jié)果見表2。表2寧心解郁膠嚢對利血平所致小鼠眼瞼下垂的拮抗作用(；±s)組別n不能崢眼動物數(shù)瞭眼不能百分率/%正常組2300模型組221986.36寧心解郁膠嚢大劑量組23939.13*寧心解郁膠嚢中劑量組21942.85*寧心解郁膠囊小劑量組181055.56**鹽酸氟西汀組20735.00*注與才莫型纟且比4交*P<0.01，**P<0.053.寧心解郁膠嚢對利血平所致小鼠運動不能的拮抗作用模型組皮下注射利血平后表現(xiàn)為運動不能，出圏率顯著降低，與正常對照組比較均有顯著性差異(P<0.01);寧心解郁膠嚢組大、中、小劑量能顯著拮抗利血平所致的運動不能，出圏率顯著高與模型組(P〈0.05)，結(jié)果見表3。表3寧心解郁膠嚢對利血平所致小鼠運動不能的拮抗作用(-/x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>注與才莫型組比4交*P<0.01實驗例3總黃酮的含量測定取實施例中的樣品1和2進行總黃酮含量測定。測定方法精密稱取減壓干燥至恒重的蘆丁0.0101g，甲醇定容于50ml容量瓶中搖勻，準確量取0.0，1.0,2.0，3.0，4.0,5.0ml于25ml容量并瓦中，加5%NaN036ml,混勻，；故置6min，加入10。M1(N03)30.6ml，混勻，i丈置6min,加4%NaOH溶液5ml，用60%乙醇稀釋至刻度，放置15min，按藥典分光光度法，以第一管為空白，在500mn波長處測吸收度。以吸收度為橫坐標，濃度為縱坐標，繪制標準曲線。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>回歸方程為y=12.術(shù)x-O.0021r=0.9990準確稱取樣1和2各0.0025g,置于50ml容量瓶中，同法測定吸收度分別為0.11867和0.12219,由標準曲線計算濃度分別為0.009739和0.010022mg/ml。總黃酮含量分別為19.478%和20.044%。下述實施例均能夠?qū)崿F(xiàn)上述實-瞼例所述的效果具體實施方式實施例l:膠嚢劑將9900g干黃花菜切成2-3厘米長的小段，95%乙醇浸泡過夜。95%乙醇加熱提取3次，從沸騰開始計時，時間分別為40min，30min,30min，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏A。殘渣用60%乙醇加熱才是取2次，每次40min，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏B。將浸膏A用蒸餾水稀釋后過濾，通過已處理好的AB-8大孔樹脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇，得到樣1。同法處理浸膏B，得樣2。樣1為64.3101g樣2為60.9338g。出膏率大于1.265%，取干燥后的浸膏，按l:0-5加入乳糖(或淀粉、或糊精)，混合均勻，制成顆?；蛑苯庸扪b于膠嚢中即得。功效解郁，寧心，安神主治用于抑郁狀態(tài)證屬心氣虧虛、心神不寧者。癥見情志抑郁，喜太息，失眠多夢，夢多易醒，心神不寧，善恐易驚，舌質(zhì)淡，脈沉細每曰總量合生藥15克(每次5克)，每日3次。l個月為1療程，用3個療程。實施例2:黃花菜中總黃酮的制備及檢驗將9900g干黃花菜切成2-3厘米長的小段，95%乙醇浸泡過夜。95%乙醇加熱提取3次，從沸騰開始計時，時間分別為40min，30min，30min,過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏A。殘渣用60%乙醇加熱提取2次，每次40min，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏B。將浸膏A用蒸餾水稀釋后過濾，通過已處理好的AB-8大孔樹脂柱，，蒸餾水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇，得到樣1。同法處理浸膏B,得樣2。樣1為64.3101g,樣2為60.9338g。出膏率大于1.265%，混合樣1、2,即得黃花菜中總黃酮。將上述樣品采用乙醇溶解按照黃酮類化合物通用的檢查方法進行以下實驗，證明了屬于黃酮類化合物。1、紫外光燈下枱4見有黃綠色熒光；2、加入少許4美粉振搖后滴加濃鹽酸2-3滴溶液，l-2分鐘后呈書^紅色；3、樣品的乙醇溶液和1%三氯化鋁乙醇溶液通過紙斑反應(yīng)后，置紫外燈下顯黃綠色熒光；4、滴加氳氧化鈉溶液呈棕黃色實施例3:顆粒劑將9900g干黃花菜切成2-3厘米長的小段，95%乙醇浸泡過夜。95%乙醇加熱才是取3次，從沸騰開始計時，時間分別為40min,30min,30min，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏A。殘渣用60%乙醇加熱提取2次，每次40min，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏B。將浸膏A用蒸餾水稀釋后過濾，通過已處理好的AB-8大孔樹脂柱，，蒸餾水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇，得到樣1。同法處理浸膏B,得樣2。樣l為64.3101g，樣2為60.9338g。出膏率大于1.265%,混合樣1、2，加入糊精經(jīng)常M^工藝制成顆粒劑。實施例4:片劑將9900g干黃花菜切成2-3厘米長的小段，95%乙醇浸泡過夜。95%乙醇加熱提取3次，從沸騰開始計時，時間分別為40miri，30min,30min,過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏A。殘渣用60°/。乙醇加熱|是取2次，每次40min，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏B。將浸膏A用蒸餾水稀釋后過濾，通過已處理好的AB-8大孔樹脂柱，，蒸餾水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脫，回收乙醇，得到樣1。同法處理浸膏B,得樣2。樣1為64.3101g,樣2為60.9338g。出膏率大于1.265%，混合樣1、2,加入淀粉、乳糖、糊精經(jīng)常少見工藝制成顆粒后，按常^L加入潤滑劑，壓制成片劑。權(quán)利要求1.黃花菜在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。2、如權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于在制備升高腦皮質(zhì)中的5-羥色胺藥物中的應(yīng)用。3、如權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于在制備升高腦皮質(zhì)中的去甲腎上腺素藥物中的應(yīng)用。4、如權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于在制備升高腦皮質(zhì)中的多巴胺藥物中的應(yīng)用。5、如權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于黃花菜在制備升高腦皮質(zhì)中的5-羥基吲哚乙酸藥物中的應(yīng)用。6、黃花菜在制備拮抗利血平藥物中的應(yīng)用。7、黃花菜總黃酮在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。8、如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于黃花菜總黃酮在制備升高腦皮質(zhì)中的5-羥色胺藥物中的應(yīng)用。9、如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于黃花菜總黃酮在制備升高腦皮質(zhì)中的去甲腎上腺素藥物中的應(yīng)用。10、如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于黃花菜總黃酮在制備升高腦皮質(zhì)中的多巴胺藥物中的應(yīng)用。11、如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于黃花菜總黃酮在制備升高腦皮質(zhì)中的5-羥基吲哚乙酸藥物中的應(yīng)用。12、黃花菜總黃酮在制備拮抗利血平藥物中的應(yīng)用。13、一種制備黃花菜總黃酮的方法，包括如下步驟步驟1:將黃花菜60-95%乙醇加熱回流提取1-4次，每次0.5-l小時，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏A,殘渣I;步驟2:殘渣I用20-80%乙醇加熱提取l-4次，每次20-60min過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏B;步驟3:將浸膏A用蒸餾水稀釋后過濾，通過大孔樹脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用20°/。-95%乙醇洗脫2-6倍柱體積，分別回收乙醇，得到樣品1;步驟4:將浸膏B用蒸餾水稀釋后過濾，通過大孔樹脂柱，蒸鋪水洗至流出液透明，先后用20%-95%乙醇洗脫2-6倍柱體積，分別回收乙醇，得到樣品2。步驟5:混合步驟3的樣品1、步驟4的樣品2制得黃花菜總黃酮。14、如權(quán)利要求13所述的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟步驟1:將黃花菜95%乙醇浸泡過夜，95%乙醇加熱提取3次，每次O.5-l小時，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏A，殘渣I5步驟2:殘渣I用60%乙醇加熱提取2次，每次40min，過濾，合并濾液，回收乙醇，得浸膏B,殘渣II;步驟3:將浸膏A用蒸餾水稀釋后過濾，通過已處理好的AB-8大孔樹脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用60%洗脫3倍柱體積，回收乙醇，得到樣l;步驟4:將浸膏B用蒸餾水稀釋后過濾，通過已處理好的AB-8大孔樹脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用60%洗脫3倍柱體積，回收乙醇，得到樣2。全文摘要本發(fā)明公開了黃花菜及其總黃酮在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用，具體公開了黃花菜及其總黃酮在制備升高腦皮質(zhì)中的5-羥色胺、去甲腎上腺素、多巴胺、5-羥基吲哚乙酸藥物中的應(yīng)用，并公開了黃花菜及其總黃酮在制備拮抗利血平藥物中的應(yīng)用；通過藥理實驗證實上述應(yīng)用。文檔編號A61P25/24GK101327289SQ20081013532公開日2008年12月24日申請日期2008年7月31日優(yōu)先權(quán)日2008年7月31日發(fā)明者健倪,朱陵群,鄒憶懷申請人:健倪