專利名稱：：驅(qū)蛔素在制備抗幽門螺桿菌及其引起的疾病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及驅(qū)蛔素的在在制備抗幽門螺桿菌的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：幽門螺桿菌(Helicobacterpylori)是一種單極、多鞭毛、末端鈍圓、螺旋形彎曲的革蘭染色陰性菌。幽門螺桿菌通常寄生于人胃小凹的黏液層內(nèi)，依靠其尿素酶分解產(chǎn)生的氨來(lái)中和胃酸，從而在胃內(nèi)定植。幽門螺桿菌分泌的兩種毒素CagA和VacA,CagA能夠使與細(xì)胞增殖有關(guān)的蛋白質(zhì)NFAT活性化，促使細(xì)胞異常增殖，并引起一系列炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致胃粘膜的慢性炎癥和潰瘍。1982年Warren和Marshall從胃黏膜活檢樣本中成功分離和培養(yǎng)出了這種細(xì)菌，證實(shí)該菌是導(dǎo)致胃炎的罪魁禍?zhǔn)?Marshelletal.,Letters,1984,25:83)。隨后大量研究證實(shí)，幽門螺桿菌是十二指腸潰瘍、十二指腸炎、十二指腸癌、胃潰瘍、慢性胃炎或殘胃炎的重要致病因素，與胃癌發(fā)生有密切關(guān)系。目前，國(guó)內(nèi)外應(yīng)用于治療消化性潰瘍疾病的藥物有增強(qiáng)胃粘膜保護(hù)作用的藥物(如，鉍制劑)、降低胃酸的藥物(如，ATP酶(質(zhì)子泵)抑制劑(PPI)或H2受體阻斷劑)、抗菌素(如，阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、慶大霉素等)這三大類藥物。驅(qū)蛔素(Ascaridole)，別名土荊芥油精，又稱驅(qū)蛔腦(Ascarisin)，化學(xué)名稱為l-methyl-4-(l-methylethyl)-2,3-dioxabicycIo[2.2.2]oct-5-ene，分子式C1()Hl602，結(jié)構(gòu)式如下式(I)，分子量168.23g/mo1。驅(qū)蛔素是土荊芥油殺腸蟲的主要成分，可用于驅(qū)除蛔蟲、鉤蟲，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明還具有一定的抗瘧作用。但對(duì)于驅(qū)蛔素在抑制幽門螺桿菌作用和治療消化性潰瘍，慢性胃炎等疾病方面，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了驅(qū)蛔素在制備抗幽門螺桿菌的藥物中的應(yīng)用。驅(qū)蛔素是一種驅(qū)蟲藥，本發(fā)明的發(fā)明人卻意外地發(fā)現(xiàn)，驅(qū)蛔素具有很強(qiáng)的抗抗幽門螺桿菌的作用。因此，可以用于預(yù)防和治療幽門螺旋桿菌引起的疾病，這些疾病包括但不限于十二指腸潰瘍、十二指腸炎、十二指腸癌、胃潰瘍、慢性胃炎、殘胃炎或胃癌。驅(qū)蛔素可以縮小潰瘍面積，降低十二指腸蠕動(dòng)速度，故而可以減輕痙攣性疼痛。另外，發(fā)明人還驚奇地發(fā)現(xiàn)，對(duì)于無(wú)幽門螺旋桿菌感染的潰瘍，如高胃酸分泌型潰瘍，驅(qū)蛔素也能縮小潰瘍面積，降低十二指腸蠕動(dòng)速度，故而可以減輕痙攣性疼痛。正是由于驅(qū)蛔素同時(shí)具有抗幽門螺旋桿菌、縮小潰瘍面積，降低十二指腸蠕動(dòng)速度等作用，因此特別適合治療幽門螺旋桿菌引起的疾病，既能治標(biāo)，又能治本，實(shí)現(xiàn)標(biāo)本兼治。所述的驅(qū)蛔素用于治療上述疾病時(shí)，其用量由醫(yī)生根據(jù)疾病種類、病情或者病人的一般狀況很容易確定。為了本發(fā)明目的的驅(qū)蛔素，可以從商業(yè)途徑購(gòu)買。也可以按照現(xiàn)有技術(shù)的方法制備，如可采用化學(xué)方法制備，例如光氧化反應(yīng)法(袁履冰.單態(tài)氧及其在有機(jī)合成中的應(yīng)用.遼寧化工，1985年第4期:2-9，沈玉全,曹怡.光氧化反應(yīng)的工業(yè)應(yīng)用前景.感光科學(xué)與光化學(xué)，第3期1985年8月:58-64.，江致勤.有機(jī)光化學(xué)的應(yīng)用前景.有機(jī)化學(xué)，1984年8月第4期:252-258.)、吸附法(劉和,孫忠貴.我國(guó)化學(xué)領(lǐng)域天然植物揮發(fā)性成分研究的進(jìn)展.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，第20巻第1期1998年3月:75-81.)或者植物生長(zhǎng)激素處理法(李樹殿.栽培技術(shù)對(duì)藥用植物有效成分含量的影響)來(lái)制備。本發(fā)明所用的驅(qū)蛔素，還可以是按照現(xiàn)有技術(shù)教導(dǎo)的方法從土荊芥(ChenopodiumambrosioidesL.)或波爾多(Boldo，PeumusboldusMolina)等植物中提取而來(lái)。本發(fā)明涉及的驅(qū)蛔素可制成任何一種藥劑學(xué)上所述的藥物制劑，包括但不限于膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、注射劑、滴注劑、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、口含劑、丸劑、膏劑、丹劑、噴霧劑、滴丸劑、口崩劑、微丸、氣霧劑等。為了本發(fā)明的目的，驅(qū)蛔素優(yōu)選制成口服劑型，如膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、丹劑、膏劑等，更優(yōu)選軟膠囊劑。驅(qū)蛔素的口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤(rùn)劑，必要時(shí)可對(duì)片劑進(jìn)行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤(rùn)滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤(rùn)劑包括十二烷基硫酸鈉?？赏ㄟ^(guò)混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進(jìn)行反復(fù)混合可使活性物質(zhì)分布在整個(gè)使用大量填充劑的那些組合物中。口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑，或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠;非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常規(guī)的香味劑或著色劑。對(duì)于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發(fā)明的活性物質(zhì)和無(wú)菌載體。根據(jù)載體和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過(guò)將活性物質(zhì)溶解在一種載體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過(guò)濾消毒，然后密封。輔料例如一種局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這種組合物冰凍，并在真空下將水除去。驅(qū)蛔素制劑，在制備成藥劑時(shí)可選擇性的加入適合的藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA二鈉、EDTA鈣鈉，一價(jià)堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯垸酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、e—環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。為了進(jìn)一步闡釋本發(fā)明，申請(qǐng)人提供了以下實(shí)驗(yàn)驅(qū)蛔素體外抗幽門螺桿菌實(shí)驗(yàn)、體外抗其他細(xì)菌實(shí)驗(yàn)、抗乙酸燒灼慢性胃潰瘍實(shí)驗(yàn)和對(duì)小鼠小腸墨汁推進(jìn)的抑制作用實(shí)驗(yàn)。這些實(shí)驗(yàn)表明驅(qū)蛔素有很強(qiáng)的抗幽門螺旋桿菌的作用，但對(duì)其它腸道細(xì)菌的抑制作用很弱，表明驅(qū)蛔素胃腸道用藥而不致對(duì)腸道的正常菌群造成影響。另外，驅(qū)蛔素對(duì)于縮小潰瘍面積，抑制小腸蠕動(dòng)都有很好的作用，這對(duì)于潰瘍的治療也是非常重要和有益的。驅(qū)蛔素體外抗幽門螺桿菌實(shí)驗(yàn)幽門螺桿菌菌株采用的是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株ATCC43504購(gòu)于上海仁濟(jì)醫(yī)院消化內(nèi)科。幽門螺桿菌生長(zhǎng)在改良的Skirrow選擇性培養(yǎng)基(即在改良Skirrow瓊脂基礎(chǔ)中加入抗生素混合液，使終濃度為TMP5mg/L，萬(wàn)古霉素10mg/L，多粘菌素B2500IU/L，(加入以上物質(zhì)目的何在？細(xì)菌的培養(yǎng)方法)并加入100ml脫纖維羊血)，置37。C微需氧環(huán)境(5%02，10%CO2，85%N2)培養(yǎng)72h。稱取20mg樣品油溶于12mg/ml聚山梨醇酯80水溶液1ml中，混合均勻，超聲5分鐘。用滅菌蒸餾水進(jìn)行等比稀釋。采用打孔瓊脂擴(kuò)散法。取直徑9cm、培養(yǎng)基厚度約4mm的改良Skirrow選擇性培養(yǎng)基的平板，每塊平板加入IO(VI1X108CFU/ml的幽門螺桿菌菌液，立即用涂布棒涂布均勻。之后，每個(gè)培養(yǎng)皿挖4個(gè)杯狀小孔，呈均勻分布，每孔直徑4mm。每孔中加入的驅(qū)蛔素樣液，微需氧37"培養(yǎng)72h，觀察抑菌圈，測(cè)量直徑。每個(gè)樣品濃度重復(fù)三次。結(jié)果見表l。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>"+"表示有菌生長(zhǎng)；"-"表示無(wú)菌生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明驅(qū)蛔素在體外能抑制幽門螺桿菌。驅(qū)蛔素體外抗其他細(xì)菌實(shí)驗(yàn)枯草芽孢桿菌(CMCC63501)、銅綠假單胞菌(CMCC10104)、大腸埃希菌(CMCC44102)和金黃色葡萄球菌(CMCC26003)購(gòu)置于中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心。將菌株接種于普通瓊脂平板上，置于35'C恒溫箱中培養(yǎng)2024h，用無(wú)菌肉湯調(diào)整菌液濁度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)。取100ul菌液均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，之后，每個(gè)培養(yǎng)皿挖4個(gè)杯狀小孔，呈均勻分布，每孔直徑4mm。每孔中加入2(^1的樣液。樣品初始濃度為200mg/ml。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示和荊花胃康市售油類似，驅(qū)蛔素對(duì)大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌抑制作用很弱?？挂宜釤坡晕笣儗?shí)驗(yàn)選用SD大鼠、雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組10只。按體重灌胃給藥，連續(xù)10天，每曰一次，在第2天給藥后2小時(shí)，進(jìn)行手術(shù)造模，造模前禁食24小時(shí)。動(dòng)物麻醉，劍突下切口，取胃于近幽門腺胃部漿膜下注射20%冰醋酸溶液，送回腹腔，灑青霉素粉，縫合傷口。手術(shù)后繼續(xù)給藥。最后一次給藥后，禁食24小時(shí)。處死大鼠，取胃，用游標(biāo)卡尺測(cè)量胃潰瘍的長(zhǎng)短徑，計(jì)算潰瘍面積。結(jié)果見下表表2大鼠醋酸燒灼慢性胃潰瘍模型組別劑量(mg/kg)潰瘍面積(mm2)P值(和模型組比較)模型組(花生油)12.05±6.50陽(yáng)性藥(雷尼替丁)2004.78±5.350.01驅(qū)蛔素低1010.51±4.980.55驅(qū)蛔素高205.73±2.070.005實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明驅(qū)蛔素有降低大鼠醋酸引起的胃潰瘍面積的作用，和模型組相比較，都有顯著性差異。對(duì)小鼠小腸墨汁推進(jìn)的抑制作用實(shí)驗(yàn)CD-1小鼠，隨機(jī)分為4組，每組10只。灌胃給藥三天。末次灌胃前禁食24小時(shí)，灌胃后2小時(shí)，灌胃給予50%碳素墨汁(生理鹽水配制)0.3ml/10g。準(zhǔn)確計(jì)時(shí)20分鐘，將小鼠脫頸椎處死。打開腹腔，取出腸(從幽門開始，至回盲部)，測(cè)量腸道全長(zhǎng)以及墨汁推進(jìn)距離，計(jì)算推進(jìn)百分比。結(jié)果見表3.表3小鼠小腸墨汁推進(jìn)實(shí)驗(yàn)。組別劑量(mg/kg)墨汁推進(jìn)率(％)P值(和模型組比較)模型組(花生油)67±8驅(qū)蛔素155±70扁驅(qū)蛔素21052±220.04結(jié)論5mg/kg和10mg/kg的驅(qū)蛔素有明顯抑制小腸推進(jìn)的作用，和模型組比較都有顯著性差異。圖1實(shí)施例1制備的驅(qū)蛔素在CDCL,中的'H剛R(請(qǐng)?jiān)趯?shí)施例中具體描述該圖)圖2實(shí)施例1制備的驅(qū)蛔素HPLC譜圖(請(qǐng)?jiān)趯?shí)施例中具體描述該圖)具體實(shí)施例方式本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步闡述，但不以任何形式對(duì)本發(fā)明構(gòu)成限制。實(shí)施例1驅(qū)蛔素的制備取土荊芥揮發(fā)油，采用正相硅膠(《100um)柱色譜分離，硅膠用量為揮發(fā)油重量的5~50倍。以正己垸為起始溶劑洗脫約35倍的保留體積，得流分I。再以正己垸/乙酸乙酯梯度洗脫，分步收集。順序?yàn)檎和?乙酸乙酯(100:1)洗脫約35倍保留體積，得流分II;正己烷/乙酸乙酯(80:1)洗脫約35倍保留體積，得流分III。流分111中驅(qū)蛔素含量達(dá)90%以上。圖1顯示了提取的驅(qū)蛔素的在CDC1.,中的'HNMR，從譜圖分析提取驅(qū)蛔素結(jié)構(gòu)正確。圖2顯示了驅(qū)蛔素提取樣品的HPLC譜圖。圖2顯示了驅(qū)蛔素提取樣品的HPLC譜圖，該圖表明保留時(shí)間28.592處是驅(qū)蛔素的峰，純度為91.1%。實(shí)施例2驅(qū)蛔素的制備取土荊芥揮發(fā)油，采用正相硅膠(《100um)柱色譜分離，硅膠用量為揮發(fā)油重量的550倍。以石油醚(沸程306(TC)為起始溶劑洗脫約5倍的保留體積，得流分I。再以石油醚/乙酸乙酯梯度洗脫，分步收集。順序?yàn)槭兔?乙酸乙酯(100:1)洗脫約5倍保留體積，得流分II;石油醚/乙酸乙酯(80:1)洗脫約5倍保留體積，得流分m。流分111中驅(qū)蛔素含量達(dá)90%以上。實(shí)施例3驅(qū)蛔素的制備先將正相硅膠(《100um)用2%~2.5%的硝酸銀溶液充分浸泡后，避光陰干，備用。取土荊芥揮發(fā)油，采用上述硝酸銀硅膠進(jìn)行柱色譜分離，硅膠用量為揮發(fā)油重量的550倍。以正己烷為起始溶劑洗脫約35倍的保留體積后，再以正己烷/乙酸乙酯梯度洗脫，分步收集。順序?yàn)檎和?乙酸乙酯(100:1)洗脫約3~5倍保留體積，得流分I;正己烷/乙酸乙酯(80:1)洗脫約3~5倍保留體積，得流分II。流分II中驅(qū)蛔素含量達(dá)90%以上。實(shí)施例6驅(qū)蛔素的制備方法先將正相硅膠(《100um)用2%~2.5%的硝酸銀溶液充分浸泡后，避光陰干，備用。取土荊芥揮發(fā)油，采用上述硝酸銀硅膠進(jìn)行柱色譜分離，硅膠用量為揮發(fā)油重量的550倍。以石油醚(沸程306(TC)為起始溶劑洗脫約3~5倍的保留體積，得流分I。再以石油醚/乙酸乙酯梯度洗脫，分步收集。順序?yàn)槭兔?乙酸乙酯(100:1)洗脫約35倍保留體積，得流分II;石油醚/乙酸乙酯(80:1)洗脫約35倍保留體積，得流分III。流分III中驅(qū)蛔素含量達(dá)90%8以上。實(shí)施例5驅(qū)蛔素的制備取土荊芥揮發(fā)油，采用反相C18硅膠(《100um)柱色譜分離，反相C18硅膠用量為揮發(fā)油重量的20500倍。以甲醇/水為洗脫溶劑梯度洗脫，分布收集。順序?yàn)榧状?水(30:70)洗脫約35倍保留體積，得流分I;甲醇/水(40:60)洗脫約35倍保留體積，得流分II;甲醇/水(50:50)洗脫約35倍保留體積，得流分III;甲醇/水(60:40)洗脫約3~5倍保留體積，得流分IV;甲醇/水(70:30)洗脫約35倍保留體積，得流分V;甲醇/水(80:20)洗脫約35倍保留體積，得流分VI;甲醇/7K(90:10)洗脫約35倍保留體積，得流分VII。流分V中驅(qū)蛔素含量達(dá)90%以上。實(shí)施例6驅(qū)蛔素膠丸的制備取明膠100份加入120份水中，使其吸水膨脹，另將30份甘油加熱至6(TC，將膨脹的明膠加入，攪拌、熔融、保溫待用。稱取實(shí)施例3中驅(qū)蛔素油6g，加入4g菜籽色拉油，攪均，得到原料油。將明膠液和原料油裝入自動(dòng)旋轉(zhuǎn)軋囊機(jī)，壓制成內(nèi)含油狀液體60mg/粒的膠丸，膠丸定型、干燥、洗滌、消毒，包裝即得。實(shí)施例7驅(qū)蛔素滴丸的制備取300g聚乙二醇4000加熱至75°C，熔融后加入實(shí)施例3中得驅(qū)蛔素50g，攪拌均勻，移至滴丸機(jī)中，保持熔融液溫度75-C，由上往下，滴速適中滴入S'C液體石蠟中，制成滴丸劑。權(quán)利要求1.驅(qū)蛔素在制備抗幽門螺桿菌的藥物中的應(yīng)用。2.如權(quán)利要求l的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物用于預(yù)防和治療幽門螺旋桿菌引起的疾病。3.如權(quán)利要求2的應(yīng)用，其特征在于所述的疾病選自十二指腸潰瘍、十二指腸炎、十二指腸癌、胃潰瘍、慢性胃炎、殘胃炎或胃癌。4.如權(quán)利要求3的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物用于縮小潰瘍面積。5.如權(quán)利要求3的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物用于減輕痙攣性疼痛。6.驅(qū)蛔素在制備治療高胃酸分泌型潰瘍的藥物中的應(yīng)用。7.如權(quán)利要求6的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物用于縮小潰瘍面積。8.如權(quán)利要求6的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物用于減輕痙攣性疼痛。9.如權(quán)利要求18的任一權(quán)利要求的應(yīng)用，其特征在于所述的驅(qū)蛔素制成口服制劑。10.如權(quán)利要求18的任一權(quán)利要求的應(yīng)用，其特征在于所述的驅(qū)蛔素制成軟膠囊劑。全文摘要本發(fā)明涉及驅(qū)蛔素在制備抗幽門螺桿菌的藥物中的應(yīng)用。文檔編號(hào)A61P1/00GK101675924SQ20081015148公開日2010年3月24日申請(qǐng)日期2008年9月19日優(yōu)先權(quán)日2008年9月19日發(fā)明者周水平,悅張,張?zhí)m蘭,朱永宏,李欣欣,栗志文,王方宇,陳建明,馬曉慧申請(qǐng)人:天津天士力制藥股份有限公司