專利名稱：：姜黃素明膠微球及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種姜黃素明膠微球及其制備工藝。技術(shù)背景姜黃素(Curcumin，簡稱C)是從姜科姜黃屬(curcumaL.)植物中提取的一種天然有效成分，具有廣泛的預防和治療腫瘤的作用，且毒副作用小。體外研究表明，姜黃素對多種腫瘤細胞的產(chǎn)生、增殖、轉(zhuǎn)移均具有抑制作用，特別是對于人肺癌細胞，不僅可使細胞內(nèi)Ca2、cAMP濃度升高，成功誘導其凋亡，而且可以使具有抗脫落凋亡特性的肺癌細胞發(fā)生脫落凋亡，對于惡性轉(zhuǎn)移瘤的治療具有非常重要的意義。但其水中溶解度小，.穩(wěn)定性差，口服吸收少，生物利用度低，這大大限制了其應用。微球，是一種以適宜高分子材料為載體包裹或吸附藥物而制成的球形或類球形微粒，粒徑一般在l500nm之間，屬于基質(zhì)型骨架微粒，可以供注射、口服、滴鼻、皮下埋植或關(guān)節(jié)腔給藥使用，達到提高藥物靶向性、延緩或控制藥物釋放、增加制劑穩(wěn)定性等目的。若將姜黃素制備成微球，則會大大提高其穩(wěn)定性、吸收率、生物利用度等。目前并沒有關(guān)于姜黃素微球及制備工藝的專利文獻報道。
發(fā)明內(nèi)容針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種姜黃素明膠微球，本發(fā)明還提供了其制備工藝。一種姜黃素明膠微球，微球中姜黃素的質(zhì)量分數(shù)為2.2%7.6%，余量為明膠。以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，步驟如下在溫度55。C士2。C下，將含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到溫度為55'C士2。C的含有Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為10%20%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為1:1020，Span80的體積濃度為1%2%，水相與油相的比例為l:46;攪拌形成W/0乳劑，然后降溫至20'C土2。C，加入戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58。C,攪拌固化2535min，再放入48。C冰箱中繼續(xù)固化24土0.5h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。所述電磁攪拌的轉(zhuǎn)速為8001000r/min。所述形成W/0乳劑時攪拌時間為3040min。所述戊二醛溶液體積分數(shù)為25%，加入的戊二醛溶液與7jC相的體積比為1:5。本發(fā)明的姜黃素明膠微球外觀為淡黃色粉末，用光學顯微鏡與掃描電鏡觀察，顯示微球呈球形，表面光滑，粒徑分布較窄、分散性好，不粘聯(lián)或極少粘聯(lián)，流動性好。本發(fā)明以可生物降解的價格低廉的明膠為載體材料，以乳化交聯(lián)法制備了姜黃素明膠微球(C-GMS)，具有工藝簡單、成本低、操作方便、包封率高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。-圖1為微球在光學顯微鏡下的照片(*100);圖2為微球在掃描電鏡下的照片(*4000);圖3為微球粒徑分布圖；圖4為姜黃素的DSC曲線圖；，圖5為空白明膠微球的DSC曲線圖；圖6為姜黃素明膠微球的DSC曲線圖;圖7為C-GMS體外釋放曲線示意圖。具體實施方式下面結(jié)合實施例和試驗例對本發(fā)明作進一步的說明實施例l:制備姜黃素明膠微球，步驟如下以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55'C下，將2mL含有姜黃素的明膠水溶液在800r/rnin電磁攪拌下緩慢加入到8mL溫度為55'C的含有2%Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為20%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為1:20;攪拌30min形成W/O乳劑，然后降溫至2(TC，加入0.4mL25呢的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58'C，攪拌固化30min，再放入48。C冰箱中繼續(xù)固化24h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙y醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定，載藥畺為2.22%,包封率為27.50%。實施例2:制備姜黃素明膠微球，步驟如下，，以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55'C下，將2mL含有姜黃素的明膠水溶液在1000r/min電磁攪拌下緩慢加入到8mL溫度為55'C的含有1.5%Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為15%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為15:200;攪拌40min形成W/O乳劑，然后降溫至2(TC，加入0.4mL25W的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58°C，攪拌固化25min，再放入48。C冰箱中繼續(xù)固化23.5h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定，載藥量為4.44%,包封率為52.00%。實施例3:制備姜黃素明膠微球，步驟如下以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55'C下，將2mL含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到8mL溫度為55'C的含有P/。Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為10%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為l:10;攪拌形成W/0乳劑，然后降溫至20'C，加入0.4mL25y。的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58'C，攪拌固化35min，再放入48'C冰箱中繼續(xù)固化24.5h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定，載藥量為7.6%，包封率為71.50%。實施例4:制備姜黃素明膠微球，步驟如下-以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55'C下，將2mL含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到10mL溫度為55'C的含有1.5%Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為10%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為1:20;.攪拌形成W/0乳劑，然后降溫至20'C，加入0.4mL25免的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58"，攪拌固化30min，再放入48t:冰箱中繼續(xù)固化24h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定，載藥量為3.74%，包封率為66.90%。實施例5:制備姜黃素明膠微球，步驟如下以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55'C下，將2mL2含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到10mL溫度為55'C的含有l(wèi)%Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為20%,姜黃素與明膠的質(zhì)量比為15:200;攪拌形成W/0乳劑，然后降溫至20。C，加入0.4mL25免的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58。C，攪拌固化30min，再放入48'C冰箱中繼續(xù)固化24h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定，載藥量為4.8%，包封率為'55.40%。實施例6:制備姜黃素明膠微球，步驟如下-以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55'C下，將2mL含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到10mL溫度為55'C的含有2。/。Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為15%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為1:10;攪拌形成W/0乳劑，然后降溫至2(TC，加入0.4mL2596的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58'C，攪拌固化30min，再放入48'C冰箱中繼續(xù)固化24h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定，載藥量為6.01%，包封率為71.90%。實施例7:制備姜黃素明膠微球，步驟如下以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55。C下，將2mL2含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到12mL溫度為55'C的含有l(wèi)%Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為15%,姜黃素與明膠的質(zhì)量比為l:20;攪拌形成W/0乳劑，然后降溫至20'C，加入0.4mL25免的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58。C，攪拌固化30min,再放入48'C冰箱中繼續(xù)固化24h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定，載藥量為3.30%，包封率為61.00%。實施例8:制備姜黃素明膠微球，步驟如下以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55'C下，將2mL含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到12mL溫度為55'C的含有2。/。Spaii80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為10%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為15:200;攪拌形成W/0乳劑，然后降溫至2(TC，加入0.4mL25y。的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58'C，攪拌固化30min,再放入48'C冰箱中繼續(xù)固化24h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定，載藥量為6.15%，包封率為75.50%。實施例9:制備姜黃素明膠微球，步驟如下以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55'C下，將2mL含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到12mL溫度為55'C的含有1.5%Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為20%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為1:10;攪拌形成W/0乳劑，然后降溫至2(TC，加入0.4mL259b的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58'C,攪拌固化30min，再放入48'C冰箱中繼續(xù)固化24h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定，載藥量為6.30%，包封率為50.01%。實施例10:制備姜黃素明膠微球，步驟如下r以液體石蠟為油相，Span80為乳化劑，在溫度55。C下，將2mL含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到10mL溫度為55'C的含有in/。Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為10%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為1:10;攪拌形成W/0乳齊U,然后降溫至2(TC,加入0.4mL25^的戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58'C，攪拌固化30min，再放入48'C冰箱中繼續(xù)固化24h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。經(jīng)測定.，其中，載藥量為6.15%，包封率為75.5%。試驗例l:微球的形態(tài)、粒徑及其分布按實施例10的制備工藝制備姜黃素明膠微球，觀察其形態(tài)、粒徑及其分布，結(jié)果為外觀為淡黃色粉末，用光學顯微鏡與掃描電鏡觀察，顯示微球呈球形，表面光滑，粒徑分布較窄、分散性好，不粘聯(lián)或極少粘聯(lián)，流動性好，如圖l、圖2所示。以算術(shù)平均徑(dav)為微球的平均粒徑，計算公式為dav-(n,d,+n2d2+…nndn)/(m+n2+…+nn),式中n,、！12...1111為粒子數(shù)，山、d2…dn為粒徑。在光學顯微鏡下用測微尺測定500個，以每隔5[im粒徑為一單元的微球個數(shù)除以總個數(shù)得微球的頻率(％)為縱坐標，以粒徑Oun)為橫坐標繪制微球的球徑直方圖表示粒度分布，如圖3所示，測得微球的平均粒徑為18.9pm,粒徑在5~30pm范圍內(nèi)者占總數(shù)的86.6%。試驗例2:差示掃描量熱法(DSC)測定以實施例IO所得到的微球為樣品，進行DSC測定，操作條件掃描溫度31400°C,升溫速度10°C/min，DSC量程為40mw，氮氣流量為0.2ml/min，分別測得C(姜黃素)、GMS(空白明膠微球)與C-GMS(姜黃素明膠微球)的DSC曲線，如圖4、圖5、圖6所示，從曲線上看出C在185.5。C時有特征峰，GMS在62.5。C時有特征吸收峰，但C-GMS基本上無C或GMS的特征吸收峰，而有其本身67.9X:，182.5。C的特征峰，說明確實形成了C-GMS。試驗例3:C-GMS體外釋藥試驗(1)標準曲線的制備準確稱量10mg姜黃素，用40%乙醇生理鹽水溶液溶于lOOmL容量瓶中，定容后分別取O.l、0.3、0.5、0.7、0.9ml,在10mL容量瓶中用上述溶液溶定容。于432nrn處測定吸收度A，以A對藥物濃度C進行線性回歸，得標準曲線方程為A=0.1276C-0.0035,r=0.9998(2)釋藥試驗參照文獻趙瑞玲，丁紅，謝茵.阿霉素聚乳酸微球的制備及釋藥特性研究[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2004，24(2):74-7,采用動態(tài)透析法，精密稱取實施例10制備的C-GMS20mg，裝入透析袋(分子量截留值為20000)中，置200mL溶出杯中，加入lOOmL40%乙醇生理鹽水溶液作為釋放介質(zhì)，在37。C恒溫溶出儀中旋轉(zhuǎn)，定時取樣3mL，同時補充等量的同溫度的釋放介質(zhì)。樣液用0.8pm微孔濾膜過濾后，以同法操作的GMS為空白，測定藥物含量，計算累積釋藥百分率(Ft),以(Ft)對相應取樣時間(t)做圖，結(jié)果如圖7所示。結(jié)果表明，C-GMS體外累積釋放量在48h時可達77.01%，具有明顯的緩釋特征。C-GMS的釋藥可用一級動力學方程描述ln(l-Q)=-0.0298t-0.0598，r=0.9984，T1/2=21.25h。試驗例4:C-GMS的穩(wěn)定性考察取實施例IO制備的C-GMS，密封于西林瓶中，分別置冰箱內(nèi)(35°C)、室溫1525。C與37。CRH75X條件下3個月，結(jié)果如表1所示，其外觀、形態(tài)、載藥量、釋藥規(guī)律均幾乎無變化或變化不顯著。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求1.姜黃素明膠微球，其特征在于微球中姜黃素的質(zhì)量分數(shù)為2.2％～7.6％，余量為明膠。2.權(quán)利要求1所述的姜黃素明膠微球的制備工藝，其特征在于以液體石蠟為油相，Span80'為乳化劑，步驟如下在溫度55。C土2-C下，將含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下緩慢加入到溫度為55'C土2X:的含有Span80的液體石蠟中，其中，明膠的質(zhì)量濃度為10%20%，姜黃素與明膠的質(zhì)量比為1:1020，Span80的體積濃度為1%2%，水相與油相的比例為l:46;攪拌形成W/0乳劑，然后降溫至20'C士2'C,加入戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在58。C，攪拌固化2535min,再放入48。C冰箱中繼續(xù)固化24±0.5h;將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的姜黃素明膠微球的制備工藝，其特征在于所述電磁攪拌的轉(zhuǎn)速為8001000r/min。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的姜黃素明膠微球的制備工藝，其特征在于所述形成W/0乳劑時攪拌時間為3040min。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的姜黃素明膠微球的制備工藝，其特征在于所述戊二醛溶液體積分數(shù)為25%，加入的戊二醛溶液與水相的體積比為h5。全文摘要本發(fā)明公開了一種姜黃素明膠微球，微球中姜黃素的質(zhì)量分數(shù)為2.2％～7.6％，余量為明膠。其制備方法為將含有姜黃素的明膠水溶液在電磁攪拌下加入到含有Span80的液體石蠟中，攪拌形成W/O乳劑，然后降溫至20℃，加入戊二醛溶液，冰浴，保持溫度在5～8℃，攪拌固化，再放入冰箱中繼續(xù)固化24h；將上層油相傾倒，加入異丙醇脫水，抽濾，用乙醚和異丙醇交替沖洗數(shù)次，得干燥粉末狀微球。微球外觀為淡黃色粉末，呈球形，表面光滑，粒徑分布較窄、分散性好，不粘聯(lián)或極少粘聯(lián)，流動性好。本發(fā)明以可生物降解的價格低廉的明膠為載體材料，以乳化交聯(lián)法制備了姜黃素明膠微球，具有工藝簡單、成本低、操作方便、包封率高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。文檔編號A61P35/00GK101401801SQ200810159648公開日2009年4月8日申請日期2008年11月11日優(yōu)先權(quán)日2008年11月11日發(fā)明者劍唐,曹豐亮,靜楊,翟光喜,瑋蔣申請人:山東大學