專利名稱：：5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物的用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物的用途，屬于化學醫(yī)藥領域。
背景技術：
：目前已上市的2，4-噻唑烷二酮類(TZDs)藥物如曲格列酮(troglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)、環(huán)格列酮(ciglitazone)等主要用于治療糖尿病。近幾年研究發(fā)現(xiàn)TZDs在治療心血管疾病、抑制牛皮癬、抗腫瘤方面也顯示出較好的醫(yī)療價值?？箘用}粥樣硬化是TZDs對心血管最突出的作用，TZDs抗動脈粥樣硬化的直接效應包括增加一氧化氮的生物利用度，減少白細胞和內皮細胞的相互作用，減少血管平滑肌細胞的迀移和增殖及巨噬細胞中膽固醇的外流等。曲格列酮是AMP激酶的活化劑，對角質化細胞的增殖也有抑制作用。該藥可改善器官培養(yǎng)的牛皮癬皮膚的組織學特征，臨床試驗表明，部分患者服用曲格列酮后其牛皮癬癥狀有實質性的改善。Bhagavathula等合成了一種對PPARy有高親和力的化合物BP-1107(式a)用于人皮膚的SCID(severe-combinedimmunodeficient)鼠移植模型進行試驗，在體外試驗中發(fā)現(xiàn)BP-1107是有效的角質化細胞生長抑制劑，顯著降低了移植到SCID鼠的人牛皮癬皮膚的超常增生。Richard等研充發(fā)現(xiàn)，服用濃度為lnirol/L的羅格歹lj酮8小吋后，結腸癌細胞表面的CXCR4的表達顯著減少，其他4種TZDs[曲格列酮、吡格列酮、環(huán)格列酮，MCC555(b)]也表現(xiàn)出類似的活性。5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物屬于2，4-噻唑烷二酮類(TZDs)化合物。目前還未見5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物應用于醫(yī)藥領域，更未見其在制備治療肝炎、結腸炎、免疫性心肌炎、胰腺炎和肺纖維化等免疫性疾病藥物中的應用。本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一類5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制備治療肝炎、結腸炎、免疫性心肌炎、胰腺炎和肺纖維化等免疫性疾病藥物中的用途。式I所示的5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制備治療免疫性疾病藥物中的用途，其中，Ri為氫、鹵代基、羥基或烷氧基；R2為氫、鹵代基、羥基或烷氧基。優(yōu)選的，Ri為氫、羥基或烷氧基；R2為氫、羥基或烷氧基。最優(yōu)的，Rl為甲氧基；R2為氫。進一步的，所述免疫性疾病為肝炎、結腸炎、免疫性心肌炎、胰腺炎或肺纖維化等。本發(fā)明的有益效果是創(chuàng)造性通過實驗證明了式I所示的5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物具有很好的治療肝炎、結腸炎、免疫性心肌炎、胰腺炎、肺纖維化等自身免疫性疾病的作用，為該類藥物的制備提供了一種新的選擇。圖l是對小鼠實驗性自身免疫性心肌炎的療效觀察圖，a為正常組，b為對照組，c為模型組，d為治療組。圖2是對小鼠實驗性自身免疫性心肌炎的療效觀察圖，a為模型組，b為治療組。圖3是血清轉氨酶ALT的生化學評價對比圖。圖4是血清轉氨酶AST的生化學評價對比圖。圖5是肝組織H&E染色進行病理切片觀察圖，a:ConA模型組，b:50mg/kg5-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮灌胃治療組。圖6是RT-PCR及ELISA分析炎性細胞因子IL-IO，IL-2的改變圖。圖7是5-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮治療ConcanavalinA誘導的慢性肝炎的PE染色療效觀察，a:模型組，b:治療組。
發(fā)明內容圖8是5-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮治療ConcanavalinA誘導的慢性肝炎的免疫組化療效觀察，a:模型組，b:治療組。圖9是5-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮治療博萊霉素誘導的肺纖維化的療效觀察，A:單純BleO組；B:BleO+溶劑組；C:治療組；D:單純藥物組；E:正常對照組。圖10是5-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮治療L-精氨酸誘導的急性壞死性胰腺炎的療效觀察圖，a:血清AMY-P隨時間的變化圖，b:血清AMYL2隨時間的變化圖，1:模型組，2:治療組。圖ll是5-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮治療L-精氨酸誘導的急性壞死性胰腺炎的療效免疫組化實驗觀察圖，a:正常對照組，b:模型組，C:治療組。圖12是5-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治療蛙皮素誘導的水腫性胰腺炎的療效免疫組化實驗觀察圖，a:正常對照組，b:模型組，C:治療組。具體實施例方式本發(fā)明5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物可采用公知常識制備得到，也可以采用以下方法以e-丙氨酸為催化劑，以醋酸為溶劑，相應結構的芳香醛與2，4-噻唑烷二酮在80130。C下反應l4小時；將反應液冷卻，若有固體析出，直接過濾即得；若無固體析出，加少量的蒸餾水，即有固體析出，直接過濾也得到5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>以下結合實施例對本發(fā)明作進一步的闡述。實施例僅用于說明本發(fā)明，而不是以任何方式來限制本發(fā)明。下列化合物的制備方法可以采用公知方法制備得到，比如參考(Bioorganic&MedicinalChemistry(2006)，14(2)，567-574)所述的方法進行的。5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮(Ia)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>用質譜、^NMR鑒別收取的產品，實驗數(shù)據(jù)如下4NMR(DMS0-d6)S:3.465(t，J=12腿z，1H，-CH=)m，5H，aromatic)，7.755(s，1H，NH)MS:m/z204.0197(M-)5-(4-溴苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Ib)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>用質譜、^NMR鑒別收取的產品，實驗數(shù)據(jù)如下工HNMR(DMS0-d6)S:3.447(t，lH，-CH=)，7.609(q，2H，aromatic)m，2H，aromatic)，12.674(s，1H，NH)MS:m/z281.9303(M-)5-(4-羥基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Ic)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>用質譜、^NMR鑒別收取的產品，實驗數(shù)據(jù)如下工H麗R(DMS0-d6)S:3.492(d，lH，-CH=)，6.922(d，2H，aromatic)d，2H，aromatic)，7.698(s，lH，-0H)，10.303(s，lH，-NH-)MS:m/z220.0147(M-)5-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>用質譜鑒別收取的產品，實驗數(shù)據(jù)如下MS:m/z234.0303(M-)5-(3-甲氧基-4-羥基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Ie)0<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>用質譜、^NMR鑒別收取的產品，實驗數(shù)據(jù)如下工HNMR(DMS0-d6)S:3.802(s，3H，-CH3)，3.486(d，lH，-CH=)，6.919(d，1H，aromatic)，7.065(q，1H，aromatic)，7.173(d，1H，aromatic)，7.720(s，1H，-0H)，9.952(s，1H，NH)MS:m/z250.0252(M-)藥效學試驗部分試驗例l5-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治療小鼠實驗性、自身免疫性心肌炎的療效觀察1、實驗材料健康雌性68周齡Balb/C小鼠，清潔級，由四川大學動物實驗中心提供。ConA劑量為15mg/Kg，無菌生理鹽水配制；化合物Id劑量為50mg/Kg，無菌生理鹽水配制；地塞米松(Dexamethasone)劑量為500ug/Kg。2、實驗方法及分組正常組不做任何處理。對照組:腹腔注射地塞米松一小時后，ConA尾靜脈給藥。模型組ConA尾靜脈給藥。治療組ConA尾靜脈給藥半小時后，50mg/kg化合物Id灌胃治療。連續(xù)治療3周，處死小鼠，取出心臟，觀察心臟大小和顏色并取典型標本照相，稱取心臟重量(需要微量天平)，將心臟橫切，部分保存于液氮，其余保存于福爾馬林，制作HE切片做免疫組化實驗。3、對比結論自身免疫性心肌炎的療效觀察圖la為正常組，心肌細胞排列清楚，無炎癥細胞浸潤和水腫；圖lb為對照組，心肌細胞排列清楚，有極少量炎癥細胞灶性浸潤；圖lc為模型組，心肌細胞排列紊亂，有大量炎癥細胞浸潤，心肌水腫并伴有壞死和纖維化；圖ld為治療組，心肌細胞排列較正常，炎癥細胞灶性浸潤，心肌水腫，伴少量壞死和纖維化。各組病理評分結果見表l:表l各組病理評分結杲<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>可見，治療組的病理評分(1.83)處于對照組(0.67)和模型組(2.86)之間，說明Id對自身免疫性心肌炎具有治療效果，但其療效不如地塞米松顯著。免疫組化后觀察心肌中AKT磷酸化的表達和巨噬細胞、CD4、CD8細胞的浸潤，圖2a為模型組，可見較多巨噬細胞浸潤；圖2b為治療組，有中等巨噬細胞。結果說明，使用Id治療后，巨噬細胞數(shù)量減少，對炎癥起到了減緩的作用。試驗例25-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治療ConcanavalinA(ConA)誘導的急性肝炎的療效觀察1、實驗材料健康雌性68周齡Balb/C小鼠，清潔級，由四川大學動物實驗中心提供。ConA劑量為15mg/Kg，無菌生理鹽水配制；化合物Id劑量為50mg/Kg，無菌生理鹽水配制；地塞米松(Dexamethasone)劑量為500ug/Kg。2、實驗方法及分組正常組不做任何處理。對照組:腹腔注射地塞米松一小時后，ConA尾靜脈給藥。模型組ConA尾靜脈給藥。治療組ConA尾靜脈給藥半小時后，50mg/kg化合物Id灌胃治療?？蛰d組ConA尾靜脈給藥半小時后，用藥物媒介(0.5%羧甲基纖維素/0.25%吐溫20)灌胃給藥。以上各組小鼠ConA注射后20小時眼眶取血，分離血清。然后斷頸處死，觀察腹腔內各器官病理變化，肝組織保存于10%的中性甲醛中大于24小時，石蠟包埋切片。3、對比結論圖3是血清轉氨酶ALT的生化學評價。治療組及對照組的ALT水平較模型組有顯著下降，Id的治療效果接近地塞米松。圖4是血清轉氨酶AST的生化學評價。治療組及對照組的AST水平較模型組有顯著下降，Id的治療效果接近地塞米松。圖5是肝組織HE染色進行病理切片觀察圖，A為ConA模型組，B為50mg/kg化合物Id灌胃治療組。HE染色表明治療組與模型組相比較尾靜脈給藥后20小時，小鼠可見廣泛的肝細胞腫脹，部分肝細胞徹底壞死，壞死灶及血管周圍有炎性細胞浸潤，肝臟壞死灶及肝細胞水腫都明顯改善。圖6是RT-PCR及ELISA分析炎性細胞因子IL-IO，IL-2的改變圖。圖6a中治療組的IL-10水平明顯高于模型組，說明經Id治療后可誘導抗炎細胞因子IL-lO水平升高，從而抑制炎性反應。圖6b中Id治療后脾細胞中IL-2的水平都高于未受應激者，但低于脂多糖誘導的IL-2水平。表明Id可增加免疫調節(jié)因子白介素2(IL-2)的表達，激活自身免疫能力，對殺滅炎性細胞起到積極作用。試驗例3化合物Id治療ConcanavalinA誘導的慢性肝炎的療效觀察1、實驗材料健康雌性68周齡Balb/C小鼠，清潔級，由四川大學動物實驗中心提供。ConA劑量為15mg/Kg，無菌生理鹽水配制；化合物Id劑量為50mg/Kg，無菌生理鹽水配制；地塞米松(Dexamethasone)劑量為500ug/Kg。2、實驗方法及分組慢性肝炎模型組ConA(10mg/kg體重)每星期尾靜脈注射，持續(xù)4周，在第4次ConA注射后7天，斷頸處死小鼠，肝臟保存于10%的中性甲醛中大于24小時，石蠟包埋，切片，染色慢性肝炎治療組ConA(10mg/kg體重)每星期尾靜脈注射，持續(xù)4周，第2次ConA注射后口服Id(50mg/kg體重每日)，持續(xù)3個星期，最后l次ConA注射后口服化合物Id7次，斷頸處死小鼠，肝臟保存于10%的中性甲醛中大于24小時，石蠟包埋，切片，染色。模型組ConA(10mg/kg體重)每星期尾靜脈注射，持續(xù)4周，在第4次ConA注射后7天，斷頸處死小鼠，肝臟保存于10%的中性甲醛中大于24小時，石蠟包埋，切片，免疫組化。治療組ConA(10mg/kg體重)每星期尾靜脈注射，持續(xù)4周，第2次ConA注射后口服Id后(50mg/kg體重每日)，持續(xù)3個星期，最后l次CONA注射后口服Id7次，斷頸處死小鼠，肝臟保存于10%的中性甲醛中大于24小時，石蠟包埋，切片，免疫組化。3、對比結論慢性肝炎模型組觀察結果見圖7a，HE染色表明，尾靜脈給藥后20小時后，可見廣泛的肝細胞腫脹，部分肝細胞徹底壞死，壞死灶及血管周圍有炎性細胞浸潤。慢性肝炎治療組服E染色觀察結果見圖7b。HE染色表明，50mg/kgId灌胃治療，肝臟壞死灶及肝細胞水腫都明顯改善。模型組免疫組化觀察結果見圖8a，治療組免疫組化觀察結果見圖8b。該圖表明，治療組與模型組比較，細胞浸潤顯著下降；并且經Id治療后逆轉了模型組中的肝纖維化。實施例45-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治療老鼠肺纖維化大鼠的療效觀察1、實驗材料20只無病原體ICR小鼠，清潔級，由四川大學動物實驗中心提供；博萊霉素劑量為25mg/kg，無菌生理鹽水配制；化合物Id用無菌生理鹽水配制。2、實驗方法及分組將老鼠分為5組，每組3到4只老鼠。單純Bleo組動物麻醉后，每天通過動物聲帶向氣管內注射生理鹽水和0.5%甲基纖維素溶液，共持續(xù)14天。Bleo+溶劑組動物麻醉后，每天皮下注射O.5%甲基纖維素溶液，兩個小時后通過動物聲帶向氣管內注射博萊霉素，共持續(xù)14天。治療組動物麻醉后，每天皮下注射50mg/kg體重的化合物Id溶液，兩個小時后向氣管內注射博萊霉素，共持續(xù)14天。單純藥物組動物麻醉后，每天皮下注射50mg/kg體重的化合物Id溶液，共持續(xù)14天。正常對照組取正常小鼠肺組織。將上述五組動物處死，取肺組織用10%福爾馬林固定，做HE免疫組化實驗。3、對比結論各組HE染色后觀察結果見圖9(放大倍數(shù)為100X)，A:單純Bleo組；B:Bleo+溶劑組;C:治療組；D:單純藥物組；E:正常對照組。氣管內注入博萊霉素后可以引起明顯的肺間質纖維化(A、B、C圖)正常肺泡結構被破壞甚至消失，肺泡間隔增寬，肺組織纖維樣變。治療組(C圖)較未治療組(A、B圖)，肺組織纖維化的范圍及程度均明顯減輕。單純藥物組(D圖)肺組織情況與正常肺組織(E圖)幾乎相同，表明藥物本身是安全的，不會引起肺纖維化。實施例55-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治療精氨酸誘導的急性壞死性胰腺炎的療效觀察1、實驗材料健康雄性Wistar大鼠(250-300g)，清潔級，由四川大學動物實驗中心提供；L-精氨酸劑量為250mg/100g，無菌生理鹽水配制；化合物Id劑量為50mg/Kg，無菌生理鹽水配制。2、實驗方法及分組正常對照組5只大鼠腹腔注射生理鹽水(250mg/100g)，半小時后給予生理鹽水灌胃，再過半小時后注射生理鹽水(250mg/100g)，第一次灌胃后每隔3.5h生理鹽水灌胃一次，第二天開始每天2次生理鹽水灌胃。于第二次注射生理鹽水后12h、24h、48h、72h取血。模型組9只大鼠腹腔注射L-精氨酸，半小時后給予生理鹽水灌胃，半小時后注射L-精氨酸，第一次灌胃后每隔3.5h生理鹽水灌胃一次，第二天開始每天2次生理鹽水灌胃。分別在第二次注射L-精氨酸后12h、24h、48h、72h取血。治療組9只大鼠腹腔注射L-精氨酸，半小時后給予化合物Id灌胃治療，半小時后注射L-精氨酸，第一次治療后每隔3.5h灌胃一次，第二天開始每天2次灌胃治療。分別在第二次注射L-精氨酸后12h、24h、48h、72h取血。上述各組取得的血樣分離血清，立即送檢胰酶、淀粉酶。然后處死大鼠，觀察腹腔內各器官病理變化，取胰腺放入10%福爾馬林中固定，HE染色觀察病理變化。3、對比結論胰酶隨時間的變化見圖10a，模型組的在L-精氨酸誘導12h后胰酶的含量開始升高，24h后達到高潮，此后開始慢慢的降低。治療組的胰酶含量上升幅度較小，說明藥物Id對L-精氨酸誘導的胰腺炎有確切的治療效果。淀粉酶隨時間的變化見圖1Ob，模型組的在L-精氨酸誘導12h后淀粉酶的含量開始升高，24h后達到高潮，此后開始慢慢的降低。治療組淀粉酶含量上升幅度較小，說明藥物Id對L-精氨酸誘導的胰腺炎有確切的治療效果。圖lla、b、c分別為正常對照組、模型組和治療組的免疫組化實驗結果，由圖中可以看出，相對正常胰腺組織(圖lla)，L-精氨酸誘導后，胰腺組織腫大，間質充血水腫，大量中性粒細胞和單核細胞浸潤圖(圖llb)，而經Id藥物治療后胰腺間質充血水腫明顯減輕，炎性細胞浸潤明顯減少(圖llc)。實施例65-(4-甲氧基苯亞甲基)-2，4-噻唑烷二酮(Id)治療蛙皮素(cerulein)誘導的水腫性胰腺炎的療效觀察1、實驗材料健康雄性小鼠12只(20-22g)，清潔級，由四川大學動物實驗中心提供；蛙皮素劑量為50yg/Kg，無菌生理鹽水配制；化合物Id溶液劑量為50mg/Kg，無菌生理鹽水配制。2、實驗方法及分組分為治療組10只，模型組10只，正常對照組10只，禁食18h，自由飲水。正常對照組腹腔注射6次生理鹽水后(200uL，每小時l次)，灌胃生理鹽水。模型組腹腔注射6次蛙皮素后(50yg/Kg，每小時l次)，灌胃生理鹽水。治療組腹腔注射6次蛙皮素后(50yg/Kg，每小時l次)，灌胃化合物Id溶液(50mg/Kg)。第一次注射24h后，取眼動脈血送淀粉酶和胰酶檢測(治療組和模型組各5只，正常組2只)，然后處死小鼠，觀察腹腔內各器官病理變化，取胰腺、肝、脾、腎、肺、胃、回腸近胰端放入10%福爾馬林中固定，并進一步做HE染色，觀察病理變化。剩余小鼠繼續(xù)飼養(yǎng)7天，期間治療組每天灌胃化合物Id溶液(50mg/Kg)治療1次，觀察生存率有無變化。3、對比結論圖12a、b、c分別為正常對照組、模型組和治療組的免疫組化實驗結果，由圖中可以看出，相對正常胰腺組，腹腔注射6次蛙皮素后，胰腺組織腫大，間質充血水腫，大量中性粒細胞和單核細胞浸潤，而經Id藥物治療后胰腺間質充血水腫明顯減輕，炎性細胞浸潤明顯減少。權利要求1.式I所示的5苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制備治療免疫性疾病藥物中的用途，其中，R1為氫、鹵代基、羥基或烷氧基；R2為氫、鹵代基、羥基或烷氧基。2.根據(jù)權利要求l所述的式I所示的5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制備治療免疫性疾病藥物中的用途，其特征在于^為氫、羥基或烷氧基；&為氫、羥基或烷氧基。3.根據(jù)權利要求l所述的式I所示的5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制備治療免疫性疾病藥物中的用途，其特征在于^為甲氧基；&為氫。4.根據(jù)權利要求l所述的式I所示的5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物在制備治療免疫性疾病藥物中的用途，其特征在于所述免疫性疾病為肝炎、結腸炎、免疫性心肌炎、胰腺炎或肺纖維化。全文摘要本發(fā)明涉及5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物的用途，屬于化學醫(yī)藥領域。本發(fā)明的5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物如式I所示，其中，R₁為氫、鹵代基、羥基或烷氧基；R₂為氫、鹵代基、羥基或烷氧基。通過實驗證明了式I所示的5-苯亞甲基-2，4-噻唑烷二酮衍生物具有很好的治療肝炎、結腸炎、免疫性心肌炎、胰腺炎和肺纖維化等自身免疫性疾病的作用，為該類藥物的制備提供了一種新的選擇。文檔編號A61P1/00GK101361737SQ20081030472公開日2009年2月11日申請日期2008年9月28日優(yōu)先權日2008年9月28日發(fā)明者吳曉華,羅有福,霞趙,陳俐娟,魏于全申請人:四川大學