專利名稱：：測定脊柱側(cè)凸風險的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：發(fā)明涉及測定發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的方法，對具有脊柱側(cè)凸的對象分類的方法，評估支具(brace)對具有脊柱側(cè)凸的對象的效力的方法以及用于這些方法的試劑盒。
背景技術(shù)：
：脊柱畸形，特別是脊柱側(cè)凸代表了兒童和青少年中最常見的整形外科畸形(人群的0.2-6%)，而青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸(AIS)代表了脊柱側(cè)凸的最常見形式。青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸(AIS)的原因尚不清楚，因此傳統(tǒng)認為AIS是具有某種遺傳傾向的多因子疾病(1'7)。有報道稱源自手術(shù)期間從患AIS患者獲得的活檢樣品的細胞中發(fā)生褪黑激素信號傳導功能障礙8。不幸的是，沒有經(jīng)證實的方法或檢驗可用于鑒定具有發(fā)生AIS風險的兒童或青少年或鑒定哪位受影響的個體因(疾病)進展的風險而需要治療。因此，目前治療方法，例如支具療法或外科手術(shù)矯正的應(yīng)用遲滯，除非檢測到明顯畸形或明確顯示顯著進展，從而導致治療延遲和治療不佳。29本說明書參考許多文件，它們的內(nèi)容通過引用全文納入本文。6發(fā)明概述更具體地說，本發(fā)明提供測定發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的方法，包括在一段時期中監(jiān)測對象樣品的骨橋蛋白(OPN)表達，其中一段時期中該對象樣品中的OPN表達增加表明該對象具有發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險。在一具體實施方式中，所述監(jiān)測始于當該對象約3歲時。在另一具體實施方式中，通過以每月至少約一次的頻率檢測OPN表達來實施所述監(jiān)測。在另一具體實施方式中，通過以每6個月至少約一次的頻率檢測OPN表達來實施所述監(jiān)測。在另一具體實施方式中，所述方法還包括檢測該對象的樣品中的sCD44表達。在另一具體實施方式中，采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)或放射免疫測定(RIA)實施所述監(jiān)測OPN表達。本發(fā)明提供測定發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的方法，包括檢測對象的樣品中的骨橋蛋白(OPN)表達，其中該對象樣品中的OPN表達高于對照樣品中的表明該對象具有發(fā)生脊柱側(cè)凸風險。在另一具體實施方式中，所述對象是發(fā)生脊柱側(cè)凸的可能候選對象。在另一實施方式中，所述對象是發(fā)生青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸的可能候選對象。在另一具體實施方式中，所述對象是預先診斷為具有脊柱側(cè)凸。在另一具體實施方式中，所述對象預先診斷為具有青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸。本發(fā)明另一方面提供對具有脊柱側(cè)凸的對象分類的方法，包括檢測該對象的樣品中的骨橋蛋白(OPN)表達，從而該檢測步驟能將該對象分入脊柱側(cè)凸亞組。本發(fā)明的另一方面提供評估支具對具有脊柱側(cè)凸的對象的效力的方法，包括在支具治療該對象之前和之后至少一次檢測該對象的樣品中骨橋蛋白(OPN)表達，其中與支具治療該對象之前相比，隨后OPN表達增加表明該支具無效。在具體實施方式中，在支具治療后測定OPN表達在支具治療后至少一個月時進行。在另一具體實施方式中，在支具治療后測定OPN表達在支具治療后至少兩個月時進行。在另一具體實施方式中，在支具治療后測定OPN表達在支具治療后至少三個月時進行。在另一具體實施方式中，在支具治療后測定在另一具體實施方式中，該方法還包括檢測該對象的樣品中可溶性CD44受體(sCD44)表達。在另一具體實施方式中，該對象的樣品是該對象的生物學液體。在另一具體實施方式中，所述生物學液體選自下組血液、尿液、淚液和唾液。在另一具體實施方式中，所述生物學液體是血漿。在另一具體實施方式中，所述OPN表達是OPN蛋白。在另一具體實施方式中，用特異性結(jié)合OPN的抗體測定OPN表達。在另一具體實施方式中，采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測OPN表達。在另一具體實施方式中，所述樣品是血漿樣品，OPN表達高于每毫升血漿700納克表明該對象具有發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險。在另一具體實施方式中，所述樣品是血漿樣品，OPN表達高于每毫升血漿800納克表明該對象具有發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險。在另一具體實施方式中，所述OPN表達是OPNRNA。在另一具體實施方式中，所述對象的樣品是脊柱旁肌肉活檢樣品，而所述OPN表達是OPNRNA。本發(fā)明的另一方面提供選擇用于減輕或預防脊柱側(cè)凸的可能候選藥劑的方法，包括將候選藥劑與表達骨橋蛋白(OPN)的細胞接觸，檢測OPN的表達，其中與沒有候選藥劑存在下相比，當有其存在下OPN的表達降低，則選擇該候選藥劑。本發(fā)明的另一方面提供選擇用于減輕或預防脊柱側(cè)凸的可能候選藥劑的方法，包括將候選藥劑與表達sCD44的細胞接觸，檢測sCD44的表達，其中與沒有候選藥劑存在下相比，當有其存在下OPN的表達增加，則選擇該候選藥劑。在另一具體實施方式中，所述細胞是源自脊柱側(cè)凸患者的細胞。本發(fā)明的另一方面提供選擇用于預防或減輕脊柱側(cè)凸的可能候選藥劑的方法，包括在脊柱側(cè)凸模型動物發(fā)生脊柱側(cè)凸之前將候選藥劑給予該動物，從而與未給予候選藥劑的對照動物相比，當該模型動物的脊柱側(cè)凸得到預防或減輕時，選擇該候選藥劑。本發(fā)明的另一方面提供預防或減輕脊柱側(cè)凸的方法，包括將治療有效量的骨橋蛋白抑制劑(OPN)或富硒飲食給予具有脊柱側(cè)凸的對象，從而預防或治療脊柱側(cè)凸。本發(fā)明的另一方面提供預防或減輕脊柱側(cè)凸的方法，包括將治療有效量的CD44抑制劑給予具有脊柱側(cè)凸的對象，從而預防或治療脊柱側(cè)凸。本發(fā)明的另一方面提供預防或減輕脊柱側(cè)凸的方法，包括將治療有效量的sCD44刺激劑給予具有脊柱側(cè)凸的對象，從而預防或治療脊柱側(cè)凸。在本發(fā)明方法的某具體實施方式中，所述對象是人。在本發(fā)明方法的另一具體實施方式中，所述對象是女性。在本發(fā)明方法的另一具體實施方式中，所述對象是男性。本發(fā)明的另一方面提供用于治療或預防脊柱側(cè)凸的骨橋蛋白抑制劑。本發(fā)明的另一方面提供用于治療或預防脊柱側(cè)凸的CD44抑制劑。本發(fā)明的另一方面提供甩于治療或預防脊柱側(cè)凸的sCD44刺激劑。本發(fā)明的另一方面提供骨橋蛋白抑制劑在制備預防或治療脊柱側(cè)凸的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一方面提供骨橋蛋白抑制劑在預防或治療脊柱側(cè)凸中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一方面提供CD44抑制劑在制備預防或治療脊柱側(cè)凸的藥物中的應(yīng)用。發(fā)明的另一方面提供CD44抑制劑在預防或治療脊柱側(cè)凸中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一方面提供sCD44剌激劑在制備預防或治療脊柱側(cè)凸的藥物中的應(yīng)用。發(fā)明的另一方面提供sCD44刺激劑在預防或治療脊柱側(cè)凸中的應(yīng)用。在本發(fā)明應(yīng)用的某具體實施方式中，所述脊柱側(cè)凸是青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸。本發(fā)明的另一方面提供預測發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的試劑盒，其裝有骨橋蛋白(OPN)的特異性配體和使用該試劑盒預測發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的使用說明書。在一具體實施方式中，所述試劑盒還裝有可溶性CD44(sCD44)的特異性配體。參考附圖閱讀下文對具體實施方式(只是舉例)的非限制性描述后可更明白本發(fā)明的其它目的、優(yōu)點和特征。附圖簡述在附圖中圖1顯示了在松果體切除的雞中的OPN檢測情況和相應(yīng)的脊柱側(cè)凸。上圖和下圖分別描述了與未受影響(NS)的相比，在發(fā)生脊柱側(cè)凸(S)的松果體切除雞中脊柱旁肌肉中檢測到的OPN表達在mRNA和蛋白質(zhì)水平均上調(diào)；圖2在左圖中示出了外科手術(shù)后脊柱側(cè)凸的兩足C57Bl/6j小鼠的循環(huán)OPN水平的動態(tài)變化，右圖示出在兩足C57Bl/6j小鼠中觀察到脊柱側(cè)凸畸形的典型x-射線照片，其中雌性(708)比雄性(907)受影響更嚴重；圖3顯示了不同小鼠品系中血漿褪黑激素濃度的變化。S=脊柱側(cè)凸的；NS=非-脊柱側(cè)凸的；圖4顯示藥理學抑制OPN轉(zhuǎn)錄對脊柱側(cè)凸的松果體切除雞的作用；圖5圖示了健康對照對象、AIS患者和具有風險的無癥狀對象中血槳骨橋蛋白的靈敏度和特異性。在圖A中，包括33位健康對照對象和具有嚴重科布角(^45。)的32位AIS患者的分析顯示曲線下面積(AUC)為0.94，標準偏差為0.03(95%置信區(qū)間[CI]，0.88-1.000)。在圖B中，應(yīng)用每毫升700納克/毫升骨橋蛋白的截斷值顯示對于早期檢測AIS和檢測脊柱側(cè)凸進展風險的靈敏度高(90.6%)并且特異性非常好(81.8%)。在圖C中，應(yīng)用800納克/毫升骨橋蛋白的截斷值顯示對于早期檢測AIS和檢測脊柱側(cè)凸進展風險的靈敏度高(84.9%)而特異性更高(90.9%)。在圖D中，利用所有AIS患者顯示血漿骨橋蛋白水平和科布角之間有明確的相關(guān)性，產(chǎn)生的p-值0.001，r2=0.26;圖6圖示了男性和女性混合的(對照，具有風險，AIS<45和AIS245)(圖A)以及按性別分開的女性(圖B)和男性(圖C)的不同組中的年齡分布；圖7顯示了基線訪問(baselinevisit)時，12歲(紅色)、14歲(綠色和藍色)和17歲(黃色)的4位選擇的AIS女性患者(未經(jīng)支具治療)在隨訪期間的OPN水平、sCD44水平和科布角的變化情況；圖8顯示了彎曲畸形加重(科布角的總增值超過3°;n=14)的AIS患者和彎曲沒有明顯改變(科布角沒變化，減小或增值小于3°;n-36)的那些AIS患者在隨訪期間OPN(左圖)和sCD44(左圖)水平的總體改變的分布；圖9顯示AIS患者中OPN進展與科布角進展相關(guān)；圖10顯示AIS患者中OPN消退或穩(wěn)定與科布角消退或穩(wěn)定相關(guān)；圖11顯示基線訪問時，沒有脊柱側(cè)凸但具有風險的4位選擇對象在隨訪期間OPN和sCD44水平的改變情況13歲男性1名(綠色)，5歲(金色)、11歲(藍色)和9歲(紅色)女性3名；圖12比較了非AIS脊柱側(cè)凸患者(NAIS)(OPN(n=28)、sCD44(n=18)、HA(n=24))、健康對照(n=35)和AIS患者(n=252)中的OPN、sCD44和HA水平；圖13是比較手術(shù)前AIS患者(n:79)與手術(shù)后AIS患者(n:28)中，OPN循環(huán)水平的改變與脊柱生物力學性能的關(guān)系的柱狀圖14是比較手術(shù)前AIS女性(OPN(n=10);sCD44(『15))與手術(shù)后AIS女性(OPN(n=10);sCD44(n-12))中OPN和sCD44循環(huán)水平的柱狀圖15是手術(shù)前(圖A)和手術(shù)后(圖B)，AIS患者在預定截斷區(qū)(cut-offzone)上的分布圖16是用支具治療前(圖A)和支具治療后(圖B)，AIS患者在預定截斷區(qū)上的分布圖17說明了AIS中脊柱畸形進展可能的假定分子概念；圖18將AIS患者中的硒水平與OPN水平相關(guān)聯(lián)；圖19是比較以下三類對象中硒水平的柱狀圖對照、低OPN產(chǎn)生對象和高OPN產(chǎn)生對象；圖20是3種人OPN同種型的核苷酸序列(轉(zhuǎn)錄物變體1，mRNANM_001040058(SEQIDNO:1);轉(zhuǎn)錄物變體2，mRNANM—000582(SEQIDNO:2);轉(zhuǎn)錄物變體3，mRNANM—001040060(SEQIDNO:3)和3種人OPN同種型的氨基酸序列(同種型aNP—001035147(SEQIDNO:4);同種型bNP—000573(SEQIDNO:5);和同種型cNP—001035149(SEQIDNO:6));圖21是6種人CD44同種型的核苷酸序列(mRNA)(NM_000610轉(zhuǎn)錄物變體1(SEQIDNO:7);NM—001001389轉(zhuǎn)錄物變體2(SEQIDNO:8);NM—001001390轉(zhuǎn)錄物變體3(SEQIDNO:9);NM—001001391轉(zhuǎn)錄物變體4(SEQIDNO:10);NM—001001392轉(zhuǎn)錄物變體5(SEQIDNO:11);腫瘤細胞中鑒定的X62739同種型(SEQIDNO:12))和6種人sCD44同種型的氨基酸序列(NP—000601同種型1前體(SEQIDNO:13);NP—001001389同種型2前體(SEQIDNO:14);NP—001001390同種型3前體(SEQIDNO:15);NP—001001391同種型4前體(SEQIDNO:16);NP—001001392同種型5前體(SEQIDNO:17);和在腫瘤細胞中鑒定的CAA44602同種型(SEQIDNO:18));和圖22顯示了sCD44的結(jié)構(gòu)(圖A)、各種CD44同種型的起源(圖B)和一種sCD44同種型(SEQIDNO:23)的切割位點。說明性實施方式的描述觀察到一種多功能細胞因子——骨橋蛋白(OPN)(也稱為分泌型磷蛋白1、骨唾液蛋白I、早期T-淋巴細胞活化l)參與青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸(AIS)，測定了三種人群的血漿OPN濃度AIS患者、沒有任何脊柱側(cè)凸家族先例的健康對照和雙親中至少一位是脊柱側(cè)凸患者，視作有風險的無癥狀后代("風險兒童")。比較一組252位連續(xù)的AIS患者與35位無任何脊柱側(cè)凸家族病史的健康對照對象和70位無癥狀有風險的對象。所有的對象是高加索人，人口統(tǒng)計學特征見下表2。通過酶聯(lián)免疫吸附測定檢測血漿OPN、可溶性CD44受體(sCD44)和乙酰透明質(zhì)酸(HA)水平。還研究了松果體切除的雞和經(jīng)遺傳修飾缺乏OPN或CD44受體(一種己知的OPN受體)的兩足C57Bl/6j小鼠。科布角>45°(965±414納克/毫升)的AIS患者中平均血漿OPN濃度明顯高于(p-值<0.001)健康對照(570±156納克/毫升)和科布角<45°(799±284納克/毫升)的AIS患者。OPN對AIS的診斷靈敏度和特異性分別是84.4%和90.6%(截斷值2800納克/毫升)。亞組分析顯示47.9%有風險的兒童的OPN值高于800ng/ml，而對照只有8.6%，表明血漿OPN水平先于脊柱側(cè)凸形成之前升高。所有組之間的平均血漿sCD44水平和HA水平?jīng)]有顯著差異。對于脊柱側(cè)凸的病理生理學研究，兩足C57Bl/6j小鼠模型顯示脊柱側(cè)凸的發(fā)生需要OPN與CD44受體相互作用，因為遺傳修飾的兩足小鼠無一發(fā)生脊柱側(cè)凸。利用IBL的商品化人OPN特異性ELISA試劑盒計算本文公開的OPN截斷值。當有差別地檢測OPN表達(mRNA或蛋白質(zhì))時(例如，通過OPNRNA或OPN蛋白質(zhì)，但利用不同的抗體檢測不同生物學樣品中的OPN表達)，它們可能不同。OPN(也稱為分泌型磷蛋白1，米諾蛋白(minopontin)，Eta-l)是存在于礦化組織，例如胞外基質(zhì)中的含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的磷酸化糖蛋白。該多功能細胞因子參與許多病理學狀況9'1()。感興趣的是OPN轉(zhuǎn)錄物和蛋白質(zhì)是否存在于控制平衡的體位控制中心，例如小腦、骨骼肌本體感受感覺器官和內(nèi)耳結(jié)構(gòu)中(11)，因為AIS患者也顯示體位控制、本體感受和平衡有缺陷(12，13)。現(xiàn)己在不同的成人癌癥和炎性病癥中發(fā)現(xiàn)血漿OPN水平高3()_33。OPN信號傳導作用OPN信號傳導途徑不十分了解，雖然已知除與整聯(lián)蛋白相互作用外，OPN還能與細胞表面的CD44受體相互作用14'15。雖然CD44是乙酰透明質(zhì)酸(HA)的主要受體，它還用作OPN的受體并具有多個RGD結(jié)合位點。粘著分子的CD44家族的所有人同種型由一種基因編碼。人CD44基因的19個外顯子中12個的另路剪接產(chǎn)生了多個變體同種型16'17，這種結(jié)構(gòu)異質(zhì)性產(chǎn)生了CD44的配體庫，包括纖連蛋白18、硫酸軟骨素19、骨橋蛋白2Q、至少兩種肝素結(jié)合生長激素和乙酰透明質(zhì)酸21'22。sCD44的可溶性變體同種型(sCD44var)與幾種病理學狀況有關(guān)16'18，23，24。有人提出sCD44同種型通過細胞表面CD44的蛋白水解切割或因另路剪接導致的從頭合成而產(chǎn)生。觀察到當CD44H，或任何具體剪接變體在某些細胞類型中表達時有乙酰透明質(zhì)酸(HA)結(jié)合活性但在其它細胞類型中無活性，證明CD44分子之間有功能差異，與變體外顯子利用無關(guān)。許多CD44同種型是組織特異性的，但sCD44的全部可溶性變體同種型與一些病理學狀況有關(guān)。實際上，總sCD44和具體的可溶性CD44同種型顯示在包括非霍奇金淋巴瘤和乳腺癌、胃癌及結(jié)腸癌在內(nèi)的一些惡性腫瘤中與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。還知道可溶性CD44的水平在具有特定炎性病癥，例如類風濕性關(guān)節(jié)炎、腸粘膜極性炎癥(pouchitis)和結(jié)腸炎及支氣管炎的對象的體液中較高。乙酰透明質(zhì)酸(HA)也稱為透明質(zhì)酸鹽或透明質(zhì)酸，其是廣泛分布于身體的粘多糖，由包括成纖維細胞和其它專門化結(jié)締組織細胞在內(nèi)的各種細胞產(chǎn)生。本文所用的術(shù)語"對象"表示任何哺乳動物，包括人、小鼠、大鼠、狗、貓、豬、猴、馬，等等。在一具體實施方式中，其指人。本文所用的術(shù)語"支具"表示包括牙科和矯型支具，因此"支具治療"指將支具置于對象中的行為。在一具體實施方式中，其表示用于脊柱側(cè)凸對象的支具。本文所用的術(shù)語"脊柱疾病和導致脊柱側(cè)凸的疾病"指可能參與脊柱側(cè)凸發(fā)生的疾病。其包括但不限于AIS、先天性脊柱側(cè)凸、先天性脊柱后凸(congenitalcyphosescoliosis)、神經(jīng)性脊柱偵!j凸(neurologicalscoliosis)、發(fā)育不良性脊柱側(cè)凸(dysplasicscoliosis)、多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤、大腦性癱瘓、肌營養(yǎng)不良、神經(jīng)肌肉性脊柱側(cè)凸(neuromuscularscoliosis)、脊椎前移和努南綜合征(Noonansyndrome)?？煞诸惢蝾A測的脊柱側(cè)凸不包括事故和某些先天畸形導致的那些。本文所用的術(shù)語"發(fā)生青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸的可能候選對象"包括至少雙親之一具有青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸的兒童。相對于其它因素，已知年齡(青少年)、性別和遺傳特征(艮卩，母親或父親具有脊柱側(cè)凸)是發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險的因素，在一定程度上可用它們來評估發(fā)生AIS的風險。在某些對象中，脊柱側(cè)凸在很短時期內(nèi)快速發(fā)展到需要接受矯型外科手術(shù)的地步。目前從診斷到AIS之時(脊柱側(cè)凸明顯時)可用的做法包括目測觀察(科布角約為10-25°時)、整形外科裝置(科布角約為25-30°時)和外科手術(shù)(超過45°)。按照本發(fā)明測定進展的風險并監(jiān)測治療效率的更可靠方法有助于1)選擇合適的飲食以除去鑒定為導致脊柱側(cè)凸的某些食品；2)選擇最佳治療劑；或3)選擇介入性最低的預防措施和/或可用的治療方法，例如體位鍛煉、整形外科裝置，或介入性較低的外科手術(shù)或不融合的外科手術(shù)(不融合脊椎且保留脊柱運動性的外科手術(shù))。本文所用的術(shù)語"嚴重的AIS"指特征在于科布角為45?；蛞陨系募怪鶄?cè)凸。本文所用的術(shù)語"發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險"指某對象發(fā)生脊柱側(cè)凸(即，脊柱畸形)和/或在將來發(fā)生更嚴重的脊柱側(cè)凸的遺傳或新陳代謝傾向性。例如，對象的科布角增加(如，從40。增加到50。?；驈?8。增加到25。)即為發(fā)生脊柱側(cè)凸。本文所用的術(shù)語"生物學樣品"指從生物分離的任何固體或液體樣品。在一具體實施方式中，其指從人分離的任何固體或液體樣品。其包括生物膜液、尿液、耳液(earfluid)、羊水和腦脊液，但不局限于此。在一具體實施方式中，其指血液樣品。本文所用的術(shù)語"血液樣品"表示血液、血漿或血清。某一優(yōu)選實施方式采用血漿。在一更具體的實施方式中，其指血漿樣品。本文所用的術(shù)語"對照樣品"指并非來自已知具有脊柱側(cè)凸的對象或來自已知可能發(fā)生脊柱側(cè)凸的候選者的樣品。然而，在測定預診斷為脊柱側(cè)凸的對象發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的方法中，樣品還可來自經(jīng)研究處于該疾病或病癥的早期階段的對象。本文所用的術(shù)語"治療的"或"治療"述及脊柱側(cè)凸時指至少一種以下情況已存在的脊柱畸形的科布角減小、脊柱運動性改善、脊柱運動性保留/維持、某一特定計劃(plan)中均衡和平衡的改善；某一特定計劃中均衡和平衡的保留/維持；某一特定計劃中功能的改善、某一特定計劃中功能的保留/維持、美容學改善和以上任一種的組合。本文所用的術(shù)語"預防的"或"預防"述及脊柱側(cè)凸時指至少一種以下情況具有脊柱側(cè)凸的患者或無癥狀患者中科布角進展減緩，完全防止出現(xiàn)脊柱畸形，包括在三維上影響肋架和骨盆的改變，和以上任一種的組合o本文所用的術(shù)語"骨橋蛋白抑制劑"指能減少或阻斷OPN(稱為sspil的基因)表達(轉(zhuǎn)錄或翻譯)的藥劑，能減少或阻斷OPN分泌的藥劑或能減少或阻斷OPN與其受體CD44結(jié)合的藥劑。所述藥劑可以是天然或合成的，可以是蛋白質(zhì)，例如但不限于特異性結(jié)合OPN的抗體、肽、小分子、核苷酸，例如但不限于OPN的特異性反義或siRNA，但不限于此。本文所用的術(shù)語"CD44抑制劑"指能減少CD44表達(轉(zhuǎn)錄或翻譯)的藥劑，或能減少CD44定位于細胞膜的藥劑。所述藥劑可以是天然或合成的，可以是蛋白質(zhì)，例如但不限于特異性結(jié)合CD44的抗體、肽、小分子、核苷酸，例如但不限于CD44的特異性反義或siRNA，但不限于此。本文所用的術(shù)語"sCD44刺激劑"指能增加sCD44表達(轉(zhuǎn)錄或翻譯)的藥劑，能增加sCD44分泌的藥劑或能增加sCD44與OPN親和力的藥劑。所述藥劑可以是蛋白質(zhì)、肽、小分子或核苷酸，但不限于此。本文利用冠詞"一"、"一個"和"該"指一個或更多個(即，至少一個)該冠詞在語法上的對象。本文利用術(shù)語"包括"和"包含"表示短語"包括但不限于"和"包含但不限于"，并可與上述短語互換使用。本文利用術(shù)語"例如"表示短語"例如但不限于"，并可與該短語互換使用。本發(fā)明還涉及測定OPN、HA或sCD44的表達水平(即，轉(zhuǎn)錄或翻譯)的方法。因此，本發(fā)明包括用于這種測定的任何已知方法，包括ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)、R1A(放射免疫測定)、實時PCR和競爭性PCR、Northern印跡、核酶保護、噬菌斑雜交和槽印跡。本發(fā)明還涉及分離的核酸分子，包括檢測OPN、sCD44或CD44的探針和引物。在具體的實施方式中，分離的核酸分子具有不超過300、或不超過200、或不超過100、或不超過90、或不超過80、或不超過70、或不超過60、或不超過5(K或不超過4U或不超過30個核苷酸。在具體的實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少17、或至少18、或至少19、或至少20、或至少30、或至少40個核苷酸。在其它具體的實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過300個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過200個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過IOO個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過90個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過80個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過70個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過60個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過50個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過40個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少17且不超過40個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少20且不超過30個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少17且不超過30個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少30且不超過300個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少30且不超過200個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少30且不超過IOO個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少30且不超過90個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少30且不超過80個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少30且不超過70個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少30且不超過60個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少30且不超過50個核苷酸。在其它具體實施方式中，所述分離的核酸分子具有至少30且不超過40個核苷酸。應(yīng)該知道在實時PCR中，引物還構(gòu)成探針，而不是該術(shù)語的傳統(tǒng)含義?？刹捎靡阎姆椒?，利用分布在它們各自的核苷酸序列中的序列設(shè)計適合在本發(fā)明方法中檢測OPN、sCD44和CD44的引物或探針(49)。可用的本發(fā)明探針含天然產(chǎn)生的糖-磷酸主鏈以及修飾的主鏈，包含硫代磷酸酯、連二硫酸酯、膦酸垸酯和a-核苷酸等。修飾的糖-磷酸主鏈是公知的。本發(fā)明的探針可由核糖核酸(RNA)或脫氧核糖核酸(DNA)，優(yōu)選DNA構(gòu)成?？捎锰结樀臋z測方法的類型包括Southern印跡(DNA檢測)、斑點或槽印跡(DNA、RNA)和Northern印跡(RNA檢測)。雖然不是最優(yōu)選，但標記的蛋白質(zhì)也可用于檢測與其結(jié)合的特定核酸序列。其它檢測方法包括含有在浸漬片裝置上的探針的試劑盒，等等。本文所用的術(shù)語"可檢測標記的"指標記本發(fā)明的探針或抗體，從而能按照本發(fā)明檢測OPN、HA和/或sCD44。雖然本發(fā)明并不特別依賴于利用標記物來檢測特定的核酸序列，但這種標記物因提高檢測的靈敏度而可能有益。此外，它能實現(xiàn)自動化?？砂凑赵S多熟知的方法標記探針。標記物的非限制性例子包括3H、14C、32P和35S。可檢測標記的非限制性例子包括配體、熒光團、化學發(fā)光劑、酶和抗體?？膳c探針聯(lián)用并能提高本發(fā)明方法的靈敏度的其它可檢測標記包括生物素和放射性核苷酸。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)明白特定標記物的選擇決定了其與探針的結(jié)合方式。公知可通過幾種方法將放射性核苷酸摻入本發(fā)明探針。它們的非限制性例子包括利用Y32PATP和多核苷酸激酶激活(kinasing)探針的5'端，有放射性dNTP存在下利用大腸桿菌PolI的Klenow片段(例如，在低熔點凝膠中利用隨機寡核苷酸引物均勻標記的DNA探針)，有一種或多種放射性NTP存在下利用SP6/T7系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄DNA區(qū)段，等等。本發(fā)明還涉及選擇化合物的方法。本文所用的術(shù)語"化合物"表示包括天然、合成或半合成的化合物，包括但不限于化學物質(zhì)、大分子、細胞或組織提取物(取自植物或動物)、核酸分子、肽、抗體和蛋白質(zhì)。本發(fā)明還涉及陣列。本文所用的"陣列"是有意產(chǎn)生的分子集合，其可經(jīng)合成或生物合成制備。陣列中的分子可以彼此相同或不同。陣列可采取各種形式，例如可溶性分子文庫；系于樹脂珠、二氧化硅芯片或其它固體支持物上的化合物文庫。本文所用的"核酸分子陣列"是有意產(chǎn)生的核酸分子集合，其可經(jīng)合成或生物合成制備成各種不同形式(例如可溶性分子文庫；系于樹脂珠、二氧化硅芯片或其它固體支持物上的寡核苷酸文庫)。此外，該術(shù)語"陣列"包括可通過在基板上點樣基本上任意長度(例如，長度為1-約IOOO個核苷酸單體)的核酸來制備的那些核酸文庫。本文所用的術(shù)語"核酸"指含有嘌呤和嘧啶堿基，或其它天然的、化學或生物化學修飾的，非天然或衍生的核苷酸堿基的任何長度的核苷酸，即核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸的聚合物形式或肽核酸(PNA)。多核苷酸的主鏈可包含RNA或DNA中常見的糖和磷酸基團，或修飾或取代的糖或磷酸基團。多核苷酸可包含修飾的核苷酸，例如甲基化核苷酸和核苷酸類似物。核苷酸序列可間插以非核苷酸組分。因此核苷、核苷酸、脫氧核苷和脫氧核苷酸這些術(shù)語通常包括類似物，例如本文所述的那些。這些類似物是某些結(jié)構(gòu)特征與天然產(chǎn)生的核苷或核苷酸相同的那些分子，從而在摻入核酸或寡核苷酸序列時能與溶液中天然產(chǎn)生的核酸序列雜交。這些類似物一般通過替代和/或修飾堿基、核糖或磷酸二酯部分而衍生自天然產(chǎn)生的核苷和核苷酸?？梢曅枰刂七@些改變以使雜交穩(wěn)定或去穩(wěn)定或提高與互補核酸序列雜交的特異性。本文所用的"固體支持物"、"支持物"和"基板"可互換使用，指具有剛性或半剛性表面的材料或一組材料。在許多實施方式中，固體支持物的至少一個表面應(yīng)基本上是平的，雖然在一些實施方式中優(yōu)選為不同的化合物而用例如孔、凸出的區(qū)域、針、蝕刻槽等來物理分隔合成區(qū)域。按照其它實施方式，固體支持物可采取珠、樹脂、凝膠、微球的形式或其它幾何構(gòu)型。本發(fā)明可利用任何已知的核酸陣列。例如，這些陣列包括基于短或較長寡核苷酸探針或引物以及cDNA或聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)產(chǎn)物的那些陣列。其它方法包括基因表達系列分析(SAGE)、差異展示以及消減雜交法、差異篩選(DS)、RNA任意引物(RAP)-PCR、差異表達序列的限制性內(nèi)切核苷酸分析(READS)、擴增限制性片段-長度多態(tài)性(AFLP)?？贵w本發(fā)明包括利用檢測或測定例如，對象樣品中的OPN、sCD44或CD44水平的抗體，或裝在本發(fā)明試劑盒中的抗體?？刹捎孟挛倪M一步描述的方法常規(guī)制備特異性結(jié)合那些生物學標記的抗體，本發(fā)明還包括利用可商品化購得的抗體。特異性結(jié)合OPN的抗體包括下表1所列的那些，但不限于此。表1.可商品化購得的人OPNELISA試劑盒<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>針對OPN的單克隆和多克隆抗體均屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)，因為可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法產(chǎn)生它們。此外，針對第一抗體的任何第二抗體(單克隆或多克隆)也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本文所用的術(shù)語"抗-OPN抗體"和"免疫特異性抗-OPN抗體"指與OPN蛋白質(zhì)特異性結(jié)合(與其相互作用)，并且除與OPN蛋白質(zhì)共有相同抗原決定簇的蛋白質(zhì)外，與其它天然產(chǎn)生的蛋白質(zhì)基本上不結(jié)合的抗體。術(shù)語抗體或免疫球蛋白以最寬泛的含義使用，涵蓋單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體和抗體片段，只要它們顯示所需生物學活性?？贵w片段包含全長抗體的一部分，通常是其抗原結(jié)合或可變區(qū)?？贵w片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段，雙抗體(diabody)、線性抗體、單鏈抗體分子、單域抗體(例如，來自駱駝)、鯊魚NAR單域抗體和由抗體片段構(gòu)成的多特異性抗體。抗體片段還指包含CDR或抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的結(jié)合部分，包括但不限于VH區(qū)(Vh、Vh-Vh)、抗運載蛋白(anticalin)、PepBodies、抗體-T-細胞表位融合體(Troybodies)或肽抗體。此外，針對第一抗體的任何第二抗體(單克隆或多克隆)也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)?？傊?，制備抗體(包括單克隆抗體和雜交瘤)和利用抗體檢測抗原的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的(Campbdl，1984，刊于《單克隆抗體技術(shù)生物化學和分子生物學的實驗室技術(shù)》(MonoclonalAntibodyTechnology:LaboratoryTechniquesinBiochemistryandMolecularBiology),埃爾賽維禾斗學出版公司(ElsevierSciencePublisher),阿姆斯特丹，荷蘭)和Harlow等，1988(刊于:《抗體實驗室手冊》(AntibodyALaboratoryManual),CSH實驗室(CSHLaboratories))。術(shù)語抗體在本文包括多克隆、單克隆抗體和抗體變體，例如單鏈抗體、人源化抗體、嵌合型抗體和抑制或中和其對映體(Hyphen)中的各相互作用結(jié)構(gòu)域和/或?qū)ζ溆刑禺愋缘目贵w的免疫活性片段(例如，F(xiàn)ab和Fab'片段)。優(yōu)選通過多次皮下(sc)、靜脈內(nèi)(iv)或腹膜內(nèi)(ip)注射相關(guān)抗原(用或不用佐劑)在動物中產(chǎn)生多克隆抗體。利用雙功能或衍生劑，例如馬來酰亞胺苯甲?；腔牾啺酚现?maleimidobenzoylsulfosuccinimideester)(通過半胱氨酸殘基偶聯(lián))、N-羥基琥珀酰亞胺(通過賴氨酸殘基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2或R'N:C-NR(其中R和R1是不同的烷基)，將相關(guān)抗原與在待免疫的物種中有免疫原性的蛋白質(zhì)，例如匙孔蜮血藍蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑偶聯(lián)可能是有用的?？衫每乖⒚庖咴耘悸?lián)物或衍生物，通過將抗原或偶聯(lián)物(例如，對于家兔是100pg，對于小鼠是5嗎)與3體積的完全弗氏佐劑混合并在多個部位真皮內(nèi)注射該溶液來免疫動物。一個月后，通過在多個部位皮下注射用完全弗氏佐劑配制的該抗原或偶聯(lián)物(例如，用于免疫的原始劑量的1/5-1/10)來加強免疫動物。7-14天后，對動物采血，分析血清的抗體滴度。加強免疫動物直至滴度達到平臺期。對于偶聯(lián)物免疫，優(yōu)選用抗原相同但偶聯(lián)于不同蛋白質(zhì)和/或通過不同交聯(lián)劑的偶聯(lián)物加強免疫動物。還可在重組細胞培養(yǎng)物中將偶聯(lián)物制備成蛋白質(zhì)融合體。聚集劑，例如明礬也適用于增強免疫應(yīng)答?？刹捎肒ohler等在Nature,256:495(1975)中首次描述的雜交瘤方法，或可通過重組DNA方法(例如，美國專利號6,204,023)制備單克隆抗體。還可采用美國專利號6,025,155和6,077,677以及美國專利申請公布號2002/0160970和2003/0083293所述的技術(shù)制備單克隆抗體(也可參見，例如Lindenbaum等，2004)。在雜交瘤方法中，免疫(如上所述)小鼠或其它合適的宿主動物，例如大鼠、倉鼠或猴以引發(fā)產(chǎn)生或能產(chǎn)生特異性結(jié)合免疫所用抗原的抗體的淋巴細胞?；蛘撸审w外免疫淋巴細胞。然后利用合適的融合劑，例如聚乙二醇將淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合以形成雜交瘤細胞。在合適培養(yǎng)基中接種和培養(yǎng)如此制備的雜交瘤細胞，所述培養(yǎng)基中最好含有一種或多種抑制未融合親代骨髓瘤細胞的物質(zhì)。例如，如果親代骨髓瘤細胞缺乏次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(HGPRT或HPRT)，雜交瘤的培養(yǎng)基通常包含次黃嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT培養(yǎng)基)，這些物質(zhì)防止HGPRT-缺陷型細胞生長。本文在"純化抗體"這一表述中所用的術(shù)語"純化"只是意味著區(qū)分人造抗體與動物針對其自己的抗原而天然產(chǎn)生的抗體。因此，含有抗-OPN抗體的原始血清和雜交瘤培養(yǎng)基是本發(fā)明含義內(nèi)的"純化抗體"。本發(fā)明還包括檢測和/或定量測定OPN、HA或sCD44的翻譯產(chǎn)物的陣列。所述陣列包括蛋白質(zhì)微陣列或大陣列，包括高分辨2D-凝膠方法在內(nèi)的凝膠技術(shù)，可能在細胞水平與質(zhì)譜成像系統(tǒng)聯(lián)用，例如顯微鏡與熒光標記系統(tǒng)組合。本發(fā)明還包括鑒定直接或間接影響OPN的轉(zhuǎn)錄、翻譯、翻譯后修飾或活性的具體突變的方法。感興趣的突變包括影響OPN與CD44的任何可溶性或非可溶性同種型之間相互作用或影響HA與CD44的任何可溶性或非可溶性同種型結(jié)合的任何突變，但不限于此。本發(fā)明還包括監(jiān)測本文公開的生物標記以評估預防脊柱側(cè)凸和彎曲進展的許多方法，例如任何物理治療(如體位鍛煉、理療、通過操控或利用特定裝置，如震動板進行的生物化學刺激)的效力；監(jiān)測支具療法效力或開發(fā)新型支具；監(jiān)測融合或不融合脊椎的新外科手術(shù)裝置，和監(jiān)測具體飲食、營養(yǎng)品和/或藥物治療的效力。應(yīng)用支具后的首次檢測可在確定，例如支具是否良好調(diào)整并確定患者是否順從于該治療后l個月時進行，但不限于此。隨后，可依據(jù)是否檢測到高OPN水平，每3-6個月進行所述監(jiān)測。本發(fā)明的這種方法有利地降低了對x-射線照相的需求。例如，可只在就診時檢測到OPN水平太高時實施x-射線照相。本發(fā)明還包括監(jiān)測本文公開的生物標記，從而為早期支具療法或為利用新型無融合裝置(fusionlessdevice)的低介入性外科手術(shù)，為藥理學治療鑒定具有進展風險的患者，并監(jiān)測AIS患者對治療的反應(yīng)。眾所周知，無融合裝置對仍具有生長可能性的患者尤其有用，因此，在對象的一生中盡可能早地鑒定發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險是有益的。在一具體實施方式中，在對象約5歲時，或者在具有脊柱側(cè)凸家族先例/病史的對象中更小的年齡開始監(jiān)測。檢驗的頻率通常是每6個月一次。如果OPN值超過截斷值(即，利用代號為27158的OPNIBLELISA試劑盒時，>800ng/ml)，優(yōu)選顯著增加該頻率(例如，每月一次、每兩月一次、每三個月一次...)。對于可能有用的治療劑，本發(fā)明還包括利用全細胞測定篩選/選擇能阻遏OPN(sspl基因編碼)轉(zhuǎn)錄和/或合成，和/或能增加可以螯合循環(huán)OPN的sCD44產(chǎn)生，和/或能干擾OPN與CD44受體聯(lián)絡(luò)，和/或能阻斷CD44受體的治療性化合物的方法。用于這些方法中的細胞包括任何來源(包括內(nèi)部或可商品化購得的細胞系)和類型(任何組織)的細胞?？赏ㄟ^，例如無限增殖AIS對象的細胞來制備內(nèi)部細胞系。在具體的實施方式中，本發(fā)明的篩選方法想要鑒定抑制OPN表達(轉(zhuǎn)錄和/或翻譯)的藥劑和增加sCD44表達(轉(zhuǎn)錄和/或翻譯)的藥劑。對于這些實施方式，有用的細胞系包括產(chǎn)生高水平OPN和/或低水平sCD44的那些細胞系。參考文獻43-56描述了這些有用的細胞系。在一特定實施方式中，其包括源自脊柱側(cè)凸患者的任何細胞類型的細胞(全細胞測定)。在具體的實施方式中，其包括成骨細胞、軟骨細胞、成肌細胞或血細胞，包括淋巴細胞。本文所用的術(shù)語"源自脊柱側(cè)凸患者的細胞"指從脊柱側(cè)凸患者直接分離的細胞，或源自從脊柱側(cè)凸患者直接分離的細胞的無限增殖細胞系。在具體的實施方式中，所述細胞是脊柱旁肌肉細胞。這些細胞可通過，例如穿刺活檢從對象分離。還可通過例如經(jīng)鼻、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、舌下、鞘內(nèi)或真皮內(nèi)等途徑給予藥物組合物。給藥途徑可取決于例如環(huán)境和治療目的等因素。劑量可將任何用量的藥物和/或營養(yǎng)品和/或飲食補充劑組合物給予對象。劑量取決于包括給藥方式在內(nèi)的許多因素。單次劑量所含的抗-脊柱側(cè)凸組合物(例如，骨橋蛋白抑制劑或含硒化合物)的用量通常是有效防止、延遲或減輕脊柱側(cè)凸而不會誘導明顯毒性的用量，即"治療有效量"。在一些實施方式中，可以調(diào)節(jié)營養(yǎng)品抗-脊柱側(cè)凸組合物(例如，硒補充劑)的治療有效量。有用的有效量濃度包括以下用量以重量計，總飲食的約0.01%到約10%，總飲食的約0.01%到約6%，或總飲食的約0.2%到約還可直接檢測骨橋蛋白抑制劑或含硒化合物的有效量?？梢悦咳栈蛎恐芙o予所述有效量或它們的幾分之一。本發(fā)明的藥物和/或營養(yǎng)品和/或飲食補充劑組合物的給予量通常是每日每公斤體重約0.001mg到最多約500mg(例如，10mg、50mg、100mg或250mg)?？梢詥未位蚨啻蝿┝糠桨柑峁﹦┝?。例如，在一些實施方式中，有效量是以下劑量每天約lmg到約25克抗-脊柱側(cè)凸制品，每天約50mg到約10克抗-脊柱側(cè)凸制品，每天約100mg到約5克抗-脊柱側(cè)凸制品，每天約1克抗-脊柱側(cè)凸制品，每周約1mg到約25克抗-脊柱側(cè)凸制品，每周約50mg到約10克抗-脊柱側(cè)凸制品，每隔一天約100mg到約5克抗-脊柱側(cè)凸制品，和每周一次約1克抗脊柱側(cè)凸制品。例如，本發(fā)明的藥物(例如，含有骨橋蛋白抑制劑)和/或營養(yǎng)品(例如，含有硒)和/或飲食補充劑(例如，含有硒)組合物可以是以下形式液體、溶液、混懸液、丸劑、膠囊、片劑、軟膠囊、粉末、凝膠、軟膏、乳膏、噴霧劑、輕霧、霧化氣體、氣溶膠或植物復合體(phytosome)。對于口服給藥，可通過常規(guī)方法，利用至少一種藥學上可接受的賦形劑，例如粘合劑、填充劑、潤滑劑、崩解劑或潤濕劑制備片劑或膠囊?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的方法包衣片劑?？诜o予的液體制品可采取，例如溶液、糖漿或混懸液等形式，或者它們可以是在使用前以鹽水或其它合適的液體載體構(gòu)建的干產(chǎn)品。本發(fā)明的飲食補充劑還可視需要含有藥學上可接受的添加劑，例如懸浮劑、乳化劑、非水性載體、防腐劑、緩沖鹽、調(diào)味劑、著色劑和甜味劑。還可適當配制口服給予的制品以控釋活性成分。此外，本發(fā)明的藥物(例如，含有骨橋蛋白抑制劑)和/或營養(yǎng)品(例如，含有硒)和/或飲食補充劑(例如，含有硒)組合物可含有用于給予哺乳動物的藥學上可接受的運載體，包括但不限于無菌水性或非水性溶液、混懸液和乳液。非水性溶劑的例子包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射有機酯。水性運載體包括但不限于水、醇、鹽水和緩沖溶液。藥學上可接受的運載體還可包括生理學上可接受的載體(例如，生理鹽水)或?qū)τ谔囟ńo藥途徑合適的其它己知運載體。可將骨橋蛋白抑制劑或硒與藥學制品中通常使用的任何載體，例如滑石粉、阿拉伯膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、可可脂、水性或非水性溶劑、油、石蠟衍生物或乙二醇一起摻入劑型。還可利用乳液，例如美國專利號5,434,183所述那些，其中混合了植物油(例如，大豆油或紅花油)、乳化劑(例如，卵黃磷脂)和水與甘油。制備合適制劑的方法是本領(lǐng)域熟知的(參見，例如，《雷明頓藥物科學》(Remington'sPharmaceuticalSciences),第16版，1980，A.Oslo編，伊斯頓，賓夕法尼亞州)。如果選擇胃腸外給藥作為給藥途徑，可將含有骨橋蛋白抑制劑或硒的制品與藥學上可接受的無菌水性或非水性溶劑、混懸液或乳液混合提供給患者。非水性溶劑的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油、魚油和可注射有機酯。水性運載體包括水、水-醇溶液、乳液或混懸液，包括鹽水或經(jīng)緩沖的醫(yī)學胃腸外載體，包括氯化鈉溶液、林格葡萄糖溶液、葡萄糖加氯化鈉溶液、含乳糖的林格溶液或不揮發(fā)的油。靜脈內(nèi)載體可包括液體和營養(yǎng)補充物、電解質(zhì)補充物，例如基于林格葡萄糖的那些載體，等等。這些只是簡單的指導，因為實際劑量必須由主治醫(yī)師根據(jù)每位患者獨特的臨床因素或由營養(yǎng)學家仔細選擇和測定。最佳每日劑量通過本領(lǐng)域已知的方法測定，其受例如患者的年齡等因素以及其它臨床相關(guān)因素的影響。此外，患者可服用用于其它疾病或病癥的藥物。在骨橋蛋白抑制劑或含硒化合物給予患者期間可繼續(xù)其它藥物治療，但在這種情況下特別建議以低劑量開始來測定是否經(jīng)歷不利的副作用。本發(fā)明還涉及試劑盒。本發(fā)明涉及將脊柱側(cè)凸對象分類和/或預測某對象是否具有發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的試劑盒，但不限于此，所述試劑盒裝有上述本發(fā)明分離核酸、蛋白質(zhì)或配體，例如抗體。例如，本發(fā)明的分區(qū)試劑盒(compartmentalizedkit)包括試劑包含在不同容器中的任何試劑盒。這些容器包括小玻璃容器、塑料容器或塑料或紙條帶。這些容器能將試劑自一個隔室有效地轉(zhuǎn)移至另一隔室，因而樣品和試劑不會交叉污染，還能將各容器中的試劑或溶液以定量方式自一個隔室加入另一個。這些容器包括接受對象樣品(DNA基因組核酸、細胞樣品或血液樣品)的容器，含有(在本發(fā)明的一些試劑盒中)本發(fā)明方法所用探針的容器，含有酶的容器，含有洗滌試劑的容器和含有用于檢測延伸產(chǎn)物的試劑的容器。本發(fā)明試劑盒還裝有利用這些探針或抗體對脊柱側(cè)凸患者分類或預測某對象是否具有發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的使用說明書。以下非限制性實施例更詳細地描述了本發(fā)明。實施例l材料與方法產(chǎn)生兩足C57BL/6JOPN-缺乏和CD44-缺乏小鼠.按照圣賈斯汀醫(yī)院動物健康照料審查委員會(TheSte-JustineHospital'sAnimalHealthCareReviewCommittee)批準的方案進行小鼠實驗。在C57Bl/6j小鼠中回交10代以上的無OPN(OPN-缺乏小鼠)或CD44受體(CD44-缺乏小鼠)的C57B1/6的繁殖對(Breedingpair)分別由美國新澤西州拉吉爾大學(RutgerUniversity,NJ,USA)的SusanRittling博士和加拿大安大略省多倫多大學(UniversityofToronto，ON，Canada)的TakMak博士饋贈以建立新的群體，而C57Bl/6j小鼠用作野生型對照小鼠(査爾斯河公司(Charles-River)，威爾明頓，馬薩諸塞州，美國)。使用C57B16/6j小鼠品系是因為其天然缺乏褪黑激素PW，表現(xiàn)出高循環(huán)OPN水平P"并在維持于兩足階段時發(fā)生脊柱側(cè)凸(28)。其是熟知的脊柱側(cè)凸動物模型。如以前報道的(28)，斷奶后通過在麻醉下截去前肢和尾部進行兩足外科手術(shù)。所有小鼠自6周齡起在麻醉下利用FaxitronX-射線設(shè)備(FX公司(FaxitronX-raysCo卬.)，惠靈，伊利諾依州，美國)每兩周進行完全X-射線照相檢査。獲得前后位X-射線照片(AnteroposteriorX-ray)，隨后評估每幅數(shù)字圖看是否存在脊柱側(cè)凸?？撇冀情撝禐?0?；蚋咭琅f作為顯著的脊柱側(cè)凸狀況。免疫檢測小鼠OPN.將外周血收集在含硅膠的血清分離器試管中(BD微容器公司(BDMicrotainer)，BD，新澤西州，美國)，然后離心，從而獲得小鼠血清來測定OPN的血清水平。將獲得的血清樣品等分并在-8(TC冷凍，直至被解凍并分析。根據(jù)生產(chǎn)商(IBL公司，漢堡，德國)提供的方案，通過捕獲酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測OPN的血清濃度。OPNELISA試劑盒檢測血清中OPN的所有磷酸化和非磷酸化同種型的總濃度。ELISA檢驗一式兩份進行，利用英國劍橋拜爾克羅姆公司的AsysHiTechTM專家-96微板讀數(shù)計(AsysHiTechTMExpert-96microplatereader,Biochrom，Cambridge,;UK)檢測450nm的光密度。雖然本文使用的是小鼠血清，但本發(fā)明也包括檢測小鼠血漿中的OPN。產(chǎn)生松果體切除的雞.一定百分比的松果體切除雞發(fā)生脊柱側(cè)凸，因此它們用作脊柱側(cè)凸模型。對于本研究，在本地孵化站購買145只新孵出的雞(哈伯德山(MountainHubbard))，如前所述切除松果體(25)。雞OPN的表達分析和免疫檢測.通過苯酚/氯仿提取從松果體切除雞的脊柱旁肌肉制備總細胞RNA。對于RT-PCR，利用英杰公司(Invitrogen)的ThermoScriptTM逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄1微克總RNA，等量的0.1微克逆轉(zhuǎn)錄RNA用于PCR反應(yīng)。這些反應(yīng)在含有200微摩爾dNTP、1.5微摩爾MgCl2、IO皮摩爾的各引物和1UPfuDNA-聚合酶(美國加利福尼亞州拉霍亞斯特拉塔基因公司(Stratagene，LaJolla，CA，USA))的50微升終體積中進行。利用以下引物和條件進行PCR反應(yīng)雞OPN(420bpPCR產(chǎn)物)5，-ACACTTTCACTCCAATCGTCC-3，(SEQIDNO:19)(正向)，5'國TGCCCTTTCCGTTGTTGTCC-3，(SEQIDNO:20)(反向)35輪95°C/45秒，66°C/45秒，72°C/1分鐘。對于定量分析，所有擴增根據(jù)持家基因|3-肌動蛋白標準化；雞P-肌動蛋白(460bpPCR產(chǎn)物)5'-GGAAATCGTGCGTGACAT-3，(SEQIDNO:21)(正向)，5，-TCATGATGGAGTTGAATGTAGTT-3，(SEQIDNO:22)(反向)32輪94。C/45秒，55。C/45秒，72°C/1分鐘。用含溴化乙錠的1.5%瓊脂糖凝膠分析PCR擴增產(chǎn)物。利用與雞OPN交叉反應(yīng)的抗-人OPN抗體(克隆8E5，凱美亞生物醫(yī)學公司(KamiyaBiomedial)，華盛頓州，美國)，通過蛋白質(zhì)印跡檢測脊柱旁肌肉的總蛋白提取物中的雞OPN。人群.位于的圣賈斯汀醫(yī)院(Ste-JustineHospital)、蒙特利爾兒童醫(yī)院(Montreal'sChildrenHospital)和蒙特利爾麥吉爾大學兄弟會兒童醫(yī)院(TheShrinersHospitalforChildren,McGillUniversity,Montreal)的機構(gòu)倫理委員會(InstitutionalReviewBoard)和愛福侖特學校董事會(TheAffluentSchoolBoard)批準該項研究。所有參與者的父母和法定監(jiān)護人給予書面知情同意，少數(shù)表示同意。所有AIS患者由6位矯形外科醫(yī)生之一檢查。如果某人的病史和體檢與特發(fā)性脊柱側(cè)凸的診斷一致并且在脊柱的直立X-射線照片上發(fā)現(xiàn)額平面(coronalplane)有最低IO度曲率伴有脊椎扭轉(zhuǎn)，則認為該人受(脊柱側(cè)凸)侵襲。在蒙特利爾小學中募集健康對照。采用亞當前彎檢驗(Adam'sforwardbending-test)，由同一矯形外科醫(yī)生用脊柱側(cè)凸測量器檢査各對象。檢査了三群人AIS患者，無脊柱側(cè)凸的任何家族先例/病史的健康對照和雙親中至少一位是脊柱側(cè)凸患者，視作有發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的無癥狀后代。募集一組252位連續(xù)的AIS患者、35位健康對照對象和70位無癥狀有發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的兒童。所有的對象是高加索人，人口統(tǒng)計學特征見下表2。表2.AIS患者、健康對照和有風險的對照對象的人口統(tǒng)計學和臨床特征<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>*加-減值是平均值±標準偏差。t胸部和腰部水平的曲率分別表示雙重脊柱側(cè)凸的平均科布角。t三重脊柱側(cè)凸的平均科布角表示兩個胸部曲率和一個腰部曲率。骨橋蛋白、sCD44和HA酶聯(lián)免疫吸附測定.在含EDTA的試管中收集AIS患者、無癥狀兒童和對照組的外周血樣品，然后離心。將獲得的血清樣品等分并在-8(TC冷凍，直至被解凍并分析。根據(jù)生產(chǎn)商(IBL公司，漢堡，德國)提供的方案，通過捕獲酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測OPN和sCD44的血漿濃度。sCD44Elisa試劑盒(sCD44std)檢測所有循環(huán)(可溶性)CD44同種型，所述同種型包含標準蛋白質(zhì)序列，但不是與外顯子V2和V10(50)之間的另路剪接相關(guān)的罕有同種型(也參見圖22)。OPNIBLELISA試劑盒(代號27158)檢測血漿中OPN的所有磷酸化和非磷酸化同種型的總濃度。利用ELISA試劑盒(HA-Elisa(K-1200)，階梯生物科學公司(EchelonBiosciences),鹽湖城，猶他州)檢測所有血漿樣品中HA的循環(huán)水平。所有ELISA檢驗一式兩份進行，利用英國劍橋拜爾克羅姆公司的AsysHiTechTM專家-96TM微板讀數(shù)計(AsysHiTechExpert-96TMmicroplatereader)檢測450nm(對于OPN和sCD44)和405nm(對于HA)的光密度。其它可商品化購得或內(nèi)部制備的Elisa試劑盒可用于本發(fā)明的方法。在統(tǒng)計學上區(qū)分非脊柱側(cè)凸對象與脊柱側(cè)凸對象的截斷值有助于預測脊柱側(cè)凸進展的風險，如這些其它試劑盒所測定的截斷值可能不同于本文所用試劑盒計算的。然而，可計算如本文所述使用的各新抗體的截斷值。統(tǒng)計學分析.利用皮爾遜^和斯氏t檢驗分別評估不同AIS和對照組的年齡和性別差異。利用多元線性回歸模型檢驗各組和OPN、sCD44及HA水平之間的關(guān)聯(lián)性。當這些可能的混淆對象(confounder)與生物標記水平在;KO.l相關(guān)時，根據(jù)年齡、性別和年齡-性別相互作用調(diào)整數(shù)值。還檢査了組與性別之間的相互作用。利用比較具有和不具有組效應(yīng)(groupeffect)的模型的全局F檢驗(globalFtest)首次檢驗了整體組效應(yīng)。然后，如果檢測到諸組之間有特定差異，則應(yīng)用多元檢驗的布氏校正(Bonferronicorrectionformultipletesting)。禾U用接收器-操作特征(Receiver-operatingcharacteristics)(ROC)曲線評估OPN的診斷值，鑒定最佳閾值。曲線描繪了OPN的靈敏度(當試驗應(yīng)用于已知具有AIS的患者時，真陽性結(jié)果的比例)和特異性(當試驗應(yīng)用于健康對照時，真陰性結(jié)果的比例)。計算ROC曲線下面積(AUC)和相關(guān)95。/。的置信區(qū)間。對理論AUC為0.5的假設(shè)的檢驗基于該置信區(qū)間。除ROC曲線分析由用于R的ROCR軟件包進行外(www.r-project.org)(51，52)，利用SAS軟件9.1版進行統(tǒng)計學分析。除另有指出的，所有分析中，認為/>值<0.05是統(tǒng)計學顯著的。實施例2松果體切除雞中OPN的mRNA和蛋白質(zhì)水平如以上實施例l所述對松果體切除雞的OPN進行表達分析和免疫檢測分析。在mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測松果體切除雞中產(chǎn)生的OPN。圖1顯示只有在發(fā)生脊柱側(cè)凸的松果體切除雞中OPN在mRNA和蛋白質(zhì)水平強烈增加。實施例3C57Bl/6j小鼠的OPN蛋白質(zhì)水平產(chǎn)生兩足C57Bl/6j小鼠，如以上實施例1所述測定它們的OPN水平。C57Bl/6j小鼠中兩足離床活動8周在46%的雌性和24%的雄性中誘導了脊柱側(cè)凸，這與在雌性中發(fā)現(xiàn)血漿OPN水平較高良好相關(guān)(下表3)。當與兩足雄性(24%)比較時，在兩足C57Bl/6j雌性(46%)中觀察到脊柱側(cè)凸的數(shù)量更多和嚴重性更高這一事實加強了該動物模型的關(guān)聯(lián)性，在人中也觀察到這一情況。表3.天然褪黑激素缺陷小鼠品系C57Bl/6j小鼠和缺乏OPN或CD44的遺傳修飾C57B1小鼠中的脊柱側(cè)凸頻率n脊柱側(cè)凸％隨訪的平均時期C57B1/6J2124%57周+/-392846%57周+/-3C57B1/6J300%54周+/-2OPN-缺乏$240%54周+/-2C57B1/6J290%52周+/-2CD44-缺乏310%52周+/-2圖2顯示脊柱側(cè)凸C57Bl/6j小鼠中，兩足外科手術(shù)后(即，發(fā)生脊柱側(cè)凸期間)OPN蛋白質(zhì)水平強烈增加。實施例4觀察缺乏OPN或CD44對兩足C57Bl/6j小鼠脊柱側(cè)凸的作用還通過研究遺傳修飾的兩足C57Bl/6j小鼠檢查了OPN和CD44受體作為病理生理學級聯(lián)反應(yīng)的組成部分在脊柱側(cè)凸形成和彎曲進展中的作用，所述研究進行了如以上實施例1所述的實驗。如上表3所示，發(fā)現(xiàn)兩足C57Bl/6jOPN-缺乏小鼠(『54)和C57Bl/6jCD44-缺乏小鼠(11=60)中無一發(fā)生脊柱側(cè)凸，即使將它們的分析延長至52周以上。外科手術(shù)后8周檢測脊柱側(cè)凸發(fā)生。進行較長的隨訪以證明OPN-缺乏和CD44-缺乏小鼠中脊柱側(cè)凸發(fā)生不是簡單的延遲。同時在野生型和OPN-KO小鼠中檢測褪黑激素循環(huán)水平以排除兩足C57B1/6OPN-KO小鼠中不存在脊柱側(cè)凸是因為褪黑激素產(chǎn)量增加的可能性。圖3顯示與野生型(C57Bl/6j、C57Bl/6j和FVB)相比，兩足C57Bl/6jOPNKO小鼠的循環(huán)褪黑激素水平降低兩倍。如上所述，與產(chǎn)生高褪黑激素水平的FVB品系相反，C57Bl/6j小鼠是褪黑激素缺陷型并可能發(fā)生脊柱側(cè)凸。OPN-敲除小鼠不發(fā)生脊柱側(cè)凸(NS)，即使它們具有相同的遺傳學背景(C57B16/j)，雖然褪黑激素顯著減少，這提示褪黑激素在體內(nèi)負調(diào)節(jié)OPN表達和合成。這還提示在遺傳修飾的小鼠中，沒有OPN存在下褪黑激素水平會作為適應(yīng)性生理學反應(yīng)而隨之進一步降低，以提高OPN表達和合成，但不限于該假設(shè)。實施例5OPN抑制劑對脊柱側(cè)凸預防的作用在松果體切除24-48小時前，將懷疑對OPN轉(zhuǎn)錄或合成有影響的兩種化合物以500pg/kg體重/天的劑量腹膜內(nèi)注射入雞。如圖4所示，與未治療的松果體切除雞相比，用藥物預先治療的松果體切除雞中較少發(fā)生脊柱側(cè)凸(減少約50%)。實施例6比較分成兩組的AIS患者和健康對照的循環(huán)OPN水平如以上實施例1所述測試一組252位AIS患者和35位健康對照對象。根據(jù)脊椎彎曲嚴重性〈10°-44°與245°)，將AIS患者分成兩個亞組。在受影響最嚴重的AIS亞組中，患者在測試時無一經(jīng)歷矯形外科手術(shù)。與對照組相比(在健康和有風臉對照組中分別是54%和64%，與對照組相比時^0.0001)，觀察到AIS組中女孩的比例更高(10°-44°亞組和^45°亞組中分別是86%和84%)，這與就中等彎曲而言，年輕女孩的AIS患病率比男孩高(對于科布角230°的彎曲，比例為10:1)的文獻報道相一致。兩個AIS亞組(/^0.76)或兩個對照組0^0.32)之間沒有明顯的性別差異。與科布角為10-44°的AIS患者相比，科布角^45°的AIS患者的平均年齡顯著較高(15.2±1.8與13.8±2.1，；KO.OOOl)。與對照組相比，兩個AIS組的平均年齡較高(健康組為10.7士0.6，風險組為9.9土3.4，與任一AIS組相比時/<0.0001)。按照各種臨床參數(shù)將顯示嚴重畸形(科布角245°)、低至中等彎曲(科布角介于10°和44。之間)的AIS患者與健康對照的血漿OPN水平總結(jié)在下表4中。與健康對照組相比，兩個AIS組中平均血漿OPN水平顯著較高，但在畸形最嚴重(科布角245。)的患者中更高(根據(jù)年齡、性別和年齡-性別相互作用調(diào)整后，布氏校正的pO.OOl).。女孩和男孩AIS患者中血漿OPN水平與彎曲畸形的嚴重性相關(guān)(圖5)(根據(jù)年齡調(diào)整的部分皮爾遜校正系數(shù)分別是0.29，p<0.001,-和0.33，；=0.04)。有發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的組的平均血漿OPN水平(846±402ng/ml)明顯不同于(布氏校正的pO.001)健康對照(570士156ng/ml)。_表4.AIS患者、健康對照對象和無癥狀有風險對照對象*的平均生化值.<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>45°4022271254348254MD是標準偏差tP-值來自按照年齡、性別和年齡-性別相互作用(OPN和HA)或年齡(sCD44)作布氏校正和調(diào)整后，所有對象中與健康對照組的比較。作相同調(diào)整后，組與生物標記水平相關(guān)性的全局F檢驗p-值是〈0.001(OPN)、0.035(sCD44)和0.163(HA)。比較AIS影響最嚴重的患者(科布角^45。)與健康對照的血漿OPN的接收器-操作特征(ROC)曲線分析顯示AUC為0.94，標準偏差為0.03(95%置信區(qū)間0.88到0.99)(見圖5A)。截斷值為>700納克/毫升獲得90.6%的靈敏度和81.8%的特異性(見圖5B)。對于證實脊柱側(cè)凸，截斷值為>800納克/毫升獲得最高精確度，其中靈敏度為84.4%，特異性為90.6%(假陰性和假陽性結(jié)果最低)(見圖5C)。雖然如上所述，在其他成人疾病中發(fā)現(xiàn)高水平的OPN，但在脊柱側(cè)凸患者中發(fā)現(xiàn)血漿OPN水平高是兒科人群中的獨特現(xiàn)象。因此，檢測OPN水平可用于在無癥狀兒童中鑒定具有發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的那些(AIS或其他脊椎疾病和導致脊柱側(cè)凸的疾病)，在脊柱側(cè)凸對象中鑒定具有發(fā)生脊柱側(cè)凸進展的風險的那些對象。此外，AIS患者中發(fā)現(xiàn)的血漿OPN水平常高于在成人疾病中檢測到的水平。OPN水平還可用于預測成人中的風險(例如，在成年期進展的變性脊柱側(cè)凸(degenerativescoliosis)和特發(fā)性脊柱側(cè)凸)。早已將某些突變與可導致脊柱側(cè)凸的其它疾病相聯(lián)系。在一具體實施方式中，可組合使用OPN水平與對這些突變的檢測。實施例7比較有風險的無癥狀兒童與健康對照的循環(huán)OPN水平如以上實施例1所述測試一組70位無癥狀但有風險的兒童和35位健康對照對象。發(fā)生脊柱側(cè)凸的組中平均血漿OPN水平(846.30±402納克/毫升)明顯不同0=0.001)于健康對照(570±156納克/毫升)，兩組是年齡和性別匹配的。未觀察到明顯的性別差異(見上表4)。采用800納克/毫升的截斷值，觀察封該組中47.9%的無癥狀兒童高于該血漿OPN值，而健康對照中只有8.6%高于該值。這些結(jié)果與顯示相比于雙親未受影響的后代，至少雙親之一受影響的后代更易發(fā)生脊柱側(cè)凸的以前報道相一致(34,35)。因此，例如用于OPN的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)或RIA可用于為預后目的早期鑒定有發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的對象，和/或用于為進行早期支具療法和利用新型無融合裝置的低介入性外科手術(shù)、為藥理學治療對脊柱側(cè)凸患者分類，還可用于監(jiān)測AIS患者對治療的反應(yīng)。實施例8比較分成兩組的AIS患者和健康對照的循環(huán)sCD44水平如以上實施例1所述進行實驗。健康對照、兩個AIS組和無癥狀但有風險兒童的血漿sCD44和HA水平顯示于上表4。在所有組中的比較顯示平均血漿sCD44和HA值沒有明顯差別。然而，顯示與其它三組相比時，脊椎畸形最嚴重的AIS患者(245。)的平均血漿sCD44水平最低(/=0.066)。CD44和sCD44可分別用作OPN的受體和誘佴受體(decoyreceptor)。雖然在所有測試組中未觀察到明顯差異，但受影響最嚴重的AIS—患者(^45°)在所有測試組中的sCD44值最低。令人感興趣的是，在免疫缺陷和自身免疫疾病中發(fā)現(xiàn)血漿sCD44水平降低(3、37)，但在沒有高血漿OPN水平存在下這些病癥通常無一導致脊柱側(cè)凸，提示sCD44可能通過千擾OPN的作用而在AIS中作為疾病-調(diào)節(jié)因素起作用(見圖17)。實施例9AIS患者的OPN水平、sCD44水平和科布角隨時間的改變情況在隨訪期間檢測AIS患者的生物標記(OPN和sCD44水平)和科布角的進展。圖7表示在基線訪問(baselinevisit)時，12歲(紅色)、14歲(綠色和藍色)和17歲(黃色)的4位選擇的AIS女性患者(未經(jīng)支具治療)的這些進展情況。圖8顯示了彎曲畸形加重(科布角的總增值超過3。)的AiS患者和彎曲沒有明顯改變(科布角沒變化，減小或增值小于3°;也顯示了所有的)的那些AIS患者在隨訪期間OPN(左圖)和sCD44(右圖)水平的總體改變分布。彎曲畸形加重的組中OPN水平的平均改變明顯較高(威氏秩和檢驗(Wilcoxonranksumtest)p<0.01)。未檢測到sCD44有明顯差異(pX).5)。2組之間的隨訪時間長度相似(pX).5)。圖9顯示AIS患者組中，OPN進展與科布角進展相關(guān)，而圖10顯示在其它AIS患者中，OPN減退或穩(wěn)定與科布角減退或穩(wěn)定相關(guān)。OPN水平可用于鑒定預診斷患者中脊柱側(cè)凸會進展的那些患者。實施例10無癥狀但有風險的患者的OPN水平、sCD44水平和科布角隨時間的改變情況圖11顯示基線訪問時，沒有脊柱側(cè)凸但有風險的4位選擇對象的OPN和sCD44水平的改變情況13歲男性1名(綠色)，5歲(金色)、11歲(藍色)和9歲(紅色)女性3名。在生物標記的基線水平觀察到顯著的對象間差異，并在有風險對象中隨時間改變(尤其是OPN)，表明此生物標記可能用作工具來監(jiān)測有風險對象中脊柱側(cè)凸的發(fā)生。下表5-8詳細顯示健康對照對象(表5)、科布角小于45-度的AIS患者(表6)、科布角為45度或更高的AIS患者(表7)和無癥狀但有風險兒童(表8)各自的臨床和生化概況。35<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>(外)祖母<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>實施例11非AIS脊柱側(cè)凸患者的OPN、sCD44和HA水平檢測非AIS脊柱側(cè)凸患者(NAIS患者)的OPN水平。結(jié)果總結(jié)于下表9。健康、AIS和NAIS患者的OPN、sCD44和HA水平的比較見圖12。表9.非AIS脊柱側(cè)凸患者的生物標記比較.脊柱側(cè)凸類型神經(jīng)性脊柱側(cè)凸先天性脊柱側(cè)凸脊椎前移脊柱后凸性脊柱側(cè)凸(KyphosisScoliosis)其它*2平均年齡(歲)12.3±3.710.0±4.417.5±2.114.4±2.815.1平均科布角79.4±15.151.8±18.121.0±17.0肌2±28.574.5±17.7特征平均OPN濃度(ng/ml)982±452平均sCD44濃度(ng/ml)274±196平均HA濃度(ng/ml)127±1011016±400432±79123±80832±125386±19376±54923±393352土6291±56586±52240NA卞力口-減值是平均值±標準偏差.*其它脊柱側(cè)凸類型包括一種神經(jīng)肌肉性脊柱側(cè)凸(neuromuscularscoliosis)和一種發(fā)育不良性脊柱側(cè)凸.下表10詳細顯示了非AIS脊柱側(cè)凸患者的生物標記水平。<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table>*加-減值是平均值±標準偏差.卞彎曲類型術(shù)語r，右/1,左/T，胸部/L，腰部/TL，胸腰部/C，頸部CT1①實施例12手術(shù)前后AIS患者的OPN和sCD44水平檢測手術(shù)前(r^79)和手術(shù)后(n-28)AIS患者的OPN水平。有趣的是，比較手術(shù)前后的AIS患者顯示循環(huán)OPN水平降低，這進一步支持了OPN在細胞水平作為機械感受器(mechanosensor)的作用(圖13)。檢測用支具治療前(r^lO)和治療后(N-10)，AIS女性患者的OPN。在手術(shù)前(r^l5)和手術(shù)后(N-12)類似地檢測AIS女性患者的sCD44水平。結(jié)果示于圖14。還檢測了12位AIS患者在手術(shù)前和手術(shù)后的預定截斷區(qū)域分布情況。圖15顯示92%的外科手術(shù)治療患者的手術(shù)前OPN水平在紅色區(qū)域(血漿OPN水平〉800ng/mL)，而其余8%在黃色區(qū)域(700-800ng/mL)。表示血漿OPN水平<700ng/mL的綠色區(qū)域中沒有患者。這也顯示高濃度OPN與脊柱側(cè)凸彎曲進展之間有強烈的相關(guān)性。圖15的B圖顯示外科手術(shù)治療的紅色區(qū)域患者經(jīng)歷血液OPN濃度降低。75%的外科手術(shù)治療患者落入綠色和黃色區(qū)域(800ng/mL或低一些)。實施例13利用各種類型支具的AIS患者的OPN水平還檢測了用支具治療前(n-79)和治療后(N-28)AIS患者的OPN水平。下表11還顯示了支具療法對生物標記的影響。I表ii.支具治療對生物標記濃度的可能影響.治療不用支具女性男性用支具(均為女性)所有支具組合波士頓支具(Boston)SC支具(SpineCor)數(shù)量19336211414.2±2.1-14.8±2.2-14.0±1.812.013.0±1.410.614.5±1.612.7特征平均平均OPN平均科布角濃度sCD44濃(ng/ml)度(ng/ml)30.9±19.3809±376474±179108±5832.2±21.11034±176492±155126±6221.2±8.3664±282483±112"8±6025.8±4.4735±358568±184150±5720.6±8.7626±279451±81108±62支戴均穿間.Q平具時w年均^-平齡@均度i平濃s<table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table>*加-減值是平均值±標準偏差.J通過具有相等方差的雙側(cè)不配對斯氏T檢驗(bilateralunpairedStudent'sT-test)進行統(tǒng)計學分析，以比較使用或不使用支具的患者。p-值〈0.05時認為差異是統(tǒng)計學顯著的。還檢測了AIS患者在支具治療前后的預定截斷區(qū)域分布情況。支具治療數(shù)月后測試了8位患者，即，分別是支具治療后7、7、8、22、22、22和26個月的患者1號到8號中每一位。圖16顯示用支具治療前(圖A)，63%的這些患者處于紅色和黃色區(qū)域。觀察到朝著綠色區(qū)域(〈700ng/mL)的明顯位移，這與外科手術(shù)治療患者中觀察到的趨勢一致，如圖13-15所示。實施例14比較AIS患者與健康對象的硒水平據(jù)報道AIS患者的血漿中硒濃度顯著降低(42)。硒，更具體是Se-甲基硒代半胱氨酸(飲食中的天然有機硒)因為靶向OPN轉(zhuǎn)錄而作為預防性化療(chemopreventivetherapy)用于預防乳腺癌轉(zhuǎn)移(43-45)。因此，檢測兒科人群(AIS與健康對照)的血漿硒濃度以測定AIS中硒水平低是否OPN濃度與較高相關(guān)。利用2,3-二氨基萘(DAN)，通過熒光法測定血漿硒濃度(46,47)。圖18和19所示結(jié)果顯示脊柱側(cè)凸和無癥狀但有風險兒童中OPN水平高與硒水平低相關(guān)。雖然上文借助具體的實施方式描述了本發(fā)明，但可在不脫離由所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明構(gòu)思和性質(zhì)的情況下對其作出改進。參考文獻(1)BrodnerW,KreplerP，NicolakisM等，"褪黑激素和青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸"(Melatoninandadolescentidiopathicscoliosis).JBoneJointSurgBr2000;82(3):399-403.(2)LoweTG,EdgarM,MarguliesJY等，"特發(fā)性脊柱側(cè)凸的病因研究的最新進展"(Etiologyofidiopathicscoliosis:currenttrendsinresearch.)JBoneJointSurgAm2000;82-A(8):l157-1168.(3)VeldhuizenAG,WeverDJ,WebbPJ."特發(fā)性脊柱側(cè)凸的病因生物機械和神經(jīng)肌肉因素"(Theaetiologyofidiopathicscoliosis:biomechanicalandneuromuscularfactors.)EurSpineJ2000;9(3》178-184.(4)MillerNH."青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸的病因和天然歷史"(Causeandnaturalhistoryofadolescentidiopathicscoliosis.)OrthopClinNorthAm1999;30(3):343-52,vii.(5)MillerNH."家族性特發(fā)性脊柱側(cè)凸的遺傳性"(Geneticsoffamilialidiopathicscoliosis.)ClinOrthop2002;(401):60-64.(6)MillerNH，SchwabDL,SponsellerPD,ManolioTA，PughEW,WilsonAP."在臨床良好確定人群中表征特發(fā)性脊柱側(cè)凸"(Characterizationofidiopathicscoliosisinaclinicallywell-definedpopulation.)ClinOrthop2001;(392):349-357.(7)WiseCA,-BarnesR,GillumJ,HerringJA，BowcockAM,LovettM."對家族性特發(fā)性脊柱側(cè)凸易感性的定位"(Localizationofsusceptibilitytofamilialidiopathicscoliosis.)Spine2000;25(18):2372-2380.(8)MoreauA,WangDS,ForgetS等，"青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸中的褪黑激素<言號傳導失調(diào)"(MelatoninSignalingDysfunctioninAdolescentIdiopathicScoliosis.)Spine2004.(9)DenhardtDT，NodaM,O'ReganAW，PavlinD,BermanJS."骨橋蛋白作為應(yīng)付環(huán)境攻擊的手段調(diào)節(jié)炎癥、組織重塑和細胞存活"(Osteopontinasameanstocopewithenvironmentalinsults:regulationofinflammation,tissueremodeling,andcellsurvival.)JClinInvest2001;107(9):1055-1061.(10)MazzaliM,KipariT,OphascharoensukV，WessonJA，JohnsonR,HughesJ."骨橋蛋白-全季分子"(Osteopontin—amoleculeforallseasons.)QJM2002;95(1):3-13.(11)LopezCA,OlsonES,AdamsJC，MouK,DenhardtDT，DavisRL."在成人耳蝸和內(nèi)耳液中檢測骨橋蛋白表達"(Osteopontinexpressiondetectedinadultcochleaeandinnerearfluids.)HearRes1995;85(l-2):210-222.(12)SimoneauM,RicherN,MercierP,AllardP,TeasdaleN."特發(fā)性脊柱側(cè)凸青少年的感覺剝奪和平衡控制"(Sensorydeprivationandbalancecontrolinidiopathicscoliosisadolescent.)ExpBrainRes2006;170(4):576-582.(13)GuoX,ChauWW,Hui-ChanCW,CheungCS,TsangWW，ChengJC."特發(fā)性脊柱側(cè)凸青少年的平衡控制和紊亂的軀體感應(yīng)功能"(Balancecontrolinadolescentswithidiopathicscoliosisanddisturbedsomatosensoryfunction.)Spine2006;31(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rinindicateimmunedysfunctioninchronicpancreatitis.)Pancreas2001;23(4):335-340.(39)SjobergS,FogelstrandL,HultheJ,FagerbergB，KrettekA."婦女的循環(huán)CD44高于男性，并且與心血管風險因素或亞臨床動脈粥樣硬化不相關(guān)"(CirculatingsolubleCD44ishigheramongwomenthanmenandisnotassociatedwithcardiovascularriskfactorsorsubclinicalatherosclerosis.)Metabolism2005;54(2):139-141.(40)JenkinsRH,ThomasGJ,WilliamsJD，SteadmanR."成肌纖維細胞分化導致乙酰透明質(zhì)酸因乙酰透明質(zhì)酸轉(zhuǎn)換降低而累積"(Myofibroblastsdifferentiationleadstohyaluronanaccumulationthroughreducedhyaluronanturnover.)JBiolChem2004;279(40):41453-41460.(41)LienYH，F(xiàn)uJ，RuckerRB，ScheckM，AbbottU,SternR."正常和脊柱側(cè)凸雞成纖維細胞培養(yǎng)物的膠原、蛋白聚糖和透明質(zhì)酸酶活性"(Collagen,proteoglycanandhyaluronidaseactivityinculturesfromnormalandscolioticchickenfibroblasts.)BiochimBiophysActa1990;1034(3):318-325.(42)DastychM，CiencialaJ."特發(fā)性脊柱側(cè)凸和血漿中鋅、銅和硒的濃度"(Idiopathicscoliosisandconcentrationsofzinc,copper,andseleniuminbloodplasma.)BiolTraceElemRes2002;89(2):105-110.(43)El-BayoumyK，SinhaR."硒的分子化學預防基因組方法"(Molecularchemopreventionbyselenium:agenomicapproach.)MutatRes2005;591(l-2):224-236.(44)UnniE,KittrellFS，SinghU,SinhaR."骨橋蛋白是通過Se-甲基硒代半胱氨酸進行的小鼠乳腺癌化學預防中潛在的靶基因"(OsteopontinisapotentialtargetgeneinmousemammarycancerchemopreventionbySe-methylsele露ysteine.)BreastCancerRes2004;6(5):R586-R592.(45)HeYT,LiuDW,DingLY,LiQ,XiaoYH."抗纖維化草藥和硒對肝纖維化大鼠的療效和分子機制"(Therapeuticeffectsandmolecularmechanismsofanti-fibrosisherbsandseleniumonratswithhepaticfibrosis.)WorldJGastroenterol2004;10(5):703-706.(46)SheehanTM，GaoM."血漿和尿液中總硒的簡化熒光試驗"(Simplifiedfluorometricassayoftotalseleniuminplasmaandurine.)ClinChem1990;36(12):2124-2126.(47)AndoM,TakizawaM,SuwabeS,YamatoS，ShimadaK."酸消化和用2,3-二氨基萘衍生后通過液相/電子俘獲大氣壓化學電離質(zhì)譜法測定人血清中的硒"(Determinationofseleniuminhumanserumbyliquidchromatography/electroncaptureatmosphericpressurechemicalionizationmassspectrometryafteraciddigestionandderivatizationusing2,3-diaminonaphthalene,)EurJMassSpectrom(Chichester,Eng)2003;9(6):619-622.(48)UchioE，MatsuuraN,KadonosonoK,OhnoS，UedeT."過敏性結(jié)膜疾病患者眼淚中的骨橋蛋白水平"(Tearosteopontinlevelsinpatientswithallergicconjunctivaldiseases.)GraefesArchClinExpOphthalmol,2002;240(11):924-8.(49)Buck等，"定制DNA測序引物的設(shè)計方案和性能"(DesignStrategiesandPerformanceofCustomDNASequencingprimers.)Biotechniques1999;27:528-536.(50)Ponta,H，ShermanL，Herrlich,PA."CD44:從粘著分子到信號傳導調(diào)節(jié)齊U"(CD44:fromAdhesionmoleculestosignallingregulators.)NatureReviews.2004;4:33-45.(51)Garrett,K.A.，P.D.Esker和A.H.Sparks.2007."R編程環(huán)境介紹"(IntroductiontotheRProgrammingEnvironment.)ThePlantHealthInstructor.DOI:10.1094/Pm-A-2007-1226-02.(52)IhakaR,GentlemanR."數(shù)據(jù)分析和圖形語言"(Alanguagefordataanalysisandgraphics.)JournalofComputationalandGraphicalStatistics1996,5(3):299-314.(53)GoodisonS和TarinD."異常Cd44基因表達在腫瘤中的臨床含義"(ClinicalImplicationsOfAnomalousCd44GeneExpressionInNeoplasia.)FrontiersinBioscience1998,3，e89-109.(54)ItoT,HashimotoY，TanakaE,KanT,TsunodaS,SatoF，HigashiyamaM，OkumuraT,ShimadaY."針對骨橋蛋白的誘導型短-發(fā)夾RNA載體在體外和體內(nèi)降低人食道鱗狀細胞癌的轉(zhuǎn)移可能性"(AnInducibleShort-HairpinRNAVectoragainstOsteopontinReducesMetastaticPotentialofHumanEsophagealSquamousCellCarcinomaInvitroandInvivo)ClinCancerRes2006;12(4)1308-1316.(55)KadkolSS,LinAY,BarakV,KalickmanI,LeachL,Valyi-NagyK,MajumdarD，SettyS，ManiotisAJ，F(xiàn)olbergR,Pe'erJ."轉(zhuǎn)移性色素層黑色素瘤的骨橋蛋白表達和血清水平初步研究"(OsteopontinExpressionandSerumLevelsinMetastaticUvealMelanoma—APilotStudy)InvestOphthalmolVisSci.2006;47(3):802—806.(56)GuarinoV,FavianaP,SalvatoreG,CastelloneMD，CiraficiA，DeFalcoV,CelettiA，GianniniR,BasoloF，MelilloRM，SantoroM."人乳頭狀甲狀腺癌中骨橋蛋白過表達并增強甲狀腺癌細胞侵襲性"(OsteopontinIsOverexpressedinHumanPapillaryThyroidCarcinomasandEnhancesThyroidCarcinomaCellInvasiveness.)TheJournalofClinicalEndocrinology&Metabolism.200590(9):5270-5278.(57)Ponta等，NatRevMolCellBiol.2003Jan;4(l):33-45.綜述.權(quán)利要求1.一種測定脊柱側(cè)凸發(fā)生風險的方法，包括在一段時期監(jiān)測對象的樣品中的骨橋蛋白(OPN)表達；其中一段時期中該對象樣品中的OPN表達增加表明該對象具有發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述監(jiān)測始于該對象約3歲時。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過每月至少約一次的頻率檢測OPN表達來實施所述監(jiān)測。4.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，通過每6個月至少約一次的頻率檢測OPN表達來實施所述監(jiān)測。5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于，采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)或放射免疫測定(RIA)監(jiān)測OPN表達。6.—種測定發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的方法，包括檢測對象的樣品中的骨橋蛋白(OPN)表達；其中該對象樣品中的OPN表達高于對照樣品則表明該對象具有發(fā)生脊柱側(cè)凸風險。7.如權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在于，所述對象是發(fā)生脊柱側(cè)凸的可能候選對象。8.如權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法，其特征在于，所述對象是發(fā)生青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸的可能候選對象。9.如權(quán)利要求1-8中任一項所述的方法，其特征在于，所述對象預先診斷為具有脊柱側(cè)凸。10.如權(quán)利要求1-9中任一項所述的方法，其特征在于，所述對象預先診斷為具有青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸。11.一種對具有脊柱側(cè)凸的對象分類的方法，包括檢測該對象的樣品中的骨橋蛋白(OPN)表達；從而該檢測步驟能將該對象分入脊柱側(cè)凸亞組中。12.—種評估支具對具有脊柱側(cè)凸的對象的效力的方法，包括在支具治療該對象之前和之后檢測該對象的樣品中骨橋蛋白(OPN)表達，其中支具治療之后檢測至少一次，其中與支具治療該對象之前相比，隨后OPN表達增加表明該支具無效。13.如權(quán)利要求ll所述的方法，其特征在于，在支具治療后測定OPN表達是在支具治療后至少一個月時進行。14.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，在支具治療該對象后測定OPN表達是在支具治療后至少兩個月時進行。15.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，在支具治療該對象后測定OPN表達是在支具治療后至少三個月時進行。16.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，在支具治療該對象后測定OPN表達是在支具治療后至少六個月時進行。17.如權(quán)利要求1-16中任一項所述的方法，其特征在于，該方法還包括檢測該對象的樣品中可溶性CD44受體(sCD44)表達。18.如權(quán)利要求1-17中任一項所述的方法，其特征在于，該對象的樣品是該對象的生物學液體。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其特征在于，所述生物學液體選自下組血液、尿液、淚液和唾液。20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述生物學液體是血漿。21.如權(quán)利要求1-20中任一項所述的方法，其特征在于，所述OPN表達是OPN蛋白。22.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于，用特異性結(jié)合OPN的抗體測定OPN表達。23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測OPN表達。24.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述樣品是血漿樣品，OPN表達高于每毫升血漿700納克表明該對象具有發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險。25.如權(quán)利要求23所述的方法，其特征在于，所述樣品是血漿樣品，OPN表達高于每毫升血漿800納克表明該對象具有發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險。26.如權(quán)利要求1-20中任一項所述的方法，其特征在于，所述OPN表達是OPNRNA。27.如權(quán)利要求1-17中任一項所述的方法，其特征在于，所述對象的樣品是脊柱旁肌肉活檢樣品，而所述OPN表達是OPNRNA。—28.—種選擇用于減輕或預防脊柱側(cè)凸的可能候選藥劑的方法，包括將候選藥劑與表達骨橋蛋白(OPN)的細胞接觸，檢測OPN的表達，其中與沒有候選藥劑存在下相比，有其存在時OPN的表達較低，則選擇該候選藥劑。29.—種選擇用于減輕或預防脊柱側(cè)凸的可能候選藥劑的方法，包括將候選藥劑與表達sCD44的細胞接觸，檢測sCD44的表達，其中與沒有候選藥劑存在下相比，有其存在時OPN的表達較高，則選擇該候選藥劑。30.如權(quán)利要求28和29中任一項所述的方法，其特征在于，所述細胞是源自脊柱側(cè)凸患者的細胞。31.—種選擇用于預防或減輕脊柱側(cè)凸的可能候選藥劑的方法，包括在脊柱側(cè)凸模型動物發(fā)生脊柱側(cè)凸之前將候選藥劑給予該動物，從而與未給予候選藥劑的對照動物相比，當該模型動物的脊柱側(cè)凸得到預防或減輕時，選擇該候選藥劑。32.—種預防或減輕脊柱側(cè)凸的方法，包括將治療有效量的骨橋蛋白抑制劑(OPN)或富硒飲食給予具有脊柱側(cè)凸的對象，從而預防或治療脊柱側(cè)凸。33.—種預防或減輕脊柱側(cè)凸的方法，包括將治療有效量的CD44抑制劑給予具有脊柱側(cè)凸的對象，從而預防或治療脊柱側(cè)凸。34.—種預防或減輕脊柱側(cè)凸的方法，包括將治療有效量的sCD44刺激劑給予具有脊柱側(cè)凸的對象，從而預防或治療脊柱側(cè)凸。35.如權(quán)利要求l-34中任一項所述的方法，其特征在于，所述對象是人。36.-如權(quán)利要求1-34中任一項所述的方法，其特征在于，所述對象是女性。37.如權(quán)利要求1-34中任一項所述的方法，其特征在于，所述對象是男性。38.—種用于治療或預防脊柱側(cè)凸的骨橋蛋白抑制劑。39.—種用于治療或預防脊柱側(cè)凸的CD44抑制劑。40.—種用于治療或預防脊柱側(cè)凸的sCD44刺激劑。41.骨橋蛋白抑制劑在制備預防或治療脊柱側(cè)凸的藥物中的應(yīng)用。42.骨橋蛋白抑制劑在預防或治療脊柱側(cè)凸中的應(yīng)用。43.CD44抑制劑在制備預防或治療脊柱側(cè)凸的藥物中的應(yīng)用。44.CD44抑制劑在預防或治療脊柱側(cè)凸中的應(yīng)用。45.sCD44刺激劑在制備預防或治療脊柱側(cè)凸的藥物中的應(yīng)用。46.sCD44刺激劑在預防或治療脊柱側(cè)凸中的應(yīng)用。47.如權(quán)利要求41-46中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述脊柱側(cè)凸是青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸。48.—種預測發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的試劑盒，其裝有骨橋蛋白(OPN)的特異性配體和使用該試劑盒預測發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的使用說明書。49.如權(quán)利要求48所述的試劑盒，所述試劑盒還裝有可溶性CD44(sCD44)的特異性配體。全文摘要一種測定發(fā)生脊柱側(cè)凸風險的方法，包括在一段時期監(jiān)測對象的樣品中的骨橋蛋白(OPN)表達，其中在一段時期中該對象樣品的OPN表達增加表明該對象具有發(fā)生脊柱側(cè)凸的風險。文檔編號A61P19/08GK101680887SQ200880017111公開日2010年3月24日申請日期2008年3月31日優(yōu)先權(quán)日2007年3月30日發(fā)明者A·莫羅申請人:褚圣-賈斯汀公司