專利名稱：：用于治療或預(yù)防呼吸疾病的硫酸木聚糖的制作方法第l/45頁用于治療或預(yù)防呼吸疾病的硫酸木聚糖領(lǐng)域本發(fā)明總體來說涉及在預(yù)防和/或治療呼吸疾病或疾患中有用的藥劑和醫(yī)學(xué)方案，所述呼吸疾病或疾患諸如。孝喘、變應(yīng)性鼻炎和慢性阻塞性肺部疾病(COPD)。更具體地，本發(fā)明涉及石克酸木聚糖(sulfatedxylan)或其衍生物或同系物在治療呼吸疾病或疾患中的用途。背景作者在本說明書中引用的出版物的書目詳情集中放在說明書的后面。在任何國家，此說明書中對任何先前技術(shù)的引用都不是，并且不應(yīng)視為，承認或以任何形式暗示此先前技術(shù)形成普通常識的部分。哮喘的特征為造成呼吸道暫時變窄的氣道炎癥，呼吸道將空氣從鼻和口輸送到肺。哮喘癥狀可由吸入肺的變應(yīng)原或刺激物引起，造成呼吸道發(fā)炎、阻塞和收縮。癥狀包括呼吸困難、喘息、咳嗽、胸悶。在嚴重的情形中，詳喘可以是致死性的。哮喘很可能不是單一的疾病，而是交迭的多種單獨的綜合征的復(fù)合體。以下分類是基于Wenzel.丄a"c";804-813,2006，和Green等人Q/"(9/7肌爿〃ergy/w附朋o/.7:43-50,2007的凈艮道。變應(yīng)性哮喘這是最大的哮喘表型。這在兒童期哮喘中尤其如此，但是在具有哮喘的成人中也很可能有高比例。呈現(xiàn)此表型的個體通常在兒童期經(jīng)歷其最早的癥狀，單克隆抗體也已成功使用。然而，不是所有具有變應(yīng)性哞喘的人都響應(yīng)抗-IgE-療法。5職業(yè)性哮喘達15%的成人發(fā)作哮喘屬于此組。它具有以下亞表型(1)對通常是高分子量藥劑的致病原的免疫介導(dǎo)的應(yīng)答的發(fā)展與變應(yīng)性哮喘具有相似性，也是通過發(fā)展IgE抗體；(2)對低高分子量觸發(fā)物的免疫介導(dǎo)的應(yīng)答的發(fā)展和IgE應(yīng)答不一致；(3)暴露于高濃度刺激性化學(xué)品后非免疫性快速攻擊應(yīng)答的發(fā)展。兩種免疫性表型中的呼吸道炎癥相似，并與變應(yīng)性哮喘的類似，如嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、肥大細胞的存在和網(wǎng)狀基底膜的增厚。相反，由刺激性化學(xué)品引起的哞喘是非常不同的，其特征為支氣管壁纖維化和上皮剝露和黏膜下層中的纖維出血性(fibrinohaemorrhagic)分泌液而沒有嗜酸性炎癥。此哮喘的免疫類型可在缺乏暴露于致病原下繼續(xù)。阿斯匹林誘導(dǎo)的哮喘阿斯匹林和其他非甾族抗炎藥物是觸發(fā)物。它在嚴重哮喘群體中常見，并且沒有多少證據(jù)表明其與遺傳性過敏癥、升高的白三烯以及組織和血液中高數(shù)量的嗜酸性粒細胞相關(guān)。其存在嚴重的鼻竇炎和鼻息肉以及成年發(fā)作。這一表型對糖皮質(zhì)激素響應(yīng)差。月經(jīng)相關(guān)的哮喘這一表型沒有得到很好的表征。它可能僅發(fā)生于一小部分婦女中，但是它可以是嚴重的。鍛煉誘導(dǎo)的哮喘觸發(fā)此哮喘的機制看起來牽涉急性炎性細胞(通常是肥大細胞)、上皮和血管活性應(yīng)答，但是其發(fā)病機制還不清楚。鍛煉誘導(dǎo)的哮喘是代表在所有患哮喘癥者中響應(yīng)鍛煉的支氣管收縮的發(fā)展或它僅發(fā)生于一些人中還不清楚。雖然炎癥是哮喘的特點，但不是所有哮喘表型都具有顯著的嗜酸性炎癥，盡管這是最常見和研究最充分的。嗜酸性哮喘研究已通過具有不同嚴重程度的哮喘的患者中的痰液或活組織檢查檢驗定義了嗜酸性表型，并已證明一貫性地50%左右的患哮喘癥者具有此表型。其他研究則表明嗜酸性炎癥可能以比使用痰液或活組織檢查檢驗所檢測到的比例更高的比例存在于患者中。在一項研究中，認為是非嗜酸性的50%的嚴重哮喘患者實際上具有嗜酸性炎癥，但在遠端肺中。嗜中性詳喘通常見于具有嚴重疾病的患者。許多具有嗜中性炎癥的患者可在組織活檢中具有并發(fā)的嗜酸性炎癥，而痰液評估可顯示明顯的嗜中性粒細胞優(yōu)勢。嗜中性粒細胞與嚴重哮喘的關(guān)聯(lián)可能是由高劑量類固醇的治療引起的，已顯示高劑量類固醇在體外降低嗜中性粒細胞凋亡。嗜中性哮喘與il-8和嗜中性粒細胞彈性蛋白酶的增加有關(guān)。大約20%的患者具有嗜中性哮喘，并且還有8%具有嗜酸性炎癥和嗜中性炎癥二者(來自93名患者的研究)。少粒細胞性哮喘痰液細胞計數(shù)在正常范圍內(nèi)的患者(93名患者中的30%具有此亞表型)。變應(yīng)性鼻炎是變應(yīng)原誘導(dǎo)的上呼吸道疾病，特征為高反應(yīng)性呼吸道黏膜和插入有周期性急性惡化的慢性癥狀。變應(yīng)性個體變得對變應(yīng)原敏感并可發(fā)展針對變應(yīng)原的IgE抗體，所述變應(yīng)原諸如花粉、塵螨、動物毛屑和霉菌孢子。對抗原的即時變應(yīng)性應(yīng)答稱為早期應(yīng)答。此階段過程中釋放的介質(zhì)是組胺、激肽、中性蛋白酶和多種細胞因子。肥大細胞的活化導(dǎo)致產(chǎn)生白三烯和前列腺素，并且這些介質(zhì)一起在變應(yīng)原暴露幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生水樣鼻液溢、打噴噢和發(fā)癢。這之后幾個小時是晚期應(yīng)答，包括炎性細胞的浸潤和介質(zhì)向鼻黏膜的釋放。癥狀與早期應(yīng)答的相似，但是充血占優(yōu)勢。(Walls等人,7W:28-33，2005)。變應(yīng)性鼻炎已被再分為"間歇性"和"持續(xù)性"疾病。間歇性疾病描述了其中癥狀以每周少于4天或一次少于4周存在的疾患。持續(xù)性疾病意指癥狀以每周多于4天和一次多于4周存在(Pawanker,Cwr/4〃ergyC7z"./wwwwo/.;4:1-4,2004。)變應(yīng)性鼻炎和變應(yīng)性哮喘是牽涉炎性應(yīng)答的疾病。它們具有相似的基本病因?qū)W，并且每種疾病的關(guān)鍵細胞因子都是T-細胞細胞因子的Th2亞群tl-5、il-4和il-13和gm-csf。這些疾病的特征為包含嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T-淋巴細胞和單核細胞譜系的細胞的顯著的炎性細胞浸潤物。黏著分子p-選擇蛋白、mac-1和pecam-1在白細胞的外滲中起重要作用，并且很可能參與炎性過程。此外，趨化因子的嗜酸性粒細胞趨化因子(eotaxin)家族在這些疾病中起關(guān)鍵作用，因為它們是刺激嗜酸性粒細胞和cd4+T淋巴細胞浸潤的最初的趨化性因子。逐漸認識到哞喘和變應(yīng)性鼻炎是單一炎性呼吸道疾病的組分。得到流行病學(xué)數(shù)據(jù)支持的結(jié)論顯示大于80。/。的具有變應(yīng)性哮喘的人具有變應(yīng)性鼻炎，而多達50。/。的具有變應(yīng)性鼻炎的患者具有哞喘(Gelfand,丄爿〃wgyC//"./膽應(yīng)o/,"4:S135-138，2004;Passalacqua等人,Cm/tJ/ergyC7/:"./柳ww"o/.(177-183,2004)。此外，縱向和隨訪研究已顯示鼻炎通常先于哮喘并且是哞喘的風(fēng)險因素。變應(yīng)性鼻炎使發(fā)展哮喘的風(fēng)險增加了至少三倍，并且使用鼻內(nèi)類固醇正確治療變應(yīng)性鼻炎對于支氣管癥狀具有有利的作用，顯著降低了哮喘惡化的入院和急診率(Passalacqua等人，Cmat(9;,".v4〃e廠gvC/,./"朋柳o/.4:177-183,2004)。這些疾病是病理學(xué)的復(fù)雜混合物，牽涉至少上文所示的多種細胞因子、趨化因子和細胞黏著分子。肥大細胞和組胺在初始的變應(yīng)性鼻炎應(yīng)答過程中起重要作用。不過，隨著變應(yīng)性鼻炎的進展，組胺的作用消退，使得抗組胺劑作為療法效率較低(Gelfand,/.y4〃wgyC/,"./附ww朋//":S135-138，2004)。在初始的變應(yīng)性鼻炎應(yīng)答過程中，敏化的肥大細胞在變應(yīng)原暴露的幾分鐘內(nèi)脫粒，釋放已4丸行的和新合成的介質(zhì)，包括組胺、蛋白酶、半胱氨酰白三烯、前列腺素和細胞因子。變應(yīng)性鼻炎進展取決于與嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、嗜中性粒細胞、單核細胞和T-淋巴細胞的浸潤相關(guān)的介質(zhì)(Passalacqua等人，同上，2004)。意識到嗜酸性粒細胞和IL-5與變應(yīng)性鼻炎的關(guān)聯(lián)已有一段時間。重復(fù)的研究已發(fā)現(xiàn)，用變應(yīng)原誘發(fā)后Th2-型細胞因子包括IL-5和IL-4的水平增加和活化的嗜酸性粒細胞的標(biāo)志物嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)的量的增加(Blaiss爿〃wgyAw/wm尸roc.26:35-40,2005。嗜酸性粒細胞的流入與癥狀的發(fā)展密切相關(guān)。此外，鼻炎患者的鼻黏膜中上皮完整性的損失與嗜酸性粒細胞的數(shù)量而不是肥大細胞或嗜中性粒細胞的數(shù)量相關(guān)(Borish丄/4〃wgyC/w/附mw"o/.1021-1031,2003)?？雌饋碜儜?yīng)性鼻炎從對抗組胺劑有響應(yīng)的急性、主要由肥大細胞介導(dǎo)的過程進化至主要由嗜酸性粒細胞介導(dǎo)的并且對抗組胺劑的響應(yīng)低得多的慢性炎性疾病。這是具有持續(xù)性變應(yīng)性鼻炎的患者的情形。對于季節(jié)性患者來說，進展為抗組胺劑難治的疾患還可發(fā)生于變應(yīng)季節(jié)。對于具有輕度間歇性疾病的其他患者，抗組胺劑確實不失為有效的療法，反映間歇性變應(yīng)原暴露，其持續(xù)時間不足以驅(qū)動疾病進展至抗組胺劑抗性期。詳喘的一線治療是吸入性糖皮質(zhì)激素(ICS)，其通常與(32-激動劑組合使用(Barnes,&J.P//a/7M"co/."7/:S297-303,2006)。(32隱激動劑減輕癥狀而不治療基本的炎癥，并且如果在沒有ICS下頻繁使用，有可能使嗜喘更加惡化。盡管如此，由于其作用的即時性，這看起來仍是優(yōu)選的療法(雖然它有副作用)。沒有ICS的02-激動劑療法已由于與此療法有關(guān)的可能心臟問題而被FDA列入"黑框"列表。雖然副作用比用口服制劑低，但是ICS并非沒有不利的局部的和全身的副作用。糖皮質(zhì)激素的副作用是抑制下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPAA):觀察到臨床相關(guān)的副作用，并且這對于一些藥物要比其他更加明顯。骨密度和骨折也可能成為問題檢測到ICS對骨代謝的一定作用，但臨床相關(guān)性尚不清楚。最后，兒童中的生長遲緩是可能使患者擔(dān)憂的另一問題(Allen,A/v尸e^7化53:101-110,2006)?？偠灾b于持續(xù)性/無法控制性哮喘的嚴重并發(fā)癥，所述副作用是可接受的。哮喘的其他療法包括(1)奧馬珠單抗，一種抗-lgE抗體(Genetech)，并且也祐^見為對于標(biāo)準(zhǔn)哮喘治療不具成本效益。它主要用作ICS的附加療法，因為它不改善呼吸道反應(yīng)性并且具有不高的效力。劑量約束和遞送機制(皮下注射)是附加的缺點。此外，美國食品和藥品管理局(FDA)的警告將奧馬珠單抗注射與威脅生命的過敏性反應(yīng)聯(lián)系在一起，并且更令人擔(dān)憂的是，在一些患者中，此過^:性反應(yīng)是在注射后超過2小時至注射后超過24小時延遲發(fā)生的。(2)抗白三烯劑(抗LT劑)，其可引起支氣管擴張。它們的作用是與短效|32-受體激動劑的作用加成的，雖然它們單獨具有相對不高的作用?？筁T劑主要影響早期哮喘應(yīng)答(EAR)，而ICS顯示對晚期哮喘應(yīng)答的顯著作用(Palmqvist等人，/1〃ergv60:65,2005)。由于這些原因，抗LT劑已與TCS進行了組合試驗。抗白三烯劑不具成本效益。它們幾乎沒有副作用，但是它們的效力低。變應(yīng)性鼻炎的通常療法是抗組胺劑或鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素Neilsen和Dahl,y4w../.it',y/,>:AfeJ.2:55-65,2003;Yanez和Rodrigo,y4〃ergvJ's'Awa//wm/"o/.卵:479-84，2002)。比較早的第一代口服HI拮抗劑(抗組胺劑)具有許多不利的副作用，認識最清楚的是困倦和抗膽堿能作用。開發(fā)了第二代藥物以克服這些作用。然而，最近的研究表明，從困倦角度區(qū)分第一代和第二代H1拮抗劑不是一刀切的(Golightly和Greos，Drags65:341-84,2005)。FDA批準(zhǔn)的最有效的抗組胺劑西替利漆的標(biāo)簽包括對可能的嗜眠副作用警告和緊急服藥后謹慎駕駛和使用重型設(shè)備的警示。此外，應(yīng)避免同時飲酒或服用其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)阻抑劑，因為可能造成警惕性和CNS表現(xiàn)的進一步降低。而且，抗組胺劑對于慢性變應(yīng)性鼻炎相關(guān)的充血是無效的。變應(yīng)性鼻炎進展為主要由嗜酸性粒細胞介導(dǎo)并且對抗組胺劑療法不應(yīng)的疾病。當(dāng)這發(fā)生時，鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素(INCS)是主要的療法。確實，對于許多醫(yī)師來說，TNCS是治療所有變應(yīng)性鼻炎的選擇藥物，因為糖皮質(zhì)激素具有減輕嗜酸性粒細胞炎癥的作用。雖然一般認為INCS是安全的，但是建議盡可能地減類固醇劑量并優(yōu)化類固醇節(jié)約策略(Skoner,Oz/r(9pz"./4〃ergyC7/w./w附wwo/.2:7-10，2002)。慢性阻塞性肺部疾病(COPD)的基礎(chǔ)病因?qū)W與變應(yīng)性炎性疾病的不同(Sutherland和Martin,J」〃ergy/附附imo/.//么819-27，2003)。COPD牽涉影響周圍呼吸道和肺實質(zhì)的慢性炎性過程，并且在惡化過程中炎癥更加嚴重。COPD發(fā)展的主要貢獻因素是對吸煙的炎性應(yīng)答。COPD的病理學(xué)指標(biāo)是肺實質(zhì)的破壞(肺部氣腫)、小的周圍呼吸道的炎癥(呼吸性支氣管炎)和中樞呼吸道炎癥。具有COPD的大多數(shù)患者具有展示不同炎癥才莫式的全部三種病理學(xué)疾患('隄性阻塞性支氣管炎、氣腫和黏液堵塞)(Adcock和Ito，PracJw.TTzorac.2:313-319，2005)。嗜中性粒細胞和巨噬細胞被認為是疾病的主要效應(yīng)子。對痰液和支氣管肺泡灌洗液的分析顯示來自COPD患者的這些分泌物中嗜中性粒細胞和巨噬細胞二者的增加。此外，增加的證據(jù)表明，存在具有慢性呼吸道嗜酸性的COPD患者的顯著亞組。肺泡巨噬細胞在COPD中起關(guān)鍵作用，它們定位于肺泡受損位點，并且它們的數(shù)量與氣腫中的疾病嚴重性、呼吸道阻塞和肺泡壁受損程度正相關(guān)。在惡化過程中和在嚴重COPD中或在感染過程中，COPD患者的大呼吸道和小呼吸道中的呼吸道組織嗜中性粒細胞增加。具有COPD的患者還展示CD8+/CD4+T細胞比值的增加或呼吸道壁中CD8+和CD4+T細胞二者總數(shù)量的增力口(MacNee，爿肌2:258-266,2005)。細支氣管被纖維化阻塞，并浸潤有巨噬細胞和T淋巴細胞。COPD有三種形態(tài)形式慢性支氣管炎、阻塞性細支氣管炎和氣肺(Szilasi等人，2006.(9""乂*,y.12:52-60)。慢性支氣管炎相關(guān)的炎癥位于中樞呼吸道的表皮。炎性過程與黏液的產(chǎn)生增加和缺陷的黏液纖毛清除有關(guān)。在黏膜、平滑肌層和黏膜下層腺體中觀察到炎癥。在大呼吸道中，單核細胞、巨噬細胞、CD8+T細胞和血漿細胞牽涉是穩(wěn)定的COPD中和慢性支氣管炎惡化中常見的。CD8+T細胞釋放肺瘤壞死因子-a(TNF-a)，一種有效的促炎性介質(zhì)。嗜中性粒細胞的作用尚不清楚。嗜中性粒細胞僅在惡化過程中和嚴重COPD中見于大呼吸道，不過它們在早期也見于呼吸道腔中和痰液中。阻塞性細支氣管炎或小呼吸道阻塞是牽涉小呼吸道和周圍呼吸道的炎性疾患。典型特征是具有增加的黏液的瓦解的腔。巨噬細胞和CD8+T細胞支配小呼吸道炎癥，盡管在COPD中炎性變化顯示與氣流阻塞的正相關(guān)。例如，在輕度至中度的穩(wěn)定的COPD中，巨噬細胞是占優(yōu)勢的，而在嚴重的疾病中，嗜中性粒細胞是最主要的炎性組分，而在輕度惡化過程中，發(fā)現(xiàn)了嗜酸性粒細胞。在阻塞性細支氣管炎中，發(fā)現(xiàn)小呼吸道下表皮中成纖維細胞和肌成纖維細胞的數(shù)量增加和增強的胞外基質(zhì)。此病理學(xué)暗示導(dǎo)致纖維化和疤痕組織的反復(fù)受傷和愈合機制。總的結(jié)果是呼吸道變窄。氣腫定義為由末端細支氣管之外的肺組織的破壞和擴大引起的永久性氣室擴大。該疾病的機制牽涉失調(diào)的炎癥和大量蛋白水解酶的釋放。蛋白酶/抗蛋白酶不平衡是肺部氣腫的假定原因。雖然炎癥受CD8+T纟田胞支配，但是巨噬細胞和嗜中性粒細胞產(chǎn)生過量蛋白酶，包括白細胞彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、蛋白酶3、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)、半胱氨酸蛋白酶和纖維蛋白溶酶原激活物。這些酶破壞彈性蛋白和肺泡壁的其他組分，而彈性蛋白酶是在此過程中牽涉最多的酶。這些疾病過程的促炎性介質(zhì)包括白三烯-B4、IL-8和其他趨化因子(如MIP-la、MCP-l)、TNF-a、IL-13和IL陽4(Barnes，尸/w/7w"co/.Wev.56:515-548，2004)。已表明TNF-a和IL-4對支氣管上皮細胞產(chǎn)生調(diào)節(jié)性細胞因子TGF-P的抑制作用可促進炎性應(yīng)答的進展。此外，已測量到痰液中IL-6、IL-1(3、TNF-a和IL-8水平的增加以及惡化過程中的進一步增加。COPD對社會是非常大的負擔(dān)。在英國，它是第五大死亡原因。在美國，它影響5%的成人群體并且是唯一的主要死亡原因，其中發(fā)病率和死亡率不斷增加。到2020年，預(yù)計COPD將是世界范圍的第三大死亡原因和第五大殘疾原因(Halpin和Miravitlles，乂州.77;orac.fee.3:619-623，2006)。COPD的現(xiàn)有療法是很不充分的。沒有療法減緩疾病進展，并且治療響應(yīng)差。COPD對糖皮質(zhì)激素的抗炎作用是相對抗性的。盡管如此，當(dāng)前的藥理選擇包括輔助停止吸煙的藥物、短效和長效|32-激動劑、短效和長效抗膽堿能劑、吸入性糖皮質(zhì)激素、茶堿、N-乙酰半胱氨酸和其他黏液溶解劑和氧氣(Anzueto，爿附.</.//9:S46-S53，2006;Barnes和Stockley，￡wki^sp,K</.25:1084-1106，2005)。引入短效和長效卩2-激動劑以改善支氣管擴張。它們經(jīng)常與抗膽堿能劑組合使用，因為它們經(jīng)由不同的途徑產(chǎn)生支氣管擴張。吸入性糖皮質(zhì)激素經(jīng)常與(32-激動劑組合使用，并且惡化速率的改善大于觀察的個體組分的改善。茶堿是有用的支氣管擴張劑。N-乙酰半胱氨酸的作用模式尚不清楚，但它可作為黏液溶解劑或抗氧化劑起作用以改善咳嗽癥狀，并在一些患者中顯示降低惡化頻率。盡管有這些療法，但是在臨床試驗中明確顯示降低死亡率的唯一干預(yù)是停止吸煙。概述貫穿本說明書，除非文中另外要求，詞"包含"(comprise)或變化諸如"包含，，(comprises)或"包含"(comprising)應(yīng)理解為暗示包括指定的要素或整數(shù)或要素或整數(shù)的組，但不排除任何其他要素或整數(shù)或要素或整數(shù)的組。戊聚糖多聚硫酸酉旨(PPS)和其他硫酸木聚糖樣化合物鑒別為在治療和預(yù)防呼吸疾患中有用，所述呼吸疾患諸如，但不限于哮喘、變應(yīng)性鼻炎和充血性阻塞性肺部疾病(COPD)。"COPD"的涵義包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎。雖然已暗示PPS用于治療深度靜脈血栓，但是現(xiàn)在已確定硫酸木聚糖諸如PPS可用于預(yù)防或緩解呼吸疾病的癥狀。因此，提出將硫酸木聚糖諸如PPS和其功能衍生物和同系物用于治療選自包含哮喘、變應(yīng)性鼻炎、COPD和生理上、生化上和臨床上相關(guān)的疾患的列表的呼吸疾患。術(shù)語"呼吸疾病"或"呼吸疾患"包括諸如炎性和/或變應(yīng)性呼吸疾患或肺部疾患的肺部疾病或疾患。硫酸木聚糖(如PPS)、硫酸木聚糖樣化合物和包含它們的復(fù)合分子在來源上可以是合成的或半合成的，和/或可產(chǎn)生自更大的硫酸化多糖。此外，本文描述的化合物可經(jīng)歷許多其他修飾，諸如添加側(cè)枝、木聚糖主鏈的硫酸化和/或磷酸化和多糖鏈長度的變化。所述藥劑還可融合于氨基酸部分或肽、多肽或蛋白鏈或成為其部分，在本文稱為"復(fù)合"分子。因此，考慮了用于治療或預(yù)防受治療者中的呼吸疾患的方法，所述方法包括在足以緩解所迷呼吸疾患的癥狀的條件下向受治療者施用有效量的硫酸木聚糖或其衍生物或同系物或其鹽一段時間。硫酸木聚糖的一個實例是戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)或其衍生物或同系物，并且尤其是在關(guān)于緩解呼吸疾患或疾病的癥狀方面以與PPS相似的方式起作用的那些衍生物和同系物。因此，還提供了用于治療或預(yù)防受治療者中的呼吸疾患的方法，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向受治療者施用有效量的PPS或其功能衍生物或同系物或其鹽一段時間。在一實施方案中，所述藥物經(jīng)由吸入或作為鼻噴霧劑施用。硫酸木聚糖諸如PPS的"功能"衍生物或同系物是以與硫酸木聚糖相似的方式緩解所治療或預(yù)防的癥狀的化合物。衍生物或同系物還包括包含硫酸木聚糖(xylansulfate)和氨基酸部分或肽、多肽或蛋白的復(fù)合分子。復(fù)合分子還可包含多種硫酸木聚糖分子和/或多種氨基酸或多種肽、多肽或蛋白實體。在其他實施方案中，所述呼吸疾患選自包含哮喘、變應(yīng)性鼻炎和COPD的列表，COPD包括氣月中、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎。200880024634.3說明書第10/45頁因此，此方面是針對呼吸疾患的治療或預(yù)防，所述呼吸疾患選自包舍哮喘、變應(yīng)性鼻炎和COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)的列表，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向所述受治療者施用硫酸木聚糖或其衍生物或同系物或其鹽一段時間。在特定的方面，包括了選自包含哮喘、變應(yīng)性鼻炎和COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)的列表的呼吸疾患的治療或預(yù)防，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向所述受治療者施用PPS或其功能衍生物或同系物一段時間。又一方面是針對硫酸木聚糖諸如PPS或其功能衍生物或同系物在制備用于治療或預(yù)防呼吸疾患或疾病的藥物中的用途。本文考慮的呼吸疾患和疾病包括嗜喘、變應(yīng)性鼻炎和COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)。本文還考慮了包含硫酸木聚糖或其衍生物或同系物的組合物，所述組合物用于治療呼吸疾患，諸如哮喘、變應(yīng)性鼻炎和COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)。又一方面提供用于治療或預(yù)防呼吸疾患的醫(yī)學(xué)方案。所述方案包括診斷受治療者中的呼吸疾患或疾病，開處方一定類型和量的硫酸木聚糖諸如PPS或其功能衍生物或同系物，并監(jiān)測受治療者的所述疾病狀況的癥狀和/或其他跡象的緩解。所述方案還可包括開處方其他活性劑。根據(jù)以上方面，受治療者可以是任何動物，諸如哺乳動物并且尤其是人類。盡管不意欲將本發(fā)明限于任一種理論或提出的作用模式，硫酸木聚糖可充當(dāng)炎性分子的拮抗劑，所述炎性分子諸如細胞因子或生長因子以及其他分子。因此，另一方面是針對硫酸木聚糖諸如PPS結(jié)合的配體。因此，硫酸木聚糖的級分(fraction)或衍生物諸如PPS或其級分或衍生物可充當(dāng)配體的拮抗劑。配體的實例包括但不限于細胞因子，包括白介素(如IL-5、IL-4、IL畫13、IL-6、IL-7、IL陽8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL-12、IL-3、IL-14、IL-15或包括IL-25在內(nèi)的細胞因子的IL-17家族)，干擾素(如a-千擾素、p-干擾素、Y-千擾素)，或生長因子包括但不限于G-CSF、M-CSF、GM-CSF、BDNF、CNTF、EGF、EPO、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGFIO、FGFll、FGF12、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、LIF、PDGF、SCF、TGFa、TGFp、TNFa、T卿、TPO、VEGF、GH、NGF、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、制癌蛋白M(OSM)和胰島素，或趨化因子包括但不限于MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5;MIP-1家族成員，包括MIP-1a、MIP-2;嗜酸性粒細胞趨化因子(嗜酸性粒細胞趨化因子-1、匿2或-3)、PBP(血小板堿性蛋白)、SDF-1、PBSF、PF4、RANTES和類似細胞因子；諸如彈性蛋白酶的酶；組織蛋白酶家族的酶，細胞黏著分子諸如PECAM-1;或可溶性受體或細胞結(jié)合受體或病毒結(jié)合受體。因此，本發(fā)明提供組合物，所述組合物包含硫酸木聚糖的級分或衍生物，所述硫酸木聚糖是選自包含以下的列表的配體的拮抗劑IL-5、IL-4、IL-13、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL-12、IL-3、IL陽14、IL-15或包括TL-25在內(nèi)的細胞因子的IL-17家族、干擾素、G-CSF、M-CSF、GM-CSF、BDNF、CNTF、EGF、EPO、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGFIO、FGFll、FGF12、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、LIF、PDGF、SCF、TGFa、TGF(3、TNFa、T卿、TPO、VEGF、GH、NGF、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、制癌蛋白M(OSM)、胰島素、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5;MIP-1家族成員，包括MIP-la、MIP-2;嗜酸性粒細胞趨化因子(嗜酸性粒細胞趨化因子-l、-2或-3)、PBP(血小板堿性蛋白)、SDF-1、PBSF、PF4、RANTES、彈性蛋白酶；組織蛋白酶家族的酶、細胞黏著分子諸如PECAM-1和可溶性受體或細胞結(jié)合受體或病毒結(jié)合受體，所述組合物還包含一種或多種藥學(xué)可接受載體、稀釋劑和/或貞武形劑。特定的配體為IL-5、IL-4、IL-13、G-CSF和M-CSF;特定的配體還包括IL-8、MCP-1、MIP-la、嗜酸性粒細胞趨化因子-1和嗜酸性粒細胞趨化因子-2。硫酸木聚糖的級分或衍生物可以是與一種或多種藥學(xué)可接受載體、稀釋劑和/或賦形劑一起在藥物組合物中。本文使用的縮寫在表l中定義。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>附圖筒述圖1是戊聚糖多聚硫酸酉旨(PPS)的示意圖。圖2是硫酸化木寡糖的示意圖，n=l-9,X-H或S03Na。末端殘基(硫酸化之前的還原末端)的端基異構(gòu)性可以是a、P或二者的混合物。圖3A-E是顯示以下的圖解說明A)IL-4結(jié)合抑制的戊聚糖(實線)和肝素(虛線)的劑量-應(yīng)答曲線；B)IL-5結(jié)合抑制的戊聚糖(實線)和肝素(虛線)的劑量-應(yīng)答。在各種情形中，結(jié)合使用BIAcore上的肝素化流動池測量。C)不同濃度的人類嗜酸性粒細胞趨化因子(CCL11)與固定于傳感器表面的肝素的結(jié)合，顯示了BIAcore2000產(chǎn)生的傳感圖；D)戊聚糖多聚硫酸酯(藍色菱形)、肝素(綠色三角形)和由8個糖組成的硫酸木聚糖(DP8)(紅色方塊)抑制嗜酸性粒細胞趨化因子-l結(jié)合于BIAcore上的肝素化流動池的劑量-應(yīng)答；E)戊聚糖多聚硫酸酯(紅色方塊)和肝素(藍色菱形)抑制嗜酸性粒細胞趨化因子-2結(jié)合于BIAcore上的肝素化流動池的劑量-應(yīng)答。圖4是顯示Ba/F-IL-5細胞的IL-5依賴性增殖的戊聚糖(實線)和肝素(虛線)的劑量-應(yīng)答曲線的圖解說明。圖5是顯示TF-1.8細胞的IL-4依賴性增殖的戊聚糖(實線)和肝素(虛線)的劑量-應(yīng)答曲線的圖解說明。圖6是顯示TF-1.8細胞的GM-CSF依賴性增殖的劑量-應(yīng)答曲線的圖解說明。圖7是顯示硫酸化糖對用0.025ng/mlGM-CSF獲得的TF-1.8細胞增殖的效應(yīng)的圖解說明。圖8是顯示CTL-Luc細胞的IL-2依賴性增殖的劑量-應(yīng)答曲線的圖解說明。圖9是顯示硫酸化糖對用1.25ng/ml重組人類(rh)IL-2獲得的CTL-Luc細胞增殖的效應(yīng)的圖解說明。圖10A和B是顯示以下的圖解說明A)PPS抑制人類白細胞彈性蛋白酶的活性的劑量應(yīng)答曲線；和B)肝素抑制人類白細胞彈性蛋白酶的劑量應(yīng)答曲線。圖11是顯示肝素(H)和戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)二者對用卵清蛋白(OVA)敏化并用OVA鼻內(nèi)攻擊的豚鼠(變應(yīng)性鼻炎動物模型)的鼻灌洗液的蛋白含量的效應(yīng)的圖解說明。這些數(shù)據(jù)與用OVA敏化并攻擊但未用所述藥物治療的陽性對照進行了比較。顯示了統(tǒng)計顯著性(*=P<0.05,**=PO.01),并纟會出了％抑制。肝素和PPS以1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg使用。圖12是顯示肝素(H)和戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)二者對浸潤入鼻腔并在用卵清蛋白(OVA)敏化并用OVA鼻內(nèi)攻擊的豚鼠(變應(yīng)性鼻炎動物模型)的鼻灌洗液中收集的白細胞水平的效應(yīng)的圖解說明。這些數(shù)據(jù)與用OVA敏化并攻擊但未用所述藥物治療的陽性對照進行了比較。顯示了統(tǒng)計顯著性(*=P<0.05,**=P<0.01),并給出了％抑制。肝素和PPS以1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg禾口20mg/kg使用。圖13是顯示PPS以及硫酸木聚糖四糖和五糖的混合物對用卵清蛋白(OVA)敏化并用OVA鼻內(nèi)攻擊的豚鼠(變應(yīng)性鼻炎動物模型)的鼻灌洗液中含有的細胞浸潤物的效應(yīng)的圖解說明。兩種藥物均以5mg/kg使用。這些數(shù)據(jù)與用OVA敏化并攻擊但未用所述藥物治療的陽性對照進行了比較。顯示了統(tǒng)計顯著性(*=P<0.05，**=PO.Ol)，并給出了％抑制。圖14是PPS抑制收集自用卵清蛋白(OVA)敏化并用吸入性O(shè)VA攻擊的豚鼠(哮喘模型)的支氣管肺泡灌洗液中的蛋白(A)和白細胞浸潤物(B)水平的圖解說明。PPS以0.1mg/kg、0.5mg/kg、2.5mg/kg和10mg/kg使用。顯示了統(tǒng)計顯著性(*=PO.05)并給出了％抑制。圖15是不同濃度的PPS對用OVA敏化并用吸入性O(shè)VA攻擊的豚鼠(哮喘模型)中測量的呼吸道高反應(yīng)性的組分的效應(yīng)的圖解說明。顯示了對三種濃度的醋曱膽石威(3mg/ml、10mg/ml和30mg/ml)的應(yīng)答。PPS以0.1mg/kg、0.5mg/kg和2.5mg/kg使用。顯示了與陽性對照(用OVA敏化并攻擊但給予PBS)比較的統(tǒng)計顯著性("=P<0.01)。(A)呼吸道阻力(Rl);(B)肺順應(yīng)性(Coyn)。圖16是以20(xg/ml、10pg/ml、2.5昭/ml和1.25|_ig/ml使用的PPS和硫酸木聚糖五糖對TL-13(2.5ng/ml)介導(dǎo)的TF-細胞的增殖的效應(yīng)的圖解說明。顯示了相對于陽性對照的％抑制，所述陽性對照為IL-13而無硫酸化藥物。圖17是PPS和-琉酸木聚糖五糖對DMSO處理的HL-60細胞響應(yīng)20ng/mlIL-8進行遷移的能力的效應(yīng)的圖解說明。遷移入96-孔趨化板底室的細胞數(shù)量使用AQUEOUSONR染料通過在490nm下測量吸光度而定量。PPS和硫酸木聚糖五糖以10貼/ml和50昭/ml使用。顯示了不存在趨化因子(無藥劑)下和有IL-8但無抑制劑下的細胞遷移。圖18是PPS和石克酸木聚糖五糖對THP-1細胞響應(yīng)10ng/mlMCP-]進行遷移的能力的效應(yīng)的圖解說明。遷移入96-孔趨化板底室的細胞數(shù)量使用AQUEOUSONE染料通過在490nm下測量吸光度而定量。PPS和硫酸木聚糖五糖以10pg/ml和50pg/ml使用。顯示了不存在趨化因子(無藥劑)下和有MCP-1但無抑制劑下的細胞遷移。圖19是PPS和-琉酸木聚糖五糖對DMSO處理的U937細胞響應(yīng)40ng/mlMIP-la進行遷移的能力的效應(yīng)的圖解說明。遷移入96-孔趨化板底室的細胞數(shù)量使用AQUEOUSONE染料通過在4卯nm下測量吸光度而定量。PPS和硫酸木聚糖五糖以10jig/ml和50jig/ml使用。顯示了不存在趨化因子(無藥劑)下和有MIP-la但無抑制劑下的細胞遷移。詳細描述除非另外指明，本發(fā)明不限于組分的具體制劑、制備方法、劑量方案，或諸如此類，因而它們可變化。本文使用的術(shù)語僅是出于描述特定實施方案或方面的目的，而非意欲限制。如本文所用，除非文中明確另外指示，單數(shù)形式"一種(a)"、"一種(an)"和"所述(the)"包括復(fù)數(shù)方面。因此，例如，"一種硫酸木聚糖"的涵義包括單一硫酸木聚糖，以及兩種或更多種疏酸木聚糖；"一種活性劑"的涵義包括單一活性劑，以及兩種或更多種活性劑；"所述發(fā)明，，的涵義包括發(fā)明的單一方面或多個方面；等等。術(shù)語"化合物"、"活性劑"、"化學(xué)劑"、"藥理學(xué)活性劑"、"藥物"、"活性物質(zhì)"、"藥"和類似術(shù)語在本文可互換使用，以指誘導(dǎo)期望的藥理學(xué)和/或生理學(xué)效應(yīng)的化合物諸如硫酸木聚糖。在本文中，所述效應(yīng)包括呼吸疾患的治療或預(yù)防或與呼吸疾患相關(guān)的癥狀的緩解，所述呼吸疾患諸如哮喘、變應(yīng)性鼻炎和/或COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)。該術(shù)語還涵蓋本文具體提到的這些活性劑的藥學(xué)可接受的和藥理學(xué)活性成分，包括但不限于鹽、酯、酰胺、前藥、活性代謝物、類似物和類似活性成分。當(dāng)使用術(shù)語"化合物"、"活性劑"、"化學(xué)劑"、"藥理學(xué)活性劑"、"藥物"、"活性物質(zhì)"、"藥"和類似術(shù)語時，應(yīng)理解這包括所述活性劑本身以及藥學(xué)可接受的、藥理學(xué)活性鹽、酯、酰胺、前藥、代謝物、類似物等。復(fù)合分子和組合物也涵蓋在內(nèi)。"化合物"、"活性劑"、"化學(xué)劑"、"藥理學(xué)活性劑"、"藥物"、"活性物質(zhì)"、"藥"和類似術(shù)語的涵義包括兩種或更多種活性物質(zhì)諸如兩種或更多種硫酸木聚糖或硫酸木聚糖-復(fù)合分子或硫酸木聚糖和另一治療劑的組合。"組合'，還包括多部分諸如兩部分藥物組合物，其中藥劑分開地提供并分開地給藥或分配或在分配前混合在一起。例如，多部分藥物包裝可具有硫酸木聚糖或硫酸木聚糖的群體和/或一種或多種抗炎劑。"抗炎劑"包IL畫5、IL-4、IL-13、G陽CSF或M-CSF的拮抗劑，或趨化因子諸如IL-8、MCP-1、MIP-1家族成員如MIP-1a、或嗜酸性粒細胞趨化因子或其受體、或酶像白細胞彈性蛋白酶的抑制劑。拮抗劑的實例包括抗體和可溶性受體。細胞因子諸如"IL誦5、IL-4、IL-13、G-CSF或M-CSF"或趨化因子諸如"IL-8、MCP-1、嗜酸性粒細胞趨化因子(嗜酸性粒細胞趨化因子-l、-2或-3)、MIP-1家族成員如MIP-la"的列表的涵義意指在一個實施方案中，所述細胞因子是IL-5;在另一實施方案中，它是IL-4;在另一實施方案中，它是IL-13;在另一實施方案中，它是IL-8;在另一實施方案中，它是MPC-1;在另一實施方案中，它是MIP-la;而在另一實施方案中，它是G-CSF，以及在另一實施方案中，它是M-CSF。如本文所用的術(shù)語藥劑的"有效量，，和"治療有效量"意指足以提供想要的治療或生理效應(yīng)的藥劑量。不想要的效應(yīng)如副作用有時伴隨想要的治療效應(yīng)顯現(xiàn)出來；因此，醫(yī)生在確定什么是適當(dāng)?shù)?有效量"時要平衡潛在的益處和潛在的風(fēng)險。所需要的確切量隨受治療者不同而變化，這取決于受治療者的物種、年齡和一般身體狀況、施用模式和類似因素。因此，不可能指定確切的"有效量"。然而，任一個體情形下的適當(dāng)?shù)?有效量"可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員使用常規(guī)實驗確定。本文中的有效量包括治療或預(yù)防呼吸疾患或緩解呼吸疾患的癥狀需要的量，所述呼吸疾患諸如哮喘、變應(yīng)性鼻炎和/或COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)。"緩解"包括減輕不利的癥狀、誘導(dǎo)舒適或良好的狀態(tài)或除去或減少疾病的生化、生理或臨床標(biāo)志物。"藥學(xué)可接受的"載體、賦形劑或稀釋劑意指由非生物學(xué)或其他方面不想要的材料構(gòu)成的藥物媒介物，即所述材料可與選擇的活性劑一起施用于受治療者而不引起任何或明顯的不利反應(yīng)。載體可包括賦形劑和其他添加劑諸如稀釋劑、去污劑、著色劑、濕潤劑或乳化劑、pH緩沖劑、防腐劑和類似添加劑。其中組合物也可描述為藥物、制劑、藥劑或藥。相似地，如本文所提供的化合物的"藥理學(xué)可接受的"鹽、酯、酰胺、前藥或衍生物是非生物學(xué)或其他方面不想要的鹽、酯、酰胺、前藥或衍生物。如本文所用的術(shù)語"治療(treating)"和"治療(treatment)"指疾病狀況或感染的癥狀的嚴重程度和/或頻率上的減少、癥狀和/或潛在病因的后的傷害的改善或補救。所治療或預(yù)防的疾患是呼吸疾患。術(shù)語"呼吸疾患"和"呼吸疾病"在本文可互換使用。在一方面，所述呼吸疾病或疾患是肺部疾病或疾患。在另一方面，所述呼吸或肺部疾病或疾患是炎性和/或變應(yīng)性疾病或疾患。"治療，，患者可牽涉在易感個體中預(yù)防疾病或疾患或不利的生理事件以及通過抑制疾病或疾患治療具有臨床癥狀的個體。如本文所用的"患者"指可從本文描述的藥物制劑和方法獲得益處的動物，諸如哺乳動物包括人類。對可從目前描述的藥物制劑和方法獲得益處的動物的類型沒有限制?；颊撸瑹o論是人類或非人類動物，可稱為個體、受治療者、動物、宿主或接受者以及患者。本文描述的化合物和方法在人類醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)以及一般地馴養(yǎng)或野生動物祠養(yǎng)管理以及賽馬業(yè)上關(guān)于呼吸疾患具有應(yīng)用。已建議將聚陰離子用于治療哮喘和變應(yīng)性鼻炎，包括肝素和低分子量肝素、修飾的肝素、從肝素制備的寡糖、硫酸化麥芽六糖和D.P.2-4大小的硫酸化糖[Suchankova等人，五wrJ尸/ww"co/，507(7-":261畫71,2005。EffectsofbemiparinonairwayresponsestoantigeninsensitizedBrown-Norwayrats(貝米肝素對每文化的Brown-Norway大鼠中呼吸道響應(yīng)抗原的效應(yīng))；Parish等人，美國專利6,143,730;Kuszma皿等人，WO2006017752]。顯著地，這些參考文獻中描述的分子比本發(fā)明的分子具有更高的每單糖殘基硫酸化程度。木聚糖限制為最多每殘基兩個硫酸，而含有葡萄糖的寡糖可擁有每殘基三個^^酸。肝素和低分子量肝素制品的缺點是它們是抗凝血劑，并因此使常規(guī)用于哮喘和變應(yīng)性鼻炎的藥物安全性打了折扣。相反，PPS制備廉價，并易于以適合施用的形式商業(yè)獲得。而且，由于其長期用作治療劑，PPS的藥理學(xué)非常清楚。尤其是，因為PPS是弱抗凝血劑(僅為肝素的抗凝血劑的約1/15)，它不太可能具有伴隨肝素用作治療呼吸疾病的藥物的安全性顧慮。戊聚糖多聚硫酸酯先前已被用作血栓預(yù)防劑用于預(yù)防深度靜脈血栓。還研究了其在朊病毒疾病中、作為抗血管生成劑在腫瘤學(xué)中、作為阻止HIV-1感染的試劑、治療炎性腸病的試劑和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的用途。獸醫(yī)學(xué)還用它來治療非傳染性關(guān)節(jié)疾病，特別是在狗和馬中，并且更具體地，骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)創(chuàng)傷和關(guān)節(jié)周圍炎癥和剝脫性骨軟骨炎。"硫酸木聚糖，，的涵義包括硫酸化木寡糖，諸如從pi-4木寡糖以及硫酸木聚糖五糖制備的那些。硫酸木聚糖包括木二糖、木三糖、木四糖、木六糖、木七糖、木八糖、木九糖和木十糖(參見圖2)。在特定的實施方案中，所述硫酸木聚糖是戊聚糖多聚硫酸酯或PPS。PPS是異源多糖，其從植物通常是山毛櫸中提取的木聚多糖的化學(xué)硫酸化制備[Bayol等人，美國專利4，713,373]。其已被表征為硫酸化p卜4連接的木聚糖聚合物，大約每10個木糖殘基發(fā)生一個1-2連接的甲基葡糖醛酸殘基。PPS的分子量報道為在1000-6000Da范圍內(nèi)，平均分子量為~4500Da["Elmiron".PentosanPolysulfateSodium.ProductMonograph(戊聚糖多聚石危酸酯鈉產(chǎn)品專著).Janssen-OrthoIncJanuary2006]。不限于這些特性，PPS還含有小的硫酸化木寡糖，聚合化程度(D.R)2-8[Degenhardt等人，爿rd尸/wra^fe/w/^,m人334(7力27-9，2001]。"硫酸木聚糖，，的涵義包括純化的級分以及異源混合物。該術(shù)語還包括硫酸木聚糖的衍生物和同系物。考慮了用于治療或預(yù)防受治療者中的呼吸疾患的方法，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向受治療者施用有效量的硫酸木聚糖或其衍生物或同系物或其鹽一段時間。雖然最經(jīng)常使用的是硫酸化糖的鈉鹽，其他陽離子可取代鈉。鹽形成中取代鈉的陽離子包括鈣、鋅、銨和三乙醇胺，但任何"藥理學(xué)可接受的"鹽均可使用。在一實施方案中，本發(fā)明提供用于治療或預(yù)防受治療者中的呼吸疾患的方法，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向所述受治療者施用有效量的硫酸木聚糖一段時間。在一實施方案中，所述硫酸木聚糖是戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)。因此，另一方面提供用于治療或預(yù)防受治療者中的呼吸疾患的方法，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向所述受治療者施用有效量的PPS或其功能衍生物或同系物一段時間。又一方面是針對用于治療或預(yù)防受治療者中的呼吸疾患的方法，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向所述受治療者施用有效量的PPS或其鹽一段時間。在其他實施方案中，所述呼吸疾患選自包含嗜喘、變應(yīng)性鼻炎、COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)和生理上、生化上或臨床上相關(guān)的疾患的列表。與上文的CSF列表一樣，呼吸疾患的列表意指在一實施方案中，它是哮喘；在另一實施方案中，它是變應(yīng)性鼻炎；而在另一實施方案中，它是COPD。因此，此方面是針對呼吸疾患的治療或預(yù)防，所述呼吸疾患選自包含譯喘、變應(yīng)性鼻炎、COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)和生理上、生化上或臨床上相關(guān)的疾患的列表，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向所述受治療者施用;s克酸木聚糖或其衍生物或同系物或其鹽一段時間。另一方面是針對呼吸疾患的治療或預(yù)防，所述呼吸疾患選自包含哮喘、變應(yīng)性鼻炎、COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)和生理上、生化上或臨床上相關(guān)的疾患的列表，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向所述受治療者施用PPS或其功能衍生物或同系物一段時間。如上所述的，所述疾患也可考慮為疾病。在一實施方案中，所述疾病或疾患是炎性或變應(yīng)性呼吸或肺部疾患。因此，考慮了用于治療或預(yù)防受治療者中的炎性或變應(yīng)性呼吸包括肺部疾病或疾患的方法，所述方法包括在足以緩解所述疾病或疾患的癥狀或臨床指征的條件下向所述受治療者施用有效量的硫酸木聚糖或其衍生物或同系物一段時間。在一實施方案中，所述藥物經(jīng)由吸入或作為鼻噴霧劑或作為滴鼻劑施用。又一方面是針對硫酸木聚糖或其衍生物或同系物在制備用于治療呼吸疾患的藥物中的用途。好u酸木聚糖的實例是石危酸木聚糖五糖諸如PPS和其衍生物和同系物。呼吸疾患的實例包括肺部疾病諸如變應(yīng)性或炎性肺部疾病，包括哮喘、變應(yīng)性鼻炎和COPD(包括氣腫、慢性支氣管炎和阻塞性細支氣管炎)。如上所述，一種具體的硫酸木聚糖是PPS或其衍生物或同系物。在其他實施方案中，所述受治療者是人類。在這點上，另一方面提供用于治療或預(yù)防人類中的炎性或變應(yīng)性呼吸包括肺部疾病或疾患的方法，所述方法包括在足以緩解所述疾病或疾患的癥狀或臨床指征的條件下向所述人類施用有效量的PPS或其衍生物或同系物一段時間。本文描述的硫酸木聚糖可經(jīng)歷其他的硫酸化或其他修飾。例如，可修改硫酸化程度以調(diào)節(jié)與細胞表面上的蛋白配體結(jié)合。"硫酸木聚糖"或"PPS"的涵義包纟舌它們的鹽。另一方面考慮了用于產(chǎn)生硫酸木聚糖或與配體諸如蛋白相互作用的硫酸木聚糖樣復(fù)合分子的方法，所述方法包括產(chǎn)生硫酸木聚糖或硫酸木聚所述配體相互作用、或抑制所述配體和已知與所述配體相互作用的石充酸木聚糖之間的相互作用的任何能力。所述文庫可以是硫酸木聚糖的不同級分或衍生物。如上所述，PPS是硫酸木聚糖的實例。配體的實例包括但不限于細胞因子包括白介素(如IL-5、IL-4、IL-13、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-IO、IL陽ll、IL-12、IL-3、IL-14、IL-15或包括IL-25在內(nèi)的細胞因子的止-17家族)、干擾素(如a-干擾素、P-干擾素、Y-千擾素)或生長因子包括但不限于G-CSF、M陽CSF、GM畫CSF、BDNF、CNTF、EGF、EPO、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGFIO、FGFll、FGF12、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、LIF、PDGF、SCF、TGFa、TGFp、TNFa、TNF|3、TPO、VEGF、GH、NGF、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、制癌蛋白M(OSM)和胰島素、或趨化因子包括但不限于MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5;MIP-1家族成員包括MIP-la、MIP-2;嗜酸性粒細胞趨化因子(嗜酸性粒細胞趨化因子-l、-2或-3)、PBP(血小板堿性蛋白)、SDF-1、PBSF、PF4、RANTES和類似細胞因子；諸如彈性蛋白酶的酶；組織蛋白酶家族的酶、細胞黏著分子諸如PECAM-1;或可溶性受體或細胞結(jié)合受體或病毒結(jié)合受體。具體的配體是IL-5、IL-4、IL-13、G-CSF和M-CSF;具體的配體還包括IL-8、MCP-1、MIP-la、嗜酸性粒細胞趨化因子_1和嗜酸性粒細胞趨化因子-2。當(dāng)然，存在可用于篩選硫酸木聚糖或硫酸木聚糖樣復(fù)合分子和配體之間的相互作用或用于篩選抑制配體和硫酸木聚糖之間的相互作用的任何數(shù)量的測定。一種測定是過濾器結(jié)合測定。在此測定中，硫酸木聚糖或硫酸木聚糖樣復(fù)合分子或配體之一用能提供可鑒別的信號的報道分子諸如熒光染料標(biāo)記，并且讓兩種分子在溶液中相互作用。然后使所得混合物流經(jīng)能夠延遲所述硫酸木聚糖或硫酸木聚糖樣復(fù)合分子或所述配體之一或僅硫酸木聚糖-配體復(fù)合體或硫酸木聚糖樣復(fù)合分子-配體復(fù)合體的過濾器。在一實施方案中，例如，所述過濾器是延遲配體的硝酸纖維素過濾器。在這種情形中，如果用報道分子標(biāo)記的硫酸木聚糖級分不能經(jīng)過所述過濾器，則過濾器中報道信號的存在表明硫酸木聚糖與配體的結(jié)合。不同的硫酸木聚糖將與不同的配體相互作用，或不同的配體將與不同的硫酸木聚糖相互作用，或二者。因此，另一測定牽涉使用攜帶固定的配體的親和柱。然后使硫酸木聚糖或硫酸木聚糖樣復(fù)合分子經(jīng)過所述柱并確定硫酸木聚糖延遲的存在。使用鹽梯度方便地洗脫結(jié)合的硫酸木聚糖或硫酸木聚糖樣復(fù)合分子。鑒別與柱上的配體結(jié)合的級分后，即可進一步分析所述級分以獲得其中不同的結(jié)構(gòu)實體數(shù)量的指示。此類分析可包括，例如，陰離子交換層析、質(zhì)譜或電泳。鑒別與特定的配體結(jié)合的硫酸木聚糖群體之后，此級分本身可用作抑制蛋白(或其他配體)和細胞表面分子(諸如HLGAG)之間的相互作用的治療劑。所述蛋白(或其他配體)可以是游離于細胞的或與細胞或病毒諸如細胞表面或病毒表面相關(guān)的。^疏酸木聚糖還可用作調(diào)節(jié)分泌的細胞產(chǎn)物和胞外基質(zhì)組分之間、或細胞表面蛋白和胞外基質(zhì)組分之間、或蛋白和其配體之間的相互作用的治療劑，所述蛋白和其配體二者或其中的任一個可以是細胞表面或細胞相關(guān)的。可選地，硫酸木聚糖可用作鑒別自然產(chǎn)物或來自在與配體結(jié)合方面模擬硫酸木聚糖的或抑制或促進硫酸木聚糖和所述配體之間的相互作用的化學(xué)文庫的產(chǎn)物的靶標(biāo)。這些分子可以是硫酸木聚糖的拮抗劑或激動劑或化學(xué)類似物。因此，"類似物"擴展至并涵蓋功能上等同的以相似方式結(jié)合和/或調(diào)節(jié)配體的任何結(jié)構(gòu)。"調(diào)節(jié)(modulate)"或"調(diào)節(jié)(modulation)"在本文的涵義擴展至并涵蓋抑制和/或促進相互作用。另一方面提供組合物，所述組合物包含硫酸木聚糖和一種或多種藥學(xué)可接受載體、稀釋劑和/或賦形劑。在特定的方面，提供包含硫酸木聚糖的組合物，所述硫酸木聚糖充當(dāng)選自以下的配體的拮抗劑:細胞因子包括白介素(如IL-5、IL-4、IL-13、IL國6、1L-7、1L-8、1L-9、1L-10、1L-11、1L-12、1L-3、1L-14、1L-15或包括IL-25在內(nèi)的細胞因子的IL-17家族)，干擾素(如a-干擾素、P-干擾素、r干擾素)或生長因子包括但不限于G-CSF、M-CSF、GM-CSF、BDNF、CNTF、EGF、EPO、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGFIO、FGFll、FGF12、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、UF、PDGF、SCF、TGFa、TGFp、TNFa、T卿、TPO、VEGF、GH、NGF、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、制癌蛋白M(OSM)和胰島素，或趨化因子包括但不限于MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP畫5;MIP-1家力矣成員，包4舌MIP-1a、M1P-2;嗜酸性粒細胞趨化因子(嗜酸性粒細胞趨化因子-l、-2或-3)、PBP(血小板堿性蛋白)、SDF-1、PBSF、PF4、RANTES和類似細胞因子；酶，諸如彈性蛋白酶；組織蛋白酶家族的酶、細胞私著分子諸如PECAM-1;或可溶性受體或細胞結(jié)合受體或病毒結(jié)合受體，所述組合物還包含一種或多種藥學(xué)可接受載體、稀釋劑和/或賦形劑。在相關(guān)的實施方案中，本發(fā)明是針對組合物，所述組合物包含石克酸木聚糖的級分或衍生物，所述硫酸木聚糖是選自包含以下的列表的配體的拮抗劑IL-5、IL-4、IL隱13、IL畫6、IL畫7、IL隱8、IL-9、IL-IO、IL-ll、IL匿12、IL-3、IL-14、IL-15或包括IL-25在內(nèi)的細胞因子的IL-17家族、干擾素、G-CSF、M-CSF、GM-CSF、BDNF、CNTF、EGF、EPO、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGFIO、FGFll、FGF12、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、UF、PDGF、SCF、TGFa、TGF(3、TNFa、T卿、TPO、VEGF、GH、NGF、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、制癌蛋白M(OSM)、胰島素、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5;MIP-1家族成員，包括MIP-la、MIP-2;嗜酸性粒細胞趨化因子(嗜酸性粒細胞趨化因子-1、-2或-3)、PBP(血小板堿性蛋白)、SDF-1、PBSF、PF4、RANTES、彈性蛋白酶；組織蛋白酶家族的酶、細胞祐著分子諸如PECAM-1和可溶性受體或細胞結(jié)合受體或病毒結(jié)合受體，所述組合物還包含一種或多種藥學(xué)可接受載體、稀釋劑和/或賦形劑。拮抗的特定分子包括IL-5、IL-4、IL-13、G-CSF和M-CSF;特定分子還包括IL-8、MCP-1、MIP-la、嗜酸性粒細胞趨化因子-1和嗜酸性粒細胞趨化因子-2。上文所指的所有此類硫酸木聚糖一般都包括在術(shù)語"活性成分"中。這些組合物^皮提議用作藥物組合物或制劑。組合物包括無菌水溶液和無菌粉劑。此類形式方便地在生產(chǎn)和儲存條件下是穩(wěn)定的，并且一般要防護微生物諸如細菌和真菌的污染作用。載體可以是溶劑或稀釋介質(zhì)，包括例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇和類似多元醇)、其合適的混合物和植物油?？赏ㄟ^例如使用表面活性劑保持恰當(dāng)?shù)牧鲃有浴？赏ㄟ^各種抗細菌劑和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、苯酚、山梨酸、>琉柳汞和類似藥劑來產(chǎn)生預(yù)防微生物的作用。在許多情形中，將優(yōu)選包括等滲劑，例如糖或氯化鈉。可通過在組合物中使用延遲吸收的藥劑來產(chǎn)生可注射組合物的延長的吸收，所述延遲吸收的藥劑例如單硬脂酸鋁和明膠。通過將所需量的活性成分以及所需的任選地其他活性成分一起摻入合適的溶劑，然后通過滅菌或至少這樣的過程來制備無菌溶液，該方法將污染性病毒、細菌或其他生物實體減少至對于施用于人類或動物受治療者而言可接受的水平。在用于制備無菌注射液的無菌粉劑的情形中，合適的制備方法包括真空干燥和冷凍千燥技術(shù)，所述技術(shù)產(chǎn)生活性成分和任何其他想要的成分的粉劑。當(dāng)活性成分受到適當(dāng)保護時，其可經(jīng)口施用，例如，用惰性稀釋劑或用可吸收食用的載體進行保護，或其可包封在硬殼或軟殼明膠膠嚢中，或其可被壓制成片劑。對于口服治療施用，可將活性成分摻入賦形劑并以可攝入的片劑、口含片劑、藥錠、膠囊劑、酏劑、懸浮液、糖漿劑、紙嚢劑(wafer)和類似劑型的形式使用。此類組合物和制品應(yīng)含有按重量計算至少1%的活性化合物。當(dāng)然，組合物和制品的百分比可變化，方便地，可在單位重量的約5%至約80%之間。此類治療有用的組合物中的活性化合物的量是可獲得合適的劑量的量。這樣制備特定的組合物或制品，以使口服劑量單位形式含有約0.1昭至200mg之間的活性化合物?？蛇x的劑量包括從約1貼至約1000mg和從約10貼至約500mg。這些劑量可以是每個體或每kg體重。施用可以是每秒、每分鐘、每小時、每天、每周、每月或每年。片劑、藥錠、丸劑和膠嚢劑和類似劑型還可含有下面列出的組分?？杉尤胝澈蟿┲T如樹膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑諸如磷酸二鈣；崩解劑諸如玉米淀粉、土豆淀粉、海藻酸和類似崩解劑；潤滑劑諸如硬脂酸鎂；和甜味劑諸如蔗糖、乳糖或糖精。當(dāng)劑量單位形式為膠囊時，除了上述類型的材料，其還可含有液體載體。各種其他材料可以包衣的形式存在或以其他方式修飾劑量單位的物理形式。例如，片劑、丸劑或膠囊劑可用紫膠、糖或二者包衣。糖漿劑或酏劑可含有活性化合物、作為甜味劑的蔗糖、作為防腐劑的對羥基苯甲酸曱酯和對羥基苯甲酸丙酯、染料和調(diào)味劑諸如櫻桃味或柑橘味調(diào)料。當(dāng)然，用于制備任何劑量單位形式的任何材料應(yīng)當(dāng)是藥物純的并且在施用量下基本無毒。此外，可將活性化合物摻入持續(xù)釋放的制品和制劑。藥學(xué)可接受載體和/或稀釋劑包括任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑和類似藥劑。用于藥物活性物質(zhì)的此類介質(zhì)和藥劑是本領(lǐng)域公知的，與所述活性成分不相容的任何常規(guī)介質(zhì)或藥劑除外；考慮了它們在治療組合物中的用途。還可將補充性活性成分4參入組合物。組合物還可配制為局部或外用施用。配制和施用的技術(shù)可在以下中找到"Remington'sPharmaceuticalSciences"(雷明頓氏藥物科學(xué))，MackPublishingCo.,EastonPA.，第16版，1980，ArthurOsol編。因此，對于局部或外用施用，本組合物可以任何合適的方式配制，包括但不限于，乳膏劑、凝膠、油、軟膏劑、溶液、懸浮液、粉劑、噴劑或氣溶膠。對于透粘膜施用，在制劑中使用適合于要透過的屏障的滲透劑。此類滲透劑是本領(lǐng)域公知的，包括但不限于苯扎氯銨、洋地黃皂戒、二氫細胞松弛素B和癸酸。以洗劑、乳膏劑或凝膠形式存在的本文所述的組合物可含有賦予期望的質(zhì)地、稠度、黏度和外觀的可接受的稀釋劑或載體?？山邮艿南♂寗┖洼d體是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的，包括但不限于乙氧基化和非乙氧基化的表面活性劑、脂肪醇、脂肪酸、碳氫油(諸如棕櫚油、椰子油和礦物油)、可可脂蠟、硅油、緩沖劑、纖維素衍生物、乳化劑諸如非離子有機和無機堿、防腐劑、蠟酯、甾醇、甘油三酯、磷脂諸如卵磷脂和腦磷脂、多元醇酯、脂肪醇酯、親水性羊毛脂衍生物和親水性蜂蠟衍生物。本發(fā)明進一步通過下面的非限制性實施例描述。在實施例中，采用了下列藥劑、試劑和方法/t',潛，絲斷，戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)可以多種商標(biāo)名獲得，諸如Elmiron;Elmiron;Fibrase;Fibrezym;H6moclar;PentosanpolysulfatSP54;Polyanion;SP54;Tavan-SP;Thrombocid;CartorphenVet;和Pentosanequine。該活性成分的一家生產(chǎn)商是BenePharmaChem。PPS的化學(xué)注冊號包括37300-21-3、9014-63-5、11096-31-4、39432-58-1、42613-02-5和104783-23-5。PPS用作硫酸木聚糖的實例。*,萌(7」fp/L-4重組人類IL-4和IL-5使用桿狀病毒表達系統(tǒng)制備。重組人類IL-4還表達于大腸桿菌(A'.co/0表達系統(tǒng)。攜帶定點突變的重組人類1L-4或IL-5使用桿狀病毒表達系統(tǒng)表達。然后通過親和層析在HiTrap活化的NHS柱上純化所得蛋白，所述柱用肼衍生并偶聯(lián)單克隆抗體H30或單克隆抗體TRFK-5,兩種單克隆抗體都識別IL-5，或單克隆抗體11B4,其識別IL-4?；|(zhì)輔助激光解吸電離質(zhì)譜(MALDIMS)使用Venkataraman等人，Sc,e"ce2^(543^:537-542,1999描述的程序執(zhí)行。石成性肽(RG)wR通過Auspep(Melbourne,Australia)制備為三氟乙酸鹽。將大約20貼氫氧化物形式的AG-1X2陰離子交換樹脂(Bioard，Sydney,Australia)加入冰冷的等份(10(HiL)50〖iM肽中。將得到的懸浮液短暫離心并保持在冰浴上。等份的肽(lpL)與于50%v/v乙腈(8(xL)中的10mg/mL咖啡酸和5-100fiM樣品(l^iL)混合，將lpL點在不銹鋼樣品板上并讓其干燥。通過使用配有337-nm氮;敫光器的PerSeptiveBiosystems(AppliedBiosystems，Melbourne,Australia)Voager反射器飛行時間質(zhì)譜儀以線性模式獲得MALDIMS鐠圖。使用延時引出(delayedextraction)以增加分辨率(22kV，柵極93%，導(dǎo)絲0.15%，脈沖延遲150ns,低質(zhì)量門極2000,平均50次照射)?？蛇x地，用ABI型號4800MALDI質(zhì)譜儀采集譜圖。通過用生產(chǎn)商提供的肽校準(zhǔn)混合物進行外部校準(zhǔn)來實現(xiàn)質(zhì)量校準(zhǔn)。通過減去該樣品觀察到的(RG;h9R肽的質(zhì)量推導(dǎo)出寡糖的質(zhì)量。將木寡糖混合物(5g)溶解于100mlDMF。加入吡啶三氧化硫復(fù)合物(36g)并將所述溶液攪拌20小時。通過加入水(500ml)來猝滅反應(yīng)并用三丁胺調(diào)節(jié)至pH6。使用3.5kDaMWCO透析管將此溶液在2x10L水中透析。通過使用lkDaMWCO膜的超濾濃縮透析液，并通過制備型反相離子配對HPLC通過重復(fù)注入進行分級。示例性條件柱PhenomenexAxia100x21.2mmLunaC18(2)，配有保護柱體(或合適的替代物)。洗脫劑A:于20%v/v乙腈中的8mM三丁胺，用乙酸調(diào)節(jié)至pH5.8。洗脫劑B:80%v/v乙腈。流速20ml/min。檢測器蒸發(fā)光^i:射，用三通管實現(xiàn)1:40的分流。級分的大小通過尺寸排阻層析評估，使用以串聯(lián)方式連接的兩個250x7.8mmBioSep2000柱(Phenomenex或等同的，如TSK2000W)，并用0.25MNH4C1以0.5ml/min洗脫。使用折射率沖企測器監(jiān)測洗脫液。將適當(dāng)大小的級分在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，并凍干所得溶液以除去過量的三丁胺乙酸鹽。三丁胺鹽可直接使用，或可選地通過下列程序轉(zhuǎn)變?yōu)殁c鹽。將殘留物溶解于水，并用乙酸將所得溶液調(diào)節(jié)至pH5.5。將此溶液應(yīng)用于4x2cm的Dowex50WX8(NA+形式)2x4cm柱并用三倍柱體積的水清洗。收集流出物和洗液并匯集在一起。將匯集的洗液調(diào)節(jié)至pH7，并通過用lkDaMWCO膜重復(fù)超濾來透析。將濃縮的溶液凍干以產(chǎn)生白色粉末。使用純化的寡糖作為起始材料，這些可通過美國專利第4,021,544;US6,271,215和US5,541,166號中描述的程序來制備。這些材料還可通過與上文描述的程序類似的程序制備，無論是從純化的寡糖或寡糖的混合物開始。例如，將麥芽六糖(0.1g,Sigma-Aldrich)溶解于DMF(10ml)并加入吡咬三氧化硫復(fù)合物(lg)。將所述混合物在室溫下攪拌20小時，并允許產(chǎn)物作為油分離。傾去上清液，將殘留物溶解于水(15ml)并用三丁胺調(diào)節(jié)至pH6。粗材料通過HPLC純化，并按上文對于硫酸化木寡糖的描述進一步加工。以相似的方式制備了石克酸化麥芽七糖(maltopheptaose)。寡糖混合物也可被硫酸化，然后按對于硫酸化木寡糖的描述進行分級。例如，將來自HayashibaraInternational的高麥芽五糖漿(pentrupsyrup)(5g)溶解于100mlDMF。加入吡啶三氧化硫復(fù)合物(54g),并將所述混合物在室溫下攪拌20小時，并允許產(chǎn)物作為油分離。傾去上清液，將殘留物溶解于水(15ml)并用三丁胺調(diào)節(jié)至pH6?；旌衔锿ㄟ^HPLC分級，并按上文對于硫酸化木寡糖的描述進一步加工。實施例1肌c鮮廖j^浙定使用表面等離子體共振的光學(xué)現(xiàn)象來監(jiān)測分子之間的物理相互作用。使?jié)撛诘鞍着潴w(如IL-4、IL-5或嗜酸性粒細胞趨化因子)的溶液經(jīng)過偶聯(lián)靶標(biāo)(如肝素)的傳感器表面監(jiān)測蛋白配體與固定的靶標(biāo)的實時結(jié)合。通過測量非常接近傳感器表面的折射率變化來實現(xiàn)檢測。當(dāng)折射率改變時，等離子體共振的角度發(fā)生變化，并且此變化和與表面相互作用的蛋白的量直接相關(guān)。方便地使用BIAcore2000。它非常靈敏，并且其微流體學(xué)確保了僅需用少量材料。將生物素化的肝素固定在生物傳感器芯片上。生物素化是使用硫代-NHS-生物素(siilfo-NHS-biotin)，經(jīng)由氨基或用氨通過還原性胺化修飾的還原性末端而發(fā)生的。將含有感興趣的潛在蛋白配體的溶液注射到傳感器芯片表面，并實時測量結(jié)合(Fernig，于Proteoglycanprotocols(蛋白聚糖方案)，R.V.Iozzo編，HumanaPress,Totowa，NJ，USA,2001)。桿狀病毒表達的重組人類IL-4(rhlL-4)和桿狀病毒表達的重組人類IL-5(rhlL-5)容易地結(jié)合于通過此方法固定的肝素(參見PCT/AU2005/000551)。結(jié)合是特異性的，因為極少有缺乏肝素的傳感器芯片與IL-4或IL-5相互作用，并且結(jié)合受到外源肝素的抑制。相似地，大腸桿菌中表達的重組人類嗜酸性粒細胞趨化因子(CCL11)容易地結(jié)合于固定的肝素，并且結(jié)合是特異性的，因為極少有嗜酸性粒細胞趨化因子結(jié)合于缺乏肝素的傳感器芯片。而且，所述結(jié)合是濃度依賴性的(圖3C)。嗜酸性粒細胞趨化因子與固定化肝素的結(jié)合受到外源肝素的抑制，ICsG為大約160nM。PPS的制品抑制TL-4、TL-5和嗜酸性粒細胞趨化因子與BIAcore芯片上固定的肝素的結(jié)合。滴定實驗表明PPS是比肝素自身更有效的IL-4與固定的肝素結(jié)合的抑制劑，其ICso為25-80nM左右，而肝素獲得的IC5o為3.3-UiM(圖3A)。相似的滴定實驗表明PPS還是比肝素自身更有效的IL-5與固定的肝素結(jié)合的抑制劑，其1C5G為4-10nM左右，而肝素獲得的IC50為30-100nM左右(圖3B)。PPS還是比肝素自身更有效的嗜酸性粒細胞趨化因子-1和嗜酸性粒細胞趨化因子-2與固定的肝素結(jié)合的抑制劑，其IC50為15nM左右(圖3D和3E)。硫酸化木糖多糖的大小是其與嗜酸性粒細胞趨化因子結(jié)合并進而阻斷嗜酸性粒細胞趨化因子與肝素結(jié)合的能力的重要組成。D.P.8的硫酸木聚糖抑制嗜酸性粒細胞趨化因子-1與固定的肝素結(jié)合的能力較差，其ICso為大約3.5pM(圖3D)。這些數(shù)據(jù)表明PPS與IL-4在肝素結(jié)合的位點結(jié)合，并且PPS與此區(qū)域的結(jié)合比肝素結(jié)合更加穩(wěn)定。這些數(shù)據(jù)相似地表明PPS與TL-5在肝素結(jié)合的位點結(jié)合，并且PPS與此區(qū)域的結(jié)合比肝素結(jié)合更加穩(wěn)定。嗜酸性粒細胞趨化因子數(shù)據(jù)也表明PPS與嗜酸性粒細胞趨化因子-1和嗜酸性粒細胞趨化因子-2在肝素結(jié)合位點附近的位點結(jié)合，并且PPS與此區(qū)域的結(jié)合比肝素結(jié)合更加穩(wěn)定。實施例2在夢裙々更應(yīng)^^^f冷乾標(biāo)/丄-52遽^W4',潛^菜碗^游^遂》浙PPS抑制IL-5響應(yīng)細胞系的增殖。這在非常低的劑量下發(fā)生，并且不是由于PPS的毒性效應(yīng)，因為其他相似的硫酸化多糖在此測定中沒有影響。這些實驗用IL-5響應(yīng)細胞Ba/F-IL-5執(zhí)行。Ba/F-IL-5細胞衍生自Ba/F3細胞系。通過用pGL3對照載體(Promega，USA)和pEE6hcmv-IL-5Ra共轉(zhuǎn)染Ba/F3細胞系，將其轉(zhuǎn)化為IL-5依賴性同時表達荄光素酶。對照載體pGL3在SV40啟動子和增強子的直接控制下表達修飾的螢光素酶，但不含選擇標(biāo)記。為了制備pEE6hcmv-hlL-5Ra,通過RTPCR從HL60細胞克隆全長人類IL-5受體a鏈(hlL-5R-a)。Ba/F-IL-5細胞的制備已由Coombe等人，為Mmo/q/7附,聽朋/og,a7/M"/2o&2/5:145-150,1998描述。Ba/F-:iL-5細胞可通過用pPGK-噪呤霉素-螢光素酶共轉(zhuǎn)染而進一步修飾，pPGK-嘌呤霉素-螢光素酶是含有處于SV40啟動子控制之下的螢光素酶和選擇標(biāo)記嘌呤霉素的載體。轉(zhuǎn)染后，在3嗎/ml噪呤霉素中選擇陽性轉(zhuǎn)染子。然后克隆陽性轉(zhuǎn)染子以產(chǎn)生具有可檢測的螢光素酶表達的系。增殖測定在適合此類測定的96-孔微平板(Falcon)中執(zhí)行。孔是平底的，具有白色側(cè)面和透明的底部。清洗細胞以除去生長培養(yǎng)基中的任何細胞因子，然后將細胞重懸于RPMI/5%w/vFCS。用CoulterZ2顆粒計數(shù)器和大小分析器(ParticleCounterandSizeAnalyzer)(CoulterElectronics,England)對細胞進行計數(shù)，?！芬娤虿缓琁L-5(陰性對照)或含有IL-5的不同稀釋液的《汰平板孔中加入1.6x104個細胞。當(dāng)測量PPS或其他硫酸化多糖的效應(yīng)時，孔中還含有不同濃度的這些分子。細胞在37。C下于濕潤空氣中增殖24小時，之后通過加入50螢光素酶底物緩沖液(50mMTris-HCl、pH7.8、15mMMgS04、33.3mMDTT、O.lmMEDTA、0.5mM安光素鈉、0.5mMATP、0.25mM鋰CoA和0.5%v/vTritonX-100)測量螢光素酶活性。加入螢光素酶緩沖液之后，立即對平板進行螢光素酶活性測定。在Victor1420Multi-label計數(shù)器(Wallac,Turku,Finland)上檢測光的發(fā)射。使用此測定，已證明PPS是IL-5依賴性Ba/F-IL-5細胞增殖的有效抑制劑(圖4)。還測試了PPS阻斷熒光標(biāo)記的IL-5(IL-5-Alexa488)與其受體結(jié)合的能力。使用IL-5響應(yīng)細胞TF-1.8和Ba/F-IL-5進行這些實驗。TF-1.8細胞是TF-1細胞的亞克隆，其已進行了在TL-4或TL-5中生長的選擇。TF-1細胞最初是從具有嚴重全血細胞減少癥的雄性的骨髓樣品建立的。這些細胞依賴于IL-3或GM-CSF進行長期生長，并且響應(yīng)多種細胞因子包括IL-4,但不包括IL-5。通過流式細胞術(shù)測量了存在或不存在PPS下熒光標(biāo)記的止-5與TF-1.8細胞或Ba/F-IL-5的結(jié)合。為了全面了解PPS對IL-5活性的效應(yīng)，檢查了響應(yīng)IL-5的初級細胞。通過CD16陰性選擇方案從健康供體分離人類外周血嗜酸性粒細胞。評估嗜酸性粒細胞活化的一個常見方法是通過監(jiān)測它們與固定的IgG的黏附。通過測量髓過氧物酶活性，確定了與IL-5單獨相比，當(dāng)以選#^的寡糖或以硫酸肝素或硫酸類肝素呈現(xiàn)IL-5時，與固定的IgG結(jié)合的嗜酸性粒細胞的數(shù)量。在不存在細胞因子下，從外周血分離的嗜酸性粒細胞的存活不超過四天。在一系列細胞因子濃度下，相對于單獨的IL-5，評估了在PPS存在下IL-5對嗜酸性粒細胞的存活率的效應(yīng)。嗜酸性粒細胞存活率通過碘化丙啶染色后的流式細胞術(shù)確定。實施例3在夢裙乾標(biāo)f冷/Z一^進存"4',潛^菜碗虔/^"《游^^fPPS抑制人類IL-4響應(yīng)細胞系的增殖。這在非常低的劑量下發(fā)生，并且不是由于戊聚糖多聚硫酸酯的毒性效應(yīng)，因為其他相似的硫酸化多糖在相同濃度的IL-4和多糖下沒有效應(yīng)。這些實驗利用TF-1.8細胞。TF-1.8細胞是TF-1細胞的亞克隆，其已進行了在IL-4或IL-5中生長的選擇。TF-1細胞最初是從具有嚴重全血細胞減少癥的雄性的骨髓樣品建立的。這些細胞依賴于IL-3或GM-CSF進行長期生長，并且響應(yīng)多種細胞因子包括IL-4,但不包括IL-5。已用包含在表達載體pPGK-嘌呤霉素-螢光素酶中的螢火蟲螢光素酶基因轉(zhuǎn)染TF-1.8細胞(Coombe等人，1998，同上)。克隆陽性轉(zhuǎn)染子以產(chǎn)生具有良好螢光素酶表達的系。增殖測定在適合此類測定的96-孔微平板(Falcon)中執(zhí)行?？资瞧降椎?，具有白色側(cè)面和透明的底部。清洗細胞以除去生長培養(yǎng)基中的任何細胞因子，然后將細胞重懸于RPMI/5%w/vFCS。用CoulterZ2顆粒計數(shù)器和大小分析器(CoulterElectronics,England)對細胞進行計數(shù)，常規(guī)向不含IL-4(陰性對照)或含有IL-4的不同稀釋液的微平板孔中加入2.5x104個細胞。當(dāng)測量PPS或其他硫酸化多糖的效應(yīng)時，孔中還含有不同濃度的這些分子。細胞在37。C下于濕潤空氣中增殖48小時，之后通過加入50jil螢光素酶底物緩沖液(50mMTris-HCl、pH7.8、15mMMgS04、33.3mMDTT、O.lmMEDTA、0.5mM螢光素鈉、0.5mMATP、0.25mM鋰CoA和0.5%v/vTritonX-100)測量螢光素酶活性。加入螢光素酶緩沖液之后，立即對平板進行螢光素酶活性測定。在Victor1420Multi-label計數(shù)器(Wallac，Turku,Finland)上檢測光的發(fā)射。使用此測定，發(fā)明人證明PPS顯著地抑制TF-1.8細胞的IL-4依賴性增殖(圖5)。還檢查了在存在或不存在戊聚糖多聚硫酸酯下熒光標(biāo)記的IL-4與其受體結(jié)合的能力。這些實驗使用不同濃度的已軛合于AlexaFluor-488的IL-4和PPS執(zhí)行。與未顯示具有抑制TF-1.8細胞的IL-4依賴性增殖活性的其他硫酸化多糖的比較將證明特異性。實施例44',潛^,磁^游不^^/GM-CyF4'幾-2TF-1.8細胞衍生自響應(yīng)于人類GM-CSF(粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子)的TF-1細胞。TF-1.8細胞保留了TF-1細胞對GM-CSF的反應(yīng)性。常規(guī)地向不含GM-CSF(陰性對照)或含有GM-CSF的不同稀釋液的微平板孔中加入2.5x104個細胞。將細胞在37。C下于濕潤空氣中培養(yǎng)48小時，之后通過加入50pl螢光素酶底物緩沖液(50mMTris-HCl、pH7.8、15mMMgS〇4、33.3mMDTT、O.lmMEDTA、0.5mM螢光素鈉、0.5mMATP、0.25mM鋰CoA和0.5%v/vTritonX-100)測量螢光素酶活性。加入螢光素酶緩沖液之后，立即對平板進行螢光素酶活性測定。在Victor1420Multi-label計數(shù)器(Wallac,Turku,Finland)上檢測光的發(fā)射。對GM-CSF的滴定確立這些細胞依賴于此生長因子(圖6)。當(dāng)測量PPS或其他硫酸化多糖的效應(yīng)時，孔中還含有不同濃度的這些分子以及GM-CSF。這些實驗表明，10貼/ml和l嗎/ml濃度的PPS可重現(xiàn)地對用0.025ng/mlGM-CSF獲得的TF-1.8細胞增殖沒有效應(yīng)(圖7)。鼠細胞毒性T淋巴細胞系(CTLL)是從C57bl/6小鼠獲得的T細胞的亞克隆。這些細胞需要白介素-2(TL-2)進行生長，并用于測定IL-2在條件培養(yǎng)基中的存在。這些細胞響應(yīng)鼠和人類兩種IL-2。已用包含在表達載體pPGK-嘌呤霉素-螢光素酶中的螢火蟲螢光素酶基因轉(zhuǎn)染CTLL細胞(Coombe等人，1998,同上)?？寺￡栃赞D(zhuǎn)染子以產(chǎn)生具有良好螢光素酶表達的系，并將這些細胞稱為CTL-Luc。增殖測定在適合此類測定的96-孔微平板(Falcon)中執(zhí)行?？资瞧降椎?，具有白色側(cè)面和透明的底部。清洗細胞以除去生長培養(yǎng)基中的任何細胞因子，然后將細胞重懸于RPMI/5%w/vFCS。用CoulterZ2顆粒計數(shù)器和大小分析器(CoulterElectronics,England)對細胞進行計數(shù)，并常規(guī)向不含重組人類TL-2(rhTL-2)(陰性對照)或含有rhlL-2的不同稀釋液的微平板孔中加入1.6x104個細胞。當(dāng)測量PPS或其他硫酸化多糖的效應(yīng)時，孔中還含有不同濃度的這些分子。CTL-Luc細胞在37°C下于濕潤空氣中增殖24小時，之后通過加入50螢光素酶底物緩沖液(50mMTris-HCl、pH7.8、15mMMgS04、33.3mMDTT、O.lmMEDTA、0.5mM螢光素鈉、0.5mMATP、0.25mM鋰CoA和0.5%v/vTritonX-100)測量螢光素酶活性。加入螢光素酶緩沖液之后，立即對平板進行螢光素酶活性測定。在Victor1420Multi-label計數(shù)器(Wallac,Turku，F(xiàn)inland)上檢測光的發(fā)射。滴定rhIL-2濃度的實驗表明CTL-Luc依賴于IL-2進行增殖(圖8)。其中CTL-Luc細胞在存在10〖ig/ml或l昭/mlPPS下培養(yǎng)的實驗可重現(xiàn)地對用1.25ng/mlrhIL-2獲得的CTL-Luc細胞增殖沒有效應(yīng)(圖9)。用IL-2和GM-CSF響應(yīng)細胞系進行的這些實驗表明戊聚糖多聚硫酸酯不以影響這些細胞因子的增殖活性的方式與它們相互作用。這些實驗還表明PPS對細胞因子依賴性淋巴細胞系是無毒的。實施例5碗虔術(shù),潛！^^-/丄-5^^^/丄"法#^義</、^*遂增>制備了許多大小不同的硫酸木聚糖制品，并顯示糖的大小是其抗-IL-5活性的重要組成。這些實驗利用以螢光素酶轉(zhuǎn)染的Ba/F-IL-5細胞。常規(guī)向不含IL-5(陰性對照)或含有IL-5(0.4ng/ml)或IL-5(0.4ng/ml)和戊聚糖多聚硫酸酯或不同的硫酸木聚糖制品之一的不同稀釋液的微平板孔中加入1.6乂104個細胞，所述硫酸木聚糖制品擁有不同數(shù)量的糖單位。讓細胞在37。C下于濕潤空氣中增殖24小時，之后通過加入50^螢光素酶底物緩沖液(50mMTris-HCl、pH7.8、15mMMgS04、33.3mMDTT、0.1mMEDTA、0.5mM螢光素鈉、0.5mMATP、0.25mM鋰CoA和0.5%v/vTritonX-100)測量螢光素酶活性。加入螢光素酶緩沖液之后，立即對平板進行螢光素酶活性測定。在Victor1420Multi-label計數(shù)器(Wallac,Turku,Finland)上檢測光的發(fā)射。使用此測定已證明，盡管戊聚糖多聚硫酸酯是IL-5依賴性Ba/F-IL-5細胞增殖的有效抑制劑，但當(dāng)以Uig/ml使用時，包含1-4連接的2、3或4個硫酸化木糖單位的小的多糖不是有效的抑制劑(表2)。包含1-4連接的5、6或7個硫酸化木糖單位的更大的多糖使IL-5依賴性Ba/F-IL-5細胞抑制大約15-16%，而D.P.8的硫酸木聚糖抑制大約24%,硫酸化木糖多糖的混合物(所有多糖都大于八糖)抑制40%。鑒于在l貼/ml下在此測定中產(chǎn)生55%左右的抑制，PPS是有力的抑制劑。硫酸化木糖多糖的大小也是其抗-IL-4活性的重要組成。這些實驗利用以螢光素酶轉(zhuǎn)染的TF-1.8細胞。常規(guī)向不含IL-4(陰性對照)或含有IL-4(2.5ng/ml)或IL-4(2.5ng/ml)和PPS或不同的石克酸木聚糖制品之一的不同稀釋液的微平板孔中加入2.5x104個細胞，所述硫酸木聚糖制品擁有不同數(shù)量的糖單位。讓細胞在37。C下于濕潤空氣中增殖48小時，之后通過加入50jil螢光素酶底物緩沖液(50mMTris-HCl、pH7.8、15mMMgS04、33.3mMDTT、0.1mMEDTA、0.5mM螢光素鈉、0.5mMATP、0.25mM鋰CoA和0.5%v/vTritonX-100)測量螢光素酶活性。加入螢光素酶緩沖液之后，立即對平板進行螢光素酶活性測定。在Victor1420Multi-label計數(shù)器(Wallac，Turku,Finland)上檢測光的發(fā)射。使用此測定已證明，盡管PPS是TL-4依賴性TF-1.8細胞增殖的有效抑制劑，但當(dāng)以2.5嗎/ml或5jig/ml使用時，包含1-4連接的2、3或4個硫酸化木糖單位的較小的多糖全部都是無效的抑制劑(表3)。當(dāng)以2.5嗎/ml使用時，包含1-4連接的5、6或7個硫酸化木糖單位的更大的多糖使IL-4依賴性TF-1.8細胞抑制大約15-29%，而八糖和石克酸化木糖多糖的混合物(所有多糖都大于八糖)在以2.5嗎/ml使用時抑制大約21%。鑒于在2.5貼/ml下在此測定中產(chǎn)生48%左右的抑制，PPS是有力的抑制劑。表2在指定D.P.的硫酸化木寡糖和PPS存在下對IL-5誘導(dǎo)的BA/F細胞增殖的抑制。糖以ljig/ml存在，而IL-5以0.39ng/ml加入。抑制百分比D.P217%D.P.313%DP411%D.P.517%D.P.616%D.P.715%DP.824%PPS55%表3在指定D.P.的硫酸化木寡糖和PPS存在下對IL-4誘導(dǎo)的TF-1.8細胞增殖的抑制。IL-4以2.5ng/ml加入。抑制百分比抑制劑濃度2.5嗎/ml5.0(j_g/mlD.P2-21%-18%D.P.3-16%-16%D.P.4-5%4%DP.515%22%D.P.629%35%DP.726%38%DP821%37%PPS48%58%實施例6彈性蛋白酶是為用于治療COPD的潛在靶標(biāo)的蛋白。彈性蛋白酶測定在96-孔塑料微平板中執(zhí)行，以便于通過熒光平板讀取儀定量。在存在或不存在戊聚糖多聚硫酸酯或其他硫酸化多糖下，將人類白細胞彈性蛋白酶(5nM/孔)與在pH7.4磷酸鈉緩沖液中的熒光底物MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-酰氨基-曱基香豆素(20jxM/孔)孵育。在加入10|il/孔250nM乙酸終止反應(yīng)并將混合物轉(zhuǎn)移至96-孔微平板、用355nm的激發(fā)波長和460nm的發(fā)射波長測量熒光之前，使混合物在37。C下孵育60分鐘。使用各種濃度的抑制劑以允許計算抑制酶活性達50%所需的多糖濃度(IC50)。這些數(shù)據(jù)表明在此測定中PPS抑制彈性蛋白酶活性的ICso為大約l.%iM，相比之下肝素的1C5(,為大約200nM(圖IOA和B)。還使用生理底物膠原蛋白測量了彈性蛋白酶活性。對于這些實驗，將膠原蛋白包被于微平板的孔上。加入Tris緩沖液(50pl)和25〖d抑制劑(PPS或其他硫酸化多糖)或緩沖液。在對孔進行蛋白染色之前，將平板在37°C孵育30分鐘。在室溫下千燥孔之后，通過加入200pl的裂解溶液(于DMSO中的10%w/vSDS)溶解剩余的顏料，并在590mm下測量0D。對照實驗包括未經(jīng)酶消化的膠原蛋白作為100%值和酶消化但無抑制劑的膠原蛋白作為0%值。在這些實驗中，PPS是有效的彈性蛋白酶抑制劑。實施例74',潛>炎磁^游^^/更應(yīng)^#^#W^勿應(yīng)埂濕使用了豚鼠中的變應(yīng)性鼻炎模型。豚鼠通過腹膜內(nèi)注射含有100mgAl(OH)3和2pgOVA的0.5ml鹽水進行兩次卯清蛋白(OVA)敏化(第0和7天)。最后一次敏化后三周，麻醉動物，鼻腔暴露于變應(yīng)原通過向兩側(cè)鼻腔滴入20mg/ml的OVA溶液執(zhí)行。對于陰性對照，動物接受鹽水敏化和攻擊。在鼻內(nèi)灌輸OVA之前30min,用^某介物或藥(戊聚糖多聚^5克酸酯或布地奈德(Budesonide))預(yù)處理動物?！┠辰槲锘蛩幰?5pl-50^1/鼻孔施用。包括了戊聚糖多聚硫酸酯與作為參考化合物的布地奈德的比較。結(jié)束動物生命，并在誘發(fā)后八小時測量所有參數(shù)。通過測量富含蛋白并且未篩分的血漿向鼻腔的滲漏來評估鼻黏膜屏障滲透性。血漿溢出量表示為總蛋白或清蛋白的鼻灌洗液水平。通過用磷酸鹽緩沖鹽水輕輕潤洗鼻腔來收集鼻灌洗液。將此液體中的細胞離心，重懸于磷酸鹽緩沖鹽水，并使用半自動血液學(xué)分析儀計數(shù)。細胞離心(cytospin)和用MayGrynwaldGiemsa染色之后，確定鼻灌洗液的細胞組成。數(shù)據(jù)表明鼻腔的血漿溢出水平在用OVA鼻內(nèi)攻擊后8小時顯著增加。PPS顯著降低了鼻灌洗液的蛋白含量，表明用此藥時血漿溢出的降低(圖11)。對鼻灌洗液的白細胞浸潤評估表明白細胞計數(shù)相對于用鹽水敏化的動物觀察到的白細胞計數(shù)的增加，不過PPS在測試的所有濃度下抑制白細胞浸潤(圖12)。鼻灌洗液中最顯著的白細胞是嗜酸性粒細胞，并有嗜中性粒細胞浸潤的一些證據(jù)，其他細胞類型嗜堿性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞和鼻上皮細胞的水平是低的，并且沒有顯著不同于用鹽水敏化的動物中所觀察到的。接受糖皮質(zhì)激素布地奈德的動物具有鼻灌洗液中血漿溢出的顯著降低，以及鼻灌洗液中總白細胞數(shù)量的顯著降低，降低最顯著的是嗜酸性粒細胞的數(shù)量。PPS相似地顯著降低鼻灌洗液中的細胞浸潤物，并且和糖皮質(zhì)激素一樣，其最顯著的效應(yīng)是嗜酸性粒細胞的減少(圖13)。由四糖和五糖的混合物組成的另一硫酸木聚糖作為鼻腔細胞浸潤的抑制劑的效力不如PPS(圖13)。實施例84炎潛磁^游^舉裙動浙漠資尹有妓使用了哮喘的豚鼠模型。通過在第1和U天的兩次腹膜內(nèi)注射于氫氧化鋁凝膠中的卯清蛋白(等級V，20pg)對豚鼠(8只/組)進行卵清蛋白敏化。在第20天(評估呼吸道高反應(yīng)性(AHR)之前24小時)，每只動物接受攻擊劑量的OVA-這采取1小時OVA(IO叱)氣溶膠暴露形式。陰性對照動物不接受敏化和攻擊。陽性對照動物接受敏化和攻擊，但不進行進一步治療或用媒介物(鹽水)進行治療。測試化合物(PPS和硫酸木聚糖五糖)和媒介物通過使用PennCentury設(shè)備的作為含水微噴霧的氣管內(nèi)施用而施用。使用的設(shè)備為FMJ250高壓注射器和1A-1C微噴霧遞送管。遞送的顆粒大小達32pm。對于所有測試制劑，此研究過程中遞送的體積為100ul。測試化合物在用OVA攻擊之前30min施用。攻擊之后24小時對動物進行手術(shù)以將插管插入氣管，插管連接至測量氣流壓力和變化的儀器。手術(shù)之后，在讀取基線讀數(shù)之前，讓動物穩(wěn)定10min。用氣溶膠化的醋曱膽堿(10mg/ml和30mg/ml)引發(fā)支氣管收縮20秒鐘。使用基線讀數(shù)和醋甲膽堿后獲得的讀數(shù)之間的差異計算C細和RL。因此，肺功能測量在施用藥之后大約25小時進行。戊聚糖多聚硫酸酯和硫酸木聚糖五糖二者在以10mg/kg施用時均有效降低呼吸道高反應(yīng)性讀數(shù)。它們的效力大約等于使用7.5mg/kg地塞米松在此模型中通常觀察到的效力。表4AHR數(shù)據(jù)表示為RL從陽性對照的V。降低和C^從陽性對照的"/。增加化合物MCh10mg/mlMCh30mg/mlMCh10mg/mlMCh30mg/ml<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>*地塞米松15mg/kg,通過氣管內(nèi)4設(shè)噴霧施用"聚糖化合物10mg/kg，通過氣管內(nèi)微噴霧施用*在P〈0.05下與陽性對照顯著不同**在P〈0.01下與陽性對照顯著不同MCh=醋曱膽堿還檢查了略有不同的動物模型。在此模型中，豚鼠通過腹膜內(nèi)注射含有20mgAl(OH)3和20昭OVA的0.5ml鹽水進行兩次OVA敏化。敏化在第0和7天執(zhí)行。最后一次敏化后三周，在吸入OVA(10mg/ml)之前30min，動物用々某介物或藥預(yù)處理6mJn(變應(yīng)原攻擊)。對于陰性對照，動物接受鹽水敏化和攻擊，或鹽水敏化和OVA攻擊。結(jié)束動物生命，并在誘發(fā)后八小時測量所有參數(shù)。在OVA氣管內(nèi)攻擊之前30min,以1ml/kg體重氣管內(nèi)施用媒介物或藥?；衔锏拿浇槲锸躯}水。作為參考化合物的布地奈德以1mg/ml的濃度溶解于媒介物中。為了測量呼吸道阻力(RL.)和肺順應(yīng)性(C—)，用氣溶膠化的醋甲膽堿(3mg/ml、10mg/ml和30mg/ml)《1發(fā)支氣管收縮。使用基線讀數(shù)和醋曱膽堿后獲得的讀數(shù)之間的差異計算Cdyn和R^。測量肺功能之后立即執(zhí)行支氣管肺泡灌洗(BAL)。分析BAL的蛋白含量(作為滲漏量度)和白細胞數(shù)量，執(zhí)行差異細胞計數(shù)以指示白細胞的何種亞群受藥的影響最大。數(shù)據(jù)表明PPS顯著降低OVA攻擊的動物的支氣管肺泡液中的浸潤白細胞的總數(shù)量，它還顯著降低支氣管肺泡液中的總蛋白含量。測試的濃度為0.1、0.5、2.5和10mg/kg體重。與向OVA敏化的動物施用PBS(陽性對照)時觀察到的蛋白含量相比，除O.lmg/kg之外的所有戊聚糖濃度以劑量依賴性方式顯著(PO.05)降低蛋白含量(圖14A)。戊聚糖的所有劑量還顯示對浸潤入呼吸組織和支氣管肺泡液中收集的白細胞的數(shù)量的介于85%至100%的抑制效應(yīng)(0.5mg/kg除外)，并且所述抑制效應(yīng)是顯著的(卩<0.5)(圖14B)。呼吸道高反應(yīng)性測量Ri,表明，在用10mg/ml醋甲膽堿刺激后，戊聚糖多聚硫酸酯的所有劑量均顯示超過90%的抑制效應(yīng)，并且戊聚糖多聚硫酸酯的更高劑量0.5mg/kg、2.4mg/kg和10mg/kg還非常顯著地抑制RL(抑制分別為103%、94%和100°/。)(圖15A)。還在肺順應(yīng)性的變化上觀察到戊聚糖多聚^琉酸酯的抑制效應(yīng)，圖15B中顯示了測試的三個最低濃度。這些效應(yīng)顯示為肺順應(yīng)性的增加。實施例9慈衫菜孩戚游在O尸Z)郝淑尹才放使用了氣腫的小鼠模型。小鼠急性和慢性暴露于香煙煙霧導(dǎo)致部分模擬COPD中觀察到的炎性和結(jié)構(gòu)變化的肺應(yīng)答。在此^f莫型中，雄性C57B1/6J小鼠經(jīng)受急性和慢性煙霧暴露，以正常室內(nèi)空氣為對照情形。在急性研究中，小鼠暴露于室內(nèi)空氣或五支香煙的煙霧(大約12mg焦油和0.9mg尼古丁)20分鐘。在慢性研究中，小鼠暴露于室內(nèi)空氣或三支香煙的煙霧/天，5天/周，持續(xù)6個月。然后對4組小鼠進行進一步劃分，以使每組內(nèi)的小鼠也接受經(jīng)吸入性路徑的PPS。在小鼠的急性暴露組中，在暴露于香煙煙霧之前30分鐘給予戊聚糖多聚硫酸酯。藥對急性暴露組中的小鼠的效力的評估包括評估煙霧暴露結(jié)束時支氣管肺泡灌洗液(BALF)的trolox等效的抗氧化能力。還檢查了BALF的與炎性應(yīng)答相關(guān)的細胞因子和趨化因子。在暴露后4小時和香煙煙霧暴露后24小時確定這些藥劑的水平。測量了一系列細胞因子和趨化因子。這些包括IL陽la、IL-1(3、IL隱2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL誦IO、IL-12、RANTES、MIP-la、細胞因子誘導(dǎo)的嗜中性粒細胞化學(xué)引誘物(KC)、TNF-a和IFN，。還確定了BALF中細胞的差異細胞計數(shù)。此研究的結(jié)果表明，戊聚糖多聚^J臾酯降低暴露于香煙煙霧的動物的BALF中的細胞浸潤物，特別是暴露于香煙煙霧并還接受PPS的那些動物中嗜中性粒細胞的數(shù)量顯著減少。在實驗過程中，慢性研究中的動物接受每天一次的PPS。實驗結(jié)束時，殺死動物，用福爾馬林(5%)氣管內(nèi)固定肺，并通過水置換測量肺體積。制備用于組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)的肺組織，肺組織進行蘇木精-伊紅和/或高碘酸-Schiff染色或用巨噬細胞標(biāo)志物Mac-3的抗體染色。還確定了肺組織中的鎖鏈素水平。鎖鏈素是彈性蛋白特異性亞氨基酸；采用肺中鎖鏈素的評估作為肺彈性蛋白含量的指示。鎖鏈素含量的下降表明與蛋白水解和基質(zhì)分解相關(guān)的氣腫性變化。此研究的結(jié)果共同地表明PPS在此COPD模型中充當(dāng)抗炎劑。實施例104'^^磁^游弄1)尸5碗教術(shù)菜潛丼浙夢裙蛋冷/丄-"時活遂TL-13是在哞喘和變應(yīng)性疾病(包括變應(yīng)性鼻炎)中具有關(guān)鍵作用的細胞因子，并且看起來它對阻斷哮喘中觀察到的呼吸道高反應(yīng)性特別重要(Wills-Karp,/附mw"o/.化v.202:175-190,2004)。最近的數(shù)據(jù)表明IL-13在COPD中也具有非常重要的作用(Tyner等人，J.C7/w.嵌309畫321,2006;Lee等人，i^^,K&64-73，2007)。戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)和DP5硫酸木聚糖抑制人類IL-13響應(yīng)細胞系的增殖。這在非常低的劑量下發(fā)生，并且不是由于PPS的毒性效應(yīng)，因為其他相似的硫酸化多糖在相同濃度的IL-13和多糖下沒有效應(yīng)。這些實驗利用TF-1細胞。TF-1最初是從具有嚴重全血細胞減少癥的雄性的骨髓樣品建立的。這些細胞依賴于IL-3或GM-CSF進行長期生長，并且響應(yīng)多種細胞因子包括IL-4和IL-13。增殖測定在適合此類測定的96-孔微平板(Falcon)中執(zhí)行?？资瞧降椎?，具有白色側(cè)面和透明的底部。清洗細胞以除去生長培養(yǎng)基中的任何細胞因子，然后將細胞重懸于RPMI/5%w/vFCS。用CoulterZ2顆粒計數(shù)器和大小分析器(CoulterElectronics,England)對細胞進行計數(shù)，并常規(guī)向不含IL-13(陰性對照)或含有IL-13的不同稀釋液的微平板孔中加入2.5x104個細胞。當(dāng)測量PPS的效應(yīng)時，孔中還含有不同濃度的此分子。細胞在37。C下于濕潤空氣中增殖48小時，之后通過用AQUEOUSONE染料(3(Hi1/孔)染色3小時然后在490nm下讀取吸光度來定量存在的細胞數(shù)。使用此測定，發(fā)明人證明，PPS和DP5硫酸木聚糖顯著抑制TF-1細胞的IL-13依賴性增殖(圖16),在PPS濃度為5-10嗎/ml下，阻斷75-80%的IL-13介導(dǎo)的細胞增殖。實施例11A菜潛^炎碗^游々"尸5碗凝^炎潛^夢/在4CO尸Z)V^^好^癥^^#^對^#老化茵子好法#已知在介導(dǎo)與COPD相關(guān)的炎癥中起重要作用的趨化因子包括IL-8、MCP-1和MlP-la(Barnes2004，同上)。顯示PPS阻斷IL-8觸發(fā)的細胞遷移。這些實驗使用DMSO處理的人類早幼粒細胞HL-60細胞執(zhí)行。這些細胞是從具有急性早幼粒細胞性白血病的患者獲得的。在用于實驗之前，將這些細胞用DMSO(1.2%)處理4天。趨化性測定在由底室組成的96-孔Costar趨化板中進行，向底室中加入人類IL-8(+/-抑制劑)，然后向頂室中加入于RPMI和1%v/vFCS中的細胞，并將平板在37。C下孵育1小時，以讓細胞從頂室運動至底部。在讀取490nm下的吸光度之前，通過用AQUEOUSONE(、20.ul/孔)標(biāo)記1.75小時來定量遷移入底室的細胞的數(shù)量。IL-8以20ng/ml的終濃度使用，而抑制劑是硫酸木聚糖五糖(10嗎/ml和50叱/ml)和戊聚糖多聚硫酸酯(10嗎/ml和50昭/ml)。將細胞遷移與沒有IL-8或有IL-8但沒有抑制劑下觀察到的細胞遷移進行比較。這些數(shù)據(jù)表明，PPS在此測定中是很好的抑制劑，因為50昭/mlPPS抑制細胞遷移達74%(圖17)。為了檢查PPS或硫酸木聚糖五糖是否是趨化因子MCP-1的有效抑制劑，使用了人類單核細胞細胞系THP-1。這些細胞最初是從具有急性單核細胞白血病的患者的外周血獲得的。測定與上文描述的非常相似。趨化性測定在96-孔Costar趨化板中進行，向底室中加入人類MCP-1(+/-抑制劑)，然后向頂室中加入于RPMI/1%FCS中的THP-1細胞，并將平^反在37。C下孵育2.5小時，以讓細胞從頂室運動至底部。在讀取490nm下的吸光度之前，通過用AQUEOUSONE(30|11/孔)標(biāo)記4小時來定量遷移入底室的細胞的數(shù)量。MCP-1以10ng/ml的終濃度使用，而抑制劑是硫酸木聚糖五糖(10賜/ml和50pg/ml)和PPS(10貼/ml和50嗎/ml)。在這些實驗中，PPS和硫酸木聚糖五糖二者都是有效的，但PPS是更好的抑制劑(圖18)，因為在50昭/ml下，PPS抑制細胞運動達89%，而在相同濃度下，石克酸木聚糖五糖抑制細胞運動達53%。使用DMSO處理的U937細胞檢查響應(yīng)MIP-la的細胞遷移。U937細胞是最初從具有組織細胞淋巴瘤的患者的胸腔積液獲得的幼單核細胞人類細胞系。在用于趨化性實驗之前，將這些細胞用DMSO(1.2%)處理4天。趨化性測定在96-孔Costar趨化板中進行，向底室中加入人類MIP-la(+/-抑制劑)，向頂室中加入于RPMI/HEPES中的DMSO處理的U937細胞，并將平板在37。C下孵育3小時，以讓細胞從頂室運動至底部。在讀取490nm下的吸光度之前，通過用AQUEOUSONE(30pl/孔)標(biāo)記1小時來定量遷移入底室的細胞的數(shù)量。MIP-la以40ng/ml的終濃度使用，而抑制劑是硫酸木聚糖五糖(10jig/ml和50jig/ml)和PPS(10貼/ml和50貼/ml)。從這些實驗中明顯的是，PPS和硫酸木聚糖五糖二者均抑制MIP-la刺激的細胞運動。PPS更加有效，其在10貼/ml和50昭/ml兩種濃度下是很好的抑制劑，分別抑制細胞運動達48%和69%;而硫酸木聚糖五糖僅在50]ig/ml下有效，抑制細胞運動達44%(圖19)。這些數(shù)據(jù)表明PPS抑制三種關(guān)鍵趨化因子IL-8、MCP-1和MIP-la誘導(dǎo)的細胞運動，已知這三種關(guān)鍵趨化因子在與COPD相關(guān)的炎癥中起作用。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，本文描述的發(fā)明可進行具體描迷的變化和修飾之外的變化和修飾。應(yīng)理解，本發(fā)明包括所有此類變化和修飾。本發(fā)明還包括在本說明書中單獨或共同地提到或指出的所有步驟、特征、組合物和化合物，以及所述步驟或特征中的任何兩種或更多種的任何和所有組合。參考書目Adcock和Ito，爿w.Soc.2:313-319，2005Alien,y4c/v/W她53:101-110，2006Anzueto，爿附.丄Afed"9:S46-S53，2006Barnes,it'v.56:515-548，2004Barnes，5"."7S卿〃:S297隱303，2006Barnes和Stockley,■J.25:1084-1106，2005Bayol等人，美國專利4,713,373Blaiss，v4〃e/xyArf/ww尸rac26:35-40，2005Borish，J.爿〃ergyC//"/附ww朋/.7":]021-1031，2003Casu，^4<iv.C77e附.S/.0c/2ew.51-134，1985Casu，Z朋.Kv4o7(i.556:1-17，1989Coombe等人,Jowma/(9/7w膽朋/og7c"/她,/2c^"5:145-150，1998Degenhardt等人，/^c/尸/w/twfWe,"/ez附)334(7,27-9,2001Elmiron".PentosanPolysulfateSodium.ProductMonograph(戊聚糖多聚石克酸酯鈉產(chǎn)品專著).Janssen-OrthoIncJanuary2006Fernig，于Proteoglycanprotocols(蛋白聚糖方案)，R.V.Iozzo編，HumanaPress,Totowa，NJ，USA，第505-518頁，2001Gelfand，丄J〃ergyC//".S135-138,2004Golightly和Greos.Dn/gs65:341-3842005Green等人，Cm/t(9//w./4〃ergy//ww".//76>/.7:43-50,2007Halpin和Miravitlles.ZVrc.乂w.r/20A2c.5bc.3:619-623,2006Kuszmann等人，專利WO2006017752Lander和Selleck,</.O〃說o/."8f2力227-232,2000Lee等人，Ae林te.S:64-73，2007MacNee，P亂J附.77謹cSoc,2:258-266，2005Neilsen和Dahl，爿w.J.ie，>:她d2:55-65,2003Palmqvist等人，X〃ergy仰:65.2005Parish等人，美國專利6,143,730Passalacqua等人，Cm^t:J〃e廠gvC7/w./附wwwo/.4:177-183,2004Pawanker，CWrC^/:wJ〃ergvC7/.w./'腦w朋/."/:l-4，2004Sasisekharan禾口Venkataraman,CWkCT，.腸/.《6」626-631,2000Skoner，Cw/r^4//ergy//wmwwo/.2:7-10，2002.Suchankova等人，五"rJ尸/^7waco/.507卩/-3」:261-71，2005Sutherland和Martin,,/是rgyC/,./畫,/."2:819-27，2003Szilasi等人，72:52-60,2006Tyner等人，J.C7/"./"ve就"6:309-321，2006Venkataraman等人，&,ewce"5W力:537-542，1999Walls等人，yi/edJ.」"W./W:28-33,2005Wenzel，丄朋ce/36S:804畫813,2006Wills-Karp，/附wm朋/.Tev.2dl75-190，2004Yanez和Rodrigo，X朋.v4〃erg)M'rt/2層/附腿朋/.狄479-84，200權(quán)利要求1.一種用于治療或預(yù)防受治療者中的呼吸疾患的方法，所述方法包括在足以緩解所述呼吸疾患的癥狀的條件下向所述受治療者施用有效量的硫酸木聚糖或其鹽一段時間。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述呼吸疾患是炎性或變應(yīng)性呼吸或肺部疾病。3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述炎性或變應(yīng)性呼吸或肺部疾病選自包含哞喘、變應(yīng)性鼻炎和慢性阻塞性肺部疾病(COPD)的列表。4.如權(quán)利要求1或2或3所述的方法，其中所述硫酸木聚糖是戊聚糖多聚硫酸酯(PPS)或其鹽。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所迷硫酸木聚糖是PPS。6.如權(quán)利要求1至5中的任一項所述的方法，其中所述受治療者是人類。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其還包括施用抗炎劑。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述抗炎劑是抗組胺劑。9.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所述抗炎劑是G-CSF、M-CSF和/或GM-CSF的拮抗劑。10.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所迷抗炎劑是IL-5、IL-4或IL-13的拮抗劑。11.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所述抗炎劑是白細胞彈性蛋白酶的拮抗劑。12.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所述抗炎劑是嗜酸性粒細胞趨化因子-1或嗜酸性粒細胞趨化因子-2的拮抗劑。13.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其中所述抗炎劑是IL-8、MCP-1或MIP-la的拮抗劑。14.硫酸木聚糖或在制備用于治療或預(yù)防受治療者中的呼吸疾患的藥物中的用途。15.如權(quán)利要求14所述的用途，其中所述呼吸疾患是炎性或變應(yīng)性肺部疾病。16.如權(quán)利要求15所述的用途，其中所述炎性或變應(yīng)性肺部疾病選自包含嗜喘、變應(yīng)性鼻炎和COPD的列表。17.如權(quán)利要求14或15或16所述的用途，其中所述硫酸木聚糖是PPS或其鹽。18.如權(quán)利要求17所述的用途，其中所述硫酸木聚糖是PPS。19.如權(quán)利要求14至18中的任一項所述的用途，其中所述受治療者是人類。20.如權(quán)利要求19所述的用途，其還包括使用抗炎劑。21.如權(quán)利要求20所述的用途，其中所述抗炎劑是抗組胺劑。22.如權(quán)利要求20或21所述的用途，其中所述抗炎劑是G-CSF、M-CSF和/或GM-CSF的拮抗劑。23.如權(quán)利要求20或21所述的用途，其中所述抗炎劑是IL-4或IL-5或IL-13的拮抗劑。24.如權(quán)利要求20或21所述的用途，其中所述抗炎劑是白細胞彈性蛋白酶的拮抗劑。25.如權(quán)利要求20或21所述的用途，其中所述抗炎劑是嗜酸性粒細胞趨化因子-1或嗜酸性粒細胞趨化因子-2的拮抗劑。26.如權(quán)利要求20或21所述的用途，其中所迷抗炎劑是IL-8或MCP-1或MIP-la的拮抗劑。27.—種組合物，所述組合物包含硫酸木聚糖的級分或衍生物，所述硫酸木聚糖是選自包含以下的列表的配體的拮抗劑IL-5、IL-4、IL-13、IL陽6、IL-7、IL-8、IL誦9、IL-IO、IL-ll、IL誦12、IL-3、IL隱14、IL-15或包括IL-25在內(nèi)的細胞因子的IL-17家族、干擾素、G-CSF、M-CSF、GM-CSF、BDNF、CNTF、EGF、EPO、FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGFIO、FGFll、FGF12、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、LIF、PDGF、SCF、TGFa、TGFp、TNFa、TNF(3、TPO、VEGF、GH、NGF、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、制癌蛋白M(OSM)、胰島素、MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5;MIP-1家族成員，包括MIP畫la、MIP-2;嗜酸性粒細胞趨化因子(嗜酸性粒細胞趨化因子-l、-2或-3)、PBP(血小板石咸性蛋白)、SDF-1、PBSF、PF4、RANTES、彈性蛋白酶；組織蛋白酶家族的酶、細胞黏著分子諸如PECAM-1和可溶性受體或細胞結(jié)合受體或病毒結(jié)合受體，所述組合物還包含一種或多種藥學(xué)可接受載體、稀釋劑和/或賦形劑。28.如權(quán)利要求27所述的組合物物是IL-5的拮抗劑。29.如權(quán)利要求27所述的組合物物是IL-4的拮抗劑。30.如權(quán)利要求27所述的組合物物是IL-13的拮抗劑。31.如權(quán)利要求25所述的組合物物是白細胞彈性蛋白酶的拮抗劑。32.如權(quán)利要求25所述的組合物物是嗜酸性粒細胞趨化因子-1或嗜酸性粒細胞趨化因子-2的拮抗劑。33.如權(quán)利要求25所述的組合物，其中所述硫酸木聚糖的級分或衍生物是IL-8或MCP-1或MIP-la的拮抗劑。34.如權(quán)利要求25至31中任一項所述的組合物，其中所述硫酸木聚糖是PPS。，其中所述石克酸木聚糖的級分或衍生,其中所述石克酸木聚糖的級分或衍生,其中所述硫酸木聚糖的級分或衍生，其中所述;s危酸木聚糖的級分或衍生,其中所述硫酸木聚糖的級分或衍生全文摘要本發(fā)明總體來說涉及在預(yù)防和/或治療呼吸疾病或疾患中有用的藥劑和醫(yī)學(xué)方案，所述呼吸疾病或疾患諸如哮喘、變應(yīng)性鼻炎和慢性阻塞性肺部疾病(COPD)。更具體地，本發(fā)明涉及硫酸木聚糖或其衍生物或同系物在治療呼吸疾病或疾患中的用途。文檔編號A61P11/06GK101686996SQ200880024634公開日2010年3月31日申請日期2008年5月30日優(yōu)先權(quán)日2007年5月31日發(fā)明者沃倫·查爾斯·凱特,迪爾德麗·羅馬·庫柏申請人:格萊肯生物科學(xué)公司