專利名稱:具有增強(qiáng)免疫功能作用的組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及的海洋蛋白肽是以來(lái)源廣泛的海洋魚(yú)類(三文魚(yú)、大馬哈魚(yú)、羅非魚(yú)等)的魚(yú)肉經(jīng)為原料,通過(guò)水解制造出分子量在100~2000D的寡肽配伍劑,具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點(diǎn)。已有研究表明,海洋蛋白肽單獨(dú)作用具有增強(qiáng)免疫功能的作用。
本發(fā)明涉及的核苷酸是核糖核酸(RNA)為原料經(jīng)酶法降解生產(chǎn)的,純度在99%以上的5’AMP∶5’CMP∶5’GMPNa2∶5’UMPNa2按照22.8∶26.6∶30.2∶20.4配比而成的5’核苷酸混合物。之前的研究也發(fā)現(xiàn),單獨(dú)補(bǔ)充核苷酸能緩解無(wú)核酸飼料喂養(yǎng)小鼠引起的免疫功能抑制,起到增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能的作用。
而迄今為止,還沒(méi)有關(guān)于海洋蛋白肽與核苷酸配伍劑在增強(qiáng)免疫功能藥品、增強(qiáng)免疫功能保健食品以及增強(qiáng)免疫功能食品中應(yīng)用的任何報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在通過(guò)進(jìn)一步研究,提供海洋蛋白肽與核苷酸配伍劑在制備免疫調(diào)節(jié)藥物或食品中的用途,為通過(guò)飲食改善機(jī)體免疫功能提供一種新途徑。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種具有增強(qiáng)免疫功能的組合物,其特征在于由海洋蛋白肽和核苷酸按重量比為45∶8的比例配制而成。
一種具有增強(qiáng)免疫功能作用的組合物作為制備增強(qiáng)免疫功能藥物、增強(qiáng)免疫功能保健食品或增強(qiáng)免疫功能食品的用途。
其中所述的藥物、保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑或口服液。
其中所述的食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品。
具體實(shí)施方案 以下通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)闡明本發(fā)明所述海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑在增強(qiáng)免疫功能方面的作用效果。
1.材料和方法 1.1受試樣品海洋蛋白肽,由北京中食海氏生物技術(shù)有限公司制備。核苷酸(5’AMP∶5’CMP∶5’GMPNa2∶5’UMPNa2=22.8∶25.8∶30.2∶20.4)由大連珍奧公司提供。將海洋蛋白肽和核苷酸按重量比為45∶8的比例配制而成。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雌性Balb/c小鼠160只,6~8周齡,18~22克,由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,批準(zhǔn)號(hào)為SCXK11-00-0004,清潔級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng),飼養(yǎng)環(huán)境溫度25℃,濕度60%RH。
1.3檢驗(yàn)指標(biāo)小鼠脾臟和胸腺重;抗體形成細(xì)胞(IgM-PFC/脾)測(cè)定,采用Jerne改良玻片法;血清抗體滴度,采用血清半數(shù)溶血值HC50;遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH),采用足跖腫脹法測(cè)定;ConA刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖功能,采用MTT法;巨噬細(xì)胞吞噬功能的檢測(cè),采用碳粒廓清法及腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞(半體內(nèi)法)測(cè)定;NK細(xì)胞活性測(cè)定,采用乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)定法。
1.4實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物分成空白對(duì)照組,海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑高、中和低劑量組。將海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑配成高、中、低三個(gè)濃度,劑量分別為0.795g/kgBW、0.265g/kgBW和0.0883g/kgBW,受試物按不同比例摻于飼料中,空白對(duì)照組給予正常飼料。每周稱量體重以及進(jìn)食量。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。4周后實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)按照衛(wèi)生部《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》進(jìn)行上述指標(biāo)檢測(cè)。
1.5統(tǒng)計(jì)方法 所有結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS11.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,比較各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的差異。但需按方差分析的程序先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,計(jì)算F值,F(xiàn)值<F0.05,結(jié)論各組均數(shù)間差異無(wú)顯著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì);對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)或方差齊要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的,改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
1.6結(jié)果判定依據(jù) 《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)規(guī)定在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性四個(gè)方面任兩個(gè)方面結(jié)果陽(yáng)性,可判定該受試樣品具有增強(qiáng)免疫功能功能作用。其中細(xì)胞免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性,或任一個(gè)實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果陽(yáng)性,可判定細(xì)胞免疫功能測(cè)定結(jié)果陽(yáng)性。體液免疫功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性,或任一個(gè)實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果陽(yáng)性,可判定體液免疫功能測(cè)定結(jié)果陽(yáng)性。單核-巨噬細(xì)胞功能測(cè)定項(xiàng)目中的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性,或任一個(gè)實(shí)驗(yàn)的兩個(gè)劑量組結(jié)果陽(yáng)性,可判定單核-巨噬細(xì)胞功能結(jié)果陽(yáng)性。NK細(xì)胞活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)的一個(gè)以上劑量組結(jié)果陽(yáng)性,可判定NK細(xì)胞活性結(jié)果陽(yáng)性。
2.結(jié)果 2.1海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠免疫器官重量的影響 由表1可見(jiàn),小鼠的初始體重各劑量組與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后,配伍劑中、低劑量組的脾臟/體重比值明顯升高(P<0.05);而各劑量組小鼠的體重、胸腺/體重的比值與對(duì)照組比較差異均無(wú)顯著性,即配伍劑對(duì)小鼠體重和胸腺相對(duì)重量無(wú)影響(P>0.05)。
表1海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠體重及免疫器官相對(duì)重量的影響(x±s)
*與正常對(duì)照組比較有顯著性差異,P<0.05 2.2海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響 由表2可見(jiàn),經(jīng)口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后,與正常組比較,配伍劑低劑量組能顯著增強(qiáng)ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力(P<0.05),配伍劑中、低劑量組能顯著增強(qiáng)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)能力(P<0.05)。上述結(jié)果表明海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能中的遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)和ConA刺激的T淋巴細(xì)胞增殖有明顯的增強(qiáng)作用。
表2海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響(x±s)
*與正常對(duì)照組比較有顯著性差異,P<0.05 2.3海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠體液免疫功能的影響由表3可見(jiàn),經(jīng)口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后,與正常對(duì)照組比較,配伍劑中、低劑量組能顯著提高小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)(P<0.05)。各劑量組對(duì)小鼠半數(shù)溶血值也有所提高,但差異無(wú)顯著性(P>0.05)。上述結(jié)果表明海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑可明顯提高小鼠抗體生成細(xì)胞的數(shù)量,對(duì)小鼠血清抗體滴度沒(méi)有明顯影響;結(jié)果提示海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠體液免疫功能有增強(qiáng)的作用。
表3海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠體液免疫功能的影響(x±s)
*與正常對(duì)照組比較有顯著性差異,P<0.05 2.4海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響由表4可見(jiàn),經(jīng)口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后,與正常組比較,吞噬率和吞噬指數(shù)差異無(wú)顯著性(P>0.05),即對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力無(wú)影響。小鼠碳粒廓清指數(shù)(α)無(wú)顯著性差異(P>0.05),即對(duì)小鼠碳粒廓清能力無(wú)影響。
表4海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響(x±s)
2.5海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠自然殺傷(NK)細(xì)胞活性的影響由表5所示,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的配伍劑4周后,與正常組比較,小鼠NK細(xì)胞活性有所增強(qiáng),但差異無(wú)顯著性(P>0.05),即對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性無(wú)影響。
表5海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響(x±s)
3.結(jié)論 經(jīng)口給予小鼠不同劑量的海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑4周后,與正常組比較,配伍劑低劑量組對(duì)脾臟體比、ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)程度、抗體生成細(xì)胞功能(IgM-PFC)均有顯著提高;配伍劑中劑量組對(duì)脾臟體比、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)程度、抗體生成細(xì)胞功能(IgM-PFC)有顯著提高。各劑量組對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)、胸腺臟體比、單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能以及NK細(xì)胞活性均無(wú)影響。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》對(duì)增強(qiáng)免疫功能保健食品的判定標(biāo)準(zhǔn)可知,海洋蛋白肽和核苷酸配伍劑具有增強(qiáng)免疫功能的功能。
權(quán)利要求
1.一種具有增強(qiáng)免疫功能作用的組合物,其特征在于由海洋蛋白肽和核苷酸按重量比為45∶8的比例配制而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)免疫功能作用的組合物,其特征在于所述的海洋蛋白肽是以來(lái)源廣泛的海洋魚(yú)類(三文魚(yú)、大馬哈魚(yú)、羅非魚(yú)等)的魚(yú)肉經(jīng)為原料,通過(guò)水解制造出分子量在100~2000D的寡肽配伍劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)免疫功能作用的組合物,其特征在于所述的核苷酸是核糖核酸(RNA)為原料經(jīng)酶法降解生產(chǎn)的,純度在99%以上的5’AMP∶5’CMP∶5’GMPNa2∶5’UMPNa2按照22.8∶26.6∶30.2∶20.4配比而成的5’核苷酸混合物。
4.一種如權(quán)利要求1所述的具有增強(qiáng)免疫功能作用的組合物,作為制備增強(qiáng)免疫功能藥物、增強(qiáng)免疫功能保健食品或防輻射食品的用途
5.按權(quán)利要求4,其中所述的增強(qiáng)免疫功能藥物或增強(qiáng)免疫功能保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑或口服液。
6.按權(quán)利要求4,其中所述的增強(qiáng)免疫功能食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品或烘焙制品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種具有增強(qiáng)免疫功能作用的組合物,是由海洋蛋白肽和核苷酸按重量比為45∶8的比例配制而成,作為制備增強(qiáng)免疫功能藥物、增強(qiáng)免疫功能保健食品或增強(qiáng)免疫功能食品的用途。所得制劑具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點(diǎn)。本發(fā)明制劑可明顯增強(qiáng)小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)能力和ConA刺激的T淋巴細(xì)胞增殖;同時(shí)可明顯增加抗體生成細(xì)胞數(shù)量。上述結(jié)果表明海洋蛋白肽與核苷酸配伍劑對(duì)免疫功能具有增強(qiáng)作用。
文檔編號(hào)A61K31/7072GK101559214SQ200910011720
公開(kāi)日2009年10月21日 申請(qǐng)日期2009年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月27日
發(fā)明者恕 李, 勇 李, 鋒 董 申請(qǐng)人:珍奧集團(tuán)股份有限公司