專利名稱：：一種中藥婦炎康復制劑的制備方法及其檢測方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于中藥
技術領域：
，具體涉及一種中藥婦炎康復制劑的制備方法及其檢測方法。
背景技術：
：世界衛(wèi)生組織的調查顯示，中國女性40%以上患有婦科病，已婚婦女患病率更達70%以上，臨床婦科炎癥主要有陰道炎、宮頸炎、子宮內膜炎、盆腔炎、外陰炎以及尿道炎等；婦科炎癥通常表現(xiàn)為白帶異常、外陰瘙癢等，盆腔炎還會有腹痛、腹脹等表現(xiàn)，婦科炎癥對性生活、生育等都有影響，有的甚至會發(fā)生癌變，危及生命，帶給女性朋友無窮無盡的煩惱和隱患。宮頸癌，它在女性生殖道腫瘤中發(fā)病率第一，全球每年新發(fā)現(xiàn)40萬至45萬例，其中1/4到1/3在中國。目前，臨床上用于治療婦科疾病的方法分為物理治療和藥物治療兩種。其中物理治療分為激光、冷凍、微波等療法。因為物理治療會使宮頸口變硬，并且留有疤痕，對今后的懷孕、分娩都會有影響，所以對于還沒有生育的病人，尤其是大寒體質的人，不宜采用物理治療。藥物治療分為清洗液療法、栓劑療法及口服藥物療法。清洗液療法擁有其自身的弊端因為女性陰道內的生態(tài)環(huán)境是弱酸性的，本身對很多細菌有一定的抑制作用，常用清洗液就破壞了陰道酸堿度(PH)，導致病菌急劇生長，陰道本身抵抗細菌的能力大大下降，使陰道炎的感染率增加。目前治療婦科疾病的栓劑的種類非常多，一般來說，一種栓4劑只針對一種陰道炎。但有些患者得的是混合性陰道炎采用栓劑治療效果并不好。而且使用某些栓劑會破壞陰道正常菌群，造成菌群失調，導致陰道炎反復發(fā)作?？诜幬锆煼ǚ譃槲魉幆煼ê椭兴幆煼▋煞N。其中西藥治療毒副作用太大，肝臟、腎臟的負擔過大，使肝、腎功能下降，人體免疫力也隨之下降，人體免疫力下降又使病情加重或有并發(fā)感染，形成惡性循環(huán)，久治不愈，或越治越重。而中藥治療具有較強的整體觀念，婦科疾病雖然是身體的某一局部的疾病，但實際上是一種全身性疾病。對多數(shù)的婦科疾病患者來說，局部治療是不能解決根治問題的，而中醫(yī)由于從整體觀念出發(fā)，實施辨證論治，既考慮了局部的治療，又采取扶正培本的方法，對于改善患者的局部癥狀和全身狀況都具有重要的作用。已公開的一種婦科藥物及其制備方法，申請?zhí)枮?3118890.7，制備方法是敗醬草290-350份、薏苡仁145-175份、川楝子110-130份、柴胡110-130份、黃芩IIO-130份、赤芍110-130份、陳皮55-65份加水煎煮三次，濃縮煎煮液，另外加入上述薏苡仁的40%-60%量薏苡仁粉，混勻，干燥，過篩，裝膠囊。首先該發(fā)明只公開了該處藥對治療慢性盆腔炎的治療效果而我單位研發(fā)人員經過長期的臨床實驗發(fā)現(xiàn)該組方對陰道炎、宮頸炎亦具有良好的療效。其次該工藝的缺陷是產品有效成份含量低及膠囊劑的機械性差，易碎不易攜帶。另一公開的治療婦科疾病的薄膜衣片及其制備方法，其申請?zhí)枮?00710092498.9，其只公開了該處方藥治療金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌、銅綠色假單細胞菌、奇異變形菌、白色念球菌有較好的抑菌作用。對金葡菌引起的小鼠感染具有很強的體內保護作用，而經過我單位研發(fā)人員經長期臨床實驗研究證明該制劑不但具有體外抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌的生長繁殖，而且可以改變培育液的PH和細菌接種量，不影響該中藥制劑對大腸桿菌及變形桿菌的MIC。其次抗陰道毛滴蟲試驗表明，該中藥制劑體外可殺滅陰道毛滴蟲，具有時間和計量依賴性。結果說明，該中藥制劑有鎮(zhèn)痛和抗炎作用，能增強小鼠非特異性免疫及特異性體液和細胞免疫，體外有抗菌和抗陰道毛滴蟲作用。其次經過我單位科研人員的長期試驗我們改變了原工藝的崩解劑，在低成本的情況下使得產品崩解時間短，穩(wěn)定性好，黃芩苷的含量較高，含量差異性小。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種治療慢性宮頸炎、陰道炎、慢性盆腔炎的中藥制劑的制備方法。該方法工藝簡單合理，在有效降低成本的情況下，能較多的保留藥物有效成份，使得有效成份含量得到顯著提高。為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是一種中藥婦炎康復制劑的制備方法，其處方組成為敗醬草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍、陳皮，其特征在于(1)、將黃芩用沸水煮制10分鐘，備用；(2)、將川楝子清炒成表面焦黃色，備用；(3)、將一半量薏苡仁粉碎成100目的細粉，備用；(4)、剩余薏苡仁和粉碎所得余渣與敗醬草、柴胡、赤芍、陳皮四味藥材加水煎煮三次，第一、二次煎煮時間為1小時，第三次煎煮時間為0.5小時，濾液減壓濃縮至溫度為6(TC，相對密度為1.15-1.20的稠膏，濃縮所得稠膏噴霧干燥成膏粉。(5)、將步驟(3)所得中藥粉、步驟(4)所得膏粉、交聯(lián)聚維酮20.62份-21.7份和淀粉31.46份-32.55份，混勻，制備藥物制劑。所述的藥物制劑包括丸劑、片劑。陳皮、黃芩、赤芍的薄層色譜鑒別性狀丸劑，顯深褐色，味微苦；片劑除去包衣，顯深褐色，味微苦。鑒別(l)取本品，置顯微鏡下觀察淀粉粒類圓形或多圓形，直徑2、0lM,臍點星狀或短縫狀；(2)取本品10片或10粒，除去包衣，研細，加甲醇30ml,超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次分別取15ml、lOml,棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇提取4次，每次分別取15ml、10ml、lOml、10ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯甲醇水的體積比為10:1.7:1.3為展開劑，展至約5cm，取出，晾干，再以甲苯乙酸乙酯甲酸水的體積比為20:10:1:1的上層液為展開劑，展至約8cm，取出，晾干，噴以5%三氯花鋁乙醇溶液，置365nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(3)取本品IO片或IO粒，去除包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；再取黃芩對照藥材lg,加甲醇20ml,同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水的體積比為5:3:1:1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取本品8片或8粒，除去包衣，研細，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加甲醇制成lm含lml的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別于點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲垸乙酸乙酯甲醇甲酸的體積比為40:5:10:0.2為展幵劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱使斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點。本發(fā)明工藝方法簡單合理，在有效降低成本的情況下，能較多的保留藥物有效成份，使得有效成份含量得到顯著提高。-具體實施例方式本工藝所選取的輔料及其配比是經過嚴格的篩選得到的，以下為輔料的篩選過程實驗l:崩解劑的選擇崩解劑的作用是克服粘合劑和壓片所需的物理力，若粘合劑的粘合作用較強，則崩解劑的崩解作用必須更強，才能使該中藥制劑中有效成份在胃腸液中釋放出來。理想的崩解劑，不但能使該中藥制劑崩解成顆粒，而且能進一步分散成制粒前細粉狀。根據(jù)本發(fā)明處方中各藥味的理化性質，結合實際生產條件，在保證質量合格穩(wěn)定和節(jié)約成本的情況下選擇適當輔料。根據(jù)婦炎康復片的質量標準薄層鑒別應該能檢測出橙皮苷，黃苳苷，芍藥苷。含量檢測要求每片含黃芩以黃芩苷(C21H180)計，不得少于1.5mg.崩解時限:應在50分鐘內全部崩解;硬度取供試品10片，分次檢查，每次以供試品2片，分持于左右兩手，從lm的高處平墜于厚度2cm的松木板上，碎片總數(shù)不得超過3片。若超過3片，重做一次，不超過3片者仍屬合格；重量差異±4%(規(guī)定片重每片重O.35g)。超出重量差異限度的不得多于2片，并不得有1片超出限度1倍。微生物限度細菌數(shù)每lg不得過5000個，霉菌和酵母菌數(shù)每lg不得過50個，大腸埃希菌每lg不得檢出，大腸菌群每lg應小于50個，霉變、長螨者以不合格論。試驗一在用淀粉為崩解劑時制成的本產品按照訂的質量標準進行檢測，考察不同用量對產品質量的影響從而確定合適的崩解劑。不同的用量用三個批次進行實驗，結果見表一。表一<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>從表一可以看出，淀粉為崩解劑時崩解時間長而在淀粉含量為40%時崩解時間小于60分鐘符合規(guī)定，但是此時黃芩苷含量不符合要求。且陳皮，赤芍也不能完全檢出。試驗二在用交聯(lián)聚維酮為崩解劑時制成的本產品按照擬訂的質量標準進行檢測，考察不同用量對產品質量的影響從而確定合適的崩解劑。不同的用量用三個批次進行實驗，結果見表二。表二<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>從上表二中可以看出用交聯(lián)聚維酮為崩解劑，崩解時間短，但是硬度不好。且因為交聯(lián)聚維酮價格昂貴，用交聯(lián)聚維酮為崩解劑無疑是增加了生產成本。通過表一、表二可以看出在輔料量》25%黃芩苷的含量不穩(wěn)定，且不能達到要求。三、根據(jù)本產品原料藥及輔料的理化性質，我們將交聯(lián)聚維酮和淀粉按照不同的比例混合加入，但是必須控制二者總量在藥粉總量的25%以下。制成的本產品按照擬訂的質量標準進行檢測，考察不同用量對產品質量的影響從而確定合適的崩解劑。不同的用量，用三個批次進行實驗，結果見表三。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由表三試驗結果表明，在交聯(lián)聚維酮含量增加為9.5%、淀粉含量減少為15.5%按照擬定質量標準檢測各項指標符合要求。本著質量合格穩(wěn)定及節(jié)約成本的原則訂本工藝崩解劑為交聯(lián)聚維酮用量為(9.5%—10%)，淀粉的用量為(14.5%—15%)試驗四當交聯(lián)聚維酮的用量為(9.5%—10%)，淀粉的用量為(14.5—15%)時本產品成品的穩(wěn)定性試驗表四<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由表四可以看出，當崩解劑為交聯(lián)聚維酮的用量為(9.5%—10%)，淀粉的用量為(14.5—15%)時，按照擬訂的質量標準進行檢測崩解時間短，鑒別項均能檢出，黃芩苷的含量較高，含量差異性小，表明該產品的穩(wěn)定性好。上述實驗結果表明，本發(fā)明的工藝與現(xiàn)有技術相比具有明顯的技術進步。本發(fā)明具有抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌的生長繁殖及可殺滅陰道毛滴蟲。主治婦女帶下，色黃質粘稠或如豆渣狀，氣臭，少腹，腰骶疼痛，舌暗苔黃膩以及慢性盆腔炎、宮頸炎、子宮內膜炎等癥。本發(fā)明是一種中藥婦炎康復制劑的制備方法，其有益效果是用水提取，符合中醫(yī)傳統(tǒng)煎煮服用習慣，具有中醫(yī)特色，確定了崩解劑及其用量，而且提高了有效成份的含量，使得治療婦科炎癥的療效有顯著提高；本發(fā)明的另一目的修訂和提高原質量標準，修訂陳皮、黃芪的薄層鑒別，增加了赤芍的薄層色譜鑒別，建立了HPLC法測定黃芩苷的方法是這樣實現(xiàn)的-性狀本品為糖衣或薄膜衣，除去包衣后顯深褐色；味微苦。鑒別(1)取本品，除去包衣，置顯微鏡下觀察淀粉粒類圓形或多圓形，直徑220um，臍點星狀或短縫狀。(2)取本品10片，除去包衣，研細，加甲醇30ml,超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚提取2次(15ml，10ml)，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇提取4次(15ml,10ml，10ml，10ml),合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取橙皮苷對照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯一甲醇一水(10:1.7:1.3)為展開劑，展至約5cm，取出，晾干，再以甲苯一乙酸乙酯一甲酸一水(20:10:1:1)的上層液為展開劑，展至約8cm，取出，晾干，噴以5%三氯花鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365rnn)下檢視。供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(3)取本品10片，去除包衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取黃苳苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。再取黃芩對照藥材lg，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯一丁酮一甲酸一水(5:3:1:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(4)取本品8片，除去包衣，研細，加甲醇30ml,超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成lm含lml的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別于點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱使斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點。(5)黃芩苷的含量測定，照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)試驗例一本發(fā)明一種中藥婦炎康復制劑的質量標準測定方法研究性狀薄膜衣片性狀描述為依據(jù)中試三批樣品(批號200303001，200303002，200303003)實際性狀及結合糖衣片性狀而描述。鑒別(1)顯微鑒別特征婦炎康復片為中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準新藥轉正標準第四冊收載品種[WS3-30(Z-21)-93(Z)]，原標準中，顯微鑒別項下薏苡仁顯微特征明顯，專屬性強，故保留原藥材顯微鑒別特征。薄膜衣片依據(jù)原標準檢驗，結果亦符合規(guī)定(請見圖l)。故此項列入藥品標準草案正文中。(2)取本品10片，除去糖衣，研細，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚提取2次(15ml，10ml)，棄去乙醚液。再用水飽和的正丁醇提取4次(15ml，10ml，10ml，10ml)，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。制備不含陳皮的制劑，同法制成陰性對照液。另取橙皮苷對照品，加甲醇制成lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5W，分別于點于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(10:1.7:1.3)為展開劑，展至約5cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:l:l)的上層液為展開劑，展至約8cm，取出，晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。而陰性空白溶液在與對照品色譜相應的位置上，不顯相同顏色的斑點(請見圖2)。上述為方中陳皮藥材的薄層色譜鑒別。按原標準方法進行操作，色譜分離效果較差，背景污染嚴重難以辨認，按正文方法進行操作，分離效果好，斑點清晰可辨，薄膜衣片依據(jù)正文標準檢驗，結果亦符合規(guī)定(請見圖3)，故此項列入藥品標準草案正文中。(3)取本品10片，除去糖衣，研細，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。制備不含黃芩藥材的制劑，同法制成陰性對照液。另取黃芩對照藥材lg，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液。再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述四種溶液各5W，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。而陰性空白溶液在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，不顯相同顏色的斑點(請見圖4)。上述為制劑中黃芩的薄層色譜鑒別，按原標準方法進行操作，由于在紫外光燈(254rnn)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的暗紫色斑點，該斑點與背景顏色相近，直接觀察較困難，用數(shù)碼相機照相后，對照片反復調整背景顏色才可鑒別(請見圖5)。正文方法采用中國藥典黃芩藥材鑒別項下方法，從而使制劑方法同藥材方法一致，更易控制制劑的質量，該方法分離效果好，斑點清晰可辨，薄膜衣片依據(jù)正文標準檢驗，結果亦符合規(guī)定(請見圖6)，故此項列入藥品標準草案正文中。(4)取本品8片，除去糖衣，研細，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。同時制備不含赤芍的制劑，同法制成陰性對照液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成lml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各4W，分別于點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一甲酸(40:5:10:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱使斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點。而陰性空白溶液在與對照品色譜相應的位置上，不顯相同顏色的斑點(請見圖7)。上述為方中赤芍藥材的薄層色譜鑒別。該方法重復性好，專屬性強，薄膜衣片依據(jù)正文標準檢驗，結果亦符合規(guī)定(請見圖8)，故此項列入藥品標準草案正文中。檢查我們按照中國藥典2000年版一部附錄ID片劑項下的有關規(guī)定，對本品崩解時限、微生物限度等項進行檢查，按照中國藥典2000年版一部附錄KE重金屬檢査法第二法，對本品中重金屬(以Pb計)進行檢查，按中國藥典2000年版一部附錄KF砷鹽檢查法第一法，對本品中砷鹽(以As計)進行檢査，檢査結果請見表l、表2。表l糖衣片檢查項目及結果崩解重金屬砷鹽(以微生物限度結論批號時限(以Pb計,As計，ppm)細菌總霉菌數(shù)(個大腸活螨(min)ppm)數(shù)(個/g)/g)桿菌20030100130<10〈230<10未檢出未檢出符合規(guī)定20030100235<10<220<10未檢出未檢出符合規(guī)定20030100329〈10<240<10未檢出未檢出符合規(guī)定表2薄膜衣片檢查項目及結果重量崩解重金屬砷鹽(以微生物限度結論批號差異時限(以Pb計,As計，細菌總霉菌數(shù)(個大腸活螨(W(min)ppnOppm)數(shù)(個/g)/g)桿菌2003030012.443<10<230〈10未檢出未檢出符合規(guī)定2003030022.442〈10〈220<10未檢出未檢出符合規(guī)定2003030032.044<10<230<10未檢出未檢出符合規(guī)定19試驗結果表明，婦炎康復片糖衣片和薄膜衣片檢查的各項指標均符合中國藥典2000年版一部附錄ID片劑項下的規(guī)定，其中重金屬(以Pb計)〈10ppm，砷鹽(以As計)〈2ppm，因該二項含量均甚微，故不列入藥品標準正文檢查項。含量測定婦炎康復片為中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準新藥轉正標準第四冊收載品種[WS3-30(Z-21)-93(Z)]，由敗醬草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍、陳皮等組成，原標準缺少有效成份的定量控制指標，方中主藥黃芩苦寒瀉火，清熱燥濕，所含黃芩苷有抗炎，抗菌解熱等作用，對本方的臨床療效有重要作用。以黃芩為定量監(jiān)控指標可有效的控制產品質量。有關黃芩苷的含量測定方法有比色法、.分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法等，查閱大量資料，建立了高效液相色譜法測定本品中黃芩苷的含量的方法，該法具有分離效果好、靈敏、準確等優(yōu)點?，F(xiàn)將該方法學研究情況總結如下一、儀器與試藥1.儀器AgilentllOO型高效液相色譜儀，G1311A型四元梯度泵，G1314A型紫外檢測器，G2170AA型化學工作站。2.試劑乙腈、甲醇均為色譜試劑，水為超純水，其它試劑均為分析純。3.對照品黃芩苷由中國藥品生物制品檢定所提供(批號為0715-9909，供含量測定用)。4.供試品婦炎康復片(糖衣片)，批號200301001;包裝:鋁塑板，每板25片，每盒裝2板；由本公司生產。二、色譜條件l.色譜柱:KromasilC-18柱IOOA(5Wn,250mmX4.6mm)。2.流動相:乙腈-0.2%磷酸(26:74);流速1.0ml/min。3.檢測波長取黃芩苷對照品溶液(C二0.030mg/ml),置紫外分光光度計中，從250500mn進行連續(xù)波長掃描，結果表明，黃芩苷在277nm處有最大吸收峰，故選擇277nm為測定吸收波長(請見圖9)。在上述分析條件下，黃芩苷峰完全達到基線分離，其峰與相鄰雜質峰的分離度大于1.5，理論板數(shù)按黃芩苷峰計算大于3000。三、對照品純度檢查精密吸取黃芩苷對照品溶液(O0.030mg/ml)10^1，注入液相色譜儀，測定，按面積歸一法計算，其含量為99.31%。四、提取條件選擇及提取完全性試驗l.超聲時間的選擇取本品10片，共4份，除去糖衣，精密稱定，研細，取0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中精密加入甲醇50ml，精密稱定，分別超聲處理(功率250W，頻率50KHZ)20、25、30、40分鐘，取出，放冷，稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。表3超聲時間考察<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>以上結果表明，超聲時間為30分鐘，與超聲40分鐘含量已無明顯差異，因此選用30分鐘作為超聲處理時間。五、方法學考察1.線性范圍的考察取黃芩苷對照品溶液(O.030mg/ml)，分別進樣4W、8W、12W、16^1、2(Htl記錄色譜圖，測定峰面積，結果見表4。表4線性關系測定結果進樣量(pg)0.120.240.360.480.60峰面積值494.71026.4l柳.71985.22487.8以峰面積值(y)對進樣量(x)進行回歸，得標準曲線方程y二4120.8x+13.26，R=0.99985。以峰面積值(y)對進樣量(x)作圖，得一直線(請見圖10)。以上結果表明，在0.120.60iig范圍內，黃芩苷峰面積值與進樣量有良好的線性關系。2.精密度試驗精密吸取黃芩苷對照品溶液(CM).030mg/ml)l(HU，連續(xù)重復進樣5次，測定，記錄其峰面積值，結果見表5。表5黃芩苷精密度試驗實驗號12345RSD(%)峰面積值1231.591242.201235.971238.831239.180.32結果表明黃芩苷對照品重復進樣5次測得峰面積積分值的相對標準偏差RSD〈2.096，故認為本方法具有良好的精密度。3.陰性空白對照試驗取除去黃芩的模擬處方，制成不含黃芩的空白樣品，按供試品溶液制法制成陰性對照溶液。另取供試品溶液及對照品溶液(C=0.030mg/ml),按正文方法進行測定。試驗結果表明，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的保留時間位置上，有一對應的單一色譜峰，而陰性對照液色譜中，在該保留時間相應位置處無相對應的峰出現(xiàn)。說明陰性空白對其測定無干擾(請見圖11)。4.穩(wěn)定性試驗精密吸取同一批(批號200301001)供試品溶液按0、2、4、6、8小時時間間隔，分別注入液相色譜儀進行測定，試驗結果請分別見表6。表6穩(wěn)定性試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>試驗結果表明，本方法5次重復測定的相對標準偏差RSD=1.1%，說明其重復性較好。6.加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品(2.218mg/片)適量，精密稱定，分別加入黃芩苷對照品適量，依法測定，以下列公式計算回收率，結果見表8。表8樣品回收率試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>試驗結果表明本方法具有較高的回收率，其平均回收率為98.12%，RSD為1.47%，加樣回收良好。六.樣品含量測定取婦炎康復片(糖衣片)連續(xù)十批，分別按正文含量測定項下方法，進行測定(請見圖12)。結果見表9。表9十批樣品(糖衣片)中黃芩苷含量測定結果(n=2)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>續(xù)三批，分別按正文含量測定項下方法，進行測定(請見圖13)。結果見表IO。表10三批樣品(薄膜衣片)中黃芩苷含量測定結果(n=2)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>八、含量限度的確定十三批樣品中，黃芩苷的實測結果，最高含量為2.404mg/片，最低為1.521mg/片；考慮到處方用量，工藝損耗與裝量差異等因素影響，薄膜衣片和糖衣片均暫定為本品每片含黃芩以黃芩苷(C21H180n)計，不得少于1.5mg/片。三批不同來源藥材中，黃芩苷的最低含量為7.84%，最高為10.28%，按中國藥典2000年版一部規(guī)定，含量不得低于9.0%。中國藥典2005年版一部規(guī)定，含量亦不得低于9.0%。暫定為其黃芩苷含量不得低于9.0%。試驗例二本方由七味中藥成份組成，采用先進的中藥加工提取設備，以先進的工藝手法，制成便于口服攜帶方便的純中藥制劑。該藥通過西安醫(yī)科大學臨床藥理研究所試驗證明本發(fā)明經過急性毒性試驗結論證實用該中藥制劑(以生藥計，濃度為58.2%)小鼠灌胃給藥每日最大耐受量大于69.84g/kg(以生藥計)，相當于成人每日用量274倍以上，證明該藥屬無毒級藥品。長期毒性試驗結論證明在該中藥制劑大白鼠90d長期毒性試驗中，未發(fā)生明顯毒性反應，亦無延遲性毒性反應。動物安全用量為20.4g生藥Kg/日，相當于臨床成人日擬用量的80倍，故臨床用藥時安全有效。主要藥效學試驗證明扭體法和熱板法試驗表明，該中藥制劑按1.16、3.49、10.48g/kg(以生藥計)對小鼠灌胃給藥，抑制醋酸自己的小鼠扭體反映，提高小鼠熱刺激痛閥。抗炎試驗表明，該中藥制劑安0.87、2.62、7.86g/kg(以生藥劑)對大鼠灌胃給藥，抑制角叉菜膠誘導的急性實驗性炎癥和棉球刺激的肉芽組織增生。免疫試驗表明，該中藥制劑安1.16、3.49、10.48g/kg(以生藥劑)對小鼠灌胃給藥，對小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)和脾指數(shù)無明顯影響；增加小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率和吞噬指數(shù)，增強小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能；升高小鼠血清溶血素含量，促進小鼠特異性抗體的產生和分泌；升高小鼠脾臟淋巴細胞增殖指數(shù)，促進小鼠脾臟淋巴細胞增殖反應。抗菌試驗表明，該中藥制劑體外抑制金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌的生長繁殖，改變培育液的PH和細菌接種量，不影響該中藥制劑對大腸桿菌及變形桿菌的MIC?？龟幍烂蜗x試驗表明，該中藥制劑體外可殺滅陰道毛滴蟲，具有時間和計量依賴性。結果說明，該中藥制劑有鎮(zhèn)痛和抗炎作用，能增強小鼠非特異性免疫及特異性體液和細胞免疫，體外有抗菌和抗陰道毛滴蟲作用。通過藥學實驗結論證實，該藥具有明顯的鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫增強作用以及抗菌、抗陰道毛滴蟲作用。綜上所述，本發(fā)明的藥理法方藥既符合中醫(yī)對婦科炎癥的認識，又具有實踐經驗特色及臨床試驗基礎，還具有現(xiàn)代中藥藥理研究基礎，其組方是合理的，該發(fā)明研究達到國內同類藥物研究科技水領先，填補了國內研究婦科炎癥中藥口服制劑的一項空白。本發(fā)明藥物含量中富有豐富的營養(yǎng)成份，包括豐富的植物蛋白質，動物蛋白，氨基酸、生物活性成份，維生素C、維生素B、維生素E及其一些微量元素，能有效的改善人體整個及局部生理機能。為了更進一步表明本發(fā)明對治療各種婦科疾病臨床療效下面詳細列舉一些臨床觀察，數(shù)據(jù)及病例。本發(fā)明臨床研究由陜西中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院、西安醫(yī)科大學第二臨床醫(yī)學院、西安市中醫(yī)醫(yī)院三單位的婦科承擔。評價中藥制劑本發(fā)明治療多種婦科炎癥的效果。提供臨床病例300例，其中霉菌性陰道炎56例，滴蟲性陰道炎34例，細菌性陰道炎57例，慢性宮頸炎76例，慢性盆腔炎77例子。結果，該中藥制劑對慢性陰道炎、宮頸炎、盆腔炎均取得了良好的療效。本發(fā)明治療慢性陰道炎、宮頸炎、盆腔炎見效快，無副作用，長期服用均可達到治療和預防復發(fā)的顯著效果。項目指標病例數(shù)X土SD年21-30歲9231-40歲10233.76±19.4141-50歲57齡51歲以上49病》l個月<6個月101》6個月<12個月9713.95±10.3727<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>療效標準(一)陰道炎1、痊愈陰道、外陰癢痛消失，陰道分泌物檢査轉為正常。積分為0分。停藥3個月經周期無反復，各項檢査均正常。2、顯效陰道分泌物檢査正常，陰道、外陰瘁痛明顯減輕。治療后比治療前積分降低了2/3以上。3、有效陰道分泌物檢査正常而其他癥狀存在，或其他癥狀消失、減輕而陰道分泌物檢查異常。治療后比治療前積分降低了1/3以上。無效:治療后檢査及癥狀同治療前。4、無效:治療后檢査及癥狀同治療前。(二)慢性宮頸炎1、痊愈癥狀消失，宮頸光滑，積分為O分。2、顯效癥狀明顯減輕，宮頸糜爛面由重度轉為中度至輕度，或由中度轉為輕度，治療后比治療前幾分降低2/3以上。3、有效癥狀減輕，糜爛面好轉，治療后比治療前積分降低1/3以上。4、無效治療后癥狀體征同治療前。(三)慢性盆腔炎1、痊愈癥狀、體征及檢査均恢復正常，積分為O分。2、顯效癥狀消失，婦科檢査有明顯改善，治療后比治療前積分降低2/3以上。3、有效癥狀、體征及檢査均有減輕，治療后比治療前積分降低1/3以上。4、無效治療后無改善。治療結果:<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>討論1.陰道炎、慢性宮頸炎、慢性盆腔炎是婦科婦科疾病的常見病癥，嚴重影響廣大的身心健康。我們應用本發(fā)明清熱利濕，化瘀止痛，可切中婦科炎癥病機，起到事半功倍的作用。2.通過300例臨床驗證表明，該中藥制劑是治療霉菌性、滴蟲性、細菌性陰道炎和慢性宮頸炎、慢性盆腔炎的有效藥物，總有效率達91.67%3.該中藥制劑對上述疾病所表現(xiàn)的陰癢、陰痛、宮頸炎性充血、腫脹及宮頸糜爛有顯著的改善作用，能夠有效的殺滅霉菌、滴蟲、細菌。說明該藥具有消炎抑菌、殺蟲止癢作用。4.該中藥制劑對濕熱下注所致的女性生殖系統(tǒng)慢性炎癥有顯著的治療作用，說明該藥具有清熱利濕、化瘀止痛功效。對臨床治愈的典型病例介紹-1.劉琪，女41歲，西安市人，教師，主訴，陰道分泌物增多，呈豆腐渣樣、水樣或黃色泡沫狀或膿性，服用多種治療婦科疾病的藥物效果不佳，病癥總是反復。后經婦科醫(yī)生診斷，確診因濕熱瘀阻所致陰道炎，推薦服用本發(fā)明10盒，服用后病情好轉，逐漸癥狀消失并且再無復發(fā)。2.吳雪也女，49歲，西安市人，報社，主訴，外陰瘙癢，陰道分泌物增多，呈白色粘稠或膿性，排尿困難，月經過多、痛經，經醫(yī)生診斷，確診為慢性宮頸炎，服用"本發(fā)明"20天后，月經正常，排尿正常、分泌物減少。3.曹渠女，43歲，西安市人，文員，下腹墜痛，腰骶部酸痛，常在勞累、性交后、排便時加重及月經前后加重，伴有低熱、月經增多和白帶增多，經醫(yī)生診斷為慢性盆腔炎，服用"本發(fā)明"20天后病情大有好轉，腰骶部酸痛基本消失。實施例1:(1)、將黃芩用沸水煮制10分鐘，備用；(2)、將川楝子清炒成表面焦黃色，備用；(3)、將一半量薏苡仁粉碎成100目的細粉，備用；(4)、剩余薏苡仁和粉碎所得余渣與敗醬草、柴胡、赤芍、陳皮四味藥材加水煎煮三次，第一、二次煎煮時間為1小時，第三次煎煮時間為0.5小時，濾液減壓濃縮至溫度為60°C，相對密度為1.17的稠膏，濃縮所得稠膏噴霧干燥成膏粉。(5)、將步驟(3)所得中藥粉、步驟(4)所得膏粉、交聯(lián)聚維酮20.62份和淀粉31.46份份，混勻，制備藥物制劑。實施例2:一(1)、將黃芩用沸水煮制10分鐘，備用；(2)、將川楝子清炒成表面焦黃色，備用；(3)、將一半量薏苡仁粉碎成100目的細粉，備用；(4)、剩余薏苡仁和粉碎所得余渣與敗醬草、柴胡、赤芍、陳皮四味藥材加水煎煮三次，第一、二次煎煮時間為1小時，第三次煎煮時間為0.5小時，濾液減壓濃縮至溫度為60°C，相對密度為1.20的稠膏，濃縮所得稠膏噴霧干燥成膏粉。(5)、將步驟(3)所得中藥粉、步驟(4)所得膏粉、交聯(lián)聚維酮21.7份和淀粉32.55份，混勻，制備藥物制劑。實施例3:(1)、將黃芩用沸水煮制10分鐘，備用；(2)、將川楝子清炒成表面焦黃色，備用；(3)、將一半量薏苡仁粉碎成100目的細粉，備用；(4)、剩余薏苡仁和粉碎所得余渣與敗醬草、柴胡、赤芍、陳皮四味藥材加水煎煮三次，第一、二次煎煮時間為1小時，第三次煎煮時間為0.5小時，濾液減壓濃縮至溫度為60°C，相對密度為1.17的稠膏，濃縮所得稠膏噴霧干燥成膏粉。(5)、將步驟(3)所得中藥粉、步驟(4)所得膏粉、交聯(lián)聚維酮21份和淀粉32份，混勻，制備藥物制劑。權利要求1、一種中藥婦炎康復制劑的制備方法，其處方組成為敗醬草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍、陳皮，其特征在于所述中藥制劑的制備方法為(1)、將黃芩用沸水煮制10分鐘，備用；(2)、將川楝子清炒成表面焦黃色，備用；(3)、將一半量薏苡仁粉碎成100目的細粉，備用；(4)、剩余薏苡仁和粉碎所得余渣與敗醬草、柴胡、赤芍、陳皮四味藥材加水煎煮三次，第一、二次煎煮時間為1小時，第三次煎煮時間為0.5小時，濾液減壓濃縮至溫度為60℃，相對密度為1.15-1.20的稠膏，濃縮所得稠膏噴霧干燥成膏粉；(5)、將步驟(3)所得中藥粉、步驟(4)所得膏粉、交聯(lián)聚維酮20.62份-21.7份和淀粉31.46份-32.55份，混勻，制備藥物制劑。2、根據(jù)權利要求1所述的一種中藥婦炎康復制劑的制備方法，其特征在于:所述的藥物制劑包括片劑、丸劑。3、根據(jù)權利要求1所述的一種中藥婦炎康復制劑的檢測方法，其特征在于:陳皮、黃芩、赤芍的薄層色譜鑒別性狀丸劑，顯深褐色，味微苦；片劑除去包衣，顯深褐色，味微苦。鑒別(l)取本品，置顯微鏡下觀察淀粉粒類圓形或多圓形，直徑220um，臍點星狀或短縫狀；(2)取本品10片或10粒，研細，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸千，殘渣加水10ml使溶解，置分液漏斗中，用乙醚提取2次，每次分別取15ml、10ml，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇提取4次，每次分別取15ml、10ml、10ml、10ml，合并正丁醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取橙皮苷對照品，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯甲醇水的體積比為10:1.7:1.3為展開劑，展至約5cm,取出，晾干，再以甲苯乙酸乙酯甲酸水的體積比為20:10:1:1的上層液為展開劑，展至約8cm，取出，晾干，噴以5%三氯花鋁乙醇溶液，置365nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(3)取本品IO片或IO粒，研細，加甲醇20ml,超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇lml使溶解，作為供試品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；再取黃芩對照藥材lg，加甲醇20ml，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水的體積比為5:3:1:l為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對照品色譜和對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取本品8片或8粒，研細，加甲醇30ml,超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，.作為供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加甲醇制成lm含lml的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜試驗，吸取上述兩種溶液各10ul，分別于點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸的體積比為40:5:10:0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱使斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍紫色斑點。全文摘要本發(fā)明涉及一種中藥婦炎康復制劑的制備方法及其檢測方法。目前，用于治療婦科疾病的方法有物理治療和藥物治療，物理治療會使宮頸口變硬，留有疤痕，對于沒有生育的病人，尤其是大寒體質的人，不宜采用物理治療；女性陰道內的生態(tài)環(huán)境為弱酸性，本身對很多細菌有一定的抑制作用，常用藥物治療破壞了陰道酸堿度，導致病菌急劇生長，陰道本身抵抗細菌的能力大大下降，使陰道炎的感染率增加。本發(fā)明由敗醬草、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍、陳皮以及輔料交聯(lián)聚維酮和淀粉，經檢測、特殊方法制備而成的一種治療婦科疾病的中藥。本發(fā)明方法工藝簡單合理，在有效降低成本的情況下，能較多的保留藥物有效成份，使得有效成份含量得到顯著提高。文檔編號A61K36/8994GK101658647SQ200910024048公開日2010年3月3日申請日期2009年9月25日優(yōu)先權日2009年9月25日發(fā)明者彬付,浩張,麗石,雒西萍,黃小華申請人:西安碑林藥業(yè)股份有限公司