專利名稱：一種中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是涉及一種抗氧化、具有增強免疫力功能的中藥組合 物及其制備方法。
背景技術(shù)：
隨著社會經(jīng)濟的繁榮、生活節(jié)奏的加快、競爭的日益激烈，現(xiàn)代人特別是中年人要 肩負家庭和工作的雙重重擔(dān)，影響人體健康的因素發(fā)生了很大的變化，長期超負荷的體力、 腦力勞動導(dǎo)致機體免疫功能下降、以至于引起多種疾病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)、細胞生物學(xué)及分子生物學(xué)的發(fā)展，使人們認識到免疫系統(tǒng)的紊亂不僅 會產(chǎn)生多種疾病，而且與人體衰老及老年人的多發(fā)病如腫瘤、高血壓、糖尿病的發(fā)生均有密 切關(guān)系，免疫功能具有增齡性變化，即年齡增大，其免疫功能下降或紊亂，結(jié)果胸腺萎縮，T 細胞損耗，從而導(dǎo)致機體衰老，壽命縮短。而中藥免疫調(diào)節(jié)劑可以增強老年人的免疫功能， 近十多年來，化學(xué)家們已從扶正固本等補益類中藥中得到了多種化合物，不但能促進機體 的免疫功能，而且證實了確實具有很強的免疫活性。因此尋找具有良好免疫調(diào)節(jié)作用，以預(yù) 防和治療腫瘤、心腦血管等多種疾病的藥物。(1)丹參是我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中常用藥物之一，有悠久的臨床應(yīng)用歷史。近幾十年來， 用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方法，結(jié)合化學(xué)、分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)等多學(xué)科的技術(shù)手段，對丹參進行了 較系統(tǒng)的研究，取得大量新的認識和實驗結(jié)果。從丹參中提取的化學(xué)成份分為脂溶性和水 溶性兩類，現(xiàn)已得到40種脂溶性化合物。其結(jié)構(gòu)主要分為兩類，即鄰醌類和鄰羥基對醌類， 屬于二萜醌類化合物。20世紀(jì)80年代初，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院，藥物研究所首先對丹參水溶性 成份進行系統(tǒng)研究，先后從丹參水溶性成份中分離得到一系列化合物。經(jīng)國內(nèi)學(xué)者的共同 努力，已經(jīng)分離出丹參水溶性成份近20種。主要為丹酚酸類，目前結(jié)構(gòu)明確的丹酚酸有13 種，如丹參素、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、迷迭香酸。這些化合物多具有酚酸性結(jié)構(gòu)，如 丹酚酸A為丹參素(水溶性各種成份的基本結(jié)構(gòu))與兩分子咖啡酸結(jié)合而成；丹酚酸B為 三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成；丹酚酸c則為兩分子丹參素縮合而成；迷迭香酸， 由一分子丹參素和一分子咖啡酸縮合而成等。我國藥典2005版一部52頁“丹參”項下規(guī) 定丹參日服用量為9-15克，安全食用劑量彡15g?，F(xiàn)代藥理研究表明丹參的水溶性成分具有很強的抗脂質(zhì)過氧化和自由基清除作 用。丹參水溶性提取物可顯著抑制Fe2+-半胱氨酸引起的大鼠心、腦、肝等組織中線粒體和 微粒體的脂質(zhì)過氧化，還可明顯抑制由Fe2+-Vc體系和Triton X_100引起的大鼠心、腦、肝、 腎線粒體腫脹，推測其保護作用與抗氧化作用有關(guān)。丹參的免疫調(diào)節(jié)作用主要是通過它對 細胞因子、抗體及免疫復(fù)合物、免疫細胞的作用發(fā)揮對免疫應(yīng)答的內(nèi)調(diào)節(jié)作用，且這種作用 具有雙向性。(2)黃芪黃芪臨床應(yīng)用十分廣泛，具有補氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡等功效。黃芪的化學(xué) 成分主要有皂苷、多糖、黃酮、氨基酸等，其中黃芪甲苷為其主要有效成分之一，具有抗炎、降壓、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜等作用，對免疫器官也有影響。因此對黃芪藥材及含黃芪(君藥)的中成 藥的質(zhì)量評價均以黃芪甲苷作為評價的指標(biāo)，且文獻報道較多。中華人民共和國藥典2005 年版一部“黃芪”項下規(guī)定黃芪日服用量為9-30克，安全食用劑量< 30g?，F(xiàn)代藥理研究表明黃芪可誘生干擾素、提高干擾素抗病毒能力、提高細胞免疫、 增加自然殺傷細胞(NK)和單核巨噬細胞系統(tǒng)功能，從而在一定程度上抑制病毒復(fù)制，進而 殺滅病毒。黃芪不但能抗病毒，而且還可幫助修復(fù)病毒產(chǎn)生的損害。臨床實踐也證明黃芪 對柯薩奇病毒、乙型肝炎病毒、輪狀病毒、巨細胞病毒等多種病毒引起的疾病療效確切，且 無有毒副作用報道。充分發(fā)掘黃芪作為免疫調(diào)節(jié)劑的潛力，很多疾病的進展和遷延不愈都 與病人自身免疫系統(tǒng)失衡-即免疫功能亢進或免疫力下降有關(guān)，而黃芪不但具有雙向免疫 調(diào)節(jié)作用，而且其清除自由基、促進蛋白質(zhì)合成、誘生干擾素等作用可以增強機體抵抗力， 減輕病原體對機體的損害，促進受損組織復(fù)原，可謂一藥多效。所以，無論是將黃芪用于免 疫系統(tǒng)疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、銀屑病等的治病，還是配合其他藥物，用于其他疾病的治 療，調(diào)動機體免疫系統(tǒng)，提高機體免疫力，共同對抗疾病損害以達到提高療效，縮短療程的 目的，都是值得進一步研究的。(3)三七三七為五加科植物參三七的干燥根，主產(chǎn)于云南、廣西及四川等地。味甘、微苦，性 溫，歸肝、胃、心、小腸經(jīng)，具有化瘀止血、消腫定痛、補虛、強壯等作用。主要用于治療咯血、 外傷出血、跌打腫痛。近年來用于治療冠心病、糖尿病、抗心絞痛、抗血栓等。三七塊根含總 皂昔12%，是三七的主要生理活性成分，可分成人參二醇型(Rb型)和人參三醇型(Rg型) 皂苷。另外尚含具有止血活性的三七素(0-草?；?1^-(!-0-二氨基丙酸)，具有增強免 疫功能的多糖等多種成份。我國藥典2005版一部9頁“三七”項下規(guī)定三七日服用量為 3 9克，安全食用劑量<9克。 三七總皂苷，與人參皂苷相似，具有滋補強壯及抗衰老作用。三七皂苷能抑制脂質(zhì) 過氧化、提高腦組織SOD活性、降低腦組織和血液中的脂褐素含量。三七能增強人體的免疫 功能。三七總皂苷能提高大、小鼠的巨噬細胞的吞噬指數(shù)，提高NK細胞的活性。三七皂苷 還能升高紅細胞C3b受體花結(jié)率，增強紅細胞免疫功能。三七具有免疫調(diào)節(jié)作用，能使過低 或過高的免疫反應(yīng)恢復(fù)正常，不干擾正常的免疫反應(yīng)。周小玲等報道，TSPNS能提高大鼠的 特異性和非特異性細胞的免疫功能。目前藥典上規(guī)定的丹參、三七、黃芪的最低日服用量比較高，藥劑的載藥量低，效 果不明顯，同時患者依從性不好。再有，市面上的關(guān)于抗氧化，增強免疫力的大復(fù)方制劑比 較多，成分復(fù)雜，主要有效成分含量較低。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種具有抗氧化、能夠增強免疫力 的中藥組合物及其制劑，載藥量高，服用量低。本發(fā)明另一目的是提供了該組合物的制備方法。本發(fā)明含有一個目的提供了該組合物在制備抗氧化、增強免疫力藥物或保健品上 的應(yīng)用。本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的
本發(fā)明的中藥組合物，其是由重量份原料藥丹參2 8份、黃芪7 13份、三七 0.5 2份組成。本發(fā)明的中藥組合物，優(yōu)選是由重量份原料藥丹參4 6份，黃芪9-11份、三七 1 2份組成。本發(fā)明的中藥組合物，最佳是由重量份原料藥丹參5份、黃芪10份、三七1份組 成。本發(fā)明的中藥組合物中按重量百分比計丹參素含量不得低于147mg/100g。 本發(fā)明的中藥組合物可以結(jié)合各種載體如賦型劑或輔助劑制成藥學(xué)上可接受的 劑型，其中制劑的劑型分為口服、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)給藥?？诜┓譃槠胀ㄆ瑒?膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑、口服液、軟膠囊、口崩片、散劑、膏劑、丹劑、丸劑、栓劑及其這些劑 型的速釋制劑或長效制劑、粉霧劑、氣霧劑、凝膠劑。皮下或靜脈給藥分為注射劑、凍干粉針 劑等。優(yōu)選制成膠囊劑滴丸劑等。本發(fā)明所提供的上述中藥組合物的制備方法，包括以下步驟(1)丹參、三七浸膏提??；(2)黃芪浸膏提??；(3)丹參、三七、黃芪浸膏混合均勻即得組合物。其中，步驟(1)中所述的丹參、三七浸膏提取方法包括以下步驟a、丹參、三七藥材制成粗粉；b、上述丹參、三七藥材5-7倍量水，回流提取1-3次，每次1-2小時，合并提取液， 濾過；C、提取液濾過濃縮后醇沉，取上清液；d、將上述上清液過濾濃縮后，得丹參三七浸膏。所述的步驟b中優(yōu)選丹參、三七藥材用7倍量水回流提取2次，每次2小時。步 驟c中優(yōu)選提取液濃縮至生藥體積比為1 1，濃縮液用95 %乙醇醇沉至醇濃度為65 % 75%，優(yōu)選醇沉濃度為70%。上述步驟(1)中丹參、三七浸膏的具體提取方法如下a、取符合2005年版藥典相 關(guān)規(guī)定的丹參、三七為原料，丹參藥材切制成飲片；三七粉碎成0. 2-0. 5cm左右的粗顆粒； b、丹參、三七藥材混合加水煎煮兩次，每次加入藥材總重7倍的水，每次回流提取2小時，合 并提取液，濾過；C、提取液過濾后加入濃縮罐，真空減壓濃縮至相對密度1. 10 1. 20 (50 60°C )，加熱溫度75 80°C，真空度0. 06 0. IMpa，濃縮液加入95 %乙醇，至醇濃度為 70 %，靜置12h，取上清液過濾；d、上清液過濾后加入濃縮罐，加熱溫度75 80°C，真空度 0. 06 0. IMpa,真空減壓濃縮至相對密度1. 30 1. 38 (50 60°C )，得丹參三七浸膏，進 入30萬級潔凈區(qū)，密封，備用。本發(fā)明的步驟(2)中黃芪浸膏的提取方法包括黃芪飲片用4-6倍量水或含水乙 醇提取1-4次，每次提取1-2小時(優(yōu)選6倍量，提取2次，第一次2小時，第二次1小時)， 合并提取液；提取液濃縮后醇沉至濃度為60 70% (優(yōu)選60% )，回收乙醇濃縮即得黃芪浸膏。上述步驟中所述的含水乙醇為45-95%乙醇，優(yōu)選95%乙醇。本發(fā)明的步驟(2)黃芪浸膏的具體提取方法取符合2005年版藥典相關(guān)規(guī)定的黃芪藥材為原料，切制成飲片；加水煎煮兩次，每次加入藥材重量6倍的水，第一次回流提取2 小時，第二次回流提取1小時，合并提取液，濾過提取液過濾后加入濃縮罐，真空減壓濃縮 至相對密度1. 05 1. 20 (50 60°C )。加熱溫度75 80°C，真空度0. 06 0. IMpa ；濃縮 液加入95%乙醇，至醇濃度為60%，靜置12h，取上清液過濾；上清液加入濃縮罐，加熱溫度 75 80°C，真空度0. 06 0. IMpa,真空減壓濃縮至相對密度1. 22 1. 30 (50 60°C )，得 黃芪浸膏，進入30萬級潔凈區(qū)，密封，備用。本發(fā)明的制備工藝簡單，適合大生產(chǎn)，而且收率高，含量穩(wěn)定，生物利用度好。下面通過試驗例來了解本發(fā)明，說明本發(fā)明的有益效果。試驗例1本發(fā)明藥物的含量測定方法及方法學(xué)驗證1、藥品，試劑與儀器1.1藥品選自實施例11. 2儀器色譜儀=AgilentllOO高效液相色譜儀檢測器=Agilent VffD型紫外檢測
器1.3試劑甲醇(色譜純)2、供試品的制備取實施例1中的藥物，混勻，研成細粉，取0. 4g置IOml量瓶，甲醇超聲30分鐘，放 至室溫，甲醇定容至刻度。3、對照品的制備取丹參素鈉對照品(每Img丹參素鈉相當(dāng)于0.9mg丹參素)適量，精密稱定，加甲 醇制成每Iml相當(dāng)于含0. Img丹參素。4、色譜條件檢測器檢測波長281nm。色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，5 μ m，250 X 4. 6mm。流動相甲醇水醋酸=50 450 4. 2流速0.8ml/min理論塔板數(shù)按丹參素計算應(yīng)不低于2000 ；30°C柱溫下進行測定。5、測定方法精密吸取供試品溶液和對照品溶液各20μ 1，進入高效液相色譜儀，測定丹參素的含量。6、丹參素含量測定方法學(xué)驗證6. 1.含量測定線性試驗 對照品溶液(丹參素標(biāo)準(zhǔn)溶液0. 226mg/ml)中，分別取Iml分別置2、5、10、50ml
容量瓶甲醇定容，分別取5μ 1進HPLC，以丹參素含量為橫座標(biāo)，以峰面積為縱座標(biāo)，作丹參 素的標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)值見表1。表1丹參素含量測定線性試驗 回歸方程γ = 5005. 2X-3. 406，相關(guān)系數(shù)R = 0. 9999，有很好的線性回歸。6.2.進樣精密度實驗對同一供試品溶液重復(fù)進樣6次，以峰面積計算，結(jié)果RSD% = 1. 6，說明該儀器的 比較穩(wěn)定。見表2。表2進樣精密度 6. 3溶液穩(wěn)定性試驗取供試品溶液，在室溫條件下(18 20°C )分別于0小時，1小時，2小時，4小時， 8小時，12小時，24小時測定樣品中丹參素含量，樣品中丹參素含量24小時內(nèi)穩(wěn)定。見表 3。表3樣品溶液穩(wěn)定性 6. 4.方法的重復(fù)性實驗取實施例1的藥物粉末六份(0. 4g/份)，以上述供試品制備方法處理，分別進行液 相色譜定量測定，得出方法的變異系數(shù)為2. 2%，說明該含量測定方法重復(fù)性好。見表4。表4吉智膠囊中丹參素含量測定方法精密度 6. 5回收率實驗采用加樣回收法，分別取實施例1膠囊20粒，混合均勻，取6份，0. 2g/份，精密稱定，分別置IOml容量瓶，分別加入丹參素鈉對照品(0. 175mg/ml)2ml,甲醇定容，混勻，離心 取上清液測定含量。計算出吉智膠囊中丹參素平均回收率為100. 2%, RSD為2. 1%，說明 該含量測定方法準(zhǔn)確，能夠真實反應(yīng)產(chǎn)品的質(zhì)量。見表5。
表5HPLC對吉智膠囊中丹參素含量測定方法的回收試驗
由此可見，本發(fā)明的藥物組合物含量穩(wěn)定。 試驗例2抗氧化動物試驗 1材料與方法
1.1樣品取實施例1的樣品
1. 2試驗動物二級昆明雌性小鼠50只，體重18-22g，約3月齡，由軍科院提供。 1. 3劑量選擇本品人體日推薦攝入量為3. 6g/60kgBff,設(shè)三個劑量組，分別為 0. 30,0. 6,1. 80g/kg, Bff,即分別相當(dāng)于人體攝入量的5,10,30倍。樣品內(nèi)容物經(jīng)過蒸餾水 配置成溶液，均經(jīng)口灌胃，灌胃量0. 2ml/10g. Bff0另設(shè)D-半乳糖模型對照組和空白對照組。1. 4主要儀器UV-1201紫外可見分光光度計、低溫冷凍離心機、超聲勻漿器、水浴箱、丙二醛、試 劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒，谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒，考馬斯亮蘭蛋白測定試 劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供。1. 5試驗方法取二級昆明種雌性小鼠50只，隨機分成5組，除空白對照組外，其余動物用D-半 乳糖500mg/kg，BW腹腔注射造模，注射量為0. lml/10g, BW，每日1次，連續(xù)造模6周，取尾 血測定給予不同濃度的受試樣品，模型對照組給予等體積蒸餾水，在給與受試樣品的同時， 模型對照組和各劑量組繼續(xù)給予相同劑量的D-半乳糖，持續(xù)30天。于試驗?zāi)┢谌「?，制?5%肝勻漿后測定過氧化脂質(zhì)含量和抗氧化酶活力。1. 6過氧化脂質(zhì)含量測定1. 7抗氧化酶活力測定1. 7. 1肝勻漿中超氧化物歧化酶活力測定，按試劑盒的要求測定5%肝勻漿中SOD活力，并根據(jù)組織蛋白含量，將單位換算成U/mgprot。1. 7. 2肝勻漿中谷胱甘肽過氧化物酶活力測定按試劑盒的要求測定0. 25%肝勻 漿中GSH-PX活力，并根據(jù)組織蛋白含量，將單位換算成U/mgprot。1. 8組織蛋白含量測定應(yīng)用考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒測定肝勻漿組織蛋 白含量。1. 9結(jié)果統(tǒng)計試驗數(shù)據(jù)用SPSS10. 0進行統(tǒng)計檢驗，其中空白對照組與模型對照組采用T-檢驗， 模型對照組與各劑量組采用方差分析及兩兩檢驗。如方差不齊者采用數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后仍 不齊則采用非參數(shù)統(tǒng)計。2 結(jié)果2. 1對小鼠體重的影響經(jīng)口給予不同劑量的內(nèi)容物后，各組動物生長，活動正常，低、高劑量組動物增重 高于模型對照組，且差異有顯著性(P < 0. 05).，見表1。表1藥物對D-半乳糖造模試驗小鼠體重的影響 2. 2 對小鼠 MDA/S0D/GSH-PX 的影響經(jīng)口服給予不同劑量的樣品后，中、高劑量組肝勻漿的MDA含量均低于模型對照 組，且差異有顯著性(P < 0. 05)；低、高劑量組肝勻漿的SOD活力均高于模型對照組，且差 異有顯著性，P <0.05 ；高劑量組肝勻漿的GSH-PX活力高于模型對照組，且差異有顯著性。 ρ < 0. 05，見表 2-4。表2造模分組后MDA水平 表3對MDA、SOD的影響 表4對GSH-PX的影響 3 總結(jié)在D-半乳糖造模動物試驗中，經(jīng)口服給予不同劑量的本發(fā)明的藥物后，各組動物 生長、活動正常，低、高劑量組動物增重高于正常對照組，且差異顯著性。中高劑量組肝勻漿 的MDA含量均低于模型對照組，且差異顯著性；低高劑量組肝勻漿的SOD活力均高于模型對 照組，且差異顯著性；高劑量組肝勻漿的GSH-PX活力高于模型對照組，且差異顯著性。因此 本發(fā)明的藥物具有抗氧化功能作用。本發(fā)明保護的所有的藥物及具體實施例中所涉及的組合物或制劑均具有抗氧化 功能。試驗例3增強免疫力功能動物實驗1實驗材料與方法1.1樣品實施例一1.2實驗動物18_22g雌性二級昆明種小鼠120只，由軍科院提供
1.3劑量選擇樣品人體日推薦攝入量為3. 6g/60kgBW，設(shè)三個劑量組，分別為0. 30,0. 6,1. 80g/ kg, BW，即分別相當(dāng)于人體攝入量的5、10、30倍。樣品內(nèi)容物經(jīng)過蒸餾水配置成溶液，均經(jīng) 口灌胃，灌胃量0. 2ml/10g. Bff,對照給予等量蒸餾水，每日一次，連續(xù)給予30填，末次給藥 后24小時測定各項指標(biāo)。免疫一組40只小鼠，分為4組，每組10只，進行HC50測定、抗體 生成細胞檢測、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)；免疫二組40只小鼠，分為4組，每組10只，進行小鼠腹腔 巨噬細胞吞噬細胞雞紅細胞實驗，小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗，NK細胞活性測定實驗，臟/體比 值測定；免疫三組40只小鼠，每組10只，分為4組，進行碳廓清實驗。1.4儀器與試劑游標(biāo)卡尺、SRBC、微量注射器、無菌解剖器材、RPMT1640細胞培養(yǎng)液、刀豆蛋白、異 丙醇、MTT、吸管、722型可分光光度計、離心機等。1.5實驗方法1.5. 1臟器/體重比值測定給藥30天后，稱取脾臟、胸腺，計算臟/體比。1. 5. 2遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)給藥30天后，第25天腹腔注射2% SRBC、免疫4天后，測定左右后趾部厚度，同時 在測量部位注射20% SRBCA20ul，24小時后再次測量。1. 5. 3ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗給藥30天，無菌取脾，制成擔(dān)心包懸液，Hanks液洗3遍，調(diào)整細胞濃度為3 X IO6個 /ml。將細胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔lml。一孔加75ulConA液(100ug/ml)， 另一孔為對照，置5%C02孵箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔吸去上清液0.4mml。加入 0. 7ml不含小牛血清的RPMT1640細胞培養(yǎng)液，同時加入MTT50ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng) 結(jié)束后，每孔加入Iml酸性異丙醇，吹打均勻，使紫色結(jié)晶完全溶解后，可見分光光度計以 75nm波長測定光密度值。1. 5. 4半數(shù)溶血值的測定給藥30天后，于第25天腹腔給藥注射2% SRBC,免疫5天后，摘眼球收集血清，試 管內(nèi)加入250倍稀釋的血清lml、10% SRBCO. 5ml，補體1ml，37度水浴20分鐘，冰浴終止反 應(yīng)，離心，取上清液1ml，加都氏試劑3ml，10分鐘后540nm比色。1. 5. 5抗體生成細胞檢測給藥30天，于第25天腹腔注射2% SRBC，免疫5天后，脫白處死，取脾，200目篩網(wǎng) 過濾，用Hanks液洗3遍，每次100r/min離心lOmin，將細胞懸浮于5mlRPMT1640細胞培養(yǎng) 液中。將表層培養(yǎng)基中加熱溶解，45水浴保溫，與等量2倍量濃度Hanks液混合，分裝小試 管，每管0. 5ml，加入50ul 110 % SRBC, 20ul脾細胞懸液，混勻，倒片，二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng) lh，加入用SA緩沖液稀釋的補體(1 10)，繼續(xù)培養(yǎng)1小時，技術(shù)溶血空斑點。1.5. 6小鼠碳廓清試驗給藥30天后，尾靜脈注射3. 5倍稀釋的印度墨汁，分別于第2、10分鐘內(nèi)吸取血 20ul，加入到3mll%碳酸鈉溶液中，600rmm比色。另取肝疲稱重，計算吞噬指數(shù)。1. 5. 7小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗給藥30天后，每鼠腹腔注射20%雞紅細胞懸液1ml，間隔30min，頸椎脫白處死動物，將其仰位固定鼠板上，正中剪開腹壁皮膚，經(jīng)腹腔諸如生理鹽水2ml。轉(zhuǎn)動鼠板IminJl 出腹腔洗液1ml，平均分滴于2片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盤內(nèi)，于30度孵箱中溫 育30min，生理鹽水漂洗，晾干，以1 1丙醇甲醇溶液固定，4% Giemsa染色3min，計數(shù)吞 噬雞紅細胞的巨噬細胞數(shù)及被吞噬細胞數(shù)。1.5. 8NK細胞活性測定試驗前24h將YAC-I細胞進行傳代培養(yǎng)，用RPMT1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為 4X IO5個/ml.無菌取脾，制成單細胞懸液，Hanks液洗3次，調(diào)整細胞濃度為4X IO7個/ml。 取靶細胞和效應(yīng)細胞各IOOul (效靶比50 1)，加入U型96孔培養(yǎng)板中看靶細胞自然釋放 孔加靶細胞和培養(yǎng)液各IOOul，靶細胞最大釋放孔加靶細胞和NP40各IOOul，均設(shè)三個 復(fù)孔，于37度，5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，每孔吸取上清液lOOul，置平底96孔培養(yǎng)版 中，同時加入LDH基液lOOul，反應(yīng)3min，每孔加入lmol/1的HCI30ul，在酶標(biāo)儀493nm測定 光密度值。1.6結(jié)果統(tǒng)計試驗數(shù)據(jù)用SPSS10. 0進行統(tǒng)計檢驗，其中空白對照組與模型對照組采用T-檢驗， 模型對照組與各劑量組采用方差分析及兩兩檢驗。如方差不齊者采用數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后仍 不齊則采用非參數(shù)統(tǒng)計。2 結(jié)果2. 1對小鼠體重的影響，見表5-8.表5各組小鼠初期體重 表6各組小鼠中期體重 表7各組小鼠的結(jié)束體重 表8樣品對小鼠體重增重的影響 由表5-8可知，經(jīng)口給予不同劑量的樣品后，各組動物生長活動良好，各組動物增 重與對照組比較，差異無顯著性。2. 2對小鼠臟器/體重比值的影響，見表9表9對小鼠臟器/體重比值的影響 由表9可見，各劑量組小鼠脾臟，胸腺/體重比值與對照組比較，差異均無顯著性。2. 3對小鼠免疫功能的影響2. 3. 1對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響見表10表10小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響
13 由表10可見，中、高劑量組小鼠攻擊前后足趾厚度差異均高于對照組，且差異有 顯著性。2. 2. 3對ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗的影響表11對ConA誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗的影響 由表11可見，各劑量組的光密度差值與對照組相比，差異均無顯著性。2. 4對體液免疫的影響2. 4. 1對小鼠半數(shù)溶血值的影響表12對小鼠半數(shù)溶血值(HC50)的影響 由表12可見，低、高劑量組小鼠溶血值高于對照組，且差異有顯著性。2. 4. 2對小鼠抗體生成細胞試驗的影響表13對小鼠抗體生成細胞試驗的影響 由表13可見，各劑量組小鼠抗體生成細胞與對照組相比，差異均無顯著性。2. 5對單核-巨噬細胞功能的影響2. 5. 1對小鼠碳廓清試驗的影響表14對小鼠碳廓清試驗的影響 由表14可見，各劑量組小鼠的吞噬指數(shù)與對照組相比，差異無顯著性。2. 5. 2對小鼠腹腔巨噬細胞雞紅細胞試驗的影響表15對小鼠腹腔巨噬細胞雞紅細胞試驗的影響 由表15可見，各劑量組的吞噬百分率及吞噬指數(shù)與對照組相比，差異均無顯著 性。2.6NK細胞活性的影響表16對小鼠NK細胞活性的影響
由表16可見，中、高劑量NK細胞活性均高于對照組，且差異有顯著性。3、總結(jié)經(jīng)口給予不同劑量的樣品30天后，各組動物生產(chǎn)活動正常，遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)中， 中、高劑量組小鼠攻擊前后足趾厚度均高于對照組，且差異有顯著性；小鼠半數(shù)溶血值測定 中，低、高劑量組小鼠半數(shù)溶血值高于對照組，且差異有顯著性；NK細胞活性測定中，中、高 劑量組NK細胞活性均高于對照組，且差異有顯著性。其它各項試驗均未見免疫抑制現(xiàn)象， 試驗結(jié)果表明本發(fā)明的組合物具有增強免疫力功能的作用。本發(fā)明權(quán)利要求書保護的所有組合物及實施例中涉及的制劑均具有上述增強免 疫力功能的作用。為了更好的了解本發(fā)明，下面通過具體實施例方式來說明，但其并不是對本發(fā)明 保護范圍的限定，同時可以對這些實施方案進行多種變化和修飾。
具體實施例方式實施例1丹參300g、三七藥材60g混合加水煎煮兩次，每次加入藥材總重7倍的水，每次回 流提取2小時，合并提取液(其中丹參素總量為3735mg)，提取液過濾后加入濃縮罐，真空減 壓濃縮至相對密度1. 10 1. 20 (50 60°C )。濃縮液加入95%乙醇，至醇濃度為70%，靜置 12h。取上清液過濾后加入濃縮罐，加熱溫度75 80°C，真空度0. 06 0. IMpa0真空減壓 濃縮至相對密度1. 30 1. 38(50 60°C )，得丹參三七浸膏，其中丹參素總量為986. 4mg。取黃芪藥材600g加水煎煮兩次，每次加入藥材重量6倍的水，第一次回流提取2 小時，第二次回流提取1小時，合并提取液，濾過。提取液過濾后加入濃縮罐，真空減壓濃縮 至相對密度1.05 1.20(50 60°C )，濃縮液加入95%乙醇，至醇濃度為60%，靜置12h。 取上清液過濾；濾液加入濃縮罐，加熱溫度75 80°C，真空度0. 06 0. IMpa，真空減壓濃 縮至相對密度1.22 1.30 (50 60°C )，得黃芪浸膏，進入30萬級潔凈區(qū)，密封，備用。黃芪浸膏、丹參三七浸膏加水至稀浸膏比重1. 15 1. 18(50 60°C)。過篩與糊 精300g噴霧制粒，裝膠囊，制成1000粒。0.4克/粒。丹參素含量為167mg/100g每日3 次，每次3粒。相當(dāng)于每天服用丹參藥材2. 7克，黃芪藥材5. 4克，三七藥材0. 54克，用量 低于藥典服用量。實施例2取丹參300g、三七60g混合加5倍量水煎煮1次，每次回流提取1小時，合并提取
16液(其中丹參素總量為3963mg)，提取液過濾真空減壓濃縮至相對密度1. 10 1. 20(50 600C )后加入95%乙醇，至醇濃度為70%，靜置12h。取上清液過濾真空減壓濃縮至相對密 度1. 30 1. 38(50 60°C )，得丹參三七浸膏，其中丹參素總量為491. 2mg。取黃芪藥材加6倍量水煎煮3次，第一次回流提取2小時，第二次回流提取1小時， 合并提取液，濾過。提取液過濾后真空減壓濃縮至相對密度1. 05 1. 20(50 60°C )，濃 縮液加入95%乙醇，至醇濃度為70%，靜置12h。取上清液過濾，真空減壓濃縮至相對密度 1.22 1.30，得黃芪浸膏，密封，備用。黃芪浸膏、丹參三七浸膏加水至稀浸膏比重1. 15 1. 18(50 60°C )。過篩與糊 精300g噴霧制粒，裝膠囊，制成1000粒。0.4克/粒。丹參素含量為83mg/100g。實施例3取丹參300g、三七60g混合加6倍量水煎煮3次，每次回流提取1. 5小時，合并提取 液(其中丹參素總量為3963mg)，提取液過濾真空減壓濃縮至相對密度1. 10 1. 20(50 600C )后加入95%乙醇，至醇濃度為70%，靜置12h。取上清液過濾真空減壓濃縮至相對密 度1. 30 1. 38(50 60°C )，得丹參三七浸膏，其中丹參素總量為1046. 6mg。取黃芪藥材加6倍量水煎煮3次，第一次回流提取2小時，第二次回流提取1小時， 合并提取液，濾過。提取液過濾后真空減壓濃縮至相對密度1. 05 1. 20(50 60°C )，濃 縮液加入95%乙醇，至醇濃度為70%，靜置12h。取上清液過濾，真空減壓濃縮至相對密度 1.22 1.30，得黃芪浸膏，密封，備用。黃芪浸膏、丹參三七浸膏加水至稀浸膏比重1. 15 1. 18(50 60°C )。過篩與糊 精300g噴霧制粒，裝膠囊，制成1000粒，0.4克/粒。丹參素含量為177. lmg/100g。實施例4取丹參300g、三七60g混合加7倍量水煎煮2次，每次回流提取2小時，合并提取 液(其中丹參素總量為3735mg)，提取液過濾真空減壓濃縮至相對密度1. 10 1. 20(50 600C )后加入95%乙醇，至醇濃度為65%，靜置12h。取上清液過濾真空減壓濃縮至相對密 度1. 30 1. 38(50 60°C )，得丹參三七浸膏，其中丹參素總量為518. 4mg。取黃芪藥材加6倍量45%乙醇回流提取3次，第一次2小時，第二次1小時，合并 提取液，濾過。提取液過濾后真空減壓濃縮至相對密度1. 05 1. 20 (50 60°C )，濃縮液加 入95%乙醇，至醇濃度為60%，靜置12h。取上清液過濾，真空減壓濃縮至相對密度1. 22 1.30，得黃芪浸膏，密封，備用。黃芪浸膏、丹參三七浸膏加水至稀浸膏比重1.15 1.18(50 60°C)。過篩與 聚乙二醇300g，混合均勻，熔融，上滴丸機，制成滴丸10000丸。40mg/丸。丹參素含量為 177.lmg/100g。實施例5取丹參300g、三七60g混合加7倍量水煎煮2次，每次回流提取2小時，合并提取 液(其中丹參素總量為3735mg)，提取液過濾真空減壓濃縮至相對密度1. 10 1. 20(50 600C )后加入95%乙醇，至醇濃度為75%，靜置12h。取上清液過濾真空減壓濃縮至相對密 度1. 30 1. 38(50 60°C )，得丹參三七浸膏，其中丹參素總量為873mg。取黃芪藥材加6倍量95%乙醇回流提取3次，第一次2小時，第二次1小時，合并 提取液，濾過。提取液過濾后真空減壓濃縮至相對密度1. 05 1. 20 (50 60°C )，濃縮液加
17入95%乙醇，至醇濃度為70%，靜置121!。取上清液過濾，真空減壓濃縮至相對密度1. 22 1.30，得黃芪浸膏，密封，備用。黃芪浸膏、丹參三七浸膏加水至稀浸膏比重1.15 1.18(50 60°C)。過篩與 聚乙二醇300g，混合均勻，熔融，上滴丸機，制成滴丸10000丸。40mg/丸。丹參素含量為 177.lmg/100g。實施例6取丹參100g、黃芪700g、三七25g組成混合物，按照實施例1的制備方法制得混合 浸膏后再與甘露醇90克、EDTA15克和蒸餾水15ml，上述組分混合均勻后，冷凍干燥，分裝 1000 支。實施例7取丹參800g、黃芪1300g，三七200g組合物，按照實施例1的制備方法制得混合浸 膏后，與加入5%交聯(lián)聚維酮，0. 1 %的硬脂酸鎂，50 %的微晶纖維素，用適量乙醇溶液制成 軟材，制粒，60°C鼓風(fēng)干燥，制粒，整粒，壓制成片，即得□腔崩解片。實施例8取丹參40g、黃芪110g、三七IOg的組合物，按照實施例1中的制備方法制得混合 浸膏，再與適量的淀粉，微晶纖維素、硬脂酸鎂等混合均勻后，濕法制粒，壓片即得。實施例9取丹參600g、黃芪900g、三七200g的組合物，按照實施例1中的制備方法制得混 合浸膏，再與550g糊精混合均勻后，噴霧制粒，即得顆粒劑。
權(quán)利要求
一種中藥組合物，其是由重量份原料藥丹參2～8份、黃芪7～13份、三七0.5～2份組成。
2.如權(quán)利要求1所述的一種中藥組合物，其特征在于所述的組合物是由重量份原料 藥丹參4 6份，黃芪9-11份、三七1 2份組成。
3.如權(quán)利要求2所述的一種中藥組合物，其特征在于所述的組合物是由重量份原料 藥丹參5份、黃芪10份、三七1份組成。
4.權(quán)利要求1 3所述的中藥組合物可以制成藥學(xué)上可接受的劑型。
5.權(quán)利要求1或3任一項所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)丹參、三七浸膏提?。?2)黃芪浸膏提??；(3)丹參、三七、黃芪浸膏混合均勻即得組合物。
6.如權(quán)利要求5所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述的丹參、 三七浸膏提取方法包括以下步驟a、丹參、三七藥材制成粗粉；b、上述丹參、三七藥材5-7倍量水，回流提取1-3次，每次1-2小時，合并提取液，濾過；c、提取液濾過濃縮后醇沉，取上清液；d、將上述上清液過濾濃縮后，得丹參三七浸膏。
7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的步驟b中丹參、三七藥材用7倍 量水回流提取2次，每次2小時。
8.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于所述的步驟c中濃縮液用95%乙醇醇 沉至醇濃度為65% 75%。
9.如權(quán)利要求5中所述的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中黃芪浸膏的提取 方法包括黃芪飲片用4-6倍量水或含水乙醇提取1-4次，每次提取1-2小時，合并提取液； 提取液濃縮后醇沉至濃度為60 70%，回收乙醇濃縮即得黃芪浸膏。
10.如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于所述的步驟中用6倍量水或含水乙醇 提取2次，第一次2小時，第二次1小時。
11.如權(quán)利要求9或10所述的制備方法，其特征在于所述的步驟中含水乙醇為 45-95% 乙醇。
12.如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于所述的步驟B中醇沉濃度為60%。
13.權(quán)利要求1 3任一項所述的中藥組合物在制備抗氧化，增強免疫力藥品或保健品 上的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法，該組合物是由重量份原料藥丹參2～8份、黃芪7～13份、三七0.5～2份組成，該組合物具有抗氧化、能夠增強免疫力等功效。
文檔編號A61P37/04GK101897752SQ20091006906
公開日2010年12月1日 申請日期2009年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月31日
發(fā)明者李愛民, 李長文 申請人:金士力佳友(天津)有限公司