專利名稱：二酮基哌嗪和包含它們的組合物的使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及采用一些二酮基哌溱抑制血小板活化因子作用的方法。本發(fā)明亦涉及采用這些二酮基哌。秦抑制白細胞介素8(IL-8)的生成和/或釋放的方法。最后，本發(fā)明涉及包含二酮基哌口秦的藥物組合物。
背景技術(shù)：
血小板活化因子(PAF; 1-0-烷基-2-乙?；?^2-甘油-3-磷酸膽堿)是具有各種生理活性的有效的炎性磷酯介體。它由嗜堿粒細胞、單核細胞、巨噬細胞、多形核白細胞、嗜曙紅細胞、嗜中性白細胞、天然殺傷淋巴細胞、血小板和內(nèi)皮細胞，以及由在適當免疫和非免疫的刺激下腎和心臟的組織產(chǎn)生和釋放。參見PCT申請WO 94/04537。 PAF通過結(jié)合在許多細胞和組織中發(fā)現(xiàn)的特異的PAF受體介導生物反應。對PAF和其類似物結(jié)構(gòu)-活性的研究說明PAF結(jié)合這些受體的能力是結(jié)構(gòu)特異的和立體有擇的。參見PCT WO94/04537。
當PAF介導基本的生物反應時，它還表現(xiàn)出在病理學免疫和炎性反應中起作用。許多出版的研究論文已經(jīng)提供證據(jù)，說明PAF與疾病有關(guān)，其中包括關(guān)節(jié)炎、急性炎癥、哮喘、變態(tài)反應、心血管疾病、腫瘤性疾病、內(nèi)毒素休克、疼痛、牛皮癬、眼發(fā)炎、局部缺血、胃腸潰瘍、心肌梗死、炎性腸疾病和急性呼吸窘迫綜合征。參見PCT申請WO 94/04537。
PAF與病理學的發(fā)炎和免疫狀態(tài)有關(guān)已經(jīng)促進大量研究以鑒別PAF受體拮抗劑，并且已經(jīng)鑒別許多不同化學結(jié)構(gòu)的化合物為PAF拮抗劑。參見，例如，PCT申請WO 94/04537和WO 96/00212(和這兩篇申請中引用的參考文獻)，PCT申請WO 95/18610和WO 99/49865,美國專利4,940,709,5,358,938, 5,434,151， 5,463,083, 5,648，486, 5,741,809 5,792,776， 5,780,503，5,856,323,日本申請63 290868, Shimazaki等，Chem. Phare. Bull" 35 (8)，3527-3530 (1987), Shimazaki等，J. Med. Chem., 30,1709-1711 (1987)， Yoshida等，Prog. Biochem. Pharmacol" 22,68-80 (1988)， Shimazaki等，Lipids, 26 (12)，1175-1178 (1991)。已知大量的病理學免疫和炎性反應由PAF介導，有鑒別抑制PAF活性的新的化合物和組合物的需要。
已經(jīng)報道二酮基哌。秦具有許多生理活性。參見，例如，美國專利4,289，759(免疫調(diào)節(jié)劑)，4,331,595(免疫調(diào)節(jié)劑)，4,940,709(PAF拮抗劑)，5，700，804(纖溶酶原活化因子抑制劑的抑制劑)，5，750，530(纖溶酶原活化因子抑制劑的抑制劑)，5，990,112(金屬蛋白抑制劑)，PCT申請WO 97/36888(法呢-蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑)和WO 99/40931(中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷治療劑),EP申請43219(免疫調(diào)節(jié)劑)，日本申請63 290868 (PAF拮抗劑)，日本申請317647S(免疫抑制劑)，Shimazaki等，Chem. Phare. Bull" 35 (8)， 3527-3530 (1987)(PAF拮抗劑)，Shimazaki等，J. Med. Chem.， 30,17091711 (1987)(PAF拮抗劑)，Shimazaki等，Lipids, 26 (12), 1175-1178 (1991 )(PAF拮抗劑)，Yoshida等，Prog.Biochem. Pharmacol" 22,68-80 (1988)(PAF拮抗劑)，Alvarez等，丄Antibiotics,47(11)， 1195-1201 (1994) (4丐激活中性蛋白酶抑制劑)。
由天冬氨酸和丙氨酸組成的二酮基哌溱(3-曱基-2，5 二酮基哌嗪-6-乙酸;DA-DKP)是已知的。已經(jīng)報道它作為在30。C以上貯藏的人血清蛋白降解的結(jié)果形成。Chan等，Eur,J. Biochem.，227, 524-528 (1995)。不知道它具有生物活性。
本發(fā)明提供一種治療血小板活化因子介導的疾病或病癥的方法。這種方法包括給予需要該治療的動物有效量的該結(jié)構(gòu)式的二酮基哌嗪<formula>formula see original document page 4</formula>
R1是-CH2COR3,或-CH2-CH2COR3;
R"是選自由甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、羥賴氨酸、組氨
發(fā)明概述酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、曱狀腺素、半胱氨酸、蛋氨酸、 正纈氨酸和鳥氨酸組成的組的氨基酸的側(cè)鏈；
R3是-OH，-NH2,-OR4,-NHR4,或-NR4r,和 每個R"分別是烷基，芳基，烷芳基，或芳烷基； 或者它們生理學上可接受的鹽。
本發(fā)明進一步提供一種抑制炎癥的方法。這種方法包括給予需要該治 療的動物有效量的結(jié)構(gòu)式(l)的化合物或其生理學上可接受的鹽。
本發(fā)明還提供一種抑制血小板聚集的方法。這種方法包括以有效量的 結(jié)構(gòu)式(l)的化合物或其生理學上可接受的鹽和血小板接觸。
此外，本發(fā)明提供一種抑制由細胞產(chǎn)生、釋放或者產(chǎn)生和釋放白細胞 介素8的方法。這種方法包括以有效量的結(jié)構(gòu)式(l)的化合物或其生理學上 可接受的鹽和細胞接觸。
本發(fā)明進一步提供抑制血小板活化因子(PAF)作用的方法。這種方法包 括以有效量的結(jié)構(gòu)式(l)的化合物或其生理學上可接受的鹽和PAF接觸。
最后，本發(fā)明提供一種藥物組合物。這種組合物包括藥學上可接受的 載體和結(jié)構(gòu)式(l)的化合物或其生理學上可接受的鹽。
本發(fā)明優(yōu)選的實施方案的詳細說明
氨基酸的"側(cè)鏈"指連在以上列出所有氨基酸共有的 2 主鏈 上的氨基酸部分。例如，甘氨酸的側(cè)鏈是-H,丙氨酸的側(cè)鏈是-CH3，和絲 氨酸的側(cè)鏈是-ch20h。
"烷基"指含有1-30個碳原子，優(yōu)選1-18個碳原子的直鏈或支鏈烷基。 "低級烷基"指含有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基。
"芳基"指具有至少一個芳環(huán)(例如苯基)的芳香基團。
"烷芳基"指具有與其相連的芳基的低級烷基(例如，-CH2C6H5或 -CH3CH(C6H5)CH3)。
"芳烷基"指具有與其相連的低級烷基的芳基(例如，-C6H4-CH3)。
本文使用的"抑制"指減輕(完全或部分)或預防。
本文使用的"介導"指引起，惡化，或有關(guān)。
本文使用的"治療"意指減輕(完全或部分)疾病或病癥的癥狀，包括治愈疾病或病癥，或者子貞防疾病或癥卄犬。
本發(fā)明基于3-曱基-2，5-二酮基哌嗪-6-乙酸(DA-DKP)抑制PAF活性的 發(fā)現(xiàn)。這種抑制看來歸因于DA-DKP與PAF和PAF受體的結(jié)合。認為DA-DKP與PAF結(jié)合歸因于DA-DKP的羧基和PAF膽石咸部分上的N+的離子配 對。因此，預計其它的包括一個或多個羧基的二酮基哌。秦是PAF的有效抑 制劑。實際上，其它的含羧基的非二酮基哌。桊化合物，例如聚-天冬氨酸或 聚-谷氨酸，也可能是有效的PAF抑制劑。DA-DKP結(jié)合PAF受體的機理是 未知的，但是假設它歸因于DA-DKP的二酮基哌喚環(huán)結(jié)構(gòu)和/或DA-DKP的 疏水112側(cè)《連。
制備二酮基哌。秦的方法是本領(lǐng)域已知的，并且可能采用這些方法合成結(jié) 構(gòu)式(l)的二酮基哌嗪。參見，例如，美國專利4,694,081和5,817,751; Sm他 等，Bioorg Med. Chem. Letters, 8,2369-2374(1998)。然而，當采用現(xiàn)有技術(shù)方 法合成結(jié)構(gòu)式(l)的二酮基哌嗪時，會遭遇困難或得到不令人滿意的結(jié)果(參 見共同待審的臨時申請60/223,075,2000年8月4提交)。從而，如共同待審 的臨時申請60/223,075所述的方法合成結(jié)構(gòu)式(l)的二酮基哌嗪是最優(yōu)選的， 它的全部公開引入本文作為參考。
臨時申請60/223,075描述的合成方法采用了本領(lǐng)域公知的標準溶液相 或固相肽合成法。固相肽合成法是優(yōu)選的。
臨時申請60/223,075描述的合成方法的第一步驟包括提供第一氨基酸。 第一氨基酸選自由甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、 蘇氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、羥賴氨酸、組 氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、曱狀腺素、半胱氨酸、蛋氨酸、 正纈氨酸和鳥氨酸組成的組。這些氨基酸可以是D-或L-對映體形式，是商 業(yè)上可得到的，或者能由本領(lǐng)域公知的方法制備(參見，例如，Williams, Synthesis Of Optically Active a-AminoAcids (Pergammon Press, 1989))。 4尤選的 是疏水氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和苯丙氨 酸。特別優(yōu)選的是丙氨酸。
第 一氨基酸還優(yōu)選以一種或多種保護基團保護，以防止合成期間不需要 的副反應。這種保護基團，和連接和除去它們的方法，是本領(lǐng)域公知的。參 見，例長口， Green禾口 Wuts, Protective Groups In Organic Chemistry (Wiley 1992) 和Grant, Synthetic Peptides : A User's Guide (Freemen 1992)。第一氨基酸與以下結(jié)構(gòu)式NH2CH(CH2COOR5)COOH的天冬氨酸衍生
RS是低級烷基或烷芳基。RS優(yōu)選是千基(-CH2C6H5;Bz)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)千基不僅 保護這些氨基酸的側(cè)鏈羧基，而且促進二肽的環(huán)化。此外，可在防止手性 中心(連接I^和R2基團的碳原子)外消旋作用的中性條件下從二肽除去節(jié)基。
天冬氨酸和谷氨酸衍生物 NH2CH(CH2COOR5)COOH 和 NH2CH(CH2CH2COOR5)COOH是商業(yè)上可得到的或可由已知方法制備(參 見，例^口， Bodansky ,口 Bodansky, The Practice ofPeptide Synthesis, 63-66頁(第 2版，Springer-Verlag, 1994)。天冬氨酸和谷氨酸衍生物的氨基或a羧基任選 以標準保護基(見上述)保護以便防止不需要的副反應。
如上所述，二酮基哌。秦的合成優(yōu)選采用固相肽合成方法。第一氨基酸 或者天冬氨酸或谷氨酸衍生物經(jīng)其a羧基連接至固體載體以便固相合成。固 體載體可以是任何與肽合成相容的載體，例如Grant和Atherton描述的方法， Solid Phase Peptide Synthesis : A Practical Approach (BL Press 1989)。適當?shù)墓?體載體是商業(yè)上可得到的或者能由標準方法制備。參見PCT申請WO 96/00391。固體載體包含固定第一氨基酸或者天冬氨酸或谷氨酸衍生物至載 體表面的接頭或間隔分子。許多具有各種性質(zhì)的接頭是本領(lǐng)域公知的。參見， 例如，Grant, Synthetic P印tides : A User's Guide (Freemen 1992)和PCT申請 WO 96/00391。這種接頭通常包括連接第一氨基酸或者天冬氨酸或谷氨酸衍 生物的官能團。
優(yōu)選地，第一氨基酸連接在固體載體上，并且，在偶合天冬氨酸或谷 氨酸衍生物至第一氨基酸之前，如果存在，除去在鍵合的第一氨基酸的ot氨 基上的保護基團。然而，應避免任何側(cè)鏈氨基的保護基團的除去，應該選擇 這樣的條件以在不去保護側(cè)鏈氨基時去保護a氨基。適當?shù)娜ケＷo條件是本 領(lǐng)域已知的。例如，以20%至55%的仲胺堿例如哌啶，在極性非質(zhì)子傳遞 溶劑，例如二曱基曱酰胺、二氯曱烷或N-曱基吡咯烷中可進行9-芴基甲氧 基羰基的除去。優(yōu)選加入二異丙基硅烷以防止去保護期間的具說在大規(guī)模制 備中存在的酯交換。
第 一氨基酸和天冬氨酸或谷氨酸衍生物之間的反應在有效產(chǎn)生肽鍵的 條件下進行，這樣以形成二肽。這些條件是本領(lǐng)域公知的。例如，偶合催化齊寸(例如2-(lH-苯并三唑-l-基)-l,2，3，3-四曱基脲鉻四氟硼酸鹽，苯并三唑-l-
基-氧基三(二曱氨基)轔六氟磷酸鹽，2-(lH-笨并三唑-l-基)-l，l,3,3-四曱基脲镎 六磷酸鹽，1-羥基苯并三唑，二異丙胺，二環(huán)已基碳二亞胺)可用于形成二肽。 通常，使用過量的偶合催化劑，具有2至10當量或更多的量。通常相對于 偶合的化學物質(zhì)的反應性確定過量的范圍。極性非質(zhì)子傳遞溶劑(例如二曱 基曱酰胺，N-曱基吡咯烷，二氯曱烷和二曱亞砜)是優(yōu)選的。反應時間可以是 一個半小時至整夜，溫度由室溫至回流變化。
下一步，如果二肽與固體載體鍵合，采用本領(lǐng)域^^知的標準方法由固體 載體除去二肽。由固體載體有效除去二肽的條件將取決于固體載體和選擇的 接頭。通常，采用強酸，例如三氟乙酸通過酸水解除去該肽。
接著環(huán)化二肽以形成二酮基哌。秦；這種二酮基哌噪會具有仍然為酯形式 的天冬氨酸或谷氨酸衍生物的側(cè)鏈羧基。環(huán)化通過在中性條件下加熱二肽完 成。典型地，二肽在約80。C至約180。C加熱，優(yōu)選約120°C。溶劑是中性溶 劑。例如，這種溶劑包括醇(例如丁醇、曱醇、乙醇和高級醇，但不是酚)和 共沸的共溶劑(例如曱苯、苯，或二甲苯)。優(yōu)選地，醇是丁-2-醇，共沸溶劑 是曱苯。持續(xù)加熱直至反應完全，并且根據(jù)經(jīng)驗確定加熱時間。典型地，二 肽通過將其回流約8-24小時，優(yōu)選約18小時環(huán)化。
最后，R5基團從二酮基哌溱通過本領(lǐng)域公知的方法除去以便除去保護基 (見上述)。當RS基團是芐基時，它優(yōu)選從二酮基哌嗪通過采用碳載鈀(Pd/C) 催化劑氫化除去。應該避免強酸(無機酸，例如硫酸或鹽酸)、強堿(堿金屬 堿，例如氫氧化鉀或氫氧化鈉)和強的還原劑(例如，氫化鋁鋰)的使用，以便 保持最終化合物的手性。 一旦除去RS基團，可衍生游離酸，如果需要，形成標準衍生物，例如 酰胺和酯。用于轉(zhuǎn)化游離酸成為酰胺或酯的方法是本領(lǐng)域^^知的。
結(jié)構(gòu)式(l)的二酮基哌嗪生理學上可接受的鹽還可用于本發(fā)明的實踐。 生理學上可接受的鹽包括常規(guī)的無毒鹽，例如衍生自無機酸(例如鹽酸、氫 溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)、有機酸(例如乙酸、丙酸、琥珀酸、羥基乙酸、 硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、枸椽酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯曱酸、水 楊酸、草酸、抗壞血酸等)或堿(例如的藥學上可接受金屬陽離子或者衍生自 N， N-二節(jié)基乙二胺、D-葡糖胺或乙二胺的有機陽離子的氫氧化物、碳酸鹽 或碳酸氫鹽)的鹽。這類鹽用常規(guī)方法，例如，通過用酸中和游離堿形式的化合物制備。
結(jié)構(gòu)式(l)的二酮基哌溱，或其生理學上可接受的鹽，能用于治療PAF 介導的疾病或病癥。為此，向需要該治療的動物給藥結(jié)構(gòu)式(1)的二酮基哌。秦， 或其生理學上可接受的鹽。優(yōu)選的動物是哺乳動物，例如兔、山羊、狗、貓、 馬或人?？梢愿鶕?jù)經(jīng)驗確定適于本發(fā)明的各種化合物的有效劑型、給藥模式 和劑量，并且在本領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員做出這種決定。本領(lǐng)域的熟練人員理 解劑量會隨采用的特定化合物、治療的疾病或病癥、疾病或病癥的嚴重性、 給藥途徑、化合物的排泄速率、治療持續(xù)時間、任何其它要給予動物的藥物 的鑒別、年齡、動物的大小和種類以及醫(yī)學和獸醫(yī)學領(lǐng)域已知的相似因素而 變化。 一般，本發(fā)明化合物的適當?shù)拿刻靹┝繒腔衔锂a(chǎn)生治療作用的最 低有效劑量的那種劑量。然而，每天劑量會由主治醫(yī)師或獸醫(yī)在合理的醫(yī)學 判斷范圍內(nèi)確定。如果需要，有效的每天劑量可以作為兩、三、四、五、六 個或更多子劑量給藥，全天以適當?shù)拈g隔單獨給藥。持續(xù)該化合物的給藥直 至獲得一種可接受的反應。
本發(fā)明的化合物(即，結(jié)構(gòu)式(l)的二酮基哌嗪和它生理學上可接受的鹽) 可以向動物患者給藥以便通過任何適當?shù)慕o藥途徑治療，包括經(jīng)口、鼻、直 腸、陰道、非腸道(例如，靜脈內(nèi)、脊柱內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或肌肉內(nèi))、腦池 內(nèi)、透皮、顱內(nèi)、大腦內(nèi)和局部(包括頰和舌下)給藥。優(yōu)選的給藥途徑是經(jīng) 口和靜脈內(nèi)。
對于本發(fā)明的化合物可單獨給藥，該化合物優(yōu)選以藥物制劑(組合物) 形式給藥。本發(fā)明的藥物組合物包括作為活性組分的 一種或多種本發(fā)明的 化合物和一種或多種藥學上可接受的載體，并且，任選地包括一種或多種 其它化合物、藥物或其它物質(zhì)。在與制劑內(nèi)其它組分相容和對動物無損傷 的意義上，每種載體必須是"可接受的"。藥學上可接受的載體是本領(lǐng)域公知 的。不考慮選擇的給藥途徑，本發(fā)明的化合物通過本領(lǐng)域熟練人員已知的
常規(guī)方法配制成藥學上可接受的劑型。參見，例如，Renzington's Pliarniaceutical Sciences 。
本發(fā)明的適于口服給藥的制劑可以是膠嚢劑、扁嚢劑、丸劑、片劑、 散劑、顆粒劑，或者作為含水或非水液體內(nèi)的溶液或懸浮液，或者水包油 或油包水液體乳劑，或者作為酏劑或糖漿劑，或者作為錠劑(采用惰性基質(zhì)， 例如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)，等等，每個含有預定量的作為活性組分的本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的化合物還可以大丸劑、藥糖劑或糊劑給藥。
本發(fā)明口服給藥的固體劑型(膠嚢劑、片劑、丸劑、糖衣丸、散劑、顆 粒劑等)中，活性組分與一種或多種藥學上可接受的載體混合，所述載體例
如枸椽酸鈉或磷酸二4丐，和/或以下任何一種(l)填充劑或膨脹劑，例如淀 粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合劑，例如，如，羧曱 基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)濕潤 劑，例如甘油；(4)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、 一些硅酸鹽和碳酸鈉；(5)溶液阻滯劑，例如石蠟；(6)吸收促進劑，例如季 銨化合物；(7)潤濕劑，例如，鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯；(8)吸收劑，例如 高嶺土和膨潤土； (9)潤滑劑，如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙醇、 月桂基硫酸鈉和它們的混合物；和(10)著色劑。在膠嚢劑、片劑和丸劑的情 況下，藥物組合物還包括緩沖劑。在采用例如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙 二醇等賦形劑的軟和硬填充的明膠膠嚢中，采用相似種類的固體組合物作為 填充劑。
通過任選地加上一種或多種輔助組分壓縮或模制制備片劑。采用粘合劑 (例如，明膠或羥丙基曱基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例 如，羥基乙酸淀粉鈉或交聯(lián)的羧曱基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑制備 壓片。通過在適合的機器中模制以惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀化合物的混 合物制備模制片。
本發(fā)明的藥物組合物的片劑和其它固體劑型，例如糖衣丸、膠嚢劑、丸 劑和顆粒劑，任選地-故刻痕，或者以包衣和殼體，例如腸溶衣和其它藥物制 備領(lǐng)域公知的包衣制備。它們還可被配制成提供其中活性組分的緩釋或控制 釋放，例如，采用各種比例提供需要的釋放曲線的羥丙基曱基纖維素、其他 聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球。它們可以通過，例如，經(jīng)截留細菌濾器過濾 進行消毒。這些組合物還任選包含遮光劑，并且是^l僅或優(yōu)先在胃腸道的某 一部分任選地以延遲方式釋放活性組分的組合物?？梢员皇褂玫陌窠M合物 的例子包括聚合物質(zhì)和蠟。活性組分還可是微膠嚢形式。
適于本發(fā)明化合物口服給藥的液體劑型包括藥學上可接受的乳劑、微乳 劑、溶液、懸浮液、糖漿劑和酏劑。除了活性組分之外，液體劑型可包含本 領(lǐng)域通常使用的惰性稀釋劑，例如，水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、千醇、苯曱酸千酯、丙二醇、1,3-丁 二醇、油(特別地，棉子油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和 芝麻油)、甘油、四氬呋喃曱醇、聚乙二醇和脫水山梨醇脂肪酸酯，及其混合物。
除了惰性稀釋劑之外，口服組合物還可包括助劑，例如潤濕劑、乳化和 懸浮劑、增甜劑、調(diào)味劑、著色劑、香味劑和防腐劑。
懸浮液，除了活性化合物之外，可含有懸浮劑，例如乙氧基化異硬脂醇、
聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁(aluminum metahydroxid)、膨潤土、瓊脂和西黃蓍膠，以及它們的混合物。
本發(fā)明的直腸或陰道給藥用藥物組合物制劑可以栓劑存在，它可通過混 合本發(fā)明的一種或多種化合物與 一種或多種適當?shù)姆谴碳ば再x形劑或載體 (包括，例如，可可脂、聚乙二醇、栓劑蠟或水楊酸酯)制備，它在室溫下是 固體，但是在體溫下是液體，因此，會在直腸或陰道腔內(nèi)熔化并釋放這種活 性化合物。適于陰道給藥的本發(fā)明的制劑還包括含有本領(lǐng)域已知是適當?shù)妮d 體的陰道栓、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧制劑。
適于本發(fā)明的化合物局部或經(jīng)皮給藥的劑型包括散劑、噴霧劑、軟膏、 糊劑、乳膏、洗劑、凝膠、溶液、貼劑、滴劑和吸入劑?；钚越M分在無菌條 件下與藥學上可接受的載體，和任何緩沖劑，或需要的噴射劑混合。
軟膏、糊劑、乳膏和凝膠除了活性組分之外，可含有賦形劑，例如動物 和植物脂肪、油、蠟、石蠟、淀粉、西黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、 硅氧烷、膨潤土、硅酸、滑石和氧化鋅，或者它們的混合物。
散劑和噴霧劑除了活性組分之外，可包含賦形劑，例如乳糖、滑石、 硅酸、氫氧化鋁、硅酸鈣和聚酰胺粉末或這些物質(zhì)的混和物。噴霧劑另外 包含通常的噴射劑，例如氯氟代烴和揮發(fā)性的未取代的烴，例如丁烷和丙 烷。
皮膚貼劑具有附加的提供控制本發(fā)明的化合物輸送至體內(nèi)的優(yōu)點。這種 劑型可通過在適當基質(zhì)，例如彈性基質(zhì)物質(zhì)中，溶解、分散或摻入一種或多 種本發(fā)明的化合物制備。吸收增強劑還可用于增加化合物經(jīng)皮膚的流動。這 種流動的速率可通過或者提供一種控制速率的膜，或者在聚合物基質(zhì)或凝 膠中分散該化合物控制。
藥物制劑包括適于吸入或吹入或適于鼻或眼內(nèi)給藥的那些。為了通過吸
ii入向上(鼻)或下呼吸道給藥，由吹入器、噴霧器或加壓包或其它輸送氣溶膠 噴霧劑的方便裝置方便地輸送本發(fā)明的化合物。加壓包可包括適當?shù)膰娚?劑，例如二氯二氟曱烷、三氯氟曱烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適當 的氣體。在加壓氣溶膠的情況下，可通過提供輸送計量劑量的閥確定劑量單位。
另一方面，為了通過吸入或吹入給藥，所述組合物可以是干粉形式，例 如，本發(fā)明 一種或多種化合物的粉末和適當粉末基質(zhì)(例如乳糖或淀粉)的混 合物。粉末組合物可以以，例如，膠嚢劑或藥筒，或者，例如明膠或薄膜包 裝單位劑量的形式存在，其中粉末可以借助于吸入器、吹入器或計量劑量的 吸入器給藥。
對于鼻內(nèi)給藥，本發(fā)明的化合物可通過滴鼻液或噴霧液給藥，例如通過
塑料瓶霧化器或計量劑量的吸入器給藥。典型的霧化器是Mistometer (Wintrop)禾口 Medihaler (Riker)。
滴劑，例如滴眼液或滴鼻液，可以和還包括一種或多種分散劑、增溶劑
或懸浮劑的含水或非水基質(zhì)配制。噴霧液由加壓包方便地輸送。滴劑可借助 于簡單的加蓋滴眼瓶或適于由特定形狀的閉合逐滴輸送液體成分塑料瓶輸送。
適于非腸道給藥的本發(fā)明的藥物組合物包括一種或多種本發(fā)明的化合 物，和一種或多種藥學上可接受的載體組合成無菌等滲含水或非水溶液、分 散液、懸浮液或乳液，或者能夠剛好在使用之前重新配制成無菌可注射溶液 或分散液的無菌粉末，它包含抗氧化劑、緩沖劑、使制劑和預期受體血液等 滲的溶質(zhì)或懸浮劑或增稠劑。
本發(fā)明的藥物組合物中可采用的適當?shù)暮头撬d體的例子包括水、 乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)，和它們適當?shù)幕旌衔?，?物油，例如橄欖油，以及可注射的有機酯，例如油酸乙酯。能夠保持適當?shù)?流動性，例如，通過利用包衣材料，例如卵磷酯，在分散液的情況下通過維 持需要的粒度，以及通過利用表面活性劑。
這些組合物還可含有助劑，例如潤濕劑、乳化劑和分散劑。在該組合物 中也需要包括等滲劑，例如糖、氯化鈉等。此外，通過摻入延遲吸收的藥齊寸， 例如單硬脂酸鋁和明膠能產(chǎn)生可注射的藥物形式的延長吸收。
在某些情況下，為了延長藥物的作用，延緩皮下或肌肉注射的藥物的吸收是需要的。這可通過利用具有不良水溶性的結(jié)晶或無定形物質(zhì)的液體懸浮 液完成。藥物吸收的速率于是取決于溶解速率，其本身取決于結(jié)晶大小和結(jié) 晶形式。另一方面，非腸道給藥的延遲吸收通過在油載體中溶解或懸浮藥物
通過在可生物降解的聚合物例如聚交酯-聚乙醇酸交酯中形成藥物的微 膠嚢基質(zhì)制備注射貯存形式。根據(jù)藥物與聚合物的比，和采用的具體聚合物 的性質(zhì)，可控制藥物釋放的速率。其它可生物降解聚合物的例子包括聚(原 酸酯)和聚(酸酐)。貯存注射制劑還可通過使藥物收集在與身體組織相容的脂 質(zhì)體或微乳劑中制備。注射材料可滅菌，例如通過經(jīng)截留細菌過濾器過濾滅菌。
制劑可存在于單位劑量或多劑量密封的容器，例如安瓿和小瓶中，并
且在凍干條件下! i藏，在使用之前僅僅需要加入無菌液體載體，例如注射 用水。臨時注射溶液和懸浮液可由以上描述種類的無菌粉末、顆粒和片劑 制備。
如上所述，業(yè)已才艮道PAF在各種疾病和病癥治療中起作用。這些疾病 和病癥包括急性呼吸窘迫綜合征，變態(tài)反應，關(guān)節(jié)炎，哮喘，自身免疫性疾 病，支氣管炎，心血管疾病，克羅恩氏病，嚢性纖維化，肺氣腫，胃腸道潰瘍， 炎癥，炎性腸病，局部缺血，多器官功能失調(diào)綜合征，心肌梗死，腫瘤性疾病， 眼炎，疼痛，牛皮癬，呼吸道感染，膿毒病，休克，和潰瘍性結(jié)膜炎。PAF還 介導血小板聚集。結(jié)構(gòu)式(l)的二酮基哌嗪可用于治療這些疾病和病癥以及任 何其它PAF起作用的疾病和病癥。本發(fā)明的化合物可以與其它適于給定疾病 或病癥的標準療法組合纟會藥。
已經(jīng)報道PAF誘發(fā)白細胞介素8(IL-8)的產(chǎn)生和分泌(參見以下實施例3 的討論)。IL-8是促炎細胞因子，已經(jīng)報道它在大量的疾病和病癥的發(fā)病中 起作用，包括急性呼吸窘迫綜合征，變態(tài)反應，關(guān)節(jié)炎，哮喘，自身免疫性疾 病，'支氣管炎，癌癥，克羅恩氏，嚢性纖維化，肺氣腫，心內(nèi)膜炎，胃炎，炎 癥性腸病，局部缺血再灌注(ischemia reperftision)，多器官功能失調(diào)綜合征， 腎炎，胰腺炎，呼吸道病毒感染，膿毒病，休克，潰瘍性結(jié)腸炎，和其它炎癥 疾病。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)式(l)的二酮哌抑制PAF誘導IL-8產(chǎn)生和/或釋放。初步 數(shù)據(jù)表明它們在無PAF時還抑制IL-8的產(chǎn)生和/或釋放。已經(jīng)具體發(fā)現(xiàn)脂多 糖(LPS)-誘導的正常人的支氣管上皮細胞的IL-8的產(chǎn)生和/或釋放受抑制(數(shù)據(jù)未顯示)。因此，本發(fā)明的二酮基哌。秦顯示通過兩種不同的機制起作用，
并且可用于治療IL-8以及PAF介導的疾病或病癥。
實施例
實施例1: 3-曱基-2,5-二酮基哌。秦-6-乙酸(5)的制備
具有與它連接的9-芴基曱氧基羰基-保護的丙氨酸(Ala-Fmoc)的Wang 樹脂(3克(g), 2.52 mmol， 1當量，NovaBiochem)轉(zhuǎn)移至潔凈的100mL圓底燒 瓶中，將哌啶(12 mL)的二曱基曱酰胺(DMF; 18 mL)溶液加入燒瓶中的樹指 中。溶液攪拌l小時，用燒結(jié)玻璃漏斗分離樹脂。以DMF (3 x 30 mL)洗滌 樹脂，接著用二氯甲烷(DCM;3x30mL)洗、;條，并且真空干燥5分鐘。
部分千燥的樹脂轉(zhuǎn)移入潔凈的100mL圓底燒并瓦中，并且加入DMF (10 mL)。接著，加入Boc-Asp(OBz)OH(3.25g, 10. 07mmo1，4當量)，之后加入 二異丙胺(2.83 mL， 2.04 g, 20.19 mmol， 8當量)和2-(lH-苯并三唑-l-基)-l，2,3，3-四曱基脲錯四氟硼酸鹽(TBTU; 3.24 g, 10.09 mmol， 4當量， Acros)。使?jié){液在厭氧條件下反應12小時。反應結(jié)束時，該樹脂顯示陰性水 合茚三酮試驗，表明偶合反應完成。樹脂真空過濾并以DMF(3 x30mL)洗滌， 之后以DCM (3 x 30 mL)洗滌。將樹脂在轉(zhuǎn)移至潔凈100mL圓底燒瓶之前室 溫真空下干燥10分鐘。
將三氟乙酸(TFA; 16.5 mL)加至干燥樹脂，在加入時樹脂變成紅色。在 攪拌樹脂又30分鐘之后，過濾除去TFA，以DCM (4 x 20 mL)洗滌樹脂。 有機組分混合，加入曱苯(20 mL)。混合的有機物真空蒸發(fā)至干燥。痕量的 TFA通過加入曱苯和蒸發(fā)除去。重復此步驟直至已經(jīng)除去所有的TFA。這種 步驟得到淺黃油狀產(chǎn)物，它的NMR和質(zhì)譜數(shù)據(jù)與預期的二肽千基酯一致， 以下顯示了它的結(jié)構(gòu)(3)。
將二肽3溶解在丁-2-醇(40 mL)中并以曱苯(60 mL)稀釋。使這種溶液回 流24小時。此周期結(jié)束時，溶液冷卻至室溫。接著在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器上濃縮， 同時保持溫度在50。C。在濃縮時，沉淀出白色固體，過濾除去沉淀物。以曱 苯(10mL)洗滌沉淀物和干燥。殘余物(0.650g)產(chǎn)生陰性水合茚三酮試驗。接 著，由熱曱醇中結(jié)晶。這種結(jié)晶產(chǎn)物的光譜學和分析結(jié)果確認它的結(jié)構(gòu)是需 要的化合物-Asp-Ala 二酮基哌。秦千基酯，以下表示為(4)。
這種化合物(400 mg)溶解在曱醇(250 mL)中，并且仔細地加入碳載4巴(Pd/C; 10。/。，0.4g)催化劑。燒瓶以氫氣吹掃并保持在正的氫氣壓力。在大氣氛 下的溶液保持至少4小時。以助濾劑(硅藻土)除去催化劑并以曱醇洗滌。混 合曱醇洗滌液，除去溶劑(產(chǎn)量200 mg)。質(zhì)鐠和NMR分析顯示游離酸 Asp-Ala 二酮基哌溱(3-甲基-2,5-二酮基哌。秦-6-乙酸，5)已經(jīng)形成，不具有任何 的交叉污染。
向3-甲基-2，5-二酮基哌。秦-6-乙酸(0.151 g, 0.81 mmol， 1當量，實施例1 描述的產(chǎn)物,5)的DMF(2.5 mL)溶液中加入羰基二咪唑(0.26 g， 1.60 mmol, 2當 量，Aldich)。室溫下攪拌1小時之后，加入固體醋酸銨(0.63 g, 8.17mmo1, 10 當量，Aldrich)。室溫下持續(xù)攪拌過夜，此時反應物分布在水(20mL)和乙酸乙 酯(10mL)之間。以第二等分的乙酸乙酯(IO mL)洗滌水層，接著減壓蒸發(fā)至 干燥(61。C)。通過以水然后曱苯進一步共蒸發(fā)除去痕量的DMF，產(chǎn)生白色固 體(362 mg)。其被溶解最小體積曱醇的DCM(20: 80 v/v)中。分餾洗脫的溶劑，
<formula>formula see original document page 15</formula>
實施例2: Asp-Ala 二酮基哌。秦酰胺(6)的制備
。該產(chǎn)物接著由曱醇重結(jié)
3曰得到需要的產(chǎn)物(0.116 g， 76%收率，6)。實施例3: IL-8釋放的抑制
白細胞介素8 (IL-8)是促炎細胞因子和有效的嗜中性白細胞的化學誘 引劑和活化劑。還報道它是T-淋巴細胞和嗜曙紅細胞的化學誘引劑和活化 劑。1L-8由免疫細胞(包括淋巴細胞、嗜中性白細胞、單核細胞和巨噬細胞)、 成纖維細胞和上皮細胞產(chǎn)生。報道表明IL-8在呼吸道病毒感染、哮喘、支氣 管炎、肺氣肺、嚢性纖維化、急性呼吸窘迫綜合征、膿毒病、多器官功能失 調(diào)綜合征和其它的炎性疾病的發(fā)病中的重要作用。
已經(jīng)報道PAF誘導人肺成纖維細胞中IL-8的轉(zhuǎn)錄和分泌。Roth等，J. Exp. Med., 184,191-201 (1996)。還有報道PAF增強人單核細胞在脂多糖(LPS)反應 中產(chǎn)生IL-8,但是PAF獨自僅僅微弱地誘導這些細胞產(chǎn)生IL-8。 Arbabi等， Archives Surgery, 134,1348-1353 (1999)。這些作者假定PAF'起動"先天免疫系
他們進一步推測如果這種起動泛化，它會變得有害。這種情況下，被認為由 不起動先天免疫系統(tǒng)的較小的次刺激，會誘發(fā)炎癥介體的攻擊、擴散和非集 中釋放，可能導致多器官功能失調(diào)綜合征。
NHBE 6122正常人支氣管上皮細胞(Clonetics， San Diego, CA)以20,000 纟田月包/孔力卩至24孔組織培養(yǎng)板(Falcon,現(xiàn)在為BD Biosciences, Franklin
生長培養(yǎng)基；Clonetics)中于37。C和5%0)2下粘著^夜(16-18小時)。粘著之 后，以不含腎上腺素的BEGM培養(yǎng)基洗滌細胞兩次。它們接著在完全培養(yǎng) 基或含有20pM3-甲基-2,5-二酮基哌嗪-6-乙酸(DA-DKP;實施例1描述的產(chǎn) 物,5; HEPES緩沖鹽水(HBSS; Clonetics)中制備的儲液)的完全培養(yǎng)基中以 4mM于37。C和5%<:02下培養(yǎng)20分鐘。接著加入溶于二曱亞砜(DMSO;組 織培養(yǎng)級；Sigma, St Louis， MO)的血小板活化因子(PAF; Sigma, St. Louis, MO)至100 nM或500 nM的最終濃度，該細胞在37。C和5%C02下培養(yǎng)額 外的6小時。使用含有DMSO和HBSS的培養(yǎng)基作為對照。
通過采用人IL-8配對抗體的ELISA(Endogen， Cambridge, MA)測定細胞 上清液中的IL-8濃度。按照制造商指令和以下例外，采用Endogen, Cambridge, MA的ELISA試劑盒進行ELISA: (l)涂1 (ig/ml抗體；(2) ^r測抗體30 ng/ml; StrepAvidin HRP稀釋1: 32，000。
結(jié)果如下表1-3所示?？梢钥闯?，NHBE 6122細胞中PAF誘導的IL-8 分泌由用DA-DKP預培養(yǎng)的細胞抑制。假定DA-DKP結(jié)合PAF, PAF受體，或者兩者，阻滯產(chǎn)生(釋放)IL-8
的信號。
表1
__IL-8(pg/ml)_SEM
DMSO 729.88 8.46
HBSS 809.62 198.23
AA-DKP(20|iM) 803.11 67.18
PAF(100nM) 1094.68 103.21
PAF+AA-DKP714.91 88.95
表2
____IL-8(pg/ml)_SEM
DMSO 602.99 73.48
HBSS 581.86 64.36
AA-DKP(20pM) 837.84 100.73
PAF(500nM) 887.87 112.56
PAF+AA-DKP542.5 37.17
表3
___IL-8(pg/ml) SEM
DMSO 209.79 13.24
HBSS 233.08 5.79
AA-DKP(20pM) 184.86 34.73
PAF(100nM) 355.36 11.28
PAF+AA-DKP 201.93 20.64
*對于表3，在試驗之前4天均分細胞以產(chǎn)生5,000細胞/孔，并且使生 長至70%融合。
權(quán)利要求
1.藥物組合物，包含藥學上可接受的載體和具有下式的活性成分其中R1是-CH2COR3，或-CH2-CH2COR3；R2是選自甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、賴氨酸、羥賴氨酸、組氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲狀腺素、正纈氨酸和鳥氨酸的氨基酸的側(cè)鏈；R3是-OH、-NH2、-OR4、-NHR4或-NR4R4；和每個R4分別是烷基、芳基、烷芳基或芳烷基；或者它們生理學上可接受的鹽。
2. 權(quán)利要求l的組合物，其中R"是選自甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和正纈氨酸的氨基酸的側(cè)鏈。
3. 權(quán)利要求2的組合物，其中W是丙氨酸的側(cè)鏈。
4. 權(quán)利要求1-3中任一項的組合物，其中R 是-OH或-OR4。
5. 權(quán)利要求4的組合物，其中R 是-OH。
6. 權(quán)利要求1-3中任一項的組合物，其中R 是-NH2、 ->^114或^114114。
7. 權(quán)利要求6的組合物，其中113是-麗2。
8. 權(quán)利要求1-7中任一項的組合物，其中R'是-CH2COOH。
全文摘要
本發(fā)明涉及二酮基哌嗪和包含它們的組合物的使用方法。本發(fā)明提供一種抑制血小板活化因子(PAF)作用的方法。例如，可以治療PAF介導的疾病或病癥(特別是炎癥)或者可以抑制血小板聚集。本發(fā)明也提供抑制由細胞產(chǎn)生和/或釋放的白細胞介素8(IL-8)的方法。按照本發(fā)明PAF的作用和IL-8的產(chǎn)生和/或釋放由該結(jié)構(gòu)式(1)的化合物抑制，其中R₁和R₂在說明書中定義，或它們生理學上可接受的鹽。本發(fā)明也提供包括這些化合物的藥物組合物。
文檔編號A61K31/495GK101632669SQ20091014568
公開日2010年1月27日 申請日期2001年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月4日
發(fā)明者C·杰拉爾德·柯蒂斯, 戴維·巴-奧爾, 格雷格·托馬斯, 納加拉杰·K·R·拉奧 申請人:Dmi生物科學公司