專(zhuān)利名稱(chēng)：蘆丁的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及蘆丁的新用途。
背景技術(shù)：
肝移植是治療終末期肝病最有效的手段，肝移植體低溫保存再灌注損傷是肝移植 術(shù)后肝原發(fā)性無(wú)功能(PFN)的重要原因，與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。目前人們針對(duì)凋亡發(fā)生的 各個(gè)環(huán)節(jié)，探索各種防治方法，從而減輕肝移植體保存再灌注損傷成為了研究的熱點(diǎn)。蘆丁，異名蕓香甙、維生素P、紫槲皮甙(Rutosidejiolaquereitrin)存在于蕓香 科植物蕓香Ruta graveolens L.全草揮發(fā)油；或豆科植物槐花kphora japonica L.果實(shí) (槐角)的主要成分；或金絲桃科植物紅旱蓮Hypericum aseyron L.全草；或鼠李科植物 光枝勾兒茶 Berchemia polyphylla Wall, var leioclada Hand. -Mazζ.；或大戟科植物野 梧桐的葉；或蓼科植物蕎麥I^agopyrum esculentum Moench籽苗中。具有抗炎作用；維生素 P樣作用，即具有維持血管抵抗力、降低其通透性、減少脆性等作用，對(duì)脂肪浸潤(rùn)的肝有祛脂 作用，與谷胱甘酞合用祛脂效果更明顯；抗病毒作用；抑制醛糖還原酶作用。目前尚無(wú)報(bào)道 稱(chēng)蘆丁具有保肝作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題是提供蘆丁的新用途，即蘆丁在制備治療保肝藥中的用 途。通過(guò)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)證明蘆丁可以有效地減輕肝移植體的低溫保存再灌注損傷，對(duì)供肝有保 護(hù)作用。應(yīng)用時(shí)是以蘆丁為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑，可制成 片劑、膠囊劑或口服液。蘆丁每日服用量為0. 5-2mgo
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)對(duì)藥理實(shí)驗(yàn)證明蘆丁如何發(fā)揮保肝作用的。一、材料與方法1、材料封閉群雄性SD大鼠1 只，供體體重200 250g，受體體重340 380g， 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)于四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。SSW-3X顯微外科手術(shù)器械包。Q550CW自動(dòng)病理圖 像分析儀。蘆丁。Bcl-2、Bax免疫組化試劑盒、AST、ALT、LDH試劑盒(北京中山生物技術(shù) 有限公司)。2、實(shí)驗(yàn)分組及處理封閉群SD大鼠(n = 126)隨機(jī)分為3個(gè)組Α組(n = 6，假手 術(shù)組)、B組(n = 30 X 2，肝移植對(duì)照組)、C組(n = 30 X 2，TMP干預(yù)組)；B、C組再根據(jù)再 灌注后0. 5h,3h,6h,24h,48h不同時(shí)相，又分為5個(gè)亞組。3、制備大鼠肝移植模型參照Delriviere和Kamada等[1]方法建立大鼠肝移植 模型。安體醚吸入麻醉，供體肝上上腔靜脈結(jié)扎，供體肝下上腔靜脈與受體右腎靜脈按照 Delriviere等[2]方法行袖套吻合(套管內(nèi)徑為2. 0-2. 2mm、外徑為2. 8-3. 0mm)；供肝門(mén)靜脈與受體門(mén)靜脈行袖套吻合(套管內(nèi)徑為1. 5-1. 8mm、外徑為2. 0-2. 2mm)；結(jié)扎受體肝固有 動(dòng)脈；最后將供肝膽管與受體膽管采用套管法重建(內(nèi)徑為0. 65mm、外徑0. 96mm硬膜外導(dǎo) 管)。B組灌洗及保存液為4°C冷平衡鹽溶液(含肝素鈉5u/ml) ；C組灌洗及保存液為冷 平衡鹽溶液中加TMP(320g/L) ；A組開(kāi)腹后游離肝周韌帶，分離膽總管及門(mén)靜脈，關(guān)腹。4、標(biāo)本的采集和檢測(cè)B、C組觀察術(shù)后的一般情況，并分別于肝移植再灌注后 0. 5h,3h,6h,24h,48h取腹主動(dòng)脈血待測(cè)肝功能(AST、ALT、LDH)，同時(shí)取移植肝一小塊肝組 織待制石蠟標(biāo)本；A組于關(guān)腹后池取標(biāo)本作為正常對(duì)照。采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行肝功 能測(cè)定；利用免疫組織化學(xué)染色的方法結(jié)合病理圖像分析測(cè)定各切片中細(xì)胞凋亡調(diào)控基因 Bcl-2、BaX表達(dá)情況。取部分切片進(jìn)行常規(guī)HE染色，光鏡下觀察肝組織的病理形態(tài)學(xué)變化。5、免疫組化染色方法石蠟切片常規(guī)脫蠟至水；3%過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化酶 活性；微波修復(fù)抗原，加封閉用羊血清，37°C孵育15min ；加1 50 Bcl_2或1 50 Bax抗 體工作液，4°C孵育過(guò)夜；滴加生物素的羊抗兔IgM(l 100)，37°C孵育30min;每張切片滴 加50 μ 1 SP復(fù)合物，于37°C孵育30min ；以新鮮配制的DAB顯色，蘇木素復(fù)染，封片，顯微鏡 下觀察。鏡下可見(jiàn)陽(yáng)性染色主要位于胞漿內(nèi)，少數(shù)為核膜，呈淺黃、棕黃或棕褐色顆粒。每 張切片內(nèi)中外隨機(jī)選取6個(gè)視野，運(yùn)用病理圖像分析儀顯微鏡下觀察并測(cè)定陽(yáng)性細(xì)胞的輝 度值(與Bcl-2、Bax表達(dá)成反比)。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(χ士 S)表示，在計(jì)算機(jī)上用 SPSS11. 0軟件包處理，方差齊性分析后，組間比較用均數(shù)t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較用單因素方差分 析，組內(nèi)不同時(shí)點(diǎn)間兩兩比較采用q檢驗(yàn)，指標(biāo)間相關(guān)分析用直線(xiàn)相關(guān)分析，P < 0. 05為差 異有顯著性。二、結(jié)果1、一般情況本實(shí)驗(yàn)肝移植60例，供體手術(shù)時(shí)間、血管袖套準(zhǔn)備時(shí)間、受體手術(shù)時(shí) 間、無(wú)肝期分別為(29. 65士3. 18)min、(9. 05士2. 12)min、(42. 64士4. 07)min、(5. 18士 1. 23) min。手術(shù)成功率為88. 33% (53/60)。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肝移植TMP干預(yù)組較肝移植對(duì)照組在 供肝恢復(fù)血流后，其表面很快呈鮮紅色，無(wú)花斑狀表現(xiàn)，門(mén)靜脈不擴(kuò)張，肝臟無(wú)腫脹，腸管無(wú) 淤血，腸系膜動(dòng)脈搏動(dòng)有力，膽汁源源不斷流出，上述表現(xiàn)明顯優(yōu)于肝移植對(duì)照組。2、肝組織形態(tài)學(xué)變化假手術(shù)組(A組)無(wú)明顯形態(tài)學(xué)改變；肝移植對(duì)照組(B組) 術(shù)后肝組織隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)，病理變化逐漸加重肝細(xì)胞排列紊亂，細(xì)胞濁腫，變性 呈顆粒狀，肝竇變窄，中性粒細(xì)胞附壁，繼而出現(xiàn)細(xì)胞核染色加深及部分核濃縮，部分還出 現(xiàn)點(diǎn)狀或小片狀壞死，以術(shù)后他最嚴(yán)重，他后，病理變化隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減輕； 肝移植TMP干預(yù)組(C組)病理變化較B組相應(yīng)時(shí)點(diǎn)明顯減輕輕度的組織水腫，肝竇內(nèi)皮 滲出較少，小葉結(jié)構(gòu)基本完好，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)較少。3、大鼠各組AST、ALT、LDH含量與A組比較，B、C組各時(shí)點(diǎn)AST、ALT、LDH含量均顯 著性增加(P < 0. 01)；與B組相應(yīng)的時(shí)點(diǎn)比較，C組各時(shí)點(diǎn)AST、ALT、LDH含量顯著性降低 (P < 0. 01) ；B、C組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)間AST、ALT、LDH含量單因素方差分析差異顯著(P < 0. 01)， 且每?jī)蓚€(gè)時(shí)點(diǎn)間q檢驗(yàn)有顯著性時(shí)效關(guān)系。4、各組Bcl-2、Bax表達(dá)輝度值變化與A組比較，B、C組于肝移植缺血再灌注后 0. 5h、3h、6h Bcl-2表達(dá)顯著性增加(P < 0. 01)，Bax表達(dá)顯著性降低(P < 0. 01) ’與B組 比較，C組0. 5h、3h、6h Bcl-2表達(dá)顯著性上調(diào)(P < 0. 01)，Bax表達(dá)差異無(wú)顯著性；并且B、C組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)Bcl-2、Bax表達(dá)差異有非常顯著性(P < 0. 01)，且每?jī)蓚€(gè)時(shí)點(diǎn)間q檢驗(yàn)有顯 著性時(shí)效關(guān)系(24h與48h間例外)。5、肝功能(AST、ALT、LDH)水平與Bcl_2、Bax表達(dá)的相關(guān)性AST、ALT、LDH水平與 Bcl-2的表達(dá)呈顯著性負(fù)相關(guān)，r值分別為-0. 39 (P < 0. 05)、-0. 51 (P < 0. 01)、-0. 52 (P < 0.01) ；AST、ALT、LDH水平與Bax的表達(dá)呈顯著性正相關(guān)，r值分別為0. 71、0. 54、 0. 75，P < 0. 01 ；AST、ALT、LDH水平與Bcl-2/Bax表達(dá)呈顯著性負(fù)相關(guān)，r值分別 為-0. 73、-0. 72、-0. 86，P < 0. 01。綜上所述，蘆丁可以通過(guò)上調(diào)Bcl-2或Bcl-2/Bax表達(dá)而有效地減輕肝移植體的 低溫保存再灌注損傷，對(duì)供肝有保護(hù)作用。但其上調(diào)Bcl-2或Bcl-2/Bax表達(dá)的具體機(jī)制 尚有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)1、Kamada N, Calne RY. Orthotopic liver transplantation in the rat techniqueusing cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation,1979, 28(1) :47-50.。2、Delriviere L,Kamada N,Goto S,et al. Retransplantation of the liver in therat. Microsurgery,1993,14(S) :416_419。
權(quán)利要求
1.蘆丁在制備治療保肝藥中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征是所述保肝藥是以蘆丁為活性成分，加入藥學(xué) 上可接受的輔料制備而成的制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征是所述制劑是片劑、膠囊劑或口服液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征是每日服用蘆丁 0. 5-2mgo
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及蘆丁的新用途。即蘆丁在制備治療保肝藥中的用途。通過(guò)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)證明蘆丁可以有效地減輕肝移植體的低溫保存再灌注損傷，對(duì)供肝有保護(hù)作用，每日服用量為0.5-2mg。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK102068449SQ20091021633
公開(kāi)日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2009年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月25日
發(fā)明者馮科 申請(qǐng)人:馮科