專利名稱：三七及其提取物在制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及三七、三七提取物、三七總皂苷以及三七總皂苷組合物的新用途，特別
是在制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物方面的新用途。
背景技術(shù)：
三七是五加科植物，具有活血、散瘀、消炎、鎮(zhèn)痛的功效。除有上述作用外，還具有 降低人體凝血因子的特殊作用。fg是肝臟合成的一種血漿球蛋白。其主要功能為參與凝血 過(guò)程。fg升高可增高心、腦血管病發(fā)生率?？诜叻勰芙档蚮g水平，有利于控制心、 腦血管病的發(fā)生。《中草藥》2008年05期刊登的中國(guó)澳門大學(xué)中華醫(yī)藥研究院的王楠、萬(wàn) 建波、李銘源、王一濤有關(guān)《三七治療動(dòng)脈粥樣硬化的研究進(jìn)展》一文指出動(dòng)脈粥樣硬化是 導(dǎo)致心腦血管事件發(fā)生的關(guān)鍵因素，為多種心腦血管疾病共同的病理生理基礎(chǔ)。其癥候、病 機(jī)等屬于中醫(yī)理論的"血瘀證"。而三七自古便是歷代醫(yī)家常用的活血化瘀之要藥。換而言 之，三七在防治動(dòng)脈粥樣硬化方面有其神奇之處。 糖尿病的神經(jīng)病變并發(fā)癥常直接或間接參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展，因此， 利用三七防治動(dòng)脈粥樣硬化的作用來(lái)治療糖尿病并發(fā)癥是可行的。 三七總皂苷是從三七植物總提取的有效物質(zhì)，三七藥物植物的化學(xué)成分較多，主 要由四環(huán)三萜達(dá)瑪烷型原人參二醇組皂苷和四環(huán)三萜達(dá)瑪烷型原人參三醇組皂苷組成。 三七總皂苷對(duì)高脂血癥、高粘血癥、高血壓、心肌缺血、心律失常、動(dòng)脈粥樣硬化等癥狀均有 一定療效，而且還具有防止血栓形成、改善微循環(huán)、抗心腦缺血、促進(jìn)造血細(xì)胞、抗纖維化、 對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。由上所述，使用三七總皂苷為原料做成的三七總皂苷注射制 劑是一種獨(dú)具多功能的注射劑，而且這些功效都具有獨(dú)立性，集若干重要生物活性，能發(fā)揮 若干種臨床功能于一藥。所有的這些功能里，有的功能是相對(duì)立的，矛盾的。由于三七總皂 苷中成份十分復(fù)雜，目前尚未能真正明確具體什么成份起主要治療作用，成份之間的作用 機(jī)理也沒(méi)有人作過(guò)全面的研究。

發(fā)明內(nèi)容
三七提取物的有效成分主要為三七總皂苷，有活血祛瘀、通脈活絡(luò)之功效，根據(jù)我 公司對(duì)三七總皂苷的臨床研究和藥效學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)三七總皂苷具有預(yù)防和治療糖尿病性神 經(jīng)病變的明顯療效。 糖尿病是由多種病因引起以慢性高血糧為特征的代謝紊亂。久病可引起多系統(tǒng)損
害，導(dǎo)致眼、腎、神經(jīng)、心臟、血管等組織的慢性進(jìn)行性病變，引起功能缺陷及衰竭。 糖尿病的慢性并發(fā)癥可遍及全身各重要器官，與遺傳易感性、高血糖、氧化應(yīng)激、
非酶糖化和多元醇代謝旁路、蛋白激酶C等多方面因素的相互影響有關(guān)。這些并發(fā)癥可單
獨(dú)出現(xiàn)或以不同組合同時(shí)或先后出現(xiàn)。有時(shí)并發(fā)癥有診斷糖尿病前已存在，有些患者因這
些并發(fā)癥作為線索而發(fā)現(xiàn)糖尿病。
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神經(jīng)病變是糖尿病的慢性并發(fā)癥之一。糖尿病神經(jīng)病變主要由微血管病變及山梨 醇旁路代謝增強(qiáng)以致山梨醇增多等所致。電生理檢查可發(fā)現(xiàn)感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度減 慢。 糖尿病周圍神經(jīng)病變是在長(zhǎng)期血糖控制不理想的基礎(chǔ)上發(fā)生的。發(fā)病機(jī)制尚不清 楚。比較公認(rèn)的是與血管障礙、代謝紊亂，肌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子減少等多種因素有關(guān)。血管改變 有毛細(xì)血管內(nèi)膜和細(xì)胞基底膜增生、血小板的聚集增加。纖維素的沉積等使微血管管腔狹 窄和閉塞。從而引起微循環(huán)供血不足、缺血、纖維素缺乏，使末梢神經(jīng)軸突變性，發(fā)生脫髓鞘 改變，因而臨床上出現(xiàn)一系列表現(xiàn)。 本發(fā)明專利從中藥三七提取的三七總皂苷。臨床生理研究證明其有阻止細(xì)胞的 鈣離子內(nèi)流、降低胞漿內(nèi)鈣離子濃度，擴(kuò)張血管；改善組織的微循環(huán)，同時(shí)有提高血小板內(nèi) CAMP含量而抑制血小板聚集，并降低全血粘度。由此而有利于組織的供血供氧。此外，三七 總皂苷有鎮(zhèn)定和鎮(zhèn)痛作用。本發(fā)明專利用于治療糖尿病周圍神經(jīng)病變患者顯效率達(dá)89%。 其機(jī)制可能是既修復(fù)了損傷的神經(jīng)又改善了滋養(yǎng)神經(jīng)的微循環(huán)，加上有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛作用，所 以療效較為顯著。 本發(fā)明專利臨床應(yīng)用的安全性較高，在糖尿病性神經(jīng)病變的藥物治療中不失為一 種好藥，其拓寬了中藥制劑治療冠心病的新方法，在不能開展介入治療的基層醫(yī)院尤為適 用。 因此，申請(qǐng)人提供一種制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物方面的新用 途。 本發(fā)明公開了一種制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物方面的新用途，其 特征在于所述三七總皂苷組合物中含有活性成份，該活性成份由三七提取的三七總皂苷活 性成份組成，三七皂苷&含量大于8.0%、人參皂苷Rgl含量大于25 % 、人參皂苷Rl^含量 大于25%、人參皂苷Re含量大于4. 0%，且三七皂苷R"人參皂苷Rb^人參皂苷Rgl與人參 皂苷Re的總重量大于活性成份總重量的75% 。
優(yōu)選地，Rb! : Rg!為l.O : 0.5 2.0。 優(yōu)選地，所述的有效成分組合物的含量是三七皂苷&含量大于8. 0%、人參皂苷 Rgi含量大于25X、人參皂苷Rbi含量大于25X、人參皂苷Re含量大于4.0X，且Rbi : Rgl
為i. o : i. o i. 8 ; 更優(yōu)選地，所述的有效成分組合物的含量是三七皂苷&含量大于8. 0%、人參皂 苷R&含量大于25X、人參皂苷Rl^含量大于25X、人參皂苷Re含量大于4.0X，且Rl^ : Rgl 為1. 0 : 1. 4 1. 6 ; 優(yōu)選地，三七皂苷Rp人參皂苷Rbp人參皂苷R^與人參皂苷Re的總重量大于活 性成份總重量的85% ; 更優(yōu)選地，三七皂苷Rp人參皂苷Rbp人參皂苷Rgl與人參皂苷Re的總重量大于 活性成份總重量的90% ; 優(yōu)選地，所述的有效成分組合物的含量是其中三七皂苷Ri含量為8X 15%、人 參皂苷Rg工含量為35X 52X、人參皂苷Re含量為4X 10X、人參皂苷Rbi含量為25X 40%。 本發(fā)明三七總皂苷活性成份組合物的劑型可以制成各種劑型，如制成注射液、注射用粉針劑，注射用凍干粉針劑、片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、合劑、糖漿劑、膠囊劑、滴丸劑制 劑，優(yōu)選制成注射液、注射用凍干粉針劑。
以下是本發(fā)明中藥制劑的藥材來(lái)源三七為五加科植物的干燥根。 申請(qǐng)人:還提供了一種制備所述的三七總皂苷活性成份組合物的方法，它包括如下
步驟 (1)取三七粉碎成粗粉1000g，加體積比為5-30倍的45_95%的乙醇提取0. 5 IO小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾； (2)取濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 5g生藥的溶液； (3)溶液通過(guò)D型大孔樹脂柱吸附，用乙醇_水的混合液進(jìn)行梯度洗脫，流速按每
小時(shí)樹脂體積的倍數(shù)計(jì)為4. 5BV/h，洗脫液中乙醇濃度逐步由5%調(diào)整至95%，收集含乙醇
濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，棄去含乙醇濃度在30%至70%以外的洗脫液，65t:
以下減壓回收溶劑并濃縮至在6(TC下相對(duì)密度為1. 10 1. 20的清膏，低溫干燥得三七總
皂苷組合物。 優(yōu)選地，步驟(1)中加入7倍的乙醇；加入的乙醇濃度為65%;提取時(shí)間為7小時(shí)。
將三七總皂苷活性成份組合物根據(jù)制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法，制成各種制劑。
上述過(guò)程獲得的三七總皂苷活性成份組合物中各成份含量約為三七皂苷I^含量 大于8. 0%、人參皂苷Rgl含量大于25%、人參皂苷Rt^含量大于25%、人參皂苷Re含量大 于4.0X，且Rbi : Rg工為l.O : 0. 5 2.0，且三七皂苷Rp人參皂苷Rbp人參皂苷Rgi與 人參皂苷Re的總重量大于活性成份總重量的75%。 基于上述三七總皂苷組合物，本發(fā)明的目的是提供該組合物的一種新用途，即在
制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物的應(yīng)用。它可以制成膠囊、注射劑、片劑、栓劑
或口服液等可使用的制劑。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。 以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明了該組合物的新藥效，表明了本發(fā)明的有益效果。 根據(jù)上述三七總皂苷組合物制備的注射液對(duì)家兔糖尿病性神經(jīng)病變的治療和/
或預(yù)防作用實(shí)驗(yàn)。 1.實(shí)驗(yàn)材料 1. 1實(shí)驗(yàn)藥物 根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例1制備的樣品；消渴丸(廣州中一藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 Z44020045，批號(hào)KY0111)。
1. 2試齊U 鏈脲霉素(str印tozotocin， STZ， sigma公司)；擰檬酸(北京市旭東化工廠，優(yōu) 級(jí)純，批號(hào)060706);檸檬酸鈉(北京化學(xué)試劑公司，分析純，批號(hào)20060606);戊巴比妥 鈉(北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)020919);葡萄糖測(cè)定試劑盒(中生北控生物科技股份有
限公司，批號(hào)060731);總膽固醇測(cè)定試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)
070471);甘油三酯測(cè)定試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)072011)。
1. 3實(shí)驗(yàn)儀器 離心機(jī)(LXJ-II，上海醫(yī)用分析儀器廠)；多導(dǎo)生理記錄儀(BIOPAC MP150，美國(guó))； 半自動(dòng)生化測(cè)定儀(Microlab 300， Vital Scientific Inc.)。
1. 4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
Wistar大鼠，雄性，清潔級(jí)，體重180g-220g，來(lái)源中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究 所，許可證號(hào)SCXK(京)2005-0013。
2..實(shí)驗(yàn)方法
2. 1試劑配制 (l)20ml 0. 1M擰檬酸緩沖液(pH4. 4) :0. 1M擰檬酸11. 4ml+0. 1M擰檬酸鈉8. 6ml ; (2)2% STZ :用0. 1M檸檬酸緩沖液配制，現(xiàn)配現(xiàn)用，置于冰浴中。
2. 2大鼠糖尿病模型的建立 大鼠禁食16h， 2 % STZ腹腔注射(50mg/kg ;0. 25ml/100g)，注射后72h尾靜脈取 血，測(cè)定空腹血糖，空腹血糖水平> 300mg/dl(16. 7mM)為大鼠糖尿病模型造模成功。
2. 3實(shí)驗(yàn)分組劑量設(shè)置 (1)實(shí)施例1 :人的臨床用藥量為300mg/60kg/d， im。大鼠用藥量為人臨床用藥量
的6倍。故而實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)劑量組高劑量組(臨床等效劑量的2倍)60mg/kg/d ;中劑量
組(臨床等效劑量)30mg/kg/d ;低劑量組(臨床等效劑量的1/2) 15mg/kg。 (2)消渴丸人的臨床用法用量為，口服，一次3-10丸(2.5g/10丸)，2-3次/日。
選定人的臨床用藥量為5g/60kg/d。大鼠用藥量為人臨床用藥量的6倍，故而消渴丸大鼠給
藥量為500mg/kg/d。 2. 4實(shí)驗(yàn)分組及給藥 大鼠按體重隨機(jī)分組，確認(rèn)糖尿病模型成功后，常規(guī)飲食飼喂12周，然后給予相 應(yīng)藥物干預(yù)如下
分組-v~ 動(dòng)物數(shù)(只)劑量(mg/kg/d)給藥途徑給藥時(shí)間(周)
正常對(duì)照組10等體積NSip12
模型組10等體積NSip12
消渴丸組10500ig12
實(shí)施例1低劑量組1015ip12
實(shí)施例1中劑量組1030ip12
實(shí)施例1高劑量組1060ip12 2. 5神經(jīng)傳導(dǎo)速度測(cè)定 末次給藥后lh，大鼠戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔麻醉。分離大鼠坐骨神經(jīng)，測(cè)定 電極兩端距離(D)， Biopac多導(dǎo)生理記錄儀測(cè)定剌激坐骨神經(jīng)兩點(diǎn)誘發(fā)腓腸肌動(dòng)作電位的 M波潛伏期的差值(L)。根據(jù)及兩剌激點(diǎn)間的距離(D)，計(jì)算出神經(jīng)傳導(dǎo)速度NCV，NCV二D/ L。 2. 6血糖、血脂測(cè)定 實(shí)驗(yàn)前禁食16h。腹主動(dòng)脈采血，離心取血清，常規(guī)生化檢測(cè)方法測(cè)定空腹血糖、
TC、TG水平。 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3. 1實(shí)施例1對(duì)糖尿病大鼠血脂及血糖的影響 表1實(shí)施例1對(duì)糖尿病大鼠血脂及血糖的影響(x士s)
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分組給藥劑量 (mg/kg)NGlu (mmol/L)TC (mmol/L)TG (mmol/L)
空白對(duì)照組—103.05士0.78"'1.53±0.321.32±0.43
模型組—1028.99土4.84' 。 *1.53±0.492.38±1.40
消渴丸組5001022.44士9.00''''1.46±0.491.76±0.48
實(shí)施例1低劑 量組15928.78士4.06''。1.60±0.712.68±1.87
實(shí)施例1中劑 量組30624.78士4.06''41.60±0.192.84±1.92
實(shí)施例1高劑 量組60822.37士8.30' *''1.10±0.522.28±1.74 與空白組比較AP < 0. 05，AAP < 0. Ol，AAAP < 0. 001 ;與模型組比較*P < 0. 05，承承P < 0. 01，承承承P < 0. 001。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)腹腔注射STZ后，模型組、消渴丸組及實(shí)施例l低、中、高組大鼠 血糖水平均顯著高于空白對(duì)照組(P〈0.001)，表明大鼠糖尿病模型造模成功。連續(xù)給藥 12周后，消渴丸(500mg/kg)與實(shí)施例1高劑量(60mg/kg)可以降低糖尿病大鼠血糖水平， 與模型組比較有顯著性差異(p<0.05)。模型組與空白對(duì)照組比較，TC、TG水平未見顯著 性差異(P>0. 05)，表明該糖尿病模型造模24周后，并未引起糖尿病大鼠血脂水平的變化。
以上結(jié)果表明，實(shí)施例1可降低糖尿大鼠血糖水平，對(duì)糖尿病大鼠的血糖水平具 有一定的調(diào)節(jié)作用。 3. 2實(shí)施例1對(duì)糖尿病大鼠神經(jīng)傳導(dǎo)的影響 表2實(shí)施例1對(duì)糖尿病大鼠神經(jīng)傳導(dǎo)速度的影響(x士s)
分組給藥劑量(mg/kg)NNCV
空白對(duì)照組—636.47±10.23"'
模型組—918.94土4.88…
消渴丸組5001031.97士8.53"
實(shí)施例1低劑量組15720.74土6.86'4'
實(shí)施例1中劑量組30629.65±6.59'
實(shí)施例1高劑量組60832.73士10.95" 與空白組比較AAAP < 0.001 ;與模型組比較*P < 0.05， **P < 0.01， ***P < 0. 001。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腹腔注射STZ糖尿病造模后24周，模型組大鼠神經(jīng)傳導(dǎo)速度減慢， 與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P < 0. 001)。消渴丸(500mg/kg)、實(shí)施例1中劑量(30mg/ kg)和實(shí)施例l大劑量(60mg/kg)均可提高糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度，與模型組比較有 顯著性差異(P值分別為< 0. Ol，O. 05，0. 01)。 結(jié)果表明，實(shí)施例1可提高糖尿病大鼠神經(jīng)傳導(dǎo)速度，對(duì)糖尿病性神經(jīng)傳導(dǎo)功能具有一定的改善作用。
4.結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)腹腔注射STZ后，糖尿病大鼠出現(xiàn)血糖水平升高、神經(jīng)傳導(dǎo)速 度減慢。經(jīng)腹腔注射實(shí)施例1凍干粉針12周后，可降低糖尿病大鼠血糖水平、提高神經(jīng)傳 導(dǎo)速度；可改善大鼠糖尿病性視網(wǎng)膜小血管和神經(jīng)纖維病變。
臨床試驗(yàn)
—、對(duì)象 1999年WH0標(biāo)準(zhǔn)診斷的2型糖尿病患者共30例，全部來(lái)自住院病人。入選條件 為 四肢自發(fā)性疼痛或感覺(jué)障礙；肌電圖示運(yùn)動(dòng)神經(jīng)尤其是脛神經(jīng)的感覺(jué)傳導(dǎo)速度減 弱。排除其他原因所致的周圍神經(jīng)病變。 年齡62 85歲、血糖控制平穩(wěn)(HbAlc < 7% );不合并使用治療糖尿病神經(jīng)病變 的藥物2周以上。其中病程5 15年(糖尿病)，男性21例、女性9例。均無(wú)使用實(shí)施例
l(凍干粉針)的禁忌癥。
二、方法 1、用藥方法所有病例均在嚴(yán)格控制飲食及口服降糖藥物或胰島素治療的基礎(chǔ) 上，用實(shí)施例1 (凍干粉針)450mg+生理鹽水100ml靜脈滴注，每日1次，2周為1療程，共2 個(gè)療程。
2、療效判斷顯效自覺(jué)癥狀明顯好轉(zhuǎn)或消失，腱反射明顯好轉(zhuǎn)或恢復(fù)正常，肌電 圖神經(jīng)傳導(dǎo)速度較前增加5m/s以上或恢復(fù)正常。有效自覺(jué)癥狀改善，膝踝反射有所改善。 無(wú)效自覺(jué)癥狀無(wú)改善，神經(jīng)肌腱反射和肌電圖神經(jīng)傳導(dǎo)速度無(wú)變化。
三、統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)以X±S表示，同組治療前后數(shù)據(jù)比較以配對(duì)t檢驗(yàn)。
四、結(jié)果 1、一般臨床特征30例糖尿病患者在觀察過(guò)程中空腹血糖治療前8. 5±1. 62mo1/
L ;治療后為7. 9±1. 4mol/L，兩者之間無(wú)明顯差異。全部病人均堅(jiān)持完成觀察。 2、周圍神經(jīng)病變癥狀的主要變化治療前上、下肢自發(fā)疼痛，感覺(jué)減退、麻木、發(fā)熱
和發(fā)冷的發(fā)生率分別為50%、34%、42%、68%、16%、17%。經(jīng)靜脈用藥四周后，上肢和下肢
自發(fā)性疼痛、感覺(jué)減退、麻木、發(fā)熱的感覺(jué)明顯改善，改善率60%以上。在治療前后膝反射、
踝反射降低的改善率分別為49%、51%。如圖l所示。 3、神經(jīng)肌電圖的測(cè)試30例病人當(dāng)中有20例進(jìn)行神經(jīng)肌電圖檢查。如表2所示。 治療前、后正中神經(jīng)、脛神經(jīng)、腓總神經(jīng)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度和正中神經(jīng)、腓淺神經(jīng)的感覺(jué) 神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯提高。 30例測(cè)定治療前、后的血常規(guī)、尿常規(guī)和肝功能、腎功能等指標(biāo)無(wú)名顯差異。
表I用實(shí)施例1 (凍干粉針)劑治療后病人主觀癥狀的改善
8
類別 例數(shù)輕度中度 重度明顯改善率(％)
下肢自發(fā)性疼痛1554 6
治療四周后1386.67 (13/15)
上肢自發(fā)性疼痛1274 1
治療四周后975.00(9/12)
麻木感22116 5
治療四周后2090.90(20/22)
發(fā)熱、發(fā)冷感24147 3
治療四周后2187.50(21/24)
感覺(jué)減退18124 2
治療四周后1161.11(11/18)
表2實(shí)施例1治療運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)速度(m/s)變化
運(yùn)動(dòng)神經(jīng)感覺(jué)神經(jīng)
治療時(shí)間 正中神經(jīng)脛神經(jīng)腓總神經(jīng)正中神經(jīng)腓前神經(jīng)
治療前 41.2 ±5.730.2±3.530.6±3.440.9±5.228.5±5.9
治療后 43.1 ±6.3*32.1±5.1*32.1 ±3.7*31.6±6.1*31.4±5.2* 與治療前比較盧P〈0. 05
五、討論 糖尿病周圍神經(jīng)病變是在長(zhǎng)期血糖控制不理想的基礎(chǔ)上發(fā)生的。發(fā)病機(jī)制尚不清 楚。比較公認(rèn)的是與血管障礙、代謝紊亂，肌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子減少等多種因素有關(guān)。血管改變 有毛細(xì)血管內(nèi)膜和細(xì)胞基底膜增生、血小板的聚集增加。纖維素的沉積等使微血管管腔狹 窄和閉塞。從而引起微循環(huán)供血不足、缺血、纖維素缺乏，使末梢神經(jīng)軸突變性，發(fā)生脫髓鞘 改變，因而臨床上出現(xiàn)一系列表現(xiàn)。實(shí)施例1是從中藥三七提取的三七總皂苷。臨床生理 研究證明其有阻止細(xì)胞的鈣離子內(nèi)流、降低胞漿內(nèi)鈣離子濃度，擴(kuò)張血管；改善組織的微 循環(huán)，同時(shí)有提高血小板內(nèi)CAMP含量而抑制血小板聚集，并降低全血粘度。由此而有利于 組織的供血供氧。此外，三七總皂苷有鎮(zhèn)定和鎮(zhèn)痛作用。用本發(fā)明專利治療30例糖尿病周 圍神經(jīng)病變患者顯效率達(dá)89%。其機(jī)制可能是既修復(fù)了損傷的神經(jīng)又改善了滋養(yǎng)神經(jīng)的微 循環(huán)，加上有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛作用，所以療效較為顯著。加上本發(fā)明專利性能穩(wěn)定，在整個(gè)療程中 未見不良反應(yīng)，故可認(rèn)為是一種治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的好藥物，值得臨床推廣。
具體實(shí)施例方式
下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施例是用于說(shuō)明 本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明 要求保護(hù)的范圍。除非另有說(shuō)明，本發(fā)明中的百分?jǐn)?shù)是重量百分?jǐn)?shù)(乙醇為體積百分比)， BV/h表示以樹脂體積為V計(jì)，B為倍數(shù)，溶液每小時(shí)的洗脫體積為樹脂體積BXV。
實(shí)施例1 : 取三七粉碎成粗粉1000g，加65%乙醇7000ml提取7小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取水制成每1ml含0. 5g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫，乙醇濃度在6小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95%，流速4. 5BV/h，棄去含乙醇濃度在30% 至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減壓回 收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 13(60°C )的清膏，得三七總皂苷活性成份，加注射用水調(diào)節(jié) 每lml含固形物100mg，超濾，灌裝，冷凍干燥，制成實(shí)施例1粉針劑。
檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷&為12. 47%、人參皂苷Rgl為 45. 12%、人參皂苷Re為6. 04%、人參皂苷Rl^為29. 94%，以上四成份總量為93. 57%，且 Rb丄:Rgl為1. 0 : 1. 51。
實(shí)施例2 : 取三七粉碎成粗粉1000g，加50%乙醇10000ml提取6小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取 濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 4g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫(乙醇濃度在5. 5小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95% )，流速5. OBV/h，棄去含乙醇濃度在 30 %至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減 壓回收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 15(60°C )的清膏，干燥，得三七總皂苷活性成份，加注 射用水調(diào)節(jié)每lml含固形物50mg 55mg，超濾，灌裝，制成實(shí)施例1注射液。
檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷&為11. 54%、人參皂苷Rgl為 45. 26X、人參皂苷Re為5. 06X、人參皂苷R^為31. 26%，以上四成份總量為93. 12%，且 Rb丄:Rgl為1. 0 : 1. 45。
實(shí)施例3: 取三七粉碎成粗粉1000g，加75%乙醇7500ml提取8小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取 濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 6g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫(乙醇濃度在6. 5小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95% )，流速4. OBV/h，棄去含乙醇濃度在 30 %至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減 壓回收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 16(60°C )的清膏，得三七總皂苷活性成份，加針用活性 炭0. 30% (重量比)，80°C以下保溫?cái)嚢?0分鐘，濾過(guò)，加注射用水調(diào)節(jié)每lml含固形物 150mg，冷凍干燥，分裝，制成實(shí)施例1粉針劑。
檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷&為13. 3%、人參皂苷Rgl為 49. lX、人參皂苷Re為5. lX、人參皂苷Rbi為30. 9%，以上四成份總量為98. 4%，且 Rb丄:Rgl為1. 0 : 1. 59。
實(shí)施例4: 取三七粉碎成粗粉1000g，加80%乙醇8000ml提取6小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取 濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 5g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫，乙醇濃度在6小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95%，流速4. 5BV/h，棄去含乙醇濃度在30% 至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減壓回 收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 13(60°C )的清膏，得三七總皂苷活性成份，加注射用水調(diào)節(jié)
10每1ml含固形物lOOmg，超濾，灌裝，冷凍干燥，制成實(shí)施例1粉針劑。
檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷^為10. 1 % 、人參皂苷Rgl為 37. 4X、人參皂苷Re為4. 7X、人參皂苷Rl^為36. 17%，以上四成份總量為88. 37%，且 Rb丄:Rgl為1. 0 : 1. 03。
實(shí)施例5: 取三七粉碎成粗粉1000g，加85%乙醇8000ml提取8小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取 濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 5g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫，乙醇濃度在6小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95%，流速4. 5BV/h，棄去含乙醇濃度在30% 至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減壓回 收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 13(60°C )的清膏，得三七總皂苷活性成份，加注射用水調(diào)節(jié) 每lml含固形物100mg，超濾，灌裝，冷凍干燥，制成實(shí)施例1粉針劑。
檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷&為10. 4%、人參皂苷Rgl為 39. 6X、人參皂苷Re為5. 2X、人參皂苷Rl^為36. 0%，以上四成份總量為91.2%，且 Rbi : Rgl為1. 0 : 1. 10。
實(shí)施例6: 取三七粉碎成粗粉1000g，加75%乙醇8000ml提取7小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取 濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 5g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫，乙醇濃度在6小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95%，流速4. 5BV/h，棄去含乙醇濃度在30% 至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減壓回 收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 13(60°C )的清膏，得三七總皂苷活性成份，加注射用水調(diào)節(jié) 每lml含固形物100mg，超濾，灌裝，冷凍干燥，制成實(shí)施例1粉針劑。檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷I^為13. 1X、人參皂苷R^為 41. 21%、人參皂苷Re為4. 9%、人參皂苷Rl^為34. 23%，以上四成份總量為93. 44%，且 Rbi : Rgl為1. 0 : 1. 20。
實(shí)施例7: 取三七粉碎成粗粉1000g，加65%乙醇6000ml提取8小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取 濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 5g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫，乙醇濃度在6小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95%，流速4. 5BV/h，棄去含乙醇濃度在30% 至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減壓回 收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 12(60°C )的清膏，得三七總皂苷活性成份，加注射用水調(diào)節(jié) 每lml含固形物100mg，超濾，灌裝，冷凍干燥，制成實(shí)施例1粉針劑。檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷&為9. 77%、人參皂苷Rgl為 44. 89% 、人參皂苷Re為4. 41 % 、人參皂苷Rl^為26. 01 % ，以上四成份總量為88. 08 % ，且 Rb丄:Rgl為1. 0 : 1. 73。
實(shí)施例8:取三七粉碎成粗粉1000g，加90%乙醇10000ml提取9小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取
11濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 5g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫，乙醇濃度在6小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95%，流速4. 5BV/h，棄去含乙醇濃度在30% 至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減壓回 收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 12(60°C )的清膏，得三七總皂苷活性成份，加注射用水調(diào)節(jié) 每lml含固形物100mg，超濾，灌裝，冷凍干燥，制成實(shí)施例1粉針劑。檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷&為12. 3%、人參皂苷Rgl為 23. 12X、人參皂苷Re為5. 81X、人參皂苷Rbi為34. 96%，以上四成份總量為76. 19%，且 Rbi : Rgl為1. 0 : 0. 66。
實(shí)施例9: 取三七粉碎成粗粉1000g，加85X乙醇9000ml提取10小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取 濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 5g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫，乙醇濃度在6小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95%，流速4. 5BV/h，棄去含乙醇濃度在30% 至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減壓回 收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 12(60°C )的清膏，得三七總皂苷活性成份，加注射用水調(diào)節(jié) 每lml含固形物100mg，超濾，灌裝，冷凍干燥，制成實(shí)施例9粉針劑。檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷&為13. 6%、人參皂苷Rgl為 51.01X、人參皂苷Re為5. lX、人參皂苷Rbi為28. 2%，以上四成份總量為97. 91%，且 Rb丄:Rgl為1. 0 : 1. 81。
實(shí)施例10 : 取三七粉碎成粗粉1000g，加65%乙醇7500ml提取9小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾，取 濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 5g生藥的溶液，用大孔樹脂柱(D類大孔樹 脂、樹脂體積3000ml，樹脂床高與直徑比約為8)及氧化鋁吸附，用不同濃度的乙醇液進(jìn)行 梯度洗脫，乙醇濃度在6小時(shí)內(nèi)由5%調(diào)整至95%，流速4. 5BV/h，棄去含乙醇濃度在30% 至70%以外的洗脫液，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，65t:以下減壓回 收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1. 13(60°C )的清膏，得三七總皂苷活性成份，加注射用水調(diào)節(jié) 每lml含固形物100mg，超濾，灌裝，冷凍干燥，制成實(shí)施例10粉針劑。 檢驗(yàn)結(jié)果上述提取物中各成份含量三七皂苷&為10. 12%、人參皂苷Rgl為 51.67X、人參皂苷Re為4. 4X、人參皂苷Rl^為27. 1%，以上四成份總量為93. 29%，且 Rb! : Rgl為1. 0 : 1. 91。
權(quán)利要求
三七植物在制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物的應(yīng)用。
2. 三七植物提取物在制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物的應(yīng)用。
3. 三七總皂苷在制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物的應(yīng)用。
4. 一種三七總皂苷組合物在制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物的應(yīng)用，其特征在于所述三七總皂苷組合物中含有活性成份，該活性成份由三七提取的三七總皂苷活性成份組成，其中三七皂苷&含量大于8.0%、人參皂苷Rgl含量大于25% 、人參皂苷Rl^含量大于25%、人參皂苷Re含量大于4. 0%，且三七皂苷R"人參皂苷Rb^人參皂苷Rgl與人參皂苷Re的總重量大于活性成份總重量的75%，所述組合物通過(guò)下述方法制備(1) 取三七粉碎成粗粉1000g，加體積比為5-30倍的45-95%的乙醇提取0. 5 10小時(shí)，收集提取液，過(guò)濾；(2) 取濾液回收乙醇至無(wú)醇味，加水制成每lml含0. 5g生藥的溶液；(3) 溶液通過(guò)D型大孔樹脂柱吸附，用乙醇_水的混合液進(jìn)行梯度洗脫，流速按每小時(shí)樹脂體積的倍數(shù)計(jì)為4. 5BV/h，洗脫液中乙醇濃度逐步由5%調(diào)整至95%，收集含乙醇濃度在30%以上至70%以下的洗脫液，棄去含乙醇濃度在30%至70%以外的洗脫液，65t:以下減壓回收溶劑并濃縮至在6(TC下相對(duì)密度為1. 10 1. 20的清膏，低溫干燥得三七總皂苷組合物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于Rbl : Rgl為l.O : 0. 5 2.0。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于Rbl : Rgl為l.O : 1.0 1.8。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于Rbl : Rgl為l.O : 1.4 1.6。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于三七皂苷Rl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rgl與人參皂苷Re的總重量大于活性成份總重量的85%。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于三七皂苷Rl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rgl與人參皂苷Re的總重量大于活性成份總重量的90%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于其中三七皂苷R1含量為8X 15%、人參皂苷Rgl含量為35% 52%、人參皂苷Re含量為4% 10%、人參皂苷Rbl含量為25% 40%。
11. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于步驟(1)中加入7倍的乙醇。
12. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于步驟(1)中加入的乙醇濃度為65%。
13. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于步驟(1)中提取時(shí)間為7小時(shí)。
14. 根據(jù)權(quán)利要求4-13所述的應(yīng)用，其特征在于其中的組合物可被制成注射液、注射用粉針劑、注射用凍干粉針劑、片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、合劑、糖漿劑、膠囊劑或滴丸劑制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及三七、三七提取物、三七總皂苷以及三七總皂苷組合物的新用途，即在制備治療和/或預(yù)防糖尿病性神經(jīng)病變藥物方面的新用途。
文檔編號(hào)A61P25/02GK101700264SQ20091022395
公開日2010年5月5日 申請(qǐng)日期2009年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月20日
發(fā)明者許淑清, 趙學(xué)偉, 陳明 申請(qǐng)人:許淑清