專利名稱：：一種馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及維吾爾藥成分純化方法，主要涉及維吾爾藥提取物的純化方法，尤其涉及馬齒莧子總黃酮的純化方法，屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：在全球長壽地區(qū)之一的新疆，維吾爾傳統(tǒng)醫(yī)藥至今廣泛流傳。新疆具有獨(dú)特的地理環(huán)境和氣候條件，因而蘊(yùn)育了豐富的維吾爾藥材資源。馬齒莧子為馬齒莧科植物馬齒莧PortulacaoleraceaL.的干燥種子，夏秋果實(shí)成熟時采收全株曬干，抖動后收集落下的種子。本品扁圓形或圓腎形，長約O.94mm，寬0.83mm，厚約0.42mm。表黑色，少數(shù)紅棕色，于解剖鏡下可見密布細(xì)小疣狀突起。一端有一凹陷，凹陷旁有一白色種臍。質(zhì)堅(jiān)硬，難破碎。氣微，味微酸。以粒飽滿，色黑者為佳。清涼生津，利尿止渴，降低機(jī)體膽液質(zhì)的偏旺。用于治療熱性疾患，胃病，頭痛，子宮炎癥，腦膜炎，尿道炎及熱性臺甫。研究認(rèn)為馬齒莧子的這些作用與黃酮類成分有密切關(guān)系。馬齒莧子總提取物由于成分復(fù)雜而使制成的制劑不可避免地存在粗、大、黑的缺點(diǎn)，且總提取物中還因含有較多的糖類而具有較大的吸濕性，限制了其劑型的選擇。因此對馬齒莧子總黃酮進(jìn)行純化，使純化后的產(chǎn)品符合中藥新劑型的需要具有重要的意義。中藥中黃酮類化合物的純化，傳統(tǒng)采用溶劑萃取法、聚酰胺和硅膠柱層析法，但是溶劑萃取法操作麻煩，萃取過程又易乳化，所有有機(jī)溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、正丁醇有不同程度的毒性，且用氯仿萃取，只能得到黃酮總量的40%;用乙酸乙酯萃取，也只能得到總量的50%;用正丁醇萃取也僅得到總量的40%左右，因此需要用上述幾種溶劑依次萃取才能使總黃酮基本萃取完全。聚酰胺純化法對馬齒莧子總黃酮的不可逆吸附達(dá)40%，因此其得率低，且洗脫麻煩。硅膠純化法對黃酮的不可逆吸附達(dá)60%，得率更低。因此上述三種方法在馬齒莧子總黃酮純化中，均不理想。而同時基于大孔樹脂在中藥純化中應(yīng)用日漸廣泛，已用于純化黃酮、皂苷、生物堿等中藥成分，大孔樹脂種類日益增多，在傳統(tǒng)D101、D102樹脂的基礎(chǔ)上，已開發(fā)了各種不同性能的大孔樹脂，如，天津農(nóng)藥股份公司樹脂分公司生產(chǎn)的D-101、DA201、匿301，河北滄州寶恩化工有限公司的HPD系列，以及南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的AB-8、D3520等?？梢钥紤]采用大孔樹脂對其進(jìn)行提純。
發(fā)明內(nèi)容針對現(xiàn)有馬齒莧子中總黃酮的提取與純化方法上存在的不足之處，本發(fā)明提供一種全新的馬齒莧子中總黃酮的提取與純化方法，主要用樹脂對馬齒莧子進(jìn)行柱提純，采用這種方法，降低了有機(jī)溶劑在整個提純過程中的應(yīng)用，防止了有機(jī)溶劑對最終產(chǎn)物的影響，本發(fā)明方法純化馬齒莧子，其總黃酮轉(zhuǎn)移率可達(dá)90%以上，純化物總黃酮含量可達(dá)55%以上，且重現(xiàn)性好，樹脂可重復(fù)使用。本發(fā)明所述的技術(shù)方案如下一種馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法，由以下具體步驟組成1)取粉碎的馬齒莧子，以體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為溶劑，浸泡12小時，以藥材質(zhì)量IO倍體積量的體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為提取劑，加熱至回流提取，收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液；2)將步驟1得到的提取液濃縮到每毫升含提取物20mg，選用HPD-400或HPD-600或AB-8或D101大孔樹脂，上樣，上樣吸附0.12.0小時，先水洗，水洗體積為1BV3BV，水洗流速為lBV/h3BV/h，然后用乙醇洗脫，洗脫用乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%80%，洗脫量為1BV4BV，洗脫速度為2BV/h4BV/h;3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，5(TC真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品。本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法步驟2中優(yōu)選HPD-400大孔樹脂對濃縮液進(jìn)行純化，優(yōu)選工藝條件為上樣吸附時間為1.0小時，水洗體積為1BV，水洗流速為2BV/h，洗脫劑為乙醇，洗脫用乙醇濃度為60%，乙醇洗脫量為2BV，乙醇洗脫速度為2BV/h。本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法步驟2中提取液濃縮物為透明狀棕黃色液體或含有懸浮態(tài)棕黃色絮狀顆粒的透明狀棕黃色液體。本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法步驟2中濃縮液上樣的方式是干法上樣，上樣體積與大孔樹脂質(zhì)量比值為5:iio:i。優(yōu)選濃縮液上樣體積比大孔樹脂質(zhì)量為8:1。干法上樣可以使未溶解的樣品與樹脂充分混合均勻，吸附的更加充分。上樣體積與大孔樹脂質(zhì)量比值太大樹脂吸收飽和且有剩余，浪費(fèi)濃縮液。上樣體積與大孔樹脂質(zhì)量比值太小，大孔樹脂利用不完全有浪費(fèi)。本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法，獲得馬齒莧子純化物的總黃酮質(zhì)量含量>55%，總黃酮轉(zhuǎn)移率>90%。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法操作簡單、快捷；2.所選的大孔樹脂具有吸附量大、解吸率大的功能；3.濃縮液上樣的方式是干法上樣，使未溶解的樣品與樹脂充分混合均勻，吸附的更加充分；4.以乙醇為溶劑和洗脫劑，價廉、無毒；5.本發(fā)明方法純化馬齒莧子，其總黃酮轉(zhuǎn)移率可達(dá)90%以上，純化物總黃酮含量可達(dá)55%以上，且重現(xiàn)性好，樹脂可重復(fù)使用。具體實(shí)施例方式為了更好理解本發(fā)明的技術(shù)方案，以下通過具體的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述。實(shí)施例1—種馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法，具體步驟如下1)取粉碎的馬齒莧子50g，以體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為溶劑，浸泡12小時，以藥材質(zhì)量10倍體積量的體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為提取劑，加熱至回流提取，收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液；2)將提取液濃縮到每毫升含提取物20mg，選用D101大孔樹脂，上樣體積與大孔樹脂質(zhì)量比值為8:1干法上樣，上樣吸附1.0小時，先用2BV蒸餾水水洗，水洗流速為2BV/h，然后用3BV體積分?jǐn)?shù)為50%乙醇洗脫，洗脫速度為2BV/;3)將收集的乙醇洗脫液，濃縮，5(TC真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品3.58g。實(shí)施例2四種樹脂對馬齒莧子總黃酮的靜態(tài)吸附與解吸試驗(yàn)稱取lg干樹脂，分別裝入100ml錐形瓶中，各加入濃度為10mg/ml的樣品溶液20ml。每隔lOmin振蕩10s，持續(xù)2h，靜止24h，使其達(dá)到飽和吸附，抽濾，取濾液l.Oml，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作，求得樣品的黃酮含量。按下式計(jì)算樹脂吸附量吸附量=[初始質(zhì)量濃度_剩余質(zhì)量濃度]X溶液體積/樹脂量將濾出的樹脂另置100ml錐形瓶中，加入70%乙醇20ml，每隔lOmin振蕩lOs，持續(xù)2h，抽濾，取濾液1.0ml，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作，求得樣品的黃酮含量。按下式計(jì)算解吸率(%):解吸率=[解吸液濃度X解吸液體積]/吸附量X100%表1四種樹脂靜態(tài)飽和吸附量及靜態(tài)洗脫率測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>通過表1可知，DIOI和HPD-400的解吸率接近，而HPD-400的吸附量更大，故選擇HPD-400型吸附樹脂。實(shí)施例3濃縮液上樣體積與大孔樹脂質(zhì)量比值稱取已處理的HPD-400型樹脂3份(每份相當(dāng)于干樹脂8g)，干法裝柱，濃縮液(20mg/ml)上樣體積與大孔樹脂質(zhì)量比值(mg/ml)分別為5:1、8:1、10:1，以2BV蒸餾水，2BV/h速度沖洗后，以3BV的50%的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，流速3BV/h，純化后總黃酮回收率分別為90.97%，91.56%，89.55%。故宜選擇濃縮液(20mg/ml)上樣體積與大孔樹脂質(zhì)量比值(mg/ml)為8:1。實(shí)施例4沖洗雜質(zhì)用水體積稱取已處理的HPD-400型樹脂3份(每份相當(dāng)于干樹脂8g)，干法裝柱，干樹脂質(zhì)量lg，上柱黃酮提取液6ml(20mg/ml)，靜置1小時，分別用1BV、2BV、3BV蒸餾水以2BV/h的速度沖洗，繼用2BV的60%乙醇洗脫，收集洗脫液，測其吸光度，計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果表明總黃酮回收率分別為89.3%、88.9%、89.4%，總黃酮的純度分別為45.6%、45.7%、45.6%，數(shù)據(jù)結(jié)果表明洗脫水用量對總黃酮回收率和純度無明顯影響。為減少洗脫用水，縮短洗脫時間且充分沖洗雜質(zhì)，選擇1BV為洗脫雜質(zhì)用水量。實(shí)施例5洗脫劑流速對純化的影響稱取已處理的D101型樹脂3份(每份相當(dāng)于干樹脂8g)，干法裝柱，干樹脂質(zhì)量lg，上柱黃酮提取液10ml(20mg/ml)，靜置1小時，讓其充分吸附，以2BV蒸餾水，2BV/h速度沖洗后，以3BV的50%的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，流速分別為lBV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h，純化后總黃酮回收率分別為93.22%，92.97%，91.19%，89.55%。洗脫劑流速lBV/h比2BV/h的回收率高，但相差不大，為了提高效率，洗脫劑流速選擇2BV/h。實(shí)施例6HPD-400大孔吸附樹脂動態(tài)吸附_洗脫實(shí)驗(yàn)洗脫用醇的體積稱取已處理的HPD-400型樹脂3份(每份相當(dāng)于干樹脂8g)，干法裝柱，干樹脂質(zhì)量lg，上柱黃酮提取液8ml(20mg/ml)，靜置1小時，以4BV水沖洗后，用2BV、3BV、4BV的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，測吸光度計(jì)算總黃酮含量。結(jié)果表明總黃酮的回收率分別為92.6%、92.8%、93.2%?？傸S酮的回收率接近，洗脫用量過多會增加洗脫時間，同時造成一定的浪費(fèi)，故選擇2BV的70%乙醇進(jìn)行洗脫。實(shí)施例7洗脫劑濃度對總黃酮回收率的影響稱取已處理的HPD-600型樹脂3份(每份相當(dāng)于干樹脂8g)，干法裝柱，干樹脂質(zhì)量lg，上柱黃酮提取液8ml(20mg/ml)，靜置1小時，以2BV蒸餾水，2BV/h速度沖洗后，分別用濃度為50%、60%、70%、80%的2BV乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，流速為2BV/h。收集洗脫液，測定黃酮的吸光度并計(jì)算總黃酮的回收率?？傸S酮的純度分別為48.6%，58.3%，57.9%，54.1%，宜選乙醇溶液濃度為60%。權(quán)利要求一種馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是其純化步驟為1)取粉碎的馬齒莧子，以體積分?jǐn)?shù)為40％乙醇為溶劑，浸泡12小時，以藥材質(zhì)量10倍體積量的體積分?jǐn)?shù)為40％乙醇為提取劑，加熱至回流提取，收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液；2)將步驟1得到的提取液濃縮到每毫升含提取物20mg，選用HPD-400或HPD-600或AB-8或D101大孔樹脂，上樣，上樣吸附0.1～2.0小時，先水洗，水洗體積為1BV～3BV，水洗流速為1BV/h～3BV/h，然后用乙醇洗脫，洗脫用乙醇體積分?jǐn)?shù)為50％～80％，洗脫量為1BV～4BV，洗脫速度為2BV/h～4BV/h；3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，50℃真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品。2.如權(quán)利要求1所述的馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是提取液濃縮物為透明狀棕黃色液體或含有懸浮態(tài)棕黃色絮狀顆粒的透明狀棕黃色液體。3.如權(quán)利要求1所述的馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是濃縮液上樣的方式是干法上樣，上樣體積與大孔樹脂質(zhì)量比值為5:110:1。4.如權(quán)利要求1所述的馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是獲得純化的馬齒莧子總黃酮含量>55%，總黃酮轉(zhuǎn)移率>90%。全文摘要本發(fā)明屬于醫(yī)藥
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，涉及一種維吾爾中草藥馬齒莧子的總黃酮樹脂純化方法，是以大孔樹脂吸附法將馬齒莧子提取液經(jīng)上柱、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲得純化的馬齒莧子總黃酮。本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹脂純化方法，采用干法上樣，是一種簡單、便捷的方法。所選的大孔樹脂具有吸附量大、解吸率大。本發(fā)明方法以乙醇為溶劑，既廉價又無毒。用本發(fā)明方法純化馬齒莧子提取物，其總黃酮轉(zhuǎn)移率可達(dá)90％以上，純化物總黃酮含量可達(dá)60％以上，且重現(xiàn)性好，樹脂可重復(fù)使用。文檔編號A61P15/00GK101708199SQ20091023009公開日2010年5月19日申請日期2009年11月13日優(yōu)先權(quán)日2009年11月13日發(fā)明者段洪東,王世瀟申請人:段洪東