一種采用大孔吸附樹脂純化鹿血低聚肽的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種采用大孔吸附樹脂技術純化鹿血低聚肽的方法。
【背景技術】
[0002]鹿血是傳統(tǒng)名貴中藥，自古以來就是宮廷皇族、達官顯貴治病健身的珍品。許多學者對鹿血的各種功能進行了研究，表明鹿血具有增強免疫、補血、延緩衰老、抗疲勞、提高性功能、益精、安神、促進代謝和創(chuàng)傷愈合等功能。鹿血中含有多種有效活性成分，具有很多生理功能，如超氧化物歧化酶、免疫球蛋白、血紅素等。
[0003]現(xiàn)代科學研究表明，人類對蛋白質的利用是將蛋白質酶解成小分子低聚肽吸收利用，而不是以前所認為的需要將蛋白質分解為氨基酸。低聚肽吸收機制的最大特點是不需要消化直接吸收，不需消耗人體能量，吸收速度快，優(yōu)先吸收，在人體中合成蛋白質的速率較氨基酸快。因此只需將蛋白質水解為低聚肽即可滿足人類的需要。
[0004]鹿血資源的利用，現(xiàn)有技術大多是對鹿血原血液的直接利用，例如與酒混合配制鹿血酒，但鹿血酒往往成色不好，有絮狀沉淀產(chǎn)生，并且蛋白質和多肽會發(fā)生變性，致使生物活性和營養(yǎng)成分部分或全部喪失。中國專利(102199648 A)利用木瓜酶和堿性蛋白酶依次對鹿血進行酶解后，采用膜技術純化，獲得活性肽，開拓了其在分子生物學領域的應用。但是，該專利利用膜技術，使得生產(chǎn)活性肽的成本較高。

【發(fā)明內容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種采用大孔吸附樹脂純化鹿血低聚肽的方法。
[0006]本發(fā)明實現(xiàn)上述目的的技術方案如下:
為了拓寬鹿血資源的應用范圍，使其營養(yǎng)成分更好地被吸收利用，據(jù)此獲取高純度低聚肽，我們利用大孔吸附樹脂從鹿血中制備低聚肽的工藝方法。
[0007]采用中國專利(102199648 A)的方法對鹿血進行酶解，酶解后的上清液在大孔吸附樹脂柱上按照串聯(lián)吸附方式進行吸附。待吸附飽和后，用溶劑洗脫，洗脫液濃縮，干燥后得到不同純度的低聚肽產(chǎn)品。
[0008]本發(fā)明以鹿血為原料，經(jīng)酶解后的上清液在大孔吸附樹脂柱上進行吸附，收集流出液，經(jīng)酸或堿沖洗后，再用有機溶劑、水、酸或堿按照兩元或多元組合溶劑洗脫樹脂柱，流出液、酸或堿洗液和洗脫液分別減壓濃縮，干燥后得到不同純度的鹿血低聚肽產(chǎn)品。
[0009]一種采用大孔吸附樹脂純化鹿血低聚肽的方法，其特征在于該方法包括以下步驟:
A、鹿血酶解后，上清液為低聚肽產(chǎn)品的純度為50%通過單根樹脂柱或多根樹脂柱按照串聯(lián)吸附方式進行吸附，吸附后收集流出液；
B、吸附飽和后的樹脂柱用廣20BV體積濃度為f 20%的酸或質量濃度為f 20%的堿沖洗，收集酸或堿洗脫液；然后樹脂柱再用廣20 BV的解吸液洗脫，流速均為f 25 BV/h ;流出液、酸或堿洗脫液和解吸液經(jīng)過減壓濃縮回收溶劑后，經(jīng)干燥后得到鹿血低聚肽。
[0010]本發(fā)明得到的鹿血低聚肽為白色或淡黃色固體粉末，純度65、5%。
[0011]在A步驟中，所述的樹脂是指中極性或極性的苯乙烯系大孔吸附樹脂。
[0012]在A步驟中，大孔吸附樹脂與鹿血質量比為0.5: f 10:1，樹脂柱徑高比為1:4?1:30，柱溫為25?50。。。
[0013]在B步驟中，所述的解吸液是指第三類有機溶劑、水、食品級酸或堿按照兩元或多元組合溶劑，洗脫時采用等度洗脫或梯度洗脫。
[0014]本發(fā)明的產(chǎn)品參照國標GB/T 22729-2008中液相色譜法進行測定。
[0015]色譜條件:
色譜柱:TSK gel G2000 SffXL 300 mmX7.8 mm或性能與此相近的同類型其它適用于測定蛋白質和多肽的凝膠柱。
[0016]流動相:乙腈:水:三氟乙酸=45:55:0.1 (v:v:v);流速:0.5 mL/min ;檢測波長:220 nm ;參比波長:360 nm ;柱溫:30 °C，進樣量:20 μ?。
[0017]本發(fā)明與已有技術方法相比，特點在于提供了一種利用大孔吸附樹脂技術從鹿血中制備低聚肽的工藝，其生產(chǎn)成本低、操作簡單、易于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，制備的低聚肽純度高、水溶性好、無腥味，可廣泛應用于醫(yī)藥、保健品、食品、化妝品等行業(yè)。
【具體實施方式】
[0018]以下實施例用于進一步說明本發(fā)明，但不意味著這對本發(fā)明的任何限制。
[0019]實施例1
稱取HPD750和LSD001樹脂兩份，每份300 g，濕法分別裝入兩根內徑3 cm、柱高66 cm的玻璃柱(A柱和B柱)中，兩柱串聯(lián)，同時用輸液泵輸送吸附液。將鹿血酶解后的上清液(5L)依次流過該串聯(lián)樹脂柱，進行吸附，流速10 BV/h,樹脂柱溫度為50°C，收集流出液。流出液經(jīng)減壓濃縮，常壓60°C干燥得到1000 g純度為90%的低聚肽。以6 BV/h流速分別向吸附完成的A柱、B柱中加入5%醋酸溶液洗脫，用量為12 BV,收集酸洗脫液。洗脫液經(jīng)減壓濃縮，于50°C真空減壓干燥得到200 g純度為80%的低聚肽產(chǎn)品。然后用乙醇-10%乙二酸(3:7，v/v)對A柱、B柱進行洗脫，流速15 BV/h，洗脫液用量10 BV，得到的洗脫液經(jīng)減壓濃縮回收溶劑后，紅外線干燥得到50 g純度為66%的低聚肽產(chǎn)品。
[0020]實施例2
稱取LX-28和DM 301樹脂兩份，每份200 g，濕法分別裝入兩根內徑5 cm、柱高80 cm的玻璃柱(A柱和B柱)中，兩柱串聯(lián)，同時用輸液泵輸送吸附液。將鹿血酶解后的上清液(IL)依次流過該串聯(lián)樹脂柱，進行吸附，流速5 BV/h,樹脂柱溫度為30°C，收集流出液。流出液經(jīng)減壓濃縮，真空冷凍干燥得到220 g純度為93%的低聚肽。以8 BV/h流速分別向吸附完成的A柱、B柱中加入10%碳酸氫鈉溶液洗脫，用量為8 BV,收集洗脫液。得到的洗脫液經(jīng)減壓濃縮，60°C常壓干燥得到45 g純度為85%的低聚肽產(chǎn)品。然后用乙醇-20%碳酸氫鈉(5:5，v/v)對A柱、B柱進行洗脫，流速25 BV/h，洗脫液用量8 BV0洗脫液經(jīng)減壓濃縮回收溶劑后，紅外線干燥得到8 g純度為70%的低聚肽產(chǎn)品。
[0021]實施例3
稱取LSA-40樹脂3000 g，濕法裝入內徑20 cm、柱高100 cm的玻璃柱中，同時用輸液泵輸送吸附液。將鹿血酶解后的上清液(20 L)依次流過該樹脂柱，進行吸附，流速15 BV/h，樹脂柱溫度為20°C，收集流出液。流出液經(jīng)減壓濃縮，真空冷凍干燥得到8000 g純度為90%的低聚肽。以I BV/h流速向吸附完成的樹脂柱中加入10%醋酸溶液洗脫，用量為12BV，收集酸洗脫液。洗脫液經(jīng)減壓濃縮，50°C常壓干燥得到3000 g純度為75%的低聚肽產(chǎn)品。然后用乙醇-15%檸檬酸(2:8，v/v)對A柱、B柱進行洗脫，流速8 BV/h，洗脫液用量6BV,得到的洗脫液經(jīng)減壓濃縮回收溶劑后，40°C真空減壓干燥得到500 g純度為68%的低聚肽產(chǎn)品。
【主權項】
1.一種采用大孔吸附樹脂純化鹿血低聚肽的方法，其特征在于該方法包括以下步驟: A、鹿血酶解后，上清液為低聚肽產(chǎn)品的純度為50%通過單根樹脂柱或多根樹脂柱按照串聯(lián)吸附方式進行吸附，吸附后收集流出液； B、吸附飽和后的樹脂柱用廣20BV體積濃度為f 20%的酸或質量濃度為f 20%的堿沖洗，收集酸或堿洗脫液；然后樹脂柱再用廣20 BV的解吸液洗脫，流速均為廣25 BV/h;流出液、酸或堿洗脫液和解吸液經(jīng)過減壓濃縮回收溶劑后，經(jīng)干燥后得到鹿血低聚肽。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于:在A步驟中，所述的樹脂是指中極性或極性的苯乙烯系大孔吸附樹脂。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于:在A步驟中，大孔吸附樹脂與鹿血質量比為0.5:廣10:1，樹脂柱徑高比為1:4?1:30，柱溫為25?50。。。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于:在B步驟中，所述的解吸液是指第三類有機溶劑、水、食品級酸或堿按照兩元或多元組合溶劑，洗脫時采用等度洗脫或梯度洗脫。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采用大孔吸附樹脂純化鹿血低聚肽的方法。本發(fā)明以鹿血為原料，經(jīng)酶解后的上清液在大孔吸附樹脂柱上進行吸附，收集流出液，經(jīng)酸或堿沖洗后，再用有機溶劑、水、酸或堿按照兩元或多元組合溶劑洗脫樹脂柱，流出液、酸或堿洗液和洗脫液分別減壓濃縮，干燥后得到不同純度的鹿血低聚肽產(chǎn)品。所得鹿血低聚肽產(chǎn)品中低聚肽的含量為65~95%。本發(fā)明具有工藝簡單、制備過程安全、整個提取工藝適合于工業(yè)化生產(chǎn)、降低生產(chǎn)成本的優(yōu)點。
【IPC分類】C07K1-22
【公開號】CN104628812
【申請?zhí)枴緾N201310544988
【發(fā)明人】劉毅, 劉永峰, 裴棟, 魏鑒騰, 邸多隆
【申請人】中國科學院蘭州化學物理研究所
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2013年11月7日