專利名稱：抗cd5抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明系關(guān)于包含抗⑶5抗體之組合物的領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
抗體為當(dāng)受到諸如細(xì)菌及病毒之外來侵染病原體激發(fā)時由免疫系統(tǒng)產(chǎn)生之分子。 抗體分子由兩個重鏈(HC)及兩個輕鏈(LC)組成，其經(jīng)雙硫橋連接以與各臂尖端上存在之 可變結(jié)合結(jié)構(gòu)域形成V形分子。該等分子由高可變性及與外來物質(zhì)(典型地蛋白質(zhì))，即所 謂的抗原之極強結(jié)合特性化?？贵w藉由結(jié)合抗原上之特異性表位發(fā)揮功能。結(jié)合后，不同 效應(yīng)功能可經(jīng)由抗體之恒定部分Fc區(qū)介導(dǎo)。取決于抗體同型，可實現(xiàn)諸如補體溶解、細(xì)胞 殺死、吞噬作用等之效應(yīng)功能。除抗體結(jié)構(gòu)以外，抗體生物學(xué)之不同方面影響天然存在內(nèi)源 性抗體及抗體基藥物治療之作用。此等方面包括抗體親和力以及反應(yīng)速率(亦即，抗體結(jié) 合表位之快慢)，所結(jié)合表位在抗原上的位置，靶向組合物中所表示的不同表位之抗體之?dāng)?shù) 目及其是否結(jié)合免疫原性表位?？贵w作為治療藥物之用涂源自血漿之多克隆抗體制劑-所謂的高免疫免疫球蛋白產(chǎn)物-傳統(tǒng)上已成功用于 治療特性在于高復(fù)雜性目標(biāo)之疾病，諸如巨細(xì)胞病毒或B型肝炎病毒感染。然而，源自血液 之產(chǎn)物具有許多固有缺點，包括供應(yīng)短缺、高批次間變化以及與傳染媒介物自血液可能轉(zhuǎn) 移至患者相關(guān)的安全風(fēng)險。在過去的10-15年中，很多焦點集中于研究重組抗體之治療潛 力，且已表明此焦點為高回報投資。目前，全世界臨床開發(fā)之超過20%的藥物源自抗體，相 當(dāng)于今后世界市場上總計會有約400種潛在藥物。目前批準(zhǔn)銷售之約20種重組抗體治療 劑全部為單克隆抗體。迄今為止仍缺乏產(chǎn)生且工業(yè)生產(chǎn)重組多克隆抗體之技術(shù)。然而，已 觀察到靶向一種以上抗原-表位之多克隆抗體治療劑之優(yōu)點及需求。目標(biāo)系藉由在未來以 重組抗體為主之藥物中再引入先前已藉由使用高免疫免疫球蛋白產(chǎn)物證明的多克隆性之 概念增加以抗體為主之藥物之質(zhì)量。慢件淋巴細(xì)胞件白血病及CD5CLL為西方世界中最常見形式之白血病。CLL細(xì)胞在細(xì)胞膜上表達(dá)⑶19及⑶20與 ⑶5及⑶23。因此，此表型可不同于另一⑶5陽性B細(xì)胞疾病套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)，其缺乏 CD23表達(dá)，但表達(dá)稱為FMC7之另一表面分子。兩種疾病以常規(guī)化學(xué)療法均無法治愈。目 前，以氟達(dá)拉濱(Fludarabine)為主之方案代表用于控制CLL之最有效療法。與其它無痛 B細(xì)胞淋巴瘤/白血病之結(jié)果相比，使用抗⑶20抗體利妥昔單抗(Rituximab)作為單一療 法之標(biāo)準(zhǔn)劑量方案對CLL具有極有限作用。在CLL中經(jīng)證明具有單一劑功效的唯一抗體為 注冊用于化學(xué)難治性CLL之抗CD52抗體阿侖單抗(Campath-IH)。然而，與阿侖單抗相關(guān)的 嚴(yán)重免疫缺陷限制其在CLL中之普遍應(yīng)用。當(dāng)前用于改善CLL中之結(jié)果的策略集中在抗體化學(xué)療法組合及開發(fā)靶向不為⑶20及⑶52的例如⑶23、⑶40、⑶40-配體及HLA-DR之其 它抗原之抗體。提出尚未加以利用之CLL細(xì)胞所特有的CD5抗原為CLL中以抗體為主之被 動免疫療法之具有吸引力的目標(biāo)。⑶5為第I型糖蛋白且為清除劑受體家族之成員。⑶5由胸腺細(xì)胞、成熟T細(xì)胞 及成熟B細(xì)胞之子集表達(dá)且已經(jīng)展示其與調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞活化及與分化過程有關(guān)。⑶72、 gp80-40及Ig構(gòu)架結(jié)構(gòu)為⑶5之目的配體，且其與⑶5之相互作用已展示于小鼠中，此等相 互作用之確切作用及結(jié)構(gòu)特性仍待澄清。⑶5與B細(xì)胞受體(BCR)附近之表面IgM的⑶79a 及⑶79b轉(zhuǎn)導(dǎo)搭配物相締合，且⑶5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)由與BCR及⑶79a及⑶79b共沈淀于脂筏中 介導(dǎo)。⑶79a及⑶79b由Lyn及其它諸如Syk之酪氨酸激酶磷酸化，且已報導(dǎo)Zap70以及酪 氨酸磷酸酯酶SHP-I亦為此信號轉(zhuǎn)導(dǎo)之介體。已在CLL細(xì)胞中觀察到CD79b之截斷形式， 因此已表明異常胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)對于CLL細(xì)胞存活而言可能較為重要。CD5與單克隆抗CD5 抗體之交聯(lián)可誘導(dǎo)CLL細(xì)胞細(xì)胞凋亡，然而除非⑶5與BCR及BCR相關(guān)之分子一起移位于 脂筏中，否則此信號之誘導(dǎo)不會發(fā)生。由于表位之位置對于抗體經(jīng)由受體傳遞信號之能力 而言關(guān)鍵，因此相信對CD5具有許多特異性之一系列抗體將揭開關(guān)于CD5在CLL細(xì)胞及正 常細(xì)胞中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用之知識，且該知識將促進(jìn)針對CLL之有效抗體療法的開發(fā)。針對CD5之多克降抗體由于多克隆抗體組合物含有數(shù)種抗體特異性且從而靶向數(shù)種表位，因此主張與 mAb相比，可使用多克隆抗體組合物更有效阻斷經(jīng)⑶72及⑶5之其它潛在配體活化的信號 途徑。靶向特異性表位對于mAb影響經(jīng)由受體傳遞之信號之能力而言可為關(guān)鍵的。由于已 展示抗⑶20抗體(利妥昔單抗)之特異性直接影響活體內(nèi)誘導(dǎo)之效應(yīng)功能之類型且由于 已展示針對Her-2之具有不同表位特異性的抗體誘導(dǎo)不同抗腫瘤活性，因此推測含有多種 特異性之抗體的多克隆抗體組合物將更有效介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞之殺死。另外，藉由靶向多種抗 原-表位之多克隆抗體組合物在表面上產(chǎn)生的抗體之高密度可能會增加諸如補體介導(dǎo)之 溶解及ADCC的效應(yīng)功能之活化，ADCC類似于細(xì)胞凋亡已經(jīng)展示在治療CLL中具有重要作 用。因此，很可能使用多克隆抗體組合物實現(xiàn)總體更有效療法。如上所述，已展示單克隆抗⑶52抗體阿侖單抗在重度預(yù)先治療患者中可有效針 對CLL，但治療伴隨有顯著免疫抑制及發(fā)生機會性感染。此系由于⑶52表達(dá)在除漿細(xì)胞外 的所有白血球上，且因此阿侖單抗靶向CLL及健康細(xì)胞。CD5相反并不表達(dá)在NK細(xì)胞及健 康B細(xì)胞上，且靶向CD5之抗CLL抗體療法將因此優(yōu)先靶向癌細(xì)胞，由于健康細(xì)胞往往較少 被消除且患者體驗最小免疫抑制，因此此將對患者有益。TlOl為針對⑶5之單克隆小鼠IgGh，其經(jīng)開發(fā)用于治療罹患皮膚T-細(xì)胞淋巴瘤 (CTCL)及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎之患者。由于在第II階段研究中缺乏治療作用，已停止臨床開發(fā) T101。尚不清楚TlOl不具有臨床作用之原因，且有可能與以下事實相關(guān)其為將不可避免 地產(chǎn)生HAMA(人類抗小鼠抗體)中和反應(yīng)之完全鼠類抗體。然而，可設(shè)想與諸如TlOl之單 克隆抗體相比，使用多克隆抗體組合物靶向數(shù)種CD5表位可例如藉由增加受體內(nèi)化作用引 起⑶5功能抑制之顯著增加，因此產(chǎn)生臨床抗腫瘤作用。另外，由于意欲產(chǎn)生含有小鼠可變 區(qū)及人類恒定區(qū)之CD5特異性嵌合抗體，因此由完全鼠類TlOl抗體所觀察到之HAMA反應(yīng) 的主要部分將不可見。若針對嵌合抗體之可變區(qū)的抗體存在，則利用活體外針對單克隆及 多克隆抗體的中和抗體之先前研究已指示多克隆抗體組合物對中和抗體之易感性比單克
7隆抗體低。因此，若中和抗體之誘導(dǎo)存在，則多克隆抗CD5抗體組合物很可能將保留藥理學(xué) 活性。效應(yīng)機制對結(jié)合細(xì)胞表面上抗原之抗體的細(xì)胞水平之作用視所結(jié)合特異性抗體而不同。重 要效應(yīng)機制包括抗體依賴細(xì)胞毒性(ADCC)及補體依賴細(xì)胞毒性(CDC)。由主動溶解由特異 性抗體結(jié)合之目標(biāo)細(xì)胞的免疫系統(tǒng)之效應(yīng)細(xì)胞特性化ADCC效應(yīng)機制。其為作為體液性免 疫反應(yīng)之部分的抗體可起作用以限制且含有感染之機制之一。典型ADCC由天然殺手(NK) 細(xì)胞介導(dǎo)。然而，單核細(xì)胞及多形核顆粒球(PMN)亦可介導(dǎo)ADCC。ADCC由于對預(yù)先抗體反 應(yīng)之依賴性而成為適應(yīng)性免疫反應(yīng)之部分。典型ADCC包括活化NK細(xì)胞且取決于藉由NK細(xì) 胞表面上之Fc受體對經(jīng)抗體涂布之感染細(xì)胞的識別。Fc受體識別諸如IgG之結(jié)合病原體 感染之目標(biāo)細(xì)胞表面之抗體之Fc (晶體)部分。NK細(xì)胞表面上存在之最常見Fc受體稱作 ⑶16或Fc γ RIII。結(jié)合IgG之Fc受體后，天然殺手細(xì)胞釋放諸如IFN-γ之細(xì)胞激素，及 含有穿孔素及顆粒酶之進(jìn)入目標(biāo)細(xì)胞且藉由觸發(fā)細(xì)胞凋亡促進(jìn)細(xì)胞死亡之細(xì)胞毒性顆粒。 此點類似于(但獨立于)細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)之反應(yīng)。ADCC之程度取決于數(shù)種因素，包 括IgG亞型(IgM > IgGl > IgG^、目標(biāo)細(xì)胞上之抗體密度、抗體糖基化模式以及目標(biāo)本身 之特性。CDC為替代效應(yīng)機制，結(jié)合細(xì)胞抗原之抗體可藉由其引起所結(jié)合細(xì)胞之中和?？贵w 能夠活化所謂的典型補體途徑。在典型補體途徑中，結(jié)合抗體募集補體系統(tǒng)之蛋白質(zhì)，其經(jīng) 由一系列相互作用殺死結(jié)合細(xì)胞。補體系統(tǒng)由血液中所見之通常以無活性酶原形式循環(huán)的 許多小蛋白質(zhì)組成。當(dāng)藉由數(shù)種觸發(fā)之一刺激時，系統(tǒng)中之蛋白酶裂解特異性蛋白以釋放 細(xì)胞激素且啟始進(jìn)一步裂解之放大級聯(lián)。此活化級聯(lián)之最終結(jié)果為殺死細(xì)胞之膜攻擊復(fù)合 物之反應(yīng)及活化的大規(guī)模放大。超過20種蛋白質(zhì)及蛋白質(zhì)片段構(gòu)成補體系統(tǒng)，包括血清蛋 白、漿液性蛋白及細(xì)胞膜受體。包含針對癌抗原之治療抗體的不同研究展示抗腫瘤活性要求活化諸如ADCC及 CDC之經(jīng)由結(jié)合抗體Fc區(qū)而活化的效應(yīng)機制。因此，關(guān)于抗體治療劑之作用之另一問題為 抗體Fc區(qū)與所募集效應(yīng)分子的相互作用。IgG抗體之Fc區(qū)與諸如巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞及補 體蛋白之效應(yīng)分子上Fc受體的結(jié)合受到抗體CH2結(jié)構(gòu)域糖基化之影響。尤其，已展示天 冬酰氨酸297處N-連接之寡醣上海藻糖的程度影響IgG Fc區(qū)與NK細(xì)胞上Fc γ III受體 (CD16)之結(jié)合。糖基化對補體活化之作用仍待闡明?？贵w糖基化具有物種特異性且因此生 產(chǎn)細(xì)胞系之性質(zhì)對抗體結(jié)合且介導(dǎo)效應(yīng)功能之能力具有重大影響。歸因于上述抗體糖基化 差異，主張表達(dá)于CHO細(xì)胞及人類Per. C6細(xì)胞中之抗體將不同程度地影響以抗體為主之藥 物之治療作用。發(fā)明概述在一個方面，本發(fā)明系關(guān)于包含至少兩種結(jié)合不同CD5表位的抗CD5抗體之抗體 組合物。在本發(fā)明之另一個方面，該組合物包含選自由如表1中所示的抗體1、2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、 33、34、35、36、及37中之任一者所組成之群組的抗⑶5抗體分子。較佳地，該組合物包括包含如表1中所示的抗體:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37
中之任一者的VL及VH序列之抗體。各抗體(以名稱列舉)之VL及VH序列提供于表2及 3中。較佳地，該組合物包括包含如表1中所示的抗體1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及37 中之任一者的 CDRHl、CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2 及 CDRL3 序列之抗體。較佳地，該組合物包含與表1中所示的抗體:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、
14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及37 中 之任一者結(jié)合相同表位之抗體。較佳地，該組合物包含能夠抑制如表1中所示的抗體1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、
36、及37中之任一者與人類⑶5結(jié)合之抗體。以下為本發(fā)明之具體實例根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體1、包含抗體1之VL及VH序列之抗體、包含抗體1之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體1結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗體 1與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體2、包含抗體2之VL及VH序列之抗體、包含抗體2之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體2結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗體 2與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體3、包含抗體3之VL及VH序列之抗體、包含抗體3之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體3結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗體 3與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體4、包含抗體4之VL及VH序列之抗體、包含抗體4之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RLl、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體4結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗體 4與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體5、包含抗體5之VL及VH序列之抗體、包含抗體5之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體5結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗體 5與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體6、包含抗體6之VL及VH序列之抗體、包含抗體6之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RLl、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體6結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗體 6與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體7、包含抗體7之VL及VH序列之抗體、包含抗體7之⑶RH1、⑶RH2、⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體7結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗體 7與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體8、包含抗體8之VL及VH序列之抗體、包含抗體8之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RLl、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體8結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗體 8與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體9、包含抗體9之VL及VH序列之抗體、包含抗體9之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RLl、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體9結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗體 9與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體10、包含抗體10之VL及VH序列之抗體、包含抗體10之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體10結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體10與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體11、包含抗體11之VL及VH序列之抗體、包含抗體11之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體11結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體11與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體12、包含抗體12之VL及VH序列之抗體、包含抗體12之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體12結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體12與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體13、包含抗體13之VL及VH序列之抗體、包含抗體13之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體13結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體13與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體14、包含抗體14之VL及VH序列之抗體、包含抗體14之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體14結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體14與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體15、包含抗體15之VL及VH序列之抗體、包含抗體15之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體15結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體15與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體16、包含抗體16之VL及VH序列之抗體、包含抗體16之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體16結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體16與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的抗⑶5抗體分子抗體17、包含抗體17之VL及VH序列之抗體、包含抗體17之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體17結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體17與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體18、包含抗體18之VL及VH序列之抗體、包含抗體18之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體18結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體18與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體19、包含抗體19之VL及VH序列之抗體、包含抗體19之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體19結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體19與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體20、包含抗體20之VL及VH序列之抗體、包含抗體20之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體20結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體20與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體21、包含抗體21之VL及VH序列之抗體、包含抗體21之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體21結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體21與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體22、包含抗體22之VL及VH序列之抗體、包含抗體22之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體22結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體22與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體23、包含抗體23之VL及VH序列之抗體、包含抗體23之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體23結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體23與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體M、包含抗體M之VL及VH序列之抗體、包含抗體M之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體M結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體對與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體25、包含抗體25之VL及VH序列之抗體、包含抗體25之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體25結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體25與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體沈、包含抗體沈之VL及VH序列之抗體、包含抗體沈之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體沈結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體26與人類⑶5結(jié)合之抗體。
根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體27、包含抗體27之VL及VH序列之抗體、包含抗體27之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體27結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體27與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體觀、包含抗體觀之VL及VH序列之抗體、包含抗體觀之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體28結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體觀與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體四、包含抗體四之VL及VH序列之抗體、包含抗體四之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體四結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體四與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體30、包含抗體30之VL及VH序列之抗體、包含抗體30之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體30結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體30與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體31、包含抗體31之VL及VH序列之抗體、包含抗體31之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體31結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體31與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體32、包含抗體32之VL及VH序列之抗體、包含抗體32之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體32結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體32與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體33、包含抗體33之VL及VH序列之抗體、包含抗體33之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體33結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體33與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體34、包含抗體34之VL及VH序列之抗體、包含抗體34之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體34結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體34與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體35、包含抗體35之VL及VH序列之抗體、包含抗體35之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體35結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體35與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體36、包含抗體36之VL及VH序列之抗體、包含抗體36之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體36結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗
12體36與人類⑶5結(jié)合之抗體。根據(jù)本發(fā)明之抗體組合物，其中該抗體組合物包含選自由以下者所組成之群組的 抗⑶5抗體分子抗體37、包含抗體37之VL及VH序列之抗體、包含抗體37之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗體、與抗體37結(jié)合相同表位之抗體、及能夠抑制抗 體37與人類⑶5結(jié)合之抗體。在另一個方面，本發(fā)明系關(guān)于一種具有本發(fā)明之抗體組合物中之任一者的結(jié)合特 異性之雙特異性結(jié)合分子。在另一個方面，本發(fā)明系關(guān)于一種包含本發(fā)明之抗體組合物或本發(fā)明之雙特異性 結(jié)合分子作為活性成份之醫(yī)藥組合物。在另一個方面，本發(fā)明系關(guān)于一種本發(fā)明之抗體組合物或本發(fā)明之雙特異性結(jié)合 分子，其用作藥劑。在另一個方面，本發(fā)明系關(guān)于一種本發(fā)明之抗體組合物或本發(fā)明之雙特異性結(jié)合 分子的用途，其用于制備藥劑。在另一個方面，本發(fā)明系關(guān)于一種治療方法，其包含向有需要之患者投予本發(fā)明 之醫(yī)藥組合物。在另一個方面，本發(fā)明系關(guān)于一種制備抗體組合物之方法，該方法包含以下步 驟-以編碼包含VH及VL鏈之第一同源對且能夠結(jié)合第一明顯(distinct)⑶5表位 的第一抗體之第一表達(dá)構(gòu)建體轉(zhuǎn)染第一真核細(xì)胞群體；-以編碼包含VH及VL鏈之第二同源對且能夠結(jié)合第二明顯⑶5表位的第二抗體 之第二表達(dá)構(gòu)建體轉(zhuǎn)染第二真核細(xì)胞群體；-視情況對第三或進(jìn)一步的群體、表達(dá)構(gòu)建體、同源對、及⑶5表位重復(fù)步驟b)；-選擇所轉(zhuǎn)染的第一、第二及可選地進(jìn)一步的細(xì)胞群體；-將所轉(zhuǎn)染的群體組合在一個容器(pot)中，以獲得細(xì)胞庫；-在允許表達(dá)抗體之條件下培養(yǎng)細(xì)胞庫的細(xì)胞；及-自上清液回收且純化抗體組合物。在另一個方面，本發(fā)明系關(guān)于一種包含真核細(xì)胞之至少兩個子群之細(xì)胞庫，其中 各子群經(jīng)一個編碼包含VH及VL鏈之同源對且能夠結(jié)合明顯⑶5表位的抗體之表達(dá)構(gòu)建體 轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)。在另一個方面，本發(fā)明系關(guān)于一種殺死表達(dá)⑶5的細(xì)胞之方法，其包含向表達(dá)⑶5 的細(xì)胞投予本發(fā)明之抗體組合物或本發(fā)明之雙特異性結(jié)合分子，從而殺死表達(dá)CD5的細(xì) 胞。在附屬申請專利范圍中闡明本發(fā)明之較佳具體實例。定義抗體術(shù)語”抗體”描述血清之功能組份且其通常稱作分子(抗體或免疫球蛋白) 之集合或一個分子(抗體分子或免疫球蛋白分子)?？贵w分子能夠與特異性抗原決定子 (抗原或抗原表位)結(jié)合或反應(yīng)，其接著可誘導(dǎo)免疫學(xué)效應(yīng)機制。各個抗體分子通常視為具 有單特異性，且抗體分子之組合物可為單克隆(亦即，由相同抗體分子組成)或多克隆(亦 即，由兩種或兩種以上與同一抗原或甚至不同抗原上之相同或不同表位反應(yīng)的不同抗體分子組成)的。各抗體分子具有使得其能夠特異性結(jié)合對應(yīng)抗原之獨特結(jié)構(gòu)，且所有天然抗 體分子均具有具兩個相同輕鏈及兩個相同重鏈之相同總體基本結(jié)構(gòu)。抗體亦統(tǒng)稱為免疫球 蛋白。如本文中所用之術(shù)語抗體亦意欲包括嵌合及單鏈抗體，以及抗體之結(jié)合片段，諸如 Fab.Fv片段或scFv片段，以及多聚形式，諸如二聚IgA分子或五價IgM?？贵w可為人類、鼠 類、嵌合、人源化或改形抗體。CDR 術(shù)語” CDR"-互補決定區(qū)系如 Lefranc 等人 Q003) IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-Iike domains. Dev. Comp Immunol 27,55-77 所定義。術(shù)語”重組多克隆蛋白之不同成員(a distinct member of a recombinant polyclonal protein) ”表示一種包含不同但同源蛋白質(zhì)分子的蛋白質(zhì)組合物之蛋白質(zhì)分 子，其中各蛋白質(zhì)分子與組合物之其它分子同源，而亦含有可變多肽序列之一或多段，其特 性在于多克隆蛋白質(zhì)之具體成員之間的氨基酸序列差異。同源VH及VL編碼對術(shù)語”同源VH及VL編碼對(cognate VH and VL coding pair)”描述相同抗體生產(chǎn)細(xì)胞內(nèi)含有的或源自相同抗體生產(chǎn)細(xì)胞的VH及VL編碼序列之原 始對。因此，同源VH及VL對表示最初存在于獲得該細(xì)胞之供體中的VH及VL配對。術(shù)語” 自 VH 及 VL 編碼對表達(dá)之抗體(an antibody expressed from a VH and VL coding pair)，， 指示抗體或抗體片段由載體、質(zhì)粒或含有VH及VL編碼序列之類似物產(chǎn)生。當(dāng)以完整抗體 或其穩(wěn)定片段形式表達(dá)同源VH及VL編碼對時，其保留最初自獲得其之細(xì)胞所表達(dá)的抗體 之結(jié)合親和力及特異性。同源對之文庫亦稱為同源對之庫或集合且可單獨地保留或匯集。不同表位術(shù)語”不同表位(distinct印itope)”意謂構(gòu)成表位之氨基酸序列不 同。由于兩個不同表位可共有部分氨基酸序列，因此不同表位可為重迭表位。表位使用術(shù)語”表位(epitope) ”描述在動物、較佳地哺乳動物且最佳人類中具有 抗原活性或免疫原活性的較大分子(例如抗原或抗原位點)之一部分。具有免疫原活性之 表位為引發(fā)動物抗體反應(yīng)的較大分子之一部分。具有抗原活性之表位為藉由在此項技術(shù)中 熟知之任何方法，例如藉由本文所述之免疫檢定所測定，抗體免疫特異性結(jié)合的較大分子 之一部分?？乖砦徊槐鼐哂忻庖咴浴？乖瓰榭贵w或抗體片段免疫特異性結(jié)合之物質(zhì)， 例如毒素、病毒、細(xì)菌、蛋白質(zhì)或DNA。除非抗原或抗原位點極小，否則其通常具有一個以上 表位且通常能夠刺激免疫反應(yīng)。表位可為線性或構(gòu)形表位。線性表位由經(jīng)抗體識別的蛋白 質(zhì)分子上之約6至10個相鄰氨基酸組成。相反，構(gòu)形表位由并非依次排列之氨基酸組成。 此處，抗體僅識別3維結(jié)構(gòu)。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分子折迭成三維結(jié)構(gòu)時，形成表位之氨基酸并置，使 得抗體能夠識別序列。在變性蛋白質(zhì)中，僅可識別線性表位。根據(jù)定義，構(gòu)形表位必須在折 迭蛋白質(zhì)外部。識別構(gòu)形表位之抗體僅可在輕度、非變性程序下結(jié)合。視表位之位置而定， 結(jié)合相同抗原上之不同表位的抗體可對其所結(jié)合的抗原之活性具有不同影響。結(jié)合抗原活 性位點中的表位之抗體可完全阻斷抗原之功能，而在不同表位處結(jié)合的另一抗體可對抗原 之活性不具有影響或僅具有輕微影響。然而，該等抗體仍可活化補體，從而使得抗原消除， 且當(dāng)將在相同抗原上之不同表位處結(jié)合的一或多個抗體組合時可產(chǎn)生協(xié)同作用。在本發(fā)明 中，表位較佳為CD5之胞外結(jié)構(gòu)域的一部分。本發(fā)明之抗原較佳為抗體或抗體片段免疫特 異性結(jié)合之胞外結(jié)構(gòu)域CD5蛋白、多肽或其片段。CD5相關(guān)抗原亦可為抗體或抗體片段免疫 特異性結(jié)合之CD5多肽或其片段之胞外結(jié)構(gòu)域的類似物或衍生物。能夠彼此競爭結(jié)合相同抗原之抗體可結(jié)合同一或重迭表位，或可具有彼此密切接近之結(jié)合位點，以便主要由位阻 引起競爭。免疫球蛋白術(shù)語”免疫球蛋白”通常用作血液或血清中所見的抗體之混合物的集 合名稱，但其亦可用以表示源自其它來源之抗體的混合物。免疫球蛋白分子術(shù)語”免疫球蛋白分子”表示各個抗體分子，例如其為免疫球蛋 白之一部分或任何多克隆或單克隆抗體組合物之一部分。重迭表位如本文中所用，術(shù)語”重迭表位(overlapping epitopes) ”意謂表位之 氨基酸序列重迭，亦即表位共有至少一個存在于兩個表位中之氨基酸殘基。結(jié)合重迭表位 之抗體彼此抑制與抗原之結(jié)合。舉例而言，第一抗體與同第二表位重迭之第一表位之結(jié)合 (其中第二表位已由第二抗體結(jié)合)可抑制至少10 %，諸如至少20 %，例如至少30 %，諸如 至少40%，例如至少50%，諸如至少60%，例如至少70%，諸如至少80%，例如至少90%, 諸如100%。典型地，如實施例所述，藉由結(jié)合實驗在飽和抗體條件下，以表達(dá)CD5的細(xì)胞及 單獨熒光標(biāo)記抗體之FACS分析，或表面等離子共振使用捕獲或結(jié)合至流動細(xì)胞表面的CD5 抗原，確定抗體對之”重迭表位”的分析。多克隆抗體術(shù)語”多克隆抗體”描述能夠與同一或不同抗原上的數(shù)種不同特異性 抗原決定子結(jié)合或反應(yīng)之不同抗體分子之組合物。通常，認(rèn)為多克隆抗體之變異性位于多 克隆抗體之所謂的可變區(qū)。然而，在本發(fā)明之情況下，例如，如在含有兩種或兩種以上抗體 同型的抗體混合物情況下，多克隆性亦可理解為描述存在于所謂的恒定區(qū)中之各個抗體分 子之間的差異，該等抗體同型諸如人類IgGl同種型、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及IgA2，或鼠 類IgGl同種型、IgGh、IgG2b、IgG3及IgA。為達(dá)成本發(fā)明之目的，該多克隆抗體亦可稱為” 抗體組合物(an antibody composition) ”。多克隆蛋白/多克隆性如本文中所用術(shù)語”多克隆蛋白(polyclonal protein)，， 或”多克隆性(polyclonality) ”系指包含不同但同源且較佳地選自免疫球蛋白超家族的蛋 白質(zhì)分子之蛋白質(zhì)組合物。因此，各蛋白質(zhì)分子與組合物之其它分子同源，而亦含有可變多 肽序列之一或多段，其特性在于多克隆蛋白之具體成員之間的氨基酸序列差異。該等多克 隆蛋白之已知實例包括抗體或免疫球蛋白分子、T細(xì)胞受體及B細(xì)胞受體。多克隆蛋白可 由蛋白質(zhì)分子之定義子集組成，該子集已藉由普遍特征定義，例如在針對所需目標(biāo)抗原之 多克隆抗體情況下，諸如共有對所需目標(biāo)的結(jié)合活性。蛋白質(zhì)/多肽”蛋白質(zhì)”或”多肽”意謂不考慮長度或轉(zhuǎn)譯后修飾的任何氨基酸 鏈。蛋白質(zhì)可以單體或多聚體形式存在，包含兩個或兩個以上裝配多肽鏈、蛋白質(zhì)之片段、 多肽、寡肽或肽。重組抗體使用術(shù)語”重組抗體”描述自細(xì)胞或細(xì)胞系表達(dá)之抗體分子或數(shù)種分 子，該細(xì)胞或細(xì)胞系經(jīng)包含不與細(xì)胞天然相關(guān)聯(lián)的抗體之編碼序列的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染本文中術(shù)語”轉(zhuǎn)染(transfection)”用作用于將外源DNA引入細(xì)胞中的廣 義術(shù)語。該術(shù)語亦意欲涵蓋用于將外源DNA引入細(xì)胞中的其它功能等效方法，諸如轉(zhuǎn)化、感 染、轉(zhuǎn)導(dǎo)或融合供體細(xì)胞與受體細(xì)胞?？勺兌嚯男蛄?可變區(qū)術(shù)語”可變多肽序列(variable polypeptide sequence)，，及，，可變區(qū)(variable region)，，可互換使用。


圖1 分選脾細(xì)胞(細(xì)節(jié)參見實施例1)。設(shè)定(描述)以下分選門·門1 活細(xì)胞(FSC/碘化丙錠圖)(左下圖)；·門2 漿細(xì)胞作為⑶43陽性/⑶138陽性被選出(右下圖)；·門3:成對辨別(右上圖)；圖2 鼠類-mSympleXTMPCR。用于擴(kuò)增且同源連接來自單細(xì)胞的重鏈及輕鏈抗體基 因之多路重迭延伸RT-PCR。細(xì)節(jié)參照實施例1。圖3:鼠類庫克隆。藉由重迭延伸藉由剪接將來自單漿細(xì)胞之編碼VH/VL基因?qū)?的mSymplex PCR產(chǎn)物池剪接成編碼人類κ恒定輕鏈之基因。將編碼完全人類-小鼠嵌合 抗體之基因池插入表達(dá)載體中，接著插入雙向啟動子盒OXCMV)。圖4 哺乳動物全長抗體表達(dá)載體00-VP-002之圖示。Amp及Amp pro，氨芐青霉素 抗性基因及其啟動子；PUC起點，PUC復(fù)制起點；CMV，驅(qū)動輕鏈及重鏈表達(dá)之哺乳動物啟動 子；IGHV前導(dǎo)序列，基因組人類重鏈前導(dǎo)序列；H填充片段，交換重鏈可變區(qū)編碼序列之插 入物；IGHG1，編碼基因組免疫球蛋白同型Gl重鏈恒定區(qū)之序列(序列展示于附錄2中)； 兔B-球蛋白A，兔β-球蛋白多聚A序列；IGKV前導(dǎo)序列，鼠類κ前導(dǎo)序列；L填充片段， 交換輕鏈編碼序列之插入物；SV40終止子，猿猴病毒40終止子序列；FRT，F(xiàn)lp識別目標(biāo)位 點；Neo，新霉素抗性基因；SV40多聚A，猿猴病毒40多聚A信號序列。圖5 =ELISA中表位定位。由在競爭ELISA中所測定，抗⑶5抗體與針對⑶5之胞 外結(jié)構(gòu)域的所列參考抗體之抑制程度。抑制評分如下25-49%:適度競爭⑴；50-74%:強 競爭(++) ；75-100% 極強競爭(+++)。*指示未進(jìn)行競爭實驗。圖6 藉由Biacore分析所測定，針對⑶5之胞外結(jié)構(gòu)域的抗⑶5抗體之表位圖。 所產(chǎn)生的抗CD5抗體及四種參考抗體的結(jié)合位點之平面圖。圖中之編號為對應(yīng)于本申請案 之其它處所示的抗體編號之抗體編號。圖7 展示藉由Biacore分析所測定針對⑶5之胞外結(jié)構(gòu)域上的不重迭表位之四 種抗體的同時結(jié)合之傳感圖。A)展示整個實驗之傳感圖。B)集中于抗CD5抗體與CD5之 胞外結(jié)構(gòu)域同時結(jié)合的來自A之傳感圖。圖中之編號為對應(yīng)于本申請案之其它處所示的抗 體編號之抗體編號。圖8:展示藉由流動式細(xì)胞計數(shù)所測定針對CD5之胞外結(jié)構(gòu)域上的不重迭表位 之四種抗體的同時結(jié)合之直方迭圖。CEM細(xì)胞經(jīng)染色如下(抗⑶5抗體、線、平均熒光強 度)無抗體、實線、7. 29 ；克隆12、虛線、479. 33 ；克隆14、點線、636. 65 ；克隆17、劃點線、 396. 29 ；克隆34、劃點點線、181. 14 ；克隆12、14、17與34之混合物，具有灰色填充之實線、 1292. 72。圖9 以所示抗體混合物在4°C或37°C處理隔夜的細(xì)胞之平均熒光強度(MFI)。與 4°C相比，37°C MFI下降指示CD5內(nèi)化。圖10 以所示抗體及抗體混合物處理指示時間段的CLL細(xì)胞(患者31)中⑶5含 量之西方印跡分析。納入α-微管蛋白作為裝載對照組。發(fā)明詳述抗體混合物在一具體實例中，本發(fā)明系關(guān)于包含能夠結(jié)合至少兩個不同⑶5表位、較佳地兩個不重迭⑶5表位的抗體分子之抗體組合物?？稍诒磉_(dá)⑶5的細(xì)胞之FACS分析中使用不 同標(biāo)記抗體或藉由使用表面等離子共振使用捕獲或結(jié)合至流動細(xì)胞表面之CD5抗原確定 抗體之不重迭性質(zhì)。亦可使用基于ELISA之方法。由于與單克隆抗體相比，結(jié)合兩個不重 迭CD5表位之組合物對CD5構(gòu)形差異可能較不敏感且對突變較不敏感，因此可使用其針對 較寬范圍之表達(dá)CD5的細(xì)胞。此外，與靶向單一表位之組合物相比，結(jié)合兩個不重迭CD5表 位之抗體組合物可提供優(yōu)良功效。對于單克隆抗⑶5抗體療法，一定比例之患者對抗體治療未作出有效反應(yīng)。對于 一些患者而言，此點可歸因于抗體之快速清除或由于抗體在患者中產(chǎn)生針對抗體之免疫反 應(yīng)。對于一些患者而言，缺乏反應(yīng)可能由于其特定表達(dá)⑶5的細(xì)胞表達(dá)某一構(gòu)形之⑶5，其 中單克隆抗體不能結(jié)合其表位。此可由于糖基化差異，由于結(jié)構(gòu)域缺失或由于突變及/或 SNP?？贵w能夠結(jié)合CD5上的至少兩個不同表位之抗體組合物將更廣泛適用，此系由于 與抗體所識別之表位相比，兩個表位均改變的可能性降低。此外，所有抗體均由患者清除之 可能性更小。對于改善之臨床功效及針對較寬范圍之表達(dá)CD5的細(xì)胞型的較寬效用而言，可增 加組合物中各自結(jié)合明顯CD5表位之抗體的數(shù)目。因此，組合物可包含能夠結(jié)合三個不重 迭表位之抗體。該組合物可包含能夠結(jié)合四個不重迭表位之抗體。本申請案之實施例展示 至少四種不同抗體可同時結(jié)合CD5。此并不排除有可能或甚至有利地藉由謹(jǐn)慎選擇抗體設(shè) 計包含能夠結(jié)合四個以上、諸如五個、六個、七個或八個不重迭表位的抗體之組合物。在另一具體實例中，該組合物包含結(jié)合一種表位之一種以上抗體分子，諸如結(jié)合 不同但重迭表位之兩種抗體。包括用于重迭表位之抗體可能存在優(yōu)勢，由于此舉會增加結(jié) 合表位之可能性。其中的一個基本原理為歸因于構(gòu)形變化或突變或SNP，一些患者及/或一 些癌細(xì)胞中之表位可改變。盡管此點可影響一種抗體結(jié)合，但其不可能影響結(jié)合重迭表位 之另一抗體的結(jié)合。此外，由于被視為抗原，一種抗體存在由患者清除之風(fēng)險。藉由包括結(jié) 合不同但重迭表位之兩種抗體，兩種抗體之一的清除之后果及表位之突變之后果削弱。因此，在一具體實例中，該組合物包含結(jié)合不同但重迭表位之兩種抗體。在另一具 體實例中，組合物包含結(jié)合相同表位之兩種不同抗體分子。結(jié)合相同或重迭表位之抗體可 具有相同或不同同型。因此，包含針對兩個不重迭表位的抗體之抗體組合物可包含三種、四種、五種或六 種不同抗體分子，以便兩種抗體結(jié)合兩個重迭表位或相同第一表位，且另一抗體結(jié)合第二 表位。當(dāng)然，組合物可包含能夠結(jié)合重迭表位或能夠結(jié)合相同表位之兩種以上，諸如三種或 四種抗體分子。因此，藉由具有一種以上抗體用于各表位或藉由具有數(shù)種抗體用于重迭表 位，組合物中所包括的抗體之總數(shù)可大于6。保持抗體之總劑量恒定，對于組合物中所包括 的各其它抗體而言，各抗體濃度降低。因此，預(yù)期在維持可接受之功效的同時，組合物中可 包括的抗體之?dāng)?shù)目有限。基于表面等離子共振結(jié)合研究及增殖檢定之觀測結(jié)果且考慮到生 產(chǎn)中的困難，預(yù)期可藉由將抗體數(shù)目自6增加至7、8、9、10或10種以上獲得有限(若存在) 其它優(yōu)勢。當(dāng)然，此并不排除組合物包含10種以上抗體，諸如11、12、13、14、15、16、17、18、 19或20種或20種以上抗體，諸如25種或25種以上抗體，例如30種或30種以上抗體，諸 如40種或40種以上抗體，諸如50種或50種以上抗體。
較佳地，該組合物包含至少一種結(jié)合結(jié)構(gòu)域I表位之抗體，且其可包含至少兩種 結(jié)合結(jié)構(gòu)域I表位之抗體。較佳地，該組合物包含至少一種結(jié)合結(jié)構(gòu)域II表位之抗體，且其可包含至少兩種 結(jié)合結(jié)構(gòu)域II表位之抗體。在一具體實例中，組合物中之至少一種抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域III表位，組合物更佳包 含至少兩種結(jié)合結(jié)構(gòu)域III表位之抗體，且組合物亦可包含三種結(jié)合結(jié)構(gòu)域III表位之抗 體。受體結(jié)合研究已展示一些抗體實際上可刺激其它抗體之結(jié)合，使得在以一或數(shù)種 抗體飽和受體后，特定抗體以較高量結(jié)合受體。當(dāng)設(shè)計針對CD5之抗體組合物的組合物時， 由于用于不重迭表位之抗體提供較高協(xié)同作用，所以較佳地使用此等抗體。組合物之抗體可為具有非人類可變鏈及人類恒定鏈之嵌合抗體。非人類可變鏈可 來自小鼠、大鼠、綿羊、豬、雞、非人類靈長類或其它適當(dāng)動物。為獲得全人類抗體，可使用人 類抗體基因在轉(zhuǎn)基因動物中產(chǎn)生抗體?？贵w亦可為所謂的人源化抗體，其中非人類CDR序 列已接枝于人類構(gòu)架序列中。較佳地，人類恒定鏈為IgGl或IgG2同型。更佳地，組合物中之所有抗體具有相同 同型以便于制備。然而，在組合物中可有利包括不同同型之抗體。較佳地，本發(fā)明之抗體組合物包含能夠結(jié)合選自由人類CD5、突變?nèi)祟怌D5及人類 CD5之缺失變異體所組成之群組的CD5之抗體。較佳地，抗體能夠結(jié)合人類與非人類靈長 類CD5，以便其可在臨床實驗之前在相關(guān)毒物學(xué)研究中加以測試。較佳地，非人類靈長類為 食蟹猴(Macaca fascicularis) 0食蟹猴為相對較小動物，且極其適于毒物學(xué)研究。因此， 其它靈長類CD5較佳為食蟹猴CD5。較佳地，抗體以約相同親和力結(jié)合人類及非人類靈長類 CD5。當(dāng)在一種組合物中組合2、3、4、5、6、7及8種抗體時，本發(fā)明已展示在一或多個功 能檢定中之優(yōu)良結(jié)果。盡管此等數(shù)據(jù)提供選擇組合物中抗體數(shù)目的指導(dǎo)，但其決不應(yīng)以限 制方式進(jìn)行解釋。即便實驗數(shù)據(jù)僅展示同時結(jié)合4種抗體，然該組合物可包含8種以上抗 體。在組合物中包括6種以上抗體可能存在其它原因，諸如抗體成員之清除速率差異。組合物中抗體之另一較佳特征為蛋白質(zhì)同質(zhì)性，使得抗體可易于純化。對于各個 抗體成員而言，具有一個明顯峰之離子交換層析譜較佳以易于特性化。清晰離子交換層析 譜亦較佳以易于特性化最終抗體組合物。亦較佳組合可使用離子交換層析法區(qū)分以便具有 所有抗體之組合物可一次性特性化之抗體?？贵w可為或來自任何來源，諸如人類、鼠類、兔、雞、豬、羊駝、綿羊。如實施例中所 述，抗體亦可為嵌合抗體或可使用在此項技術(shù)中所述之熟知方法經(jīng)人源化、高人源化或為 其改形形式。本發(fā)明之抗體分子可系選自具有如表1所示之抗體編號1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、 35、36、及37之CDR的抗體分子。此等抗體分子之CDR的氨基酸序列與核苷酸序列指示于 表1中。此外，本發(fā)明之抗體組合物可較佳地包含一種、兩種、三種、四種、五種、六種或排 他地選自具有如表1所示之抗體編號:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗體分子
之抗體。表1 抗體1-37之⑶R區(qū)的氨基酸及DNA序列
seqseqseq蛋白質(zhì)序列idididnononovh編號名稱cdrhlcdrh2cdrh311d8sgysftgytm24linpynggtt49c ardyygs spdfdyw6923121sgysftdytm25linpynggtm50c ardnygs spdfdyw7034h10sgysftgytm24linpynggtm50c ardnygs spyfdyw7148j23sgysftgytm24linpynggtm50c ardnygs spyfdyw715504sgysftgytm24linpynggtt49c ardyygs spdfdyw6964h2sgftfsnyam26sissggntf51cvryyygvtywyfdvw7275g2sgftfs 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 sggsyty64cvrhgyfdvw90281a20sgytftsyrm41ridpydsgth65cafydgayw91298e15sgfnikdtym31ridpangntk56casydpdyw92308c10sgysftdytm25linpynggtr60cardttatyyfdyw93313p16sgymftnhgm42wintytgept61carrvatyfdvw94324f3sgymftnygm43wintytgept61ctrrshitldyw95335m24sgyiftnygm44wintytgept61carrrttafdyw96345024sgfnikdyyi45widpengrte66cnngnyvrhyyfdyw97357b16sgytfinygm46wintytgept61ctrrreitfdyw98
361e8sgytftdyfi47eiypgssnty67carsgispftyw99372h16sgyiftgyni48avypgngdts68cakydrgfasw100蛋白質(zhì)序列 _VL
抗體
離號名稱CDRLl11D8SQGISNHL23121SQGIRNYL34H10SQGISNHL48J23SQGINNYL5504SQGISNHL64H2SQSVDHDGDSYM75G2SQSVD YDGDSYM88G8SQDISNYL96M4SQDISTYL102E3TSSISSSYL114E24NSSVSSSYL124F10TSSISSSYL137J9TSSISSSYL147P9SEN1YYNL158E24SENIYGYF166L18SQDINNYI177H7SQDINKYI181E7SENIYSYL198J21SQGIRNYL207111SQDVRTDV218M9SQDVITAV221P21SQ SIGTSI232H11SSQSLLNQKNYL243M22SSSVSSSYL255M6SENTYYNL265H8SQBGra277119SQSLLYSSDQKNYL281A20NSSVSYM298E15SENIYYNL308C10SSSLSYM313P16SQRIGTSM324F3SQ SIGTSI335M24SQNIGTSI345024ISSVSYM357B16SQTIAra361E8SQSLVHSNGNTYL372H16NESVEYSGTSLM
SEQSEQSEQIDIDIDNONONOCDRL2CDRL3101YFTSS128CQQYSNLPYTF151102YFTSS128CQQYSNLPYTF151101YFTSS128CQQYSNLPYTF151103YYTSS129CQQYSKIPYTC152101YFTSS128CQQYSNLPYTF151104YAASN130CQQNYEDPTF153105YAASN130CQQSNEDPTF154106YYTSR131CQQGDALPWTF155107FYTSR132CQQGNSLPFTF156108YGTSN133CQQWSSRPPTF157109YGTSN134CQQYSGYPLTF158108YGTSN134CQQYSDYPLTF159108YGTSN134CQQRSYFPFTF160109YNANS135CKQVYDVPFTF161110YNAKT136CQHHYGTPFTF162111HYTST137CLQ YDNLWTF163112HYTST137CLQ YDNLWTF163113YNAKT136CQHHYGYPYTF164102YHTST138CQQYSNLPLTF165114YSASF139CQQHYTSPWTF166115YSASY140CQQHYSTPWTF167116KSASE141CQQSNRWPLTF168117YWAST142CQNDYDYPYTF169118YSTSN143CHQYHRSPLTF170109YNANS135CQQTFD VPWTF171118KNASE144CQQSNSWPLTY172119YWAST142CQQYYNYPLTF173120YDTSK135CQQWSSNPFTF174109YNANS135CKQAYD VPWTF175121YDTSN146CQQWSSFPPTF176122KSASE141CQQSNSWPLTF177116KSASE141CQQSNSWPLTF177123KDASE147CQQSDSWPLTF178124YATSN148CQQWSSNPRTF179125KNASE144CQQSNSWPLTF177126YKVSN149CWQNTHFPQTF180127SAASN150CQQSRQVPLTF18權(quán)利要求
1.一種抗體組合物，其包含至少兩種能夠結(jié)合不同⑶5表位之抗⑶5抗體。
2.權(quán)利要求1的抗體組合物，其中該等表位不重迭。
3.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該等抗體結(jié)合CD5之選自由結(jié)構(gòu)域I、結(jié)構(gòu)域 II及結(jié)構(gòu)域III所組成之群組的至少一個胞外結(jié)構(gòu)域。
4.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中至少一種結(jié)合明顯CD5表位之抗體能夠增強 至少一種其它抗體與不同的明顯CD5表位的結(jié)合。
5.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中至少一種結(jié)合明顯CD5表位之抗體能夠增加 至少一種其它抗體對CD5之最大結(jié)合能力。
6.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該等抗體為重組抗體。
7.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，該等抗體為具有鼠類可變區(qū)與人類恒定域之嵌合 抗體。
8.權(quán)利要求7之抗體組合物，其中該人類恒定域為IgGl或IgG2。
9.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，該等抗體為人源化抗體。
10.權(quán)利要求1至6中任一項的抗體組合物，該等抗體為人類抗體。
11.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中至少一種該等抗⑶5抗體具有ΙΟΛ 或以下 之Kd值。
12.權(quán)利要求1至10中任一項的抗體組合物，其中至少一種該等抗⑶5抗體具有10_9M 或以下之Kd值。
13.權(quán)利要求1至10中任一項的抗體組合物，其中至少一種該等抗⑶5抗體具有IO-ltlM 或以下之Kd值。
14.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該⑶5為人類⑶5。
15.權(quán)利要求14之抗體組合物，其中該人類CD5具有表7所示序列。
16.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該等抗體能夠結(jié)合非人類的哺乳動物CD5。
17.權(quán)利要求16之抗體組合物，其中該等抗體能夠以實質(zhì)上等于該等抗體與人類CD5 結(jié)合之親和力結(jié)合該非人類哺乳動物CD5。
18.權(quán)利要求16或17之抗體組合物，其中該哺乳動物為靈長類。
19.權(quán)利要求18之抗體組合物，其中該靈長類為食蟹猴(Macacafascicularis) 0
20.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中至少一種抗體分子包含表6所示恒定域κ 輕鏈序列。
21.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該組合物之所有抗體分子包含表6所示恒 定域κ輕鏈序列。
22.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中至少一種抗體分子包含表6所示恒定域重 鏈序列。
23.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該組合物之所有抗體分子包含表6所示恒 定域重鏈序列。
24.一種雙特異性結(jié)合分子，其具有在先權(quán)利要求之一的抗體組合物之結(jié)合特異性。
25.權(quán)利要求M之雙特異性結(jié)合分子，其為雙可變域型抗體。
26.權(quán)利要求M之雙特異性結(jié)合分子，其為雙特異性Fab片段或雙特異性scFV。
27.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其包含至少一種抗⑶5抗體分子，所述抗體分子選自具有表 1 所示抗體:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗體。
28.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其包含至少兩種抗CD5抗體分子，所述抗體分 子選自具有表 1 所示抗體:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗體。
29.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其包含至少三種抗⑶5抗體分子，所述抗體分 子選自具有表 1 所示抗體:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗體。
30.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其包含至少四種抗⑶5抗體分子，所述抗體分 子選自具有表 1 所示抗體:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗體。
31.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其包含至少五種抗⑶5抗體分子，所述抗體分 子選自具有表 1 所示抗體:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗體。
32.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其包含至少六種抗CD5抗體分子，所述抗體分 子選自具有表 1 所示抗體:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗體。
33.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該組合物之所有抗CD5抗體分子皆選自由 具有抗體1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、對、25、 26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗體。
34.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該組合物包含至少一種另外的抗⑶5抗體 分子，其中該另外的抗體分子結(jié)合第三明顯表位。
35.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該組合物包含至少一種另外的抗⑶5抗體 分子，其中該另外的抗體分子結(jié)合第四明顯表位。
36.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該組合物包含至少一種另外的抗⑶5抗體 分子，其中該另外的抗體分子結(jié)合第五明顯表位。
37.在先權(quán)利要求之一的抗體組合物，其中該組合物包含至少一種另外的抗⑶5抗體 分子，其中該另外的抗體分子結(jié)合第六明顯表位。
38.權(quán)利要求34至37中任一項的抗體組合物，其中包含在該組合物中之至少3種抗 CD5抗體分子并不彼此抑制與CD5之結(jié)合。
39.權(quán)利要求35至37中任一項的抗體組合物，其中包含在該組合物中之至少4種抗 CD5抗體分子并不彼此抑制與CD5之結(jié)合。
40.權(quán)利要求36至37中任一項的抗體組合物，其中包含在該組合物中之至少5種抗 CD5抗體分子并不彼此抑制與CD5之結(jié)合。
41.權(quán)利要求37之抗體組合物，其中包含在該組合物中之至少6種抗⑶5抗體分子并 不彼此抑制與CD5之結(jié)合。
42.權(quán)利要求1的抗體組合物，該組合物包含兩種抗體的組合，所述組合選自 Ab9+Abl8、Ab9+Abl5、Ab9+Ab31、Ab9+Abl4、Ab9+Abl7、Abl8+Abl5、Abl8+Ab31、Abl8+Abl4、 Abl8+Abl7、Abl5+Ab31、Abl5+Abl4、Abl5+Abl7、Ab31+Abl4、Ab31+Abl7、及 Abl4+Abl7。
43.權(quán)利要求1的抗體組合物，該組合物包含三種抗體的組合，所述組合選自 Ab9+Abl8+Abl5、Ab9+Abl8+Ab31、Ab9+Abl8+Abl4、Ab9+Abl8+Abl7、Ab9+Abl5+Ab31、 Ab9+Abl5+Abl4、Ab9+Abl5+Abl7、Ab9+Ab31+Abl4、Ab9+Ab31+Abl7、Ab9+Abl4+Abl7、 Abl8+Abl5+Ab31、Abl8+Abl5+Abl4、Abl8+Abl5+Abl7、Abl8+Ab31+Abl4、Abl8+Ab31+Abl7、 Abl8+Abl4+Abl7、Abl5+Ab31+Abl4、Abl5+Ab31+Abl7、Abl5+Abl4+Abl7、及 Ab31+Abl4+Abl7。
44.權(quán)利要求1的抗體組合物，該組合物包含四種抗體的組合，所述組 合選 自Ab9+Abl8+Abl5+Ab31、Ab9+Abl8+Abl5+Abl4、Ab9+Abl8+Abl5+Abl7、 Ab9+Abl8+Ab31+Abl4、Ab9+Abl8+Ab31+Abl7、Ab9+Abl8+Abl4+Abl7、Ab9+Abl5+Ab31+Abl4、 Ab9+Abl5+Ab31+Abl7、Ab9+Abl5+Abl4+Abl7、Ab9+Ab31+Abl4+Abl7、Abl8+Abl5+Ab31+Abl4、 Abl8+Abl5+Ab31+Abl7、Ab18+Ab15+Ab14+Ab17、Ab18+Ab31+Ab14+Ab17、及 Abl5+Ab31+Abl4+Abl7。
45.權(quán)利要求1的抗體組合物，該組合物包含五種抗體的組合，所述組合選自 Ab9 +Ab 18 +Ab 15 +Ab31 +Ab 14, Ab9+Abl8+Abl5+Ab31+Abl7、Ab9+Ab 18+Ab 15+Ab 14+Ab 17, Ab9+Ab 18+Ab31 +Ab 14+Ab 17、Ab9+Ab 15+Ab31 +Ab 14+Ab 17、及 Ab 18+Ab 15+Ab31 +Ab 14+Ab 17。
46.權(quán)利要求1的抗體組合物，該組合物包含抗體Ab9+Abl8+Abl5+Ab31+Abl4+Abl7。
47.權(quán)利要求1的抗體組合物，該組合物包含多種抗體的組合，所述組合選自 9+14+15+17+18+31、9+14+15+17+18、9+15+18+31、及 9+15+18 ；其中該組合物能夠引起CD5內(nèi)化。
48.權(quán)利要求1的抗體組合物，該組合物包含多種抗體的組合，所述組合選自14+17、 17+18 ；其中該組合物不能夠引起CD5內(nèi)化。
49.一種醫(yī)藥組合物，其包含權(quán)利要求1-48中任一項的抗體組合物或權(quán)利要求M-26 中任一項的雙特異性結(jié)合分子作為活性成份。
50.權(quán)利要求1-48中任一項的抗體組合物，或權(quán)利要求M-26中任一項的雙特異性結(jié) 合分子，其用作藥劑。
51.權(quán)利要求50之組合物或雙特異性結(jié)合分子，其用于治療或預(yù)防癌癥。
52.權(quán)利要求50之組合物或雙特異性結(jié)合分子，其用于治療或預(yù)防慢性淋巴細(xì)胞性白 血病。
53.權(quán)利要求50之組合物或雙特異性結(jié)合分子，其用于治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
54.權(quán)利要求1-48中任一項的抗體組合物或權(quán)利要求2446中任一項的雙特異性結(jié)合 分子之用途，其用于制備藥劑。
55.治療方法，包括向有需要之患者投予權(quán)利要求49之醫(yī)藥組合物。
56.制備抗體組合物之方法，其包含a.用第一表達(dá)構(gòu)建體轉(zhuǎn)染第一真核細(xì)胞群體，所述表達(dá)構(gòu)建體編碼含VH及VL鏈之第 一同源對、且能夠結(jié)合第一明顯⑶5表位的第一抗體；b.用第二表達(dá)構(gòu)建體轉(zhuǎn)染第二真核細(xì)胞群體，所述表達(dá)構(gòu)建體編碼含VH及VL鏈之第 二同源對、且能夠結(jié)合第二明顯⑶5表位的第二抗體；c.視情況對第三或更進(jìn)一步的群體、表達(dá)構(gòu)建體、同源對、及CD5表位重復(fù)步驟b)；d.選擇所轉(zhuǎn)染的第一、第二和可選地進(jìn)一步的細(xì)胞群體；e.將多個所轉(zhuǎn)染的群體組合在一起，獲得細(xì)胞庫；f.在允許表達(dá)該等抗體之條件下培養(yǎng)細(xì)胞庫的細(xì)胞；及g.自上清液回收且純化抗體組合物。
57.權(quán)利要求56的方法，其中該抗體組合物為權(quán)利要求1-48中任一項的抗體組合物。
58.權(quán)利要求56的方法，其中該等細(xì)胞經(jīng)位點特異性整合而轉(zhuǎn)染。
59.權(quán)利要求56的方法，所述抗體中，VH及VL區(qū)為鼠的，恒定區(qū)為人的。
60.權(quán)利要求59的方法，其中所有抗體包含相同的重鏈恒定區(qū)。
61.一種細(xì)胞庫，其包含真核細(xì)胞之至少兩個子群，其中每一子群被一個編碼抗體的表 達(dá)構(gòu)建體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)，所述抗體包含VH及VL鏈之同源對、且能夠結(jié)合明顯⑶5表位。
62.權(quán)利要求61之細(xì)胞庫，其中該細(xì)胞庫編碼權(quán)利要求1-48中任一項的抗體組合物。
63.權(quán)利要求61之細(xì)胞庫，其中該等細(xì)胞系用位點特異性整合進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
64.一種殺死表達(dá)⑶5之細(xì)胞之方法，其包含向表達(dá)⑶5之細(xì)胞投予權(quán)利要求1-48中 任一項的抗體組合物或權(quán)利要求M-26中任一項的雙特異性結(jié)合分子，從而殺死表達(dá)CD5 之細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明系關(guān)于包含抗CD5抗體之組合物的領(lǐng)域。詳言之，本發(fā)明系關(guān)于包含至少兩種能夠結(jié)合不同CD5表位的抗CD5抗體之抗體組合物。本發(fā)明進(jìn)一步關(guān)于具有該等抗體組合物之結(jié)合特異性的雙特異性分子。本發(fā)明亦關(guān)于醫(yī)藥組合物、抗體組合物之用途及用于制備抗體組合物之方法。本發(fā)明進(jìn)一步關(guān)于細(xì)胞庫及用于殺死細(xì)胞之方法。
文檔編號A61P19/02GK102137873SQ200980133686
公開日2011年7月27日 申請日期2009年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月29日
發(fā)明者克勞斯·凱福德, 查爾斯·派克, 米克爾·W·佩德森, 約瑟芬·L·K·克利特加德 申請人:西福根有限公司