專利名稱：包含類倍半萜烯和抗微生物劑的口腔護(hù)理組合物的制作方法
包含類倍半萜烯和抗微生物劑的口腔護(hù)理組合物本發(fā)明涉及一種口腔護(hù)理組合物和這樣的口腔護(hù)理組合物用于治療由生物膜形成引起的病癥的用途。本發(fā)明還涉及一種用于抑制生物膜形成和/或降解生物膜的方法。發(fā)明背景 紅沒藥醇為天然的單環(huán)倍半萜烯醇。其通常在自然界中作為白花春黃菊(chamomile)的主要提取物而被發(fā)現(xiàn)。由于其皮膚愈合性質(zhì)，以及其抗炎、抗真菌和抗菌益處而特別用于化妝品行業(yè)。Szalontai, M ；Verzar-Petri, G. ；Florian, E. ;Gimpel，F(xiàn).，Pharmaz. Ztg，120，982(1975)和 Szalontai，Μ.，Verzar-Petri, G. ；Florian, E. ;Gimpel，F(xiàn).，Dtsch. Apoth.Ztg. 115,912(1975)公開了包括α -紅沒藥醇的白花春黃菊的生物活性物質(zhì)的殺菌和殺真菌作用。Issac O. , Dtsch. Apoth. Ztg 120，567-570 (1980)公開了紅沒藥醇具有抗微生物
和抗霉囷效果。Luppold O. , Pharmazie in unserer Zeit, 13, (1984), 3, p65_70 公開了白花春黃菊在傳統(tǒng)藥物中為有效的藥物。該文件公開了紅沒藥醇，尤其是(-)-α-紅沒藥醇對于白花春黃菊油的藥理學(xué)作用是重要的，并且具有消炎、解痙(spamolytic)和抗菌活性。還已發(fā)現(xiàn)類倍半萜烯(包括紅沒藥醇)提高對抗微生物劑的細(xì)菌透過性。Brehm-Stecher, B. F. , Johnson,E.A., Antimicrobial Agents and Chemotherapy 47(10),(2003)，p3357-3360和W099/66796各自公開了發(fā)現(xiàn)類倍半萜烯橙花叔醇、法呢醇、紅沒藥醇和2-(3，7_ 二甲基-2，6-辛二烯)環(huán)戊酮(apritone)非特異性增強培養(yǎng)的細(xì)菌細(xì)胞對某些外來化合物(包括抗微生物劑)的透過性。生物膜為包封在自發(fā)展的(self-developed)聚合細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的微生物的結(jié)構(gòu)化組(structured group)。生物膜通常粘附于活性或惰性表面。在人或動物身體中，生物膜可在任何內(nèi)或外表面上形成。已發(fā)現(xiàn)生物膜在身體中涉及廣泛種類的微生物感染，因此，引起多種病癥，包括尿道感染、中耳感染、牙斑形成和牙齦炎。US 5116602公開了一種含有低濃度的倍半萜烯醇矯味化合物的抗牙斑(antiplaque) 口腔組合物,用于在選自苯甲酸、防腐劑和聚羧酸酯和它們的混合物的添加劑存在下，在口腔賦形劑中抑制牙斑的形成。未公開倍半萜烯醇矯味化合物本身作為抗微生物劑，而是必須與其中公開的添加劑組合使用。JP 58213706公開了能壓制和抑制菌斑的形成、預(yù)防齲齒和牙周變性的用于口腔的組合物，其通過將用于口腔的組合物與選自扁桃苷、靛藍(lán)、山椒醇、紅沒藥醇和蘆丁的活性成分共混而得到。JP 2005298357公開了含有生物表面活性劑的用于口腔的組合物，所述生物表面活性劑選自由微生物生產(chǎn)的糖脂類、由此生產(chǎn)的多肽及其衍生物，并且進(jìn)一步含有一種、兩種或更多種選自百里酚、茴香腦、丁香酚、紅沒藥醇、法呢醇和橙花叔醇的精油組分。存在于生物膜中的微生物具有與相同物種的自由漂浮性微生物顯著不同的性質(zhì)。這是因為聚合細(xì)胞外基質(zhì)起到保護(hù)微生物免受周圍環(huán)境影響的作用，使得微生物以自由漂浮性微生物未呈現(xiàn)的各種方式合作和相互作用。微生物的這些復(fù)雜的群落呈現(xiàn)的獨特挑戰(zhàn)，在于它們通常耐抗微生物控制的經(jīng)典方式。在生物膜中存活的細(xì)菌呈現(xiàn)對抗生素提高的抗性，因為致密的細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞的外層保護(hù)生物膜的內(nèi)部免受抗生素的影響。因此，已知的抗微生物劑對存在于生物膜中的細(xì)菌將不具有相同的影響。本領(lǐng)域需要提供一種能抑制生物膜形成和降解生物膜的改進(jìn)的口腔組合物。發(fā)明概述
本發(fā)明的第一方面提供了一種包含類倍半萜烯和抗微生物劑的口腔護(hù)理組合物，其中所述類倍半萜烯和所述抗微生物劑以有效抑制和/或降解口腔中的生物膜的量存在。在另一方面，本發(fā)明提供了一種包含類倍半萜烯和抗微生物劑的口腔護(hù)理組合物，其改進(jìn)抗微生物劑的抗生物膜(殺滅性質(zhì))。依據(jù)本發(fā)明的組合物提供了一種用于抑制口腔中的生物膜形成和/或降解的新的手段。本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，類倍半萜烯增強抗微生物劑的抗生物膜活性。發(fā)現(xiàn)類倍半萜烯和抗微生物劑兩者的組合對抑制生物膜提供了一種協(xié)同作用。在一個方面，所述類倍半職烯選自橙花叔醇、法呢醇、紅沒藥醇、2-(3, 7-二甲基-2,6-辛二烯)環(huán)戍酮(apritone)和它們的混合物。本發(fā)明的第二方面提供了用作藥物的如上定義的組合物。本發(fā)明還提供了包含類倍半萜烯和抗微生物劑的組合物用于治療或預(yù)防由生物膜形成引起的病癥。本發(fā)明還提供了一種用于在受試者中抑制生物膜形成和/或降解生物膜的方法，所述方法包括給予受試者包含類倍半萜烯和抗微生物劑的組合物。所述方法可用于治療或預(yù)防由生物膜形成引起的病癥。附圖簡述圖I顯示在紅沒藥醇或同等濃度的EtOH的系列稀釋物存在下，粘性放線菌(A. viscosus)的生物膜形成的％降低。圖2顯示單獨的或組合的紅沒藥醇和三氯生的生物膜根除濃度5(| (BEC50)。圖3顯示三氯生的BEC5tl以及加入5ppm紅沒藥醇對三氯生的BEC5tl的影響。圖4a顯示在不存在(黑色棒)和存在(灰色棒)50ppm紅沒藥醇下，12種已知的抗微生物劑的BEC5tl ;圖4b顯示圖4a的放大。圖5顯示三氯生和紅沒藥醇單獨或組合(2 : I紅沒藥醇三氯生)對五種物種生物膜的形成的影響。發(fā)明詳述應(yīng)理解的是，詳細(xì)說明和具體的實例，雖然指出本發(fā)明的實施方案，旨在僅用于舉例說明的目的，并且不打算限制本發(fā)明的范圍。以下定義和非限制性準(zhǔn)則必須看作是回顧在此提出的本發(fā)明的描述。本文使用的標(biāo)題(例如“引言”和“概述”)和小標(biāo)題(例如“組合物”和“方法”)僅意欲用于在本發(fā)明的公開內(nèi)的主題的通常組織，并且不打算限制本發(fā)明的公開或其任何方面。特別是，在“引言”中公開的主題物質(zhì)可包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的技術(shù)的各方面，并且可能不構(gòu)成現(xiàn)有技術(shù)的描述。在“概述”中公開的主題為非窮舉的或完全公開本發(fā)明的全部范圍或其任何實施方案。在本說明書的一個章節(jié)內(nèi)為具有特定用途(例如，為“活性”或“載體”成分)的材料的分類或討論是為了方便，并且當(dāng)用于任何給定的組合物時，不應(yīng)由此推論該材料必須是必不可少的或僅僅根據(jù)其本文的分類起作用。本文對參考文獻(xiàn)的引用不構(gòu)成承認(rèn)那些參考文獻(xiàn)為現(xiàn)有技術(shù)或與本文公開的本發(fā)明的專利性具有任何關(guān)聯(lián)。在引言中引用的參考文獻(xiàn)內(nèi)容的任何討論僅旨在提供對參考文獻(xiàn)作者做出的主張的一般概述，并且不構(gòu)成為對此類參考文獻(xiàn)內(nèi)容的準(zhǔn)確性的認(rèn)可。說明書和具體的實施例，雖然指示本發(fā)明的實施方案，旨在用于僅舉例說明的目的，并不打算限制本發(fā)明的范圍。此外，對具有陳述的特征的多個實施方案的引用不意欲排除具有另外的特征的其他實施方案或結(jié)合陳述的特征的不同組合的其他實施方案。提供具體的實例用于舉例說明如何制備和使用本發(fā)明的組合物和方法，并且除非另外明確說明，不旨在代表已制備或測試或未制備或測試本發(fā)明的給定的實施方案。本文使用的詞語“優(yōu)選的”和“優(yōu)選地”是指在某些情況下給予某些益處的本發(fā)明的實施方案。然而，在相同的或其他情況下，其他實施方案可能也是優(yōu)選的。此外，對一或多個優(yōu)選的實施方案的引用不是暗示其他實施方案不能用，并且不打算將其他實施方案排 除于本發(fā)明的范圍。此外，所述組合物和方法可包含、基本上由或由本文描述的要素組成。本文使用的詞語“包括”及其變體用于為非限制性的，使得在列表中對條目的引用不排除在本發(fā)明的材料、組合物、裝置和方法中也可以是有用的其他類似的條目。本文使用的術(shù)語“約”當(dāng)應(yīng)用于本發(fā)明的組合物或方法的參數(shù)的值時，說明該值的計算或測量允許一些稍微的不精確，而對組合物或方法的化學(xué)或物理特性沒有實質(zhì)影響。出于某些原因，如果“約”提供的不精確在本領(lǐng)域中不另外理解具有該普通的含義，則本文使用的“約”說明在該值的最高5%的可能的變化。除非另外說明，否則本文涉及的所有的組成百分?jǐn)?shù)基于所述總組合物的重量計
笪用于本發(fā)明的上下文的術(shù)語“生物膜”是指在自發(fā)展的聚合細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)包封的微生物的任何組。生物膜可粘附于活性或惰性表面。例如，在口腔中，生物膜可以斑形式粘附于牙齒。生物膜可粘附的受試者表面的其他實例為尿道、耳、隱形眼鏡、導(dǎo)管。生物膜可由一種或多種不同類型的微生物形成，包括例如細(xì)菌、古生菌(archaea)、原生動物、真菌和藻類。生物膜優(yōu)選由細(xì)菌形成。在一個實施方案中，生物膜由單一菌種的細(xì)菌形成或由多菌種細(xì)菌形成。生物膜可由一種或多種選自以下的細(xì)菌形成粘性放線菌(A. viscosus)、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、口腔鏈球菌(Streptococcus oralis)、具核梭桿菌(Fusobacterium nucleatum)和小韋榮氏球菌(Veillonella parvula)?？尚纬缮锬さ钠渌?xì)菌包括皮膚種類細(xì)菌和一種或多種在Asas, J. A.等人，“Defining the normal bacterial flora of the oral cavity (限定口腔的正常細(xì)菌菌群)”J. Clin. Microbiol. 43 (11) 5721-32 (2005年11月)中描述的口腔的細(xì)菌菌群。組合物在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種包含抗微生物劑和類倍半萜烯的口腔護(hù)理組合物，其中所述類倍半萜烯和所述抗微生物劑以有效抑制和/或降解口腔中的生物膜的量存在。在一個方面，所述類倍半萜烯選自橙花叔醇、法呢醇、紅沒藥醇、2-(3，7_ 二甲基-2，6-辛二烯)環(huán)戍酮(apritone)和它們的混合物。在一個實施方案中，本發(fā)明提供一種包含紅沒藥醇和抗微生物劑的口腔護(hù)理組合物，其中所述紅沒藥醇和所述抗微生物劑以有效抑制和/或降解口腔中的生物膜的量存在。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，包含紅沒藥醇和抗微生物劑兩者的組合物對生物膜抑制和/或生物膜降解提供了協(xié)同作用。已發(fā)現(xiàn)，與當(dāng)分別測試紅沒藥醇和抗微生物劑相比，當(dāng)共同存在于組合物中時，較低濃度的紅沒藥醇和抗微生物劑兩者可用于對生物膜抑制提供相同的作用。不希望束縛于任何操作理論，認(rèn)為紅沒藥醇的抗生物膜活性不是由紅沒藥醇的抗微生物活性引起的。本領(lǐng)域已知，紅沒藥醇具有抗微生物性質(zhì)，即，其直接殺滅或抑制微生物的生長。然而，當(dāng)與已知的抗微生物劑(例如三氯生和鯨蠟基氯化吡啶鎗)相比時，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)紅沒藥醇的抗微生物活性低。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，雖然單獨的紅沒藥醇適度抑制生物膜形成，但是，當(dāng)與抗微生物劑組合時，具有更大改進(jìn)的活性。此外，已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)與紅沒藥醇組合時，抗微生物劑具有對抗生物膜的改進(jìn)的活性。 不特別限制在依據(jù)本發(fā)明的組合物中的紅沒藥醇，并且可為任何天然存在的或合成形式的紅沒藥醇。紅沒藥醇可為α-(-)-紅沒藥醇、對映異構(gòu)體α-(+)_紅沒藥醇或外消旋混合物α - (±)-紅沒藥醇。在一個方面，所述類倍半萜烯以有效抑制和/或降解口腔中的生物膜的量存在于所述組合物中。優(yōu)選地，類倍半萜烯以適于預(yù)防或治療由生物膜形成引起的病癥的量存在，例如選自牙斑、姓牙(tooth decay)、口臭、牙周病或牙銀炎的病癥。在另一個方面,紅沒藥醇以有效抑制和/或降解口腔中的生物膜的量存在于所述組合物中。優(yōu)選地，紅沒藥醇以適于預(yù)防或治療由生物膜形成引起的病癥的量存在，例如選自牙斑、蛀牙、口臭、牙周病或牙齦炎的病癥。通常類倍半萜烯以O(shè). 0001-1 %重量的濃度存在于所述組合物中，優(yōu)選約O. 025-0. 075%。通過非限制性實例，紅沒藥醇可以O(shè). 0001-1%重量的濃度存在，優(yōu)選約O. 025-0. 075%。不特別限制在依據(jù)本發(fā)明的組合物中的抗微生物劑，并且可選自鹵代二苯基醚(三氯生)、草藥提取物或精油(例如，迷迭香提取物、百里酚、薄荷醇、桉葉油素、水楊酸甲酯)、雙胍防腐劑(例如，氯己定、阿來西定或奧替尼啶)、酚類防腐劑、海克替啶、聚維酮碘、地莫匹醇、salifluor (5-正辛酰-3’ -三氟甲基苯基水楊酰胺)、金屬離子和它們的鹽(例如，氯化鋅、乳酸鋅、檸檬酸鋅、氟化亞錫和氯化亞錫)、血根堿、蜂膠、充氧劑(例如，過氧化氫、緩沖的過硼酸鈉或過碳酸鹽)、鯨蠟基氯化吡啶鎗、木蘭提取物、木蘭醇、和厚樸酚、丁基木蘭醇、丙基和厚樸酚和它們的混合物。還可包括抗附著劑例如Solrol以及牙斑分散劑例如酶(木瓜蛋白酶、葡糖淀粉酶等)。如本文所討論的，當(dāng)在依據(jù)本發(fā)明的組合物中與紅沒藥醇一起提供時，抗微生物劑具有對抑制生物膜形成和/或降解生物膜的改進(jìn)的活性。因此，與包含抗微生物劑而不含紅沒藥醇的組合物相比，需要較低濃度的抗微生物劑來提供相同的活性?？刮⑸飫┮杂行б种坪?或降解口腔中的生物膜的量存在于所述組合物中。優(yōu)選地，抗微生物劑以適于預(yù)防或治療由生物膜形成引起的病癥的量存在，例如選自牙斑、蛀牙、牙周病、口臭或牙齦炎的病癥。通常抗微生物劑以O(shè). 01 % -I. 5 %重量的濃度存在于所述組合物中，優(yōu)選O. 05% -O. 75%重量。在一個實施方案中，其中所述抗微生物劑為三氯生，三氯生優(yōu)選以O(shè). 05% -O. 75%重量的濃度存在于所述組合物中。在一個實施方案中，如本文中其他地方詳述的，類倍半萜烯(優(yōu)選紅沒藥醇)和抗微生物劑兩者的組合提供了對抑制生物膜形成和/或生物膜降解的協(xié)同作用。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)生物膜根除濃度(BEC5tl)的意外降低，其為相對于對照物，在生物質(zhì)中觀察到大于50%降低的最低濃度。與單獨測試相比，當(dāng)共同測試生物膜抑制時，紅沒藥醇和抗微生物劑的BEC5tl較低。
因此，在一個優(yōu)選的實施方案中，與不存在抗微生物劑下紅沒藥醇的BEC5tl相比，在抗微生物劑存在下，紅沒藥醇的BEC5tl為50%或更少，更優(yōu)選30%或更少，最優(yōu)選25%或更少。在抗微生物劑存在下，紅沒藥醇的BEC5tl優(yōu)選為10ppm-40ppm,更優(yōu)選20ppm-30ppm,更優(yōu)選 25ppm-30ppm,最優(yōu)選 27ppm_28ppm。在一個優(yōu)選的實施方案中，與不存在紅沒藥醇的抗微生物劑的BEC5tl相比，在紅沒藥醇存在下，抗微生物劑的BEC5tl為75%或更少，更優(yōu)選50%或更少，最優(yōu)選25%或更少。在紅沒藥醇存在下，抗微生物劑的BEC5tl取決于在組合物中使用的具體的抗微生物劑。在紅沒藥醇存在下，通?？刮⑸飫┑腂EC5tl為700ppm或更少。在紅沒藥醇存在下，抗微生物劑的BEC5tl優(yōu)選為20ppm或更少,更優(yōu)選6ppm或更少,最優(yōu)選2ppm或更少。在一個實施方案中，其中所述抗微生物劑為三氯生，在紅沒藥醇存在下，三氯生的BEC5tl為lppm-3ppm，更優(yōu)選 BEC50 為 I. 5ppm-2ppm。在一個實施方案中，含有類倍半萜烯和抗微生物劑的口腔組合物的pH可在3-9范圍，優(yōu)選4-8，最優(yōu)選pH為約5。所述口腔組合物還優(yōu)選包含選自磷酸鈉、焦磷酸四鈉、焦磷酸四鉀、檸檬酸鈉和它們的混合物的緩沖劑。依據(jù)本發(fā)明的組合物還可包含一種或多種其他試劑，其通常選自抗蝕斑劑(anti-plaque agent)、增白劑、抗菌劑、清潔劑、增香劑、甜味劑、粘著劑、表面活性劑、泡沫調(diào)節(jié)劑、研磨劑、PH調(diào)節(jié)劑、濕潤劑、口感劑、著色劑、研磨料、牙垢控制(抗牙石)劑、氟離子源、唾液刺激劑、營養(yǎng)素和它們的組合?？杉尤氲浇M合物中的各種組分包括，例如，甜味劑例如糖精或糖精鈉、醇例如乙醇、氟離子源例如氟化鈉、以及甘油、山梨糖醇、丙二醇、聚乙二醇、泊洛沙姆(Poloxomer)聚合物例如P0L0X0MER 407、PLURONIC F108( 二者均可得自BASF Corporation)、烷基多糖苷(APG)、聚山梨醇酯、PEG40、蓖麻油、薄荷醇等。在本文可用的那些食用香料中包括確實能改進(jìn)組合物味道的任何材料或多種材料的混合物?？墒褂萌魏慰谇豢山邮艿奶烊换蚝铣傻氖秤孟懔?，例如香油、矯味醛、酯、醇、類似的材料和它們的組合。食用香料包括香草醛、鼠尾草、牛至屬植物、歐芹油、留蘭香油、肉桂油、冬青油(水楊酸甲酯)、薄荷油、丁香油、月桂油、茴香油、桉樹油、柑橘油、水果油和香精包括衍生自朽1檬、桔子、酸橙、柚子、杏、香蕉、葡萄、蘋果、草莓、樓桃、菠蘿等的那些、豆子-和堅果-衍生的調(diào)料例如咖啡、可可粉、可樂、花生、杏仁等、吸附的和包封的食用香料和它們的混合物。本文中食用香料還包括在嘴中提供芳香和/或其他感覺效果的成分，包括涼或熱效果。這種成分包括薄荷醇、乙酸薄荷酯、乳酸薄荷酯、樟腦、桉樹油、桉葉油素、茴香腦、丁香酚、桂皮、覆盆子酮(oxanone)、[ α ]_紫羅蘭酮、丙烯基乙基愈創(chuàng)木酚(guaiethol)、百里酹、里哪醇、苯甲醒、肉桂醒、N-乙基-對-孟基-3-甲酰胺、N, 2, 3_三甲基-2-異丙基丁酰胺、3-1-孟氧基(menthoxy)丙-I, 2-二醇、肉桂醒甘油乙縮醒(CGA)、薄荷酮甘油乙縮醛(MGA)和它們的混合物。一種或多種食用香料任選以約O. 01% -約5%的總量存在，任選在不同的實施方案中，為約O. 05-約2%，約O. 1% -約2.5%和約O. I-約O. 5%。 在本文可用的那些甜味劑包括葡萄糖、聚葡萄糖(polydextiOse)、蔗糖、麥芽糖、糊精、干燥的轉(zhuǎn)化糖、甘露糖、木糖、核糖、果糖、左旋糖、半乳糖、玉米糖漿、部分水解的淀粉、氫化淀粉水解產(chǎn)物、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、異麥芽酮糖醇(isomalt)、阿司帕坦、紐甜(neotame)、糖精及其鹽、三氯鹿糖(sucralose)、基于二肽的強甜味劑、環(huán)己氨基磺酸鹽(cyclamates)、二氫查爾酮和它們的混合物?？诟袆┌ㄔ诮M合物的使用期間賦予期望的質(zhì)地或其他感覺的材料。在本文可用的那些著色劑包括色素、染料、色淀和賦予特定的光澤或反射性的試劑例如珠光劑。在不同的實施方案中，著色劑能在牙齒表面上提供白色或淺色涂層，以充當(dāng)已與組合物有效接觸的牙齒表面的位置的指示劑，和/或改變組合物的外觀，特別是顏色和/或不透明性，以增強對消費者的吸引力。可使用任何口腔可接受的著色劑，包括FD&C染料和色素、滑石、云母、碳酸鎂、碳酸鈣、硅酸鎂、硅酸鋁鎂、二氧化硅、二氧化鈦、氧化鋅、紅色、黃色、褐色和黑色氧化鐵、氰亞鐵酸銨鐵(ferric ammonium ferrocyanide)、猛紫、群青、涂二氧化鈦的云母(titaniated mica)、氯氧化秘和它們的混合物。一種或多種著色劑任選以約0. 001% -約20%的總量存在，例如約0.01% -約10%或約0. 1% -約5%。本發(fā)明的組合物還包含例如可用作拋光劑的任選的研磨劑?？墒褂萌魏慰谇豢山邮艿难心?，但是應(yīng)選擇研磨劑的類型、細(xì)度(粒徑)和量，使得在組合物的正常使用中牙釉質(zhì)不被過度磨損。合適的任選的研磨劑包括二氧化硅，例如沉淀二氧化硅形式或與氧化鋁、不溶性磷酸鹽、碳酸鈣和它們的混合物的的混合物。在不溶性磷酸鹽中，可用作研磨劑的有正磷酸鹽、聚偏磷酸鹽和焦磷酸鹽。示例性實例為二水合正磷酸二鈣、焦磷酸鈣、焦磷酸鈣、磷酸三鈣、聚偏磷酸鈣和不溶性聚偏磷酸鈉。本發(fā)明的組合物任選包含牙垢控制(抗牙石)劑。在本文可用的那些牙垢控制劑包括任何這些試劑的鹽，例如它們的堿金屬和銨鹽磷酸鹽和聚磷酸鹽(例如焦磷酸鹽)、聚氨基丙磺酸(AMPS)、聚烯烴磺酸鹽、聚烯烴磷酸鹽、二膦酸鹽例如氮雜環(huán)烷烴_2，2- 二膦酸鹽(例如，氮雜環(huán)庚烷_2，2- 二膦酸)、N-甲基氮雜環(huán)戊烷_2，3- 二膦酸、乙烷-I-羥基-1，1-二膦酸(EHDP)和乙烷-I-氨基-1，I-二膦酸鹽、膦基烷烴羧酸?？捎玫臒o機磷酸鹽和聚磷酸鹽包括一代、二代和三代磷酸鈉、三聚磷酸鈉、四聚磷酸鹽、焦磷酸一鈉、焦磷酸二鈉、焦磷酸三鈉和焦磷酸四鈉、三偏磷酸鈉、六偏磷酸鈉和它們的混合物。本發(fā)明的組合物任選包含氟離子源并且可例如用作抗齲齒劑?？墒褂萌魏慰谇豢山邮艿牧罘x子源，包括氟化鉀、氟化鈉和氟化銨和單氟磷酸鹽、氟化亞錫、氟化銦、氟化胺例如olafluHN'-十八烷基三亞甲基二胺-N，N，N'-三(2-乙醇)-二氫氟酸鹽)和它們的混合物。一種或多種氟離子源任選以在臨床上向口腔組合物中提供有效量的可溶性氟離子的量存在。本發(fā)明的組合物任選包含唾液刺激劑，例如可用于改善口干癥?？墒褂萌魏慰谇豢山邮艿耐僖捍碳?，包括但不限于食品酸，例如檸檬酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸、抗壞血酸、己二酸、富馬酸和酒石酸和它們的混合物。一種或多種唾液刺激劑任選以唾液刺激有效總
量存在。
本發(fā)明的組合物任選包含營養(yǎng)素。合適的營養(yǎng)素包括維生素、礦物質(zhì)、氨基酸和它們的混合物。維生素包括維生素C和D、硫胺素、核黃素、泛酸鈣、煙酸、葉酸、煙酰胺、吡哆醇、氰鈷胺素、對氨基苯甲酸、生物類黃酮和它們的混合物。營養(yǎng)補充劑包括氨基酸(例如L-色氨酸、L-賴氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、左卡尼汀和L-肉堿)、抗脂肪肝劑(例如膽堿、肌醇、甜菜堿和亞油酸)和它們的混合物。在不同的實施方案中，不特意吞咽依據(jù)本發(fā)明的口腔組合物，而是在口腔中保留足以實現(xiàn)預(yù)期用途的時間。在其他便攜的實施方案(例如錠劑、薄荷、珠粒、薄片、由小的便攜的噴霧器配制用于口腔應(yīng)用的液體、由小的便攜的產(chǎn)生液滴的瓶配制用于口腔應(yīng)用的液體、或柔軟的易變形片劑)中，任選在口腔中保留足以實現(xiàn)預(yù)期用途的時間之后，特意吞咽所述口腔組合物。優(yōu)選依據(jù)本發(fā)明的組合物在產(chǎn)品中包含口腔可接受的載體，所述產(chǎn)品為例如漱口水、牙膏、牙齒乳膏、口香糖、牙襯粘膠或便攜的劑量制品，例如但不限于錠齊U、薄荷、珠粒、薄片、在小的便攜的噴霧器中配制用于口腔應(yīng)用的液體(噴霧瓶)、在小的便攜的產(chǎn)生液滴的瓶中配制用于口腔應(yīng)用的液體、或柔軟的易變形片劑(“口香糖”)。本文使用的“口腔可 接受的載體”是指安全用于本發(fā)明組合物的、與合理的收益/風(fēng)險比相稱的一種材料或多種材料的組合。本發(fā)明還提供了包含如上定義的口腔護(hù)理組合物的便攜式劑量制品，其中所述便攜式劑量制品選自錠劑、薄荷、珠粒、薄片、含有作為噴霧劑配制用于口腔應(yīng)用的液體的所述混合物的小的便攜式噴霧器、含有作為液滴配制用于口腔應(yīng)用的液體的所述混合物的小的便攜式瓶、和柔軟的易變形片劑。因此，優(yōu)選待用于本發(fā)明的具體材料和組合物為藥學(xué)上-或化妝品上-可接受的、在臨床上有效的和/或在臨床上有效力的。本文使用的“藥學(xué)上可接受的”或“化妝品上可接受的”、“在臨床上有效的”和/或“在臨床上有效力的”組分為適于與人和/或動物一起使用并且以適當(dāng)?shù)牧?臨床有效量)提供的組分，以提供期望的治療、預(yù)防、感覺、裝飾或化妝品益處，而沒有過度不利的副作用(例如毒性、刺激和變應(yīng)性反應(yīng))，與合理的收益/風(fēng)險比相稱。使用方法可將依據(jù)本發(fā)明的組合物給予或施用于人或其他動物受試者。所述組合物可適于給予或施用于人或動物受試者的口腔，用于抑制生物膜形成和/或生物膜降解。因此，本發(fā)明提供用作藥物的如上定義的組合物。本發(fā)明還提供了包含類倍半萜烯(例如，紅沒藥醇)和抗微生物劑的組合物，用于治療或預(yù)防由生物膜形成引起的病癥。本發(fā)明還提供了包含類倍半萜烯和抗微生物劑的組合物在制備用于治療或預(yù)防由生物膜形成引起的病癥的藥物中的用途。在一個實施方案中，預(yù)防或治療的病癥選自牙斑、蛀牙、牙周病、口臭和牙齦炎。優(yōu)選所述組合物為如上定義的口腔護(hù)理組合物。本發(fā)明還提供一種用于在受試者中抑制生物膜形成和/或降解生物膜的方法，所述方法包括給予受試者包含類倍半萜烯(優(yōu)選紅沒藥醇)和抗微生物劑的組合物。通過在用于口腔以及非口腔應(yīng)用(例如，皮膚，毛發(fā)、指甲等)的組合物中，將抗微生物劑與類倍半萜烯(優(yōu)選紅沒藥醇)組合，所述方法還能增強抗微生物劑的抗微生物活性。在一個實施方案中，所述組合物為如上定義的口腔組合物，并且將所述組合物施用于口腔。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述方法用于治療或預(yù)防由生物膜形成引起的病癥。優(yōu)選地，由生物膜形成引起的病癥為口腔的病癥，并且可選自牙斑、蛀牙、牙周病、口臭或牙齦炎。包含類倍半萜烯(例如，紅沒藥醇)和抗微生物劑的組合物能在受試者中顯著抑制生物膜形成和/或降解現(xiàn)有的生物膜。所述組合物特別用于抑制口腔中的生物膜形成和/或降解生物膜?？蓪罁?jù)本發(fā)明的組合物的藥物給予患者。與已知的抗菌口腔組合物相比，由于提供協(xié)同抗生物膜作用的紅沒藥醇和抗微生物劑兩者的存在，所述藥物可以較低頻率和/或在較低濃度下給予。 本發(fā)明還提供紅沒藥醇用于增強抗微生物劑的抗生物膜活性的用途。所述紅沒藥醇和抗微生物劑優(yōu)選如本文所述。本文引用的每篇和每一篇參考文獻(xiàn)通過全文引用結(jié)合到本文中?，F(xiàn)在將參考以下非限制性實施例來描述不同的實施方案。
實施例實施例I :紅沒藥醇的最小抑制濃度測試紅沒藥醇、三氯生和鯨蠟基氯化吡啶鎗(CPC)對粘性放線菌(一種常見的口腔細(xì)菌)的抑制作用。通過用活性物質(zhì)的系列稀釋物溫育粘性放線菌(Actinomyces viscosus)細(xì)菌24小時，并確定該菌種的生長受到抑制的最低濃度，來確定活性物質(zhì)的最小抑制濃度。簡單地說，將100μ I最終體積的活性物質(zhì)橫過96-孔平底微量滴定板的雙份孔在O. 5Χ胰蛋白酶大豆肉湯(TSB)中系列稀釋。將細(xì)菌的過夜培養(yǎng)物稀釋至OD61tl O. 2，并且將100 μ I的該稀釋液加入到每個孔中。將各板在37°C下溫育過夜。讀取每個孔的OD61tl，并確定MIC，作為在最后一個孔中細(xì)菌生長受到抑制的活性物質(zhì)的濃度。最小抑制濃度(MIC)在下表I中提供。表I.兩種已知的抗菌劑和紅沒藥醇對抗常見的口腔細(xì)菌(粘性放線菌)的最小抑制濃度。
化合物MIC (粘性放線菌)
紅沒藥醇 125ppm 三氯生3. 5ppm
CPC< Ippm由表I可見，與三氯生和CPC相比，紅沒藥醇具有相對高的MIC。這表明，紅沒藥醇不能起到抗菌劑的作用。因此，認(rèn)為如在實施例2-6中說明的，紅沒藥醇的生物增強和生物膜抑制效果不是由于其抗微生物性質(zhì)。實施例2 :紅沒藥醇抑制生物膜形成測試不同濃度的紅沒藥醇對抑制粘性放線菌生物膜形成的影響。在紅沒藥醇或同等濃度的EtOH的系列稀釋物存在下，使粘性放線菌細(xì)菌生長24小時。將孔染色，以顯現(xiàn)生物膜形成。結(jié)果示于

圖1，其中X-軸表示紅沒藥醇的濃度(或者培養(yǎng)基中EtOH的同等溶液)，y-軸表示相對于在單獨的培養(yǎng)基中生長的對照物孔，生物膜的％降低。 結(jié)果顯示，在低至IlOppm的濃度下，單獨的紅沒藥醇能抑制單一菌種生物膜的形成。實施例3 :紅沒藥醇和三氯生抑制生物膜形成測試包含紅沒藥醇的組合物、包含抗菌劑三氯生的組合物以及包含紅沒藥醇和三氯生兩者的組合物的抗生物膜活性。在96-孔板中將包含紅沒藥醇(O. 7% )的組合物、包含三氯生(O. 05% )的組合物以及包含紅沒藥醇(O. 7% )和三氯生(O. 05% )的組合物各自系列稀釋。將粘性放線菌培養(yǎng)物加入到每個孔中，將各板于37°C下溫育，使得發(fā)生生物膜形成。在生物膜形成之后，將上清液除去，使用O. 6%結(jié)晶紫將孔染色15分鐘。通過讀取在590nm下每個孔的吸光度使生物膜生物質(zhì)定量，計算相對于單獨的培養(yǎng)基對照物，生物質(zhì)的％降低。結(jié)果報道為生物膜根除濃度(BEC5tl)，其為相對于對照物，在生物質(zhì)中觀察到大于50%降低的最低濃度。圖2顯示單獨的紅沒藥醇和三氯生或彼此組合的BEC5tlt5 BEC50定義為觀察到生物膜形成大于50%降低時的最小濃度。與圖I的結(jié)果一致，單獨的紅沒藥醇在低至IlOppm的濃度下抑制生物膜形成。單獨的三氯生在約3. 9ppm的濃度下抑制生物膜形成，與該有機體的其他研究一致。然而，當(dāng)將兩種活性物質(zhì)組合時，觀察到在27. 3ppm紅沒藥醇和I. 95ppm三氯生下抑制生物膜，這表明增強活性和對生物膜抑制的協(xié)同作用。換言之，當(dāng)將兩種活性物質(zhì)組合時，實現(xiàn)有效的生物膜形成所需的紅沒藥醇和三氯生的量降低大于50%，最高降低75-80%。實施例4 :紅沒藥醇增強三氯生的抗生物膜活性確定包含單獨的三氯生的組合物和包含紅沒藥醇和三氯生兩者的組合物的抗生物膜作用。為了確定生物增強活性，在O. 5X TSB中，在96孔平底微量滴定板的各排中一式四份制備50 μ I測試活性物質(zhì)的系列稀釋物。將總體積50 μ I紅沒藥醇加入到含有測試活性物質(zhì)的兩排和純培養(yǎng)基的兩排中，使指示的最終濃度加倍。在O. 5Χ TSB中將粘性放線菌細(xì)菌的過夜培養(yǎng)物稀釋至OD61tl O. 4，將100 μ I加入到96-孔板的每個孔中，使最終體積為200。將板于37°C下溫育24小時，使得細(xì)菌生長和生物膜形成。將上清液從板中傾析，將50 μ I 0.03% Gram’ s結(jié)晶紫加入到每個孔中。將板染色15分鐘，隨后將染料傾析。每個孔用IOmM tris> ImM EDTA洗漆緩沖液洗漆一次。讓板干燥,在Perkin Elmer EnVision微量板讀數(shù)器上讀取染色的板在590nm下的吸光度。適當(dāng)?shù)那闆r下，將吸光度與用單獨的培養(yǎng)基或單獨的紅沒藥醇處理的孔的吸光度相比較。結(jié)果報告為相對于對照物，在生物膜中觀察到大于50%降低的最低濃度。用5-1000ppm范圍的多種紅沒藥醇濃度重復(fù)該研究。由在5ppm紅沒藥醇下進(jìn)行的實驗的代表性數(shù)據(jù)示于圖3，其中在包含單獨的三氯生的組合物中三氯生的BEC5tl為4. 13ppm，而在包含紅沒藥醇的組合物中三氯生的BEC5tl為I. 78。同樣，可見，當(dāng)紅沒藥醇與抗微生物劑組合時，實現(xiàn)相同的或類似的生物膜降低所需的抗微生物劑的量降低遠(yuǎn)超過50%，最高達(dá)75%。鑒于這些結(jié)果,清楚的是，即使在5ppm紅沒藥醇的低濃度下,在低至I. 78ppm的三氯生濃度下，抑制單一菌種生物膜的形成，與之相比，4. 13ppm的單獨的三氯生抑制單一菌種生物膜的形成。這表明，對于單一菌種，靜態(tài)生物膜模式，紅沒藥醇能提高三氯生的效率，從而降低生物膜抑制所需的最小濃度。實施例5 :紅沒藥醇增強抗微生物劑的抗生物膜活性測試紅沒藥醇對12種不同抗微生物劑的抗生物膜活性的影響。在存在或不存在50ppm紅沒藥醇下完成這些研究，對于具有不同效力程度的一組已知的抗微生物劑再次比較BEC5tl值。結(jié)果示于圖4a和4b。圖4a顯示在不存在(黑色棒)和存在(灰色棒)50ppm紅沒藥醇下，12種已知的 抗微生物劑的BEC5Q。圖4b顯示圖4a的放大的面積。H兌明顯著性差別(P <0.05) ;+說明朝向顯著性(P<0. I)的趨勢。這些結(jié)果顯示，紅沒藥醇增強抗微生物劑的活性的能力是非特異性的。實施例6 :紅沒藥醇和抗微生物劑抑制多菌種生物膜在多菌種模式中測試包含單獨的或組合的三氯生和紅沒藥醇的組合物抑制生物膜形成的能力，其中生物膜包括五種代表性口腔細(xì)菌菌種粘性放線菌、干酪乳桿菌、口腔鏈球菌、具核梭桿菌和小韋榮氏球菌。在單獨的三氯生、單獨的紅沒藥醇或2 I濃度的紅沒藥醇三氯生存在下，使用這五種菌種的細(xì)菌混合物接種涂布唾液的羥基磷灰石(HAP)圓盤。將圓盤溫育48小時，使得發(fā)生生物膜形成。將含有生物膜的圓盤在37°C下在Iml O. 25%胰蛋白酶溶液中溫育45分鐘，以釋放生物膜，讀取生物質(zhì)作為胰蛋白酶溶液的OD610。圖5顯示這些實驗的結(jié)果?？梢?，包含20ppm單獨的三氯生的組合物高度有效(生物膜形成降低> 60% )，并且顯示難以超過該值的另外的效力。為了確定三氯生超過該值的任何抗生物膜作用，需要降低三氯生的濃度低于抑制濃度。因此，在2ppm或5ppm三氯生下進(jìn)行這些實驗。圖5顯示該水平的單獨的三氯生或2 I濃度的紅沒藥醇三氯生的組合的影響。在這些低濃度的三氯生下，發(fā)現(xiàn)比起單獨的紅沒藥醇或三氯生中的任一種，紅沒藥醇和三氯生的組合更有效地抑制模型的口腔生物膜形成。在包含紅沒藥醇和三氯生兩者的組合物中顯著降低生物膜形成，表明紅沒藥醇的存在顯著增強三氯生的抗生物膜效力。由于在實施例5中顯示紅沒藥醇用作抗微生物活性的非特異性增強劑，該相同的趨勢同樣適用于在圖4a中顯示增強的其他活性物質(zhì)。實施例7 口腔組合物表2舉例說明使用單獨的紅沒藥醇和與其他已知的口腔護(hù)理活性成分的組合配制的潔牙劑組合物的實例?？谇蛔o(hù)理的實例驗證了對于紅沒藥醇具有生物增強效應(yīng)的治療齊 ，包括但不限于三氯生、CPC、木蘭提取物(天然或合成的)、木蘭醇、和厚樸酚、丁基木蘭醇、丙基和厚樸酚、氯化鋅、乳酸鋅、檸檬酸鋅、氟化亞錫或氯化亞錫。表權(quán)利要求
1.ー種口腔護(hù)理組合物，所述組合物包含類倍半萜烯和抗微生物劑，其中所述類倍半萜烯和所述抗微生物劑以有效抑制和/或降解口腔中的生物膜的量存在。
2.依據(jù)權(quán)利要求I的口腔護(hù)理組合物，其中所述類倍半萜烯以最高1%w/w的濃度存在于所述組合物中。
3.依據(jù)權(quán)利要求I的口腔護(hù)理組合物，其中所述類倍半萜烯選自橙花叔醇、法呢醇、紅沒藥醇、2-(3，7- ニ甲基-2，6-辛ニ烯)環(huán)戊酮和它們的混合物。
4.依據(jù)權(quán)利要求3的口腔護(hù)理組合物，其中所述類倍半萜烯為紅沒藥醇。
5.依據(jù)權(quán)利要求4的口腔護(hù)理組合物，其中所述紅沒藥醇以0.025-0. 075% w/w的濃度存在于所述組合物中。
6.依據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的ロ腔護(hù)理組合物，其中所述抗微生物劑選自三氯生、餘臘基氣化批唳鐵、木蘭提取物、木蘭醇、和厚樸酌■、丁基木蘭醇、丙基和厚樸酌■、氣化鋒、乳酸鋅、檸檬酸鋅、氟化亞錫和氯化亞錫。
7.依據(jù)權(quán)利要求6的口腔護(hù)理組合物，其中所述抗微生物劑為三氯生。
8.依據(jù)前述權(quán)利要求中任ー項的ロ腔護(hù)理組合物，其中與不存在抗微生物劑時的類倍半萜烯的BEC5tl相比，在抗微生物劑存在下所述類倍半萜烯的BEC5tl為25%或更少。
9.依據(jù)權(quán)利要求8的口腔護(hù)理組合物，其中所述類倍半萜烯為紅沒藥醇，并且紅沒藥醇的 BEC5tl 為 20ppm-30ppm。
10.依據(jù)前述權(quán)利要求中任ー項的口腔護(hù)理組合物，其中與不存在類倍半萜烯時的抗微生物劑的BEC5tl相比，在類倍半萜烯存在下所述抗微生物劑的BEC5tl為75%或更少。
11.依據(jù)權(quán)利要求108的口腔護(hù)理組合物，其中與不存在類倍半萜烯時的抗微生物劑的BEC5tl相比，在類倍半萜烯存在下所述抗微生物劑的BEC5tl為50%或更少。
12.依據(jù)權(quán)利要求9的口腔護(hù)理組合物，其中所述抗微生物劑為三氯生，并且三氯生的BEC50 為 lppm_3ppm0
13.依據(jù)前述權(quán)利要求中任ー項的口腔護(hù)理組合物，其中所述組合物包含ー種或多種選自抗蝕斑劑、增白劑、甜味劑、清潔劑和增香劑的其他試劑。
14.依據(jù)前述權(quán)利要求中任ー項的口腔護(hù)理組合物，其中所述組合物包含用于牙膏、牙齒乳膏、漱ロ水、ロ香糖或牙襯粘膠的口腔可接受的載體。
15.用作藥物的依據(jù)前述權(quán)利要求中任ー項的口腔護(hù)理組合物。
16.一種組合物，所述組合物包含紅沒藥醇和抗微生物劑，用于治療或預(yù)防由生物膜形成引起的病癥。
17.依據(jù)權(quán)利要求16的組合物，其中所述病癥為口腔中的病癥。
18.依據(jù)權(quán)利要求17的組合物,其中所述病癥選自牙斑、姓牙、牙周病、口臭或牙銀炎。
19.一種在受試者中抑制生物膜形成和/或降解生物膜的方法，所述方法包括給予所述受試者包含紅沒藥醇和抗微生物劑的組合物。
20.依據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中將所述組合物施用于口腔。
21.依據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中所述方法預(yù)防或治療口腔中由生物膜形成引起的病癥。
22.依據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中所述病癥選自牙斑、蛀牙、牙周病、口臭或牙齦炎。
23.依據(jù)權(quán)利要求19-22中任ー項的方法，其中所述生物膜由單ー菌種的細(xì)菌形成。
24.依據(jù)權(quán)利要求19-22中任ー項的方法，其中所述生物膜由多個菌種的細(xì)菌形成。
25.依據(jù)權(quán)利要求19-24中任ー項的方法,其中所述生物膜由選自以下的ー種或多種細(xì)菌形成粘性放線菌、干酪乳桿菌、口腔鏈球菌、具核梭桿菌和小韋榮氏球菌。
26.類倍半萜烯用于增強抗微生物劑的抗生物膜活性的用途。
27.依據(jù)權(quán)利要求26的用途，其中所述類倍半萜烯為紅沒藥醇。
全文摘要
本發(fā)明公開了口腔護(hù)理組合物和此類口腔護(hù)理組合物用于治療由生物膜形成引起的病癥的用途。還公開了用于抑制生物膜形成和/或降解生物膜的方法。所述口腔護(hù)理組合物包含類倍半萜烯和抗微生物劑，其中所述類倍半萜烯和所述抗微生物劑以有效抑制和/或降解口腔中生物膜的量存在。
文檔編號A61K8/34GK102625691SQ200980161997
公開日2012年8月1日 申請日期2009年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月12日
發(fā)明者A·M·摩根, D·米克薩, E·S·阿瓦尼蒂多, G·塞夫茨克, L·謝菲爾-科爾比洛, L·迪-圖姆, M·普倫西普 申請人:高露潔-棕欖公司