專利名稱：一種虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物分離技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝。
背景技術(shù)：
虎眼虎眼萬年青(Ornithogalum caudatum Ait)又名胡連虎眼萬年青、海蔥、葫 蘆蘭，為百合科虎眼虎眼萬年青，屬常綠多年生球根植物，原產(chǎn)于非洲南部。在我國北方有 栽培.民間用全草或球莖入藥主要用于消炎和抗癌。虎眼虎眼萬年青有極高的藥用價(jià)值， 藥理學(xué)研究表明虎眼虎眼萬年青中的虎眼虎眼萬年青皂苷0SW21對(duì)肺癌、乳腺癌有明顯的 抗癌活性，體外抗P338淋巴細(xì)胞白血病活性結(jié)果表明，0SW21是常見抗癌藥物喜樹堿、阿霉 索、紫杉醇抗癌活性的10 100倍，而且對(duì)正常細(xì)胞沒有毒性，因此，是一種極具開發(fā)潛力 的中草藥。現(xiàn)有提取分離虎眼萬年青皂苷工藝，多是傳統(tǒng)老工藝。即虎眼萬年青葉子水溫浸 提取，乙酸鉛沉淀雜質(zhì)，活性炭吸附，乙醇再次提取，粗苷水溶解，依次用二硫化碳、乙醚洗 滌，氯仿再萃取，再用氯仿乙醇水混溶液萃取和氧化鋁柱分離，重結(jié)晶得到三種單體成分， 工藝復(fù)雜繁瑣，試劑種類繁多，給回收帶來困難。也有利用大孔樹脂吸附工藝制備皂苷的， 如肖沖等發(fā)表的“虎眼虎眼萬年青皂苷的分離提取”采用乙醇提取，石油醚脫脂，AB-8樹脂 吸附，D-280樹脂脫色?，F(xiàn)有專利公開的方法也多是粗提物的制備，如專利200510069273“虎 眼虎眼萬年青活性提取物的制備方法及用途”，該方法采用乙醇提取，樹脂分離，得到粗提 物?，F(xiàn)有公開的虎眼萬年青多糖工藝，提取方法簡(jiǎn)單，產(chǎn)品含量較低，如專利 200510017123 “治療肝癌的虎眼虎眼萬年青多糖藥物”，該專利公開的方法是水提，低醇沉 淀沉淀物棄去，再高醇沉淀多糖，乙醇洗滌即可，多糖含量50%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，該工 藝適合虎眼萬年青多種有效成分的分離，能夠提高了虎眼萬年青原料的利用率。本發(fā)明的目的是這樣來實(shí)現(xiàn)的—種虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于包括以下幾個(gè)步驟1)提取取虎眼萬年青藥材粉碎，加入5-8倍量水回流提取1-2小時(shí)，提取2-3次， 合并提取液加入澄清劑沉淀過濾，收集濾液；2)大孔樹脂吸附將上述濾液加入大孔樹脂吸附，收集下柱液，水_醇梯度洗脫， 收集醇洗脫液；3)總皂苷純化將步驟2)中的醇洗脫液，濃縮小體積，加入氧化鎂中壓柱，乙酸 乙酯_乙醇梯度洗脫，收集皂苷流分濃縮小體積，加入乙醚沉析，沉析物濾出乙醇溶解結(jié)晶 2-3次，干燥即得虎眼萬年青總皂苷；4)多糖純化將步驟2)下柱液減壓濃縮至密度1. 1-1. 3，加入乙醇梯度醇沉，濾出沉淀物熱水溶解，多糖用活性炭柱脫色，脫色液濃縮加入乙醇沉析，濾出沉淀物，低溫真空 干燥即得虎眼萬年青多糖。步驟1)中澄清劑為ZTC-II澄清劑，用量1_3%0。步驟2)中大孔樹脂可選D101、AB-8和HZ816中的一種。優(yōu)選HZ816。步驟2)中水-醇梯度洗脫為6-8倍柱體積水洗再5-6倍柱體積50_70 %乙醇洗 脫。步驟3)中乙酸乙酯-乙醇梯度洗脫為8-10倍柱體積乙酸乙酯洗脫再4-8倍柱體 積50-90%乙醇洗脫。優(yōu)選85%乙醇。步驟3)中結(jié)晶條件為90_99%乙醇回流溶解，回收至原體積的1/2-1/3，靜置結(jié)
晶°步驟4)中的梯度醇沉為最終乙醇濃度90% -70% -50%三個(gè)梯度。綜上所述，本發(fā)明存在以下優(yōu)點(diǎn)水回流提有利于皂苷多糖同時(shí)溶出，沉降劑可以 除去大分子物質(zhì)和部分鞣質(zhì)，提高了大孔樹脂壽命；氧化鎂中壓柱處理速度快、效果好、總 皂苷含量高；梯度醇沉和活性炭柱純化多糖，多糖產(chǎn)品品質(zhì)好。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 取Ikg虎眼虎眼萬年青，粉碎，加入5L去離子水，回流提取1小時(shí)，提取3次，合并 提取液加入3gZTC-II沉降劑攪拌均勻，充分沉降，濾過加入500mlHZ816樹脂柱中吸附，下 柱液收集備用。取4L去離子水洗脫樹脂中雜質(zhì)，再取3L50%的乙醇溶液，洗脫皂苷成分。1 總皂苷洗純化皂苷洗脫液，減壓濃縮小體積(濃縮體積不得大于氧化鎂體積 的1/5)，泵入中壓氧化鎂柱，先8倍柱體積乙酸乙酯洗脫雜質(zhì)，再用4倍柱體積85%乙醇洗 脫總皂苷，收集總皂苷流分濃縮無醇，加入20ml乙醚沉析，沉析物濾出，90%乙醇溶解回流 溶解，濃縮1/3靜止結(jié)晶，結(jié)晶三次，得總皂苷6g含量90%。2 多糖純化將下柱液減壓濃縮至密度1. 1，放出加入無水乙醇至醇90%，加入過 程充分?jǐn)嚢瑁恋砦镌?0%和50%兩個(gè)梯度醇沉，粗多糖濾出溶解加入糖用活性炭柱，收 集脫色液濃縮加入乙醇至80%醇沉，濾出真空干燥得多糖30g含量80%。實(shí)施例2 取Ikg虎眼虎眼萬年青，粉碎，加入8L去離子水，回流提取2小時(shí)，提取2次，合并 提取液加入4gZTC-II沉降劑攪拌均勻，充分沉降，濾過加入500mlAB-8樹脂柱中吸附，下柱 液收集備用。取3L去離子水洗脫樹脂中雜質(zhì)，再取2. 5L70%的乙醇溶液，洗脫皂苷成分。1 總皂苷洗純化皂苷洗脫液，減壓濃縮小體積(濃縮體積不得大于氧化鎂體積 的1/5)，泵入中壓氧化鎂柱，先10倍柱體積乙酸乙酯洗脫雜質(zhì)，再用4倍柱體積90%乙醇 洗脫總皂苷，收集總皂苷流分濃縮無醇，加入25ml乙醚沉析，沉析物濾出，99 %乙醇溶解回 流溶解，濃縮1/2靜止結(jié)晶，結(jié)晶三次，得總皂苷6. 2g，含量86%。2 多糖純化將下柱液減壓濃縮至密度1. 2，放出加入無水乙醇至醇90%，加入過 程充分?jǐn)嚢?，沉淀物?0%和50%兩個(gè)梯度醇沉，粗多糖濾出溶解加入糖用活性炭柱，收集脫色液濃縮加入乙醇至70%醇沉，濾出真空干燥得多糖28g，含量78%。實(shí)施例3 取Ikg虎眼虎眼萬年青，粉碎，加入5L去離子水，回流提取1小時(shí)，提取3次，合并 提取液加入3gZTC-II沉降劑攪拌均勻，充分沉降，濾過加入500mlD101樹脂柱中吸附，下柱 液收集備用。取4L去離子水洗脫樹脂中雜質(zhì)，再取3L60%的乙醇溶液，洗脫皂苷成分。1 總皂苷洗純化皂苷洗脫液，減壓濃縮小體積(濃縮體積不得大于氧化鎂體積 的1/5)，泵入中壓氧化鎂柱，先10倍柱體積乙酸乙酯洗脫雜質(zhì)，再用4倍柱體積50%乙醇 洗脫總皂苷，收集總皂苷流分濃縮無醇，加入IOml乙醚沉析，沉析物濾出，95%乙醇溶解回 流溶解，濃縮1/2靜止結(jié)晶，結(jié)晶三次，得總皂苷5. 5g含量85%。2 多糖純化將下柱液減壓濃縮至密度1. 15，放出加入無水乙醇至醇90%，加入 過程充分?jǐn)嚢?，沉淀物?0%和50%兩個(gè)梯度醇沉，粗多糖濾出溶解加入糖用活性炭柱， 收集脫色液濃縮加入乙醇至80%醇沉，濾出真空干燥得多糖26g，含量75%。實(shí)施例4 取IOkg虎眼虎眼萬年青，粉碎，加入50L去離子水，回流提取1小時(shí)，提取3次，合 并提取液加入40gZTC-II沉降劑攪拌均勻，充分沉降，濾過加入6LHZ816樹脂柱中吸附，下 柱液收集備用。取40L去離子水洗脫樹脂中雜質(zhì)，再取30L60%的乙醇溶液，洗脫皂苷成分。1 總皂苷洗純化皂苷洗脫液，減壓濃縮小體積(濃縮體積不得大于氧化鎂體積 的1/5)，泵入中壓氧化鎂柱，先10倍柱體積乙酸乙酯洗脫雜質(zhì)，再用6倍柱體積85%乙醇 洗脫總皂苷，收集總皂苷流分濃縮無醇，加入200ml乙醚沉析，沉析物濾出，90 %乙醇溶解 回流溶解，濃縮1/3靜止結(jié)晶，結(jié)晶三次，得總皂苷63g含量90%。2 多糖純化將下柱液減壓濃縮至密度1. 2，放出加入無水乙醇至醇90%，加入過 程充分?jǐn)嚢瑁恋砦镌?0%和50%兩個(gè)梯度醇沉，粗多糖濾出溶解加入糖用活性炭柱，收 集脫色液濃縮加入乙醇至80%醇沉，濾出真空干燥得多糖310g，含量80%。實(shí)施例5 取IOkg虎眼虎眼萬年青，粉碎，加入80L去離子水，回流提取2小時(shí)，提取2次，合 并提取液加入35gZTC-II沉降劑攪拌均勻，充分沉降，濾過加入6LAB-8樹脂柱中吸附，下柱 液收集備用。取48L去離子水洗脫樹脂中雜質(zhì)，再取35L65%的乙醇溶液，洗脫皂苷成分。1 總皂苷洗純化皂苷洗脫液，減壓濃縮小體積(濃縮體積不得大于氧化鎂體積 的1/5)，泵入中壓氧化鎂柱，先10倍柱體積乙酸乙酯洗脫雜質(zhì)，再用6倍柱體積85%乙醇 洗脫總皂苷，收集總皂苷流分濃縮無醇，加入200ml乙醚沉析，沉析物濾出，90 %乙醇溶解 回流溶解，濃縮1/3靜止結(jié)晶，結(jié)晶三次，得總皂苷61g含量85%。2 多糖純化將下柱液減壓濃縮至密度1. 2，放出加入無水乙醇至醇90%，加入過 程充分?jǐn)嚢?，沉淀物?0%和50%兩個(gè)梯度醇沉，粗多糖濾出溶解加入糖用活性炭柱，收 集脫色液濃縮加入乙醇至80%醇沉，濾出真空干燥得多糖305g，含量75%。
權(quán)利要求
一種虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于包括以下幾個(gè)步驟1)提取取虎眼萬年青藥材粉碎，加入5-8倍量水回流提取1-2小時(shí)，提取2-3次，合并提取液加入澄清劑沉淀過濾，收集濾液；2)大孔樹脂吸附將上述濾液加入大孔樹脂吸附，收集下柱液，水-醇梯度洗脫，收集醇洗脫液；3)總皂苷純化將步驟2)中的醇洗脫液，濃縮小體積，加入氧化鎂中壓柱，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脫，收集皂苷流分濃縮小體積，加入乙醚沉析，沉析物濾出乙醇溶解結(jié)晶2-3次，干燥即得虎眼萬年青總皂苷；4)多糖純化將步驟2)下柱液減壓濃縮至密度1.1-1.3，加入乙醇梯度醇沉，濾出沉淀物熱水溶解，多糖用活性炭柱脫色，脫色液濃縮加入乙醇沉析，濾出沉淀物，低溫真空干燥即得虎眼萬年青多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于步驟1)中澄 清劑為ZTC-II澄清劑，用量1_3%0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于步驟2)中大 孔樹脂可選D101、AB-8和HP100中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于步驟2)中 水_醇梯度洗脫為6-8倍柱體積水洗再5-6倍柱體積50-70%乙醇洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于步驟3)中乙 酸乙酯-乙醇梯度洗脫為8-10倍柱體積乙酸乙酯洗脫再4-8倍柱體積50-90%乙醇洗脫。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于步驟3)中結(jié) 晶條件為90-99%乙醇回流溶解，回收至原體積的1/2-1/3，靜置結(jié)晶。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，其特征在于步驟4)中梯 度醇沉為最終乙醇濃度90% -70% -50%三個(gè)梯度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種虎眼萬年青總皂苷、多糖的聯(lián)產(chǎn)工藝，工藝步驟包括虎眼萬年青為原料粉碎，水回流提取2-3次，ZTC-II沉降劑沉降雜質(zhì)，大孔樹脂富集皂苷分離多糖，多次梯度醇沉、活性炭柱脫色制備多糖，中壓氧化鎂柱、乙醇溶解重結(jié)晶制備總皂苷。采用工藝生產(chǎn)所得總皂苷含量高達(dá)90％，多糖含量80％左右，而且原料利用率高。
文檔編號(hào)A61K36/896GK101879265SQ20101015684
公開日2010年11月10日 申請(qǐng)日期2010年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月27日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司