專利名稱：一種功能性聚糖的酶工程制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品加工領(lǐng)域，更具體地本發(fā)明涉及應(yīng)用酶工程技術(shù)自豆制品生產(chǎn)副產(chǎn)物中提取分離豆類多糖的方法。本發(fā)明還涉及衍生自豆渣的、可用作食品添加劑的多糖分離物。
背景技術(shù)：
我國是世界上大豆等豆類的主要消費國之一，僅大豆的年消耗量超過5000萬噸左右，其主要用途是生產(chǎn)大豆油和豆制品，生產(chǎn)過程中有50%以上是副產(chǎn)物豆渣，通常直接作為飼料加以利用，使用價值很低。已有大量研究表明，水溶性多糖可作為食品添加劑廣泛應(yīng)用于乳品、軟飲料、肉制品等食品加工過程中。此外，大豆多糖作為食品添加劑，具有廣泛的應(yīng)用和獨特的功能。大豆多糖的制備方法目前采用化學(xué)法?；瘜W(xué)法主要采用酸堿水解的方法，這種方法的缺點是水解過程是非特異的，分解過程難以控制，特別是不容易得到高級的大豆聚糖 (分子量> 20萬)，大大影響了其功能的發(fā)揮。同時這種方法生產(chǎn)的產(chǎn)品有害物質(zhì)的殘留多，生產(chǎn)過程有污染。此外，由于種種原因，本領(lǐng)域尚沒有大豆多糖的酶法生產(chǎn)工藝。綜上所述，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)對環(huán)境友好的、有效的利用大豆制品副產(chǎn)物(如豆渣)生產(chǎn)大豆多糖的深加工技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種對環(huán)境友好的、有效的利用大豆制品副產(chǎn)物(如豆渣)生產(chǎn)大豆多糖的方法。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種酶法制備豆類多糖的方法，包括步驟(a)將豆渣的水溶液用蛋白酶處理，獲得經(jīng)蛋白酶處理的第一水溶液；(b)將所述的第一水溶液用果膠酶處理，獲得經(jīng)果膠酶處理的第二水溶液；(C)將所述的第二水溶液用纖維素酶處理，獲得經(jīng)纖維素酶處理的第三水溶液；(d)將所述的第四水溶液用半纖維素酶處理，獲得經(jīng)半纖維素酶處理的第四水溶液；(e)從所述的第四水溶液中分離出豆類多糖。在另一優(yōu)選例中，在步驟(a)、(b)、(c)和/(d)中，對于處理后獲得的水溶液進(jìn)行酶滅活處理。在另一優(yōu)選例中，所述的酶滅活處理是在70-100°C下放置1-20分鐘。在另一優(yōu)選例中，所述的步驟(e)包括對第四水溶液進(jìn)行過濾，從而獲得水溶性多糖溶液和非水溶性的多糖。在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括步驟(f)對獲得的水溶性多糖溶液進(jìn)行脫色、濃縮從而制得濃縮液。
在另一優(yōu)選例中，所述的脫色采用以下條件進(jìn)行將步驟(e)得到的水溶性多糖液經(jīng)顆粒狀活性炭脫色，活性炭柱O. 6 X 100cm)，活性碳酶解液=1 4-10，流速IOml/ 分鐘，從而獲得脫色液。在另一優(yōu)選例中，所述的濃縮采用以下條件進(jìn)行將脫色液進(jìn)行超濾濃縮，操作條件為膜截流分子量 IO4-IO6 ；壓力 0. 05Mpa-0. 5Mpa ；流速 101/h-1001/h ；溫度 25°C -65°C，從而獲得濃縮液。在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括步驟(g)對所述的濃縮液進(jìn)行干燥，從而獲得水溶性多糖的干燥粉末。在另一優(yōu)選例中，所述的干燥采用噴霧干燥，工藝條件為多糖濃度50g/l_200g/l ； 進(jìn)料速度 0. 05ml/s-0. 5ml/s ；進(jìn)風(fēng)溫度 110°C _200°C。在另一優(yōu)選例中，步驟(a)至(d)中用酶進(jìn)行處理的條件為在溫度35°C _65°C ； ρΗΙ. 0-ρΗ8· 0下酶解2-48小時(較佳地3-24小時)。在另一優(yōu)選例中，根據(jù)所使用的酶的具體種類，ρΗ范圍為所述酶最適ρΗ值士 1. 5。在另一優(yōu)選例中，按國際單位計算，所述的蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶的用量之間的比例為(0.5-1) (1-5) (1-5) (0.5-1)。在另一優(yōu)選例中，對于1克豆渣干重，所述的蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶4種酶的總用量10-1000IU。在另一優(yōu)選例中，所述的蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶的用量如下Ig干豆渣，使用1-1000國際單位蛋白酶，更佳地2-100國際單位蛋白酶；Ig干豆渣，使用2-1000國際單位果膠酶，更佳地5-100國際單位果膠酶；Ig干豆渣，使用2-1000國際單位纖維素酶；更佳地5-100國際單位纖維素酶；和Ig干豆渣，使用1-1000國際單位半纖維素酶，更佳地3-100國際單位半纖維素酶。在另一優(yōu)選例中，所述的過濾是超濾，操作條件為膜截流分子量IO4-IO6;壓力 0. 05Mpa-0. 5Mpa ；流速 101/h-1001/h ；溫度 25 °C -65 0C0在另一優(yōu)選例中，所述的蛋白酶是酸性蛋白酶，并且步驟(a)中在ρΗΙ. 5_3. 5下進(jìn)行酶解。在另一優(yōu)選例中，所述的豆渣包括選自以下豆類的豆渣大豆、豌豆、綠豆、蕓豆或其組合。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種用本發(fā)明第一方面中所述方法制備的豆類多糖。在另一優(yōu)選例中，所述的多糖是水溶性多糖組分，分子量在20萬 100萬道爾頓， 其單糖組成包括半乳糖、鼠李糖、巖藻糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖及糖醛酸。在另一優(yōu)選例中，所述的多糖是非水溶性多糖，其單糖組成包括半乳糖、鼠李糖、 巖藻糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖及糖醛酸，且其糖醛酸酯化度大于50%。在另一優(yōu)選例中，所述的豆渣包括選自以下豆類的豆渣大豆、豌豆、綠豆、蕓豆或其組合。在本發(fā)明的第三方面，提供了本發(fā)明所制備的豆類多糖的用途，其中所述的豆類多糖是水溶性多糖，所述的水溶性豆類多糖被作為添加劑用于食品或保健品。在本發(fā)明的第三方面，提供了本發(fā)明所制備的豆類多糖的用途，所述的豆類多糖是非水溶性多糖，所述的非水溶性豆類多糖被用于制備抑制腫瘤細(xì)胞生長的組合物。應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術(shù)特征可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再
--累述。


圖1顯示了本發(fā)明一個實例中制備的水溶性豆類多糖的單糖組成。圖2顯示了本發(fā)明一個實例中制備的水溶性豆類多糖的分子量分布情況。
具體實施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，首次采用酶工程方法對豆渣中的水溶和非水溶性多糖成功地進(jìn)行了提取分離，獲得了有功能的水溶和非水溶性多糖。它們可作為食品添加劑用于食品加工過程。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。原料可用于本發(fā)明的原料是豆類加工業(yè)的副產(chǎn)物豆渣。如本文所用，術(shù)語“豆渣”包括
干豆渣以及濕豆渣。可用于本發(fā)明的豆渣沒有特別限制，代表性的豆渣包括(但并不限于)以下豆類的豆渣大豆、豌豆、綠豆、蕓豆或其組合。此外，應(yīng)理解，術(shù)語“豆渣”不僅包括純的豆渣，還包括含有豆渣作為主要成分的原料，例如將豆渣與纖維素混合所形成的混合原料。研究表明，豆渣中含有35%以上的水溶性多糖和50%以上的非水溶性膳食多糖， 其中水溶性多糖可作為食品添加劑廣泛應(yīng)用于乳品、軟飲料、肉制品等食品加工過程中。酶如本文所用，“復(fù)合酶”指用于的本發(fā)明酶法的4種酶的總稱，即蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶。所述的蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶的用量沒有特別限制，只要各種酶能夠發(fā)揮其酶解功能即可。通常，蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶的用量的比例為 (0. 5-1) (1-5) (1-5) (0. 5-1)。在本發(fā)明方法中，對于1克豆渣干重，所述的蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶4種酶的總用量10-10000IU，較佳地為10-1000IU，更佳地為20-200IU。較佳地，在本發(fā)明方法中，蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶的用量如下Ig干豆渣，使用1-1000國際單位蛋白酶，更佳地2-100國際單位蛋白酶；Ig干豆渣，使用2-1000國際單位果膠酶，更佳地5-100國際單位果膠酶；Ig干豆渣，使用2-1000國際單位纖維素酶；更佳地5-100國際單位纖維素酶；和Ig干豆渣，使用1-1000國際單位半纖維素酶，更佳地3-100國際單位半纖維素酶。蛋白酶、果膠酶、纖維素酶和半纖維素酶都是可以通過市售方式購買或者通過現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法進(jìn)行制備。根據(jù)所采用酶的種類，可以在其最適PH值或其附近范圍、 最適溫度或其附近范圍下進(jìn)行酶解。通常，酶解條件中的PH范圍為所述酶最適pH值士 1.5。 酶解條件中的溫度范圍為所述酶最適溫度士3°C。
酶工程制備方法本發(fā)明提供了一種酶法制備豆類多糖的方法，具體包括步驟(a)將豆渣的水溶液用蛋白酶處理，獲得經(jīng)蛋白酶處理的第一水溶液；(b)將所述的第一水溶液用果膠酶處理，獲得經(jīng)果膠酶處理的第二水溶液；(C)將所述的第二水溶液用纖維素酶處理，獲得經(jīng)纖維素酶處理的第三水溶液；(d)將所述的第四水溶液用半纖維素酶處理，獲得經(jīng)半纖維素酶處理的第四水溶液；(e)從所述的第四水溶液中分離出豆類多糖。在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，提供了一種利用復(fù)合酶分解豆渣的工藝方法，它包括步驟(a)向上述溶液中加入1-10國際單位/克豆渣的酸性蛋白酶，15轉(zhuǎn)-180轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，在35°C -55°C保溫酶解3小時-10小時。(b)將上述酶解液溫度調(diào)至100°C保溫10分鐘，然后降溫至在35°C -60°C，用 lmol/1的鹽酸和lmol/1的氫氧化鈉調(diào)溶液pH到3-6,15轉(zhuǎn)-180轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，加入 1-10國際單位/克豆渣的果膠酶，保溫酶解3小時-10小時。(c)將上述酶解液溫度調(diào)至100°C保溫10分鐘，然后降溫至在35°C _60°C，lmol/ 1的鹽酸和lmol/1的氫氧化鈉調(diào)溶液pH到3-6，15轉(zhuǎn)-180轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，加入1-20國際單位/克豆渣的纖維素酶，保溫酶解8小時-16小時。(d)將上述酶解液溫度調(diào)至100°C保溫10分鐘，然后降溫至在35°C -65°C，lmol/ 1的鹽酸和lmol/1的氫氧化鈉調(diào)溶液pH到3-7，15轉(zhuǎn)-180轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，加入1-20國際單位/克豆渣的半纖維素酶，保溫酶解8小時小時。(e)將上述酶解液溫度調(diào)至100°C保溫10分鐘，然后降溫至在25°C _65°C。過濾后獲得非水溶性多糖和水溶性多糖溶液。在本發(fā)明的酶工程制備方法中，還包括原料的預(yù)處理步驟。一種優(yōu)選的預(yù)處理步驟包括將豆渣原料(g)與水(ml)的比例選擇在1 20-1 5之間；用lmol/1的鹽酸調(diào)溶液PH到1-5 ； 100°C滅菌20-30分鐘，后冷卻到35°C -550C0在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，還包括利用超濾技術(shù)分離濃縮水溶性多糖的步驟，具體包括(f)將得到的水溶性多糖液經(jīng)顆粒狀活性炭脫色，活性炭柱O. 6X 100cm)，活性碳酶解液=1 4-10，流速IOml/分鐘。(g)將上述脫色液進(jìn)行超濾濃縮，操作條件為膜截流分子量IO4-IO6;壓力 0. 05Mpa-0. 5Mpa ；流速 101/h-1001/h ；溫度 25°C -650C0 獲濃縮液。在本發(fā)明的酶工程制備方法中，還包括對濃縮液進(jìn)行噴霧干燥的工藝，具體包括步驟(h)針對權(quán)上述濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，工藝條件為多糖濃度50g/l-200g/l ；進(jìn)料速度 0. 05ml/s-0. 5ml/s ；進(jìn)風(fēng)溫度 110°C -2000C0當(dāng)使用酸性蛋白酶時，可用酸酸化溶液。其中，采用的酸沒有特別限制，可以是鹽酸，硫酸等無機酸或乙酸等有機酸，較佳地是鹽酸，其濃度通常2-8N。通常將pH調(diào)節(jié)為2-4， 較佳地pH 2. 5-3. 5即可。
當(dāng)需要中和酸或調(diào)節(jié)PH時，可使用堿。其中，采用的堿沒有特別限制，可以是氫氧化鈉，氫氧化鉀、碳酸鈉等無機堿，也可使用常規(guī)的有機堿，較佳地是氫氧化鈉，其濃度通常 2-8N。使用果膠酶、纖維素酶或半纖維素酶時，通?？捎脡A將酸性溶液的pH調(diào)節(jié)至4-8，較佳地pH 5-6。豆類多糖的應(yīng)用本發(fā)明的非水溶性豆類多糖可用作腫瘤細(xì)胞的生長抑制劑，抑制腫瘤細(xì)胞的生長。因此，可作為藥物活性成分用于藥物組合物，例如抑制腫瘤細(xì)胞生長的藥物組合物。本發(fā)明的水溶性豆類多糖可作為添加劑用于食品或保健品。在本發(fā)明的藥物組合物、食品組合物或保健品組合物中，可以添加各種常規(guī)的載體、賦形劑、稀釋劑、添加劑、香料、防腐劑等物質(zhì)，只要它們不干擾本發(fā)明豆類多糖的功能。本發(fā)明的主要優(yōu)點在于(a)本發(fā)明采用酶解法，由于具有特異性，可選擇性地酶解切斷特定鏈，酶解過程可控，從而得到高級的大豆多聚糖，而且反應(yīng)條件溫和，沒有強酸強堿，減少了環(huán)境污染，可實現(xiàn)清潔生產(chǎn)。其酶解多糖純度高，安全性好，特別適合于醫(yī)藥、食品、化妝品領(lǐng)域中的運用。(b)本發(fā)明制備的水溶性豆類多糖具有獨特的清新風(fēng)味。(c)本發(fā)明制備的非水溶性豆類多糖具有抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除外另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計算。實施例1
從大豆渣中制取水溶性和非水溶性多糖100克干大豆渣，加入500克去離子水，lmol/1鹽酸調(diào)pH到2. 5，升溫到100°C保持45分鐘。向上述溶液中加入3個國際單位/克豆渣的酸性蛋白酶，60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，45°C 保溫酶解4小時。將上述酶解液溫度調(diào)至100°C保溫10分鐘，然后降溫至在55°C，lmol/1的鹽酸和 lmol/1的氫氧化鈉調(diào)溶液pH到4. 5，60轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，加入8個國際單位/克豆渣的果膠酶，保溫酶解8小時。將上述酶解液溫度調(diào)至100°C保溫10分鐘，然后降溫至在50°C，lmol/1的鹽酸和 lmol/1的氫氧化鈉調(diào)溶液pH到5，80轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，加入10個國際單位/克豆渣的纖維素酶，保溫酶解8小時。將上述酶解液溫度調(diào)至100°C保溫10分鐘，然后降溫至在60°C，lmol/1的鹽酸和 lmol/1的氫氧化鈉調(diào)溶液pH到5. 5，100轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，加入6個國際單位/克豆渣的半纖維素酶，保溫酶解8小時。將上述酶解液溫度調(diào)至100°C保溫10分鐘，然后降溫至在25°C _65°C。過濾后獲得非水溶性多糖70克和水溶性多糖溶液350毫升。將水溶性多糖液經(jīng)顆粒狀活性炭脫色，活性炭柱O. 6 X 100cm)，活性碳70克，，流
7速IOml/分鐘，得到脫色多糖溶液290毫升。將上述脫色液進(jìn)行超濾濃縮，操作條件為膜截流分子量IO4 ；壓力0. 2Mpa ；流速 501/h ；溫度50°C ；獲濃縮液105毫升。針對上述濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，工藝條件為多糖濃度100g/l ；進(jìn)料速度0. 2ml/s ； 進(jìn)風(fēng)溫度180°C。制得粉末狀多糖20. 5克。水溶性豆類多糖的測定成分測定準(zhǔn)確稱取制備的水溶性大豆多糖純品5. Omg加入200 μ 1濃硫酸靜置，添加800 μ 1 的蒸餾水，100°c恒溫水解2. 5h,冷卻后定容至anl，水解液以固體BaCO3中和，4000r/min離心IOmin除去雜質(zhì)，將上清液稀釋10倍并過濾后進(jìn)行檢測。檢測條件色譜儀為WaterS486 HPLC色譜儀；色譜柱為PA20糖柱G μ m， 4. 6X 250mm)檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器；流動相為lOmmol/L NaOH溶液；工作參數(shù)常溫、流速0. 4ml/min，樣品濃度lOyg/ml，進(jìn)樣量10 μ 1，進(jìn)樣間隔IOmin0將檢測結(jié)果與各種單糖(包括半乳糖、鼠李糖、巖藻糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖及糖醛酸)標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時間進(jìn)行比較，表明本發(fā)明的水溶性豆類多糖的單糖組成包括 半乳糖、鼠李糖、巖藻糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖及糖醛酸(見圖1)。分子量測定取如上制備的水溶性大豆多糖(粉末狀)，配制成100微克/ml的水溶液，然后進(jìn)行kpharose CL-4B凝膠過濾色譜以0. ImoVlNaHCO3為洗脫劑，洗脫劑流速30ml/h，柱規(guī)格1. 6 X 100cm，每隔6分鐘取樣(每管3ml)，依次標(biāo)記管號。將檢測結(jié)果與分子量5萬、10萬、20萬、80萬、100萬道爾頓的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間進(jìn)行比較，表明本發(fā)明的水溶性豆類多糖的主要組分的分子量位于10-100道爾頓范圍內(nèi)(見圖2)。非水溶性豆類多糖的測定對非水溶性多糖組分同樣進(jìn)行了分析。結(jié)果表明其單糖組成包括半乳糖、鼠李糖、巖藻糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖及糖醛酸。此外，用常規(guī)方法測定表明，且其糖醛酸酯化度大于50%。對比例1重復(fù)實施例1，不同點在于，省略果膠酶處理步驟。結(jié)果無法獲得水溶性多糖。對比例2重復(fù)實施例1，不同點在于，省略蛋白酶處理步驟。結(jié)果雖然可獲得水溶性多糖，但是數(shù)量很少，僅2. 2克。對比例3重復(fù)實施例1，不同點在于，將省略纖維素酶處理步驟。結(jié)果獲得水溶液很粘，難以進(jìn)行后續(xù)處理，不易獲得水溶性多糖。對比例4重復(fù)實施例1，不同點在于，將省略半纖維素酶處理步驟。結(jié)果雖然可獲得水溶性多糖，但數(shù)量明顯下降(僅9克左右)。
對比例5重復(fù)實施例1，不同點在于，將纖維素酶處理步驟和果膠酶處理步驟的次序顛倒。結(jié)果雖然可獲得水溶性多糖，但是數(shù)量很少，僅約7克。實施例2水溶性多糖在酸奶飲料中的應(yīng)用首先用無菌去離子水在90°C配制10%的水溶性多糖(實施例1制備)溶液，并冷卻到室溫。然后向市售酸奶(150毫升)中加入6毫升10%的多糖溶液和44毫升的無菌去離子水，用lmol/1的檸檬酸調(diào)pH到4. 5，均質(zhì)后置冷藏室中，觀察穩(wěn)定性。結(jié)果1個月內(nèi)未見沉淀出現(xiàn)。這表明，該水溶性多糖可顯著提高乳飲料以及調(diào)味品的穩(wěn)定性。實施例3水溶性多糖在火腿腸中的應(yīng)用將水溶性大豆多糖(實施例1制備)配成5%的溶液添加到火腿配料中。對照組為卡拉膠。組別a、b和c分別了添加不同數(shù)量的水溶性多糖。結(jié)果表明，當(dāng)添加水溶性多糖時，可顯著改善持水量及彈性(應(yīng)力)。此外，隨著添加量的增加，其持水量及彈性(應(yīng)力)也同步改善(見表1)。另外，本發(fā)明的水溶性大豆多糖具有出乎意料的改善風(fēng)味的效果。添加了本發(fā)明的水溶性大豆多糖后，食品具有明顯的清新風(fēng)味。綜合改善效果以及添加數(shù)量等因素，合適的添加量是05-1.0%，此時組織質(zhì)構(gòu)好， 風(fēng)味較對照清新。表1水溶性大豆多糖對持水量、應(yīng)力和風(fēng)味*的影響(n = 6)
組別加量(g/kg)水分(％) (X均土SD)應(yīng)力(N)風(fēng)味顯著性(P)卡拉膠1075±1. 512. 54. 2<0. 05a568±2. 310. 94. 5<0. 05b775+1. 812. 74. 7<0. 01C1076±2. 513. 24. 9<0. 01*風(fēng)味質(zhì)量評定方法指標(biāo)的最高得分為5分，最低為0分，在所有的12位評定者中，分別去掉一個最高分和最低分，然后計算其平均值，根據(jù)數(shù)值的高低判定風(fēng)味指標(biāo)的好壞。實施例4非水溶性多糖抗腫瘤實驗無菌刮小鼠S180瘤塊，剪碎，用玻璃勻漿器研磨成單個細(xì)胞，生理鹽水1 3稀釋并調(diào)整細(xì)胞數(shù)，以0. 2ml注入小鼠右腋下二4小時后隨機分成11組，每組6只，分成生理鹽水對照組和環(huán)磷酰胺陽性對照組，非水溶性多糖樣品分高、中、低劑量組(組C、組b和組 a)，制成混懸液供口服。連續(xù)給藥10天，第11天處死小鼠取瘤塊，稱瘤重，計算抑制率。尾靜脈采血計白細(xì)胞數(shù)。
表2非水溶性大豆多糖對小鼠S180的抑制作用(n = 6)
權(quán)利要求
1.一種酶法制備豆類多糖的方法，其特征在于，包括步驟(a)將豆渣的水溶液用蛋白酶處理，獲得經(jīng)蛋白酶處理的第一水溶液；(b)將所述的第一水溶液用果膠酶處理，獲得經(jīng)果膠酶處理的第二水溶液；(c)將所述的第二水溶液用纖維素酶處理，獲得經(jīng)纖維素酶處理的第三水溶液；(d)將所述的第四水溶液用半纖維素酶處理，獲得經(jīng)半纖維素酶處理的第四水溶液；(e)從所述的第四水溶液中分離出豆類多糖。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(e)包括對第四水溶液進(jìn)行過濾，從而獲得水溶性多糖溶液和非水溶性的多糖。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的方法還包括步驟(f)對獲得的水溶性多糖溶液進(jìn)行脫色、濃縮從而制得濃縮液。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的方法還包括步驟(g)對所述的濃縮液進(jìn)行干燥，從而獲得水溶性多糖的干燥粉末。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(a)至(d)中用酶進(jìn)行處理的條件為 在溫度350C -650C ；pHl. 0_ρΗ8· 0下酶解2-48小時(較佳地3-24小時)。
6.一種用權(quán)利要求1所述方法制備的豆類多糖。
7.如權(quán)利要求6所述的豆類多糖，其特征在于，所述的多糖是水溶性多糖組分，分子量在20萬 100萬道爾頓，其單糖組成包括半乳糖、鼠李糖、巖藻糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖及糖醛酸。
8.如權(quán)利要求6所述的豆類多糖，其特征在于，所述的多糖是非水溶性多糖，其單糖組成包括半乳糖、鼠李糖、巖藻糖、木糖、葡萄糖、阿拉伯糖及糖醛酸，且其糖醛酸酯化度大于 50%。
9.一種權(quán)利要求7中所述的豆類多糖的用途，所述的豆類多糖是水溶性多糖，其特征在于，所述的水溶性豆類多糖被作為添加劑用于食品或保健品。
10.一種權(quán)利要求8中所述的豆類多糖的用途，所述的豆類多糖是非水溶性多糖，其特征在于，所述的非水溶性豆類多糖被用于制備抑制腫瘤細(xì)胞生長的組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種功能性聚糖的酶工程制造方法。本發(fā)明用酶法制取的豆類多糖包括水溶性多糖和非水溶性多糖，二者之間的比例為1∶4以上，水溶性多糖的分子量在20萬以上。本發(fā)明還提供了獲得多糖的膜分離方法、色譜脫色及噴霧干燥技術(shù)。本發(fā)明獲得的可溶性多糖可提高乳飲料、調(diào)味品的穩(wěn)定性，改善其風(fēng)味；也可用于肉質(zhì)品改善其質(zhì)地和口感。本發(fā)明獲得的非水溶性多糖可作為膳食纖維用于焙烤類食品，動物實驗表明其具有免疫抗腫瘤作用。
文檔編號A61K31/715GK102250260SQ201010178479
公開日2011年11月23日 申請日期2010年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月21日
發(fā)明者劉陽, 劉雪原, 李平作, 李鐵道, 江昊, 王俊, 王莉 申請人:上海易初生物工程有限公司