專利名稱：用于預(yù)防治療小腸移植慢性排斥的藥物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，涉及用于預(yù)防治療小腸移植慢性排斥的藥物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
小腸移植是嚴重腸功能障礙發(fā)展為腸衰竭的理想治療選擇，因小腸及系膜含有大 量淋巴組織，移植后排斥發(fā)生率高，直接影響小腸移植的成功率。隨著免疫抑制藥物的發(fā) 展，小腸移植急性排斥反應(yīng)得到了有效的控制，但目前國內(nèi)外尚缺乏移植后慢性排斥有效 的治療方法，制約小腸移植病人的長期存活。尋找有效的藥物，預(yù)防和治療小腸移植慢性排 斥反應(yīng)，為當(dāng)前亟待解決的難題。小腸移植慢性排斥反應(yīng)主要表現(xiàn)為移植動脈硬化，系膜 纖維化病變和炎性細胞浸潤。本發(fā)明在于發(fā)現(xiàn)一種可有效抑制小腸慢性排斥的藥物。n-3多不飽和脂肪酸是具有兩個或兩個以上雙鍵的不飽和脂肪酸，第一個雙鍵出 現(xiàn)在碳鏈甲基端的第三位，故稱之為n-3脂肪酸，也叫ω-3脂肪酸。η_3多不飽和脂肪酸主
(eicosapentaenoic acid, EPA)、二+二(docosahexaenoic acid, DHA)、二十二碳五煉酸(Docosapentaenoic acid, DPA)禾口 α-亞麻酸(linolenic acid, ALA)，主要存在于魚油、亞麻籽油、胡桃仁及其種子油、芥末籽油、大豆油、海藻類等。 n-3多不飽和脂肪酸具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂、抑制慢性炎性反應(yīng)的作用，多用于心腦血管疾 病的預(yù)防和治療，可降低動脈粥樣硬化的發(fā)生。國內(nèi)外至今未見關(guān)于n-3多不飽和脂肪酸 類物質(zhì)用于防治小腸移植慢性排斥的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供用于預(yù)防治療小腸移植慢性排斥的藥物。本發(fā)明的另一目的是提供該藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下用于預(yù)防治療小腸移植慢性排斥的藥物，該藥物含有n-3多不飽和脂肪酸類物 質(zhì)。所述的n-3多不飽和脂肪酸類物質(zhì)為二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳 五烯酸或α-亞麻酸中的一種或多種。所述的n-3多不飽和脂肪酸類物質(zhì)為魚油、亞麻籽油、胡桃仁及其種子油、芥末籽 油、大豆油或海藻類物質(zhì)，優(yōu)選魚油。本發(fā)明所述的藥物在制備預(yù)防和/或治療小腸移植慢性排斥的藥物中的應(yīng)用。魚油在制備預(yù)防和/或治療小腸移植慢性排斥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的魚油為富含n-3多不飽和脂肪酸類物質(zhì)的用魚或魚加工的下腳料 制取的油脂，對原料魚的種類和加工過程沒有特殊的要求。本發(fā)明的有益效果發(fā)明人經(jīng)過長期研究發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述藥物(即n-3多不飽和 脂肪酸類物質(zhì))特別是富含n-3多不飽和脂肪酸的魚油可有效減輕小腸移植慢性排斥血管 管腔閉塞，減少炎性細胞浸潤，降低腸系膜血管間質(zhì)纖維化即減輕小腸移植血管動脈硬化病變，具有較強的抗小腸移植慢性排斥作用。本發(fā)明為小腸移植慢性排斥的預(yù)防治療提供 了一種有效的藥物。


圖1移植腸大體觀察視圖。A為同基因組(即對照組)，B為PBS組圖2小腸常規(guī)病理HE染色結(jié)果圖。A為同基因組(即對照組)，B為PBS組圖3小腸常規(guī)病理彈力纖維染色結(jié)果圖A為同基因組(即對照組)，B為PBS組圖4小腸腸系膜纖維化圖。A為同基因組(即對照組)，B為PBS組
具體實施例方式實施例1材料與方法(1)實驗動物雄性Fisher344(F344)大鼠和Lewis大鼠購自北京維通利華公司，體重200-300 克；飼養(yǎng)于南京軍區(qū)南京總醫(yī)院比較醫(yī)學(xué)科動物中心，所有大鼠單籠喂養(yǎng)，12小時明暗交 替，食物和水源充足。(2)動物分組同基因移植組供、受體均為Lewis大鼠，作為對照；異基因移植組供體為F344大 鼠，受體為Lewis大鼠。異基因移植組隨機分為PBS組和魚油組PBS組術(shù)后每天用磷酸鹽 緩沖溶液(PBS，0. 1Μ，ρΗ7. 4)灌胃；魚油組術(shù)后每天用魚油(Sigma公司生產(chǎn))灌胃，劑量均 為0. 6ml/Kg體重。(3)大鼠原位全小腸移植慢性排斥模型的建立供體手術(shù)供體大鼠麻醉、消毒，腹部十字大切口入腹。游離腎下腹主動脈，結(jié)扎其 遠端及左腎動脈；結(jié)扎并切斷腸系膜上動脈胰十二指腸段分支及結(jié)腸各血管分支；結(jié)扎離 斷腸系膜上靜脈分支及脾靜脈。于Treitz韌帶下Icm及回腸末端分別剪斷腸管，10-20ml 4°C含慶大霉素(3200U/ml)的林格氏液灌洗腸管。阻斷腸系膜上動脈上方腹主動脈，4°C肝 素化(25U/ml)的林格氏液灌注血管至小腸呈乳白色。離斷腸系膜上動脈根部及脾靜脈上 方門靜脈，取下全小腸放入肝素化的林格氏液內(nèi)，保存于4°C。受體手術(shù)大鼠麻醉、消毒后，腹部正中切口。打開Treitz韌帶及胃結(jié)腸韌帶，充 分暴露整個后腹膜；鈍性分離腎下約2cm處腹主動脈和下腔靜脈，結(jié)扎兩血管細小分支，上 下阻斷腹主動脈和下腔靜脈血流；根據(jù)供體腸系膜上動脈上腹主動脈補片和門靜脈大小， 用顯微外科手術(shù)剪分別在腹主動脈和下腔靜脈前壁上剪去一片血管壁，使對應(yīng)血管口徑大 小相當(dāng)，用肝素化的林格氏液沖洗該段血管后，供、受體動靜脈血管行端側(cè)吻合。切除受體 全小腸，移植腸與受體腸殘端行端端吻合。溫鹽水沖洗腹腔，逐層關(guān)腹。小腸移植慢性排斥誘導(dǎo)方案異基因移植組術(shù)后0-13天、第20天及第27天肌肉
，C為魚油組。 ，C為魚油組。
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，C為魚油組。 ，C為魚油組。注射Π(506注射液(愛爾蘭Astellas公司生產(chǎn))，劑量為每天1. Omg/Kg體重。(4)取材及組織學(xué)檢查術(shù)后第190天，麻醉大鼠，消毒后腹部正中切口，充分顯露移植腸，觀察移植腸大 體改變情況。結(jié)扎離斷腸系膜動、靜脈血管，切取移植腸及系膜組織，心臟放血法處死大鼠。 取移植腸及系膜組織，10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色和彈力纖維染 色觀察腸系膜血管動脈硬化、纖維化及炎性細胞浸潤情況。結(jié)果(1)魚油減輕小腸移植腸系膜纖維化病變小腸移植術(shù)后190天，魚油組移植腸腸系膜組織纖維化水平明顯降低。如圖1所 示PBS組移植腸系膜呈嚴重的纖維化病變，系膜血管難以分辨；魚油組腸系膜僅見少量纖 維化改變，腸系膜血管清晰可見。(2)魚油降低小腸移植系膜血管結(jié)構(gòu)損傷與PBS組相比，魚油顯著減輕小腸移植腸系膜血管壁增生變厚，降低血管間質(zhì)纖 維化水平，維護內(nèi)彈力膜結(jié)構(gòu)的完整性，維護腸系膜血管結(jié)構(gòu)(圖2、圖3)。(3)魚油減輕腸系膜纖維化病變及淋巴細胞浸潤如圖4所示PBS組腸系膜可見明顯的纖維化及大量的炎性浸潤，魚油組系膜纖維 化水平明顯降低，炎性細胞減少。可見長期魚油干預(yù)可顯著降低移植腸系膜的纖維化，減少 炎性細胞浸潤(圖4)。結(jié)論術(shù)后長期應(yīng)用魚油對小腸移植慢性排斥進行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)魚油可有效減輕小腸移植 慢性排斥血管管腔閉塞，減少炎性細胞浸潤，降低腸系膜血管間質(zhì)纖維化，說明魚油具有較 強的抗小腸移植慢性排斥作用，是臨床預(yù)防小腸移植后慢性失功一種新的有效方法。
權(quán)利要求
用于預(yù)防治療小腸移植慢性排斥的藥物，其特征在于該藥物含有n 3多不飽和脂肪酸類物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于所述的n-3多不飽和脂肪酸類物質(zhì)為二十 碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸或α “亞麻酸中的一種或多種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于所述的n-3多不飽和脂肪酸類物質(zhì)為魚油、 亞麻籽油、胡桃仁及其種子油、芥末籽油、大豆油或海藻類物質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物，其特征在于所述的n-3多不飽和脂肪酸類物質(zhì)為魚油。
5.權(quán)利要求1所述的藥物在制備預(yù)防和/或治療小腸移植慢性排斥的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的藥物為魚油。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，公開了用于預(yù)防治療小腸移植慢性排斥的藥物及其應(yīng)用。該藥物含有n-3多不飽和脂肪酸類物質(zhì)，優(yōu)選魚油。發(fā)明人經(jīng)過長期研究發(fā)現(xiàn)n-3多不飽和脂肪酸類物質(zhì)特別是富含n-3多不飽和脂肪酸的魚油可有效減輕小腸移植慢性排斥血管管腔閉塞，減少炎性細胞浸潤，降低腸系膜血管間質(zhì)纖維化即減輕小腸移植血管動脈硬化病變，具有較強的抗小腸移植慢性排斥作用。本發(fā)明為小腸移植慢性排斥預(yù)防治療提供了一種有效的藥物。
文檔編號A61K35/60GK101926827SQ20101025039
公開日2010年12月29日 申請日期2010年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月11日
發(fā)明者李秋榮, 王晨陽, 黎介壽 申請人:中國人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院