專利名稱：紅曲在制備防治腹主動脈瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及紅曲在制備防治腹主動脈瘤藥物中的應(yīng)用。 背景技術(shù)：
腹主動脈瘤(abdominal aortic aneurysms，AAA)是種常見的致命性退行性血 管病變，由于其潛在破裂危險，自然病程中五年存活率僅19.6%。根據(jù)流行病學調(diào)查資 料顯示，在60歲以上男性和女性人群中，無癥狀性腹主動脈瘤發(fā)病率分別為4% -8%和 0. 5% -1. 5%，主要危險因素包括年齡、男性、吸煙史和腹主動脈瘤家族史，而控制/未控制 的高血壓、高膽固醇血癥、冠狀動脈疾病、外周阻塞性血管病都能促進腹主動脈瘤病程的進 展。腹主動脈瘤在歐美人群的心血管性死因中居第13位，在中國人群中發(fā)病率呈逐漸上升 趨勢，其病因?qū)W和病理學機制與歐美國家人群相似。在美國，因腹主動脈瘤破裂和外科術(shù)后并發(fā)癥而致死的患者每年達15000例，某 些報道可達30000例，其死亡率相當于前列腺和乳腺腫瘤。由于該病有很高的致死率和致 殘率，無疑增加社會經(jīng)濟和醫(yī)療負擔。根據(jù)美國心臟病學會/美國心臟學會(ACC/AHA)臨 床治療指南，腹主動脈瘤直徑在5. 0-5. 5cm以上可予外科手術(shù)或血管內(nèi)介入性修復(fù)。大部 分腹主動脈瘤患者是在對其他部位進行影像學檢查時偶爾發(fā)現(xiàn)的，90%的腹主動脈瘤在發(fā) 現(xiàn)時直徑小于5. Ocm0臨床治療無癥狀性腹主動脈瘤的“瓶頸”在于缺乏早期特異性的生物 學檢測指標。盡管血管超聲或磁共振(MRI)等檢測可以早期發(fā)現(xiàn)無癥狀性腹主動脈瘤，但 迄今為止尚未證明有藥物能防治腹主動脈瘤的發(fā)生。腹主動脈瘤是種慢性大動脈退行性病變，負荷較重的血管壁發(fā)生破壞性重構(gòu)。其 主要病理過程包括①血管壁外層慢性炎癥浸潤，伴有大量新生血管形成和促炎因子表達； ②局部大量激活的基質(zhì)降解蛋白酶；③細胞外基質(zhì)蛋白(尤其是彈性纖維和膠原纖維)的 進行性破壞導致血管壁薄弱擴張；④血管中層平滑肌細胞過度丟失影響結(jié)締組織修復(fù)過 程。人群中腹主動脈瘤好發(fā)于腎下動脈，主要與該部位血管結(jié)構(gòu)和血流動力學特點有關(guān)，但 是病變早期血管中層彈性纖維和外層結(jié)締組織中炎癥細胞浸潤起著非常關(guān)鍵作用?；|(zhì)降 解同時釋放某些化學趨化因子，驅(qū)使炎癥細胞游走到血管壁，出現(xiàn)炎性“爆發(fā)”。國際上研究人群腹主動脈瘤最常用的動物模型是小鼠，利用其能敲除或攜帶特異 性基因等優(yōu)勢，廣泛用于各種遺傳學研究。小鼠腹主動脈瘤模型主要通過基因敲除或/和 化學誘導法，包括胰彈性酶和氯化鈣。將胰彈性酶或氯化鈣局部應(yīng)用于腎下動脈，2周后有 顯著的動脈擴張，其作用機制與誘導劑直接降解和破壞動脈中層彈力蛋白有關(guān)。血管緊張 素II (Angiotensin II，AngII)能誘導高脂血癥小鼠(ApoE-/-或LDLr-/-)產(chǎn)生腹主動脈 瘤，盡管其發(fā)生部位在腎上動脈，與人群中腹主動脈瘤的發(fā)生部位不一致(腎下動脈)，但 是其病理形成過程能模擬人體腹主動脈瘤的病理機制。主要表現(xiàn)在早期動脈擴張，繼而血 管中層彈性纖維斷裂，最終有血管極度擴張和附壁血栓形成。因而，AngII誘導的小鼠腹主 動脈瘤模型是研究人群腹主動脈瘤藥理學和藥效學機制的最好的模式生物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明以紅曲作為一種中藥和食品添加劑，研究其在制備防治腹主動脈瘤藥物中 的應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是紅曲在制備防治腹主動脈瘤藥物中的應(yīng)用。紅曲是以秈米為原料，采用現(xiàn)代生物工程技術(shù)分離出優(yōu)質(zhì)的紅曲霉菌 (monascuspurpureus)經(jīng)液體深層發(fā)酵精致而成，是一種純天然、安全性高、有益于人體健 康的食品添加劑。現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于食品(肉制品、果汁、色酒、果醬、飲料、糖果、糕點、醬油、 保健醋等)、藥品(藥品著色劑、功能性保健品)、化妝品等領(lǐng)域。所述藥物可由紅曲添加常規(guī)藥用輔料制成片劑、顆粒劑、膠囊劑、注射劑或口服液 劑等常規(guī)劑型。根據(jù)實驗小鼠有效劑量推算，所述紅曲在制備防治腹主動脈瘤藥物中的有效劑量 約為1.0 1.2g/天。選取12 20周齡的ApoE基因敲除的雄性小鼠作為實驗對象，隨機分成兩組，均 提供正常飲食，每周測量體重。其中，一組小鼠在潔凈飲用水中添加紅曲粉劑(4mg/d)，并采 用灌胃法給予；喂養(yǎng)1周后，在其皮下植入ALZET滲透泵(ALZET 2004，美國健康醫(yī)療儀器 國際公司)，持續(xù)4周皮下給予AngII (lOOOng/kg/min，美國Bachem公司)。另一組小鼠，以 灌胃法給予等量不含藥物的飲用水，作為陰性對照組。應(yīng)用小動物高頻超聲成像系統(tǒng)(VevO770，加拿大VisualSonics公司)檢測小鼠腎 上動脈、左腎動脈的最大管腔內(nèi)徑和橫截面積，以實驗前后腎上動脈最大管腔內(nèi)徑增加大 于50%為診斷腹主動脈瘤的標準。觀察小鼠腹主動脈瘤的發(fā)生率和發(fā)生破裂的并發(fā)癥，定 量評價動脈粥樣硬化斑塊面積，利用膽固醇氧化酶-肌酐酶(HMMPS)法檢測血清總膽固醇 濃度，直接法檢測血清低密度脂蛋白膽固醇濃度。利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒分 別檢測血清中巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)、血清單核細胞趨化蛋白-I(MCP-I)濃度，以及 腎上動脈組織裂解液中基質(zhì)金屬酶MMP-9和AP-I轉(zhuǎn)錄因子的濃度。結(jié)論(1) 口服紅曲不僅能減慢腹主動脈瘤內(nèi)徑的擴張速度，而且能延緩腹主動脈瘤橫 截面積的擴大。(2) 口服紅曲能減少主動脈弓部動脈粥樣硬化斑塊面積，而且縮小主動脈根部動 脈粥樣硬化斑塊面積。(3) 口服紅曲具有調(diào)節(jié)血脂的功效，使血清低密度脂蛋白膽固醇含量降低。本發(fā)明有益效果主要體現(xiàn)在提供了紅曲在制備防治腹主動脈瘤藥物中的新應(yīng) 用。紅曲，既是一種中藥又是食品添加劑，能有效預(yù)防腹主動脈瘤的發(fā)生，延緩腹主動脈瘤 的進展，同時又具有抗動脈粥樣硬化和降血脂的功效，是一種應(yīng)用前景廣闊的治療藥物。


圖1為紅曲降低腎上動脈最大管腔內(nèi)徑和橫截面積；其中，A為腎上動脈最大管腔 內(nèi)徑，B為腎上動脈最大管腔橫截面積。圖2為紅曲減少動脈粥樣硬化斑塊面積；其中，A為主動脈根部動脈粥樣硬化斑塊面積，B為主動脈弓部動脈粥樣硬化斑塊面積占整個主動脈弓部面積的百分比。圖3為紅曲調(diào)節(jié)血脂的作用；其中，A為血清低密度脂蛋白膽固醇濃度，B為血清 總膽固醇濃度。圖4為紅曲上調(diào)血清巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)含量，不影響血清單核細胞趨 化蛋白-I(MCP-I)含量；其中，A為血清單核細胞趨化蛋白-I(MCP-I)濃度，B為血清巨噬 細胞遷移抑制因子(MIF)濃度。圖5為紅曲不影響動脈瘤組織中基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9和淀粉樣蛋白AP-I轉(zhuǎn) 錄因子的含量；其中，A為腎上動脈組織裂解液中MMP-9濃度，B為腎上動脈組織裂解液中 AP-I轉(zhuǎn)錄因子的濃度。圖6為紅曲不影響體重。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于 此實施例1 實驗前和實驗終點時應(yīng)用小動物高頻超聲成像系統(tǒng)(VeVO770，加拿大 VisualSonics公司)檢測小鼠腎上動脈、左腎動脈的最大管腔內(nèi)徑和橫截面積。其中，實驗 過程中左腎動脈的管腔內(nèi)徑和橫截面積在應(yīng)用AngII前后沒有顯著變化(小鼠腹主動脈瘤 的發(fā)生部位局限在腎上動脈)，可作為參照，以實驗前后腎上動脈最大管腔內(nèi)徑增加值大于 50%為診斷腹主動脈瘤的標準。選取12 20周齡的ApoE基因敲除(ApoE-/-)的雄性小鼠38只(北京維通利華 實驗動物技術(shù)有限公司)為實驗對象，并分成兩組，每組19只，均提供正常飲食，每周稱取 體重。其中一組，在潔凈飲用水中添加紅曲粉(浙江三禾生物工程有限公司)(4mg/d)并采 用灌胃法給予，喂養(yǎng)1周后在其皮下植入ALZET滲透泵(ALZET 2004，美國健康醫(yī)療儀器國 際公司)，持續(xù)性給予AngII (lOOOng/kg/min，美國Bachem公司)4周。另一組小鼠，采用灌 胃法給予等量不含藥物的飲用水作為陰性對照組，皮下給予AngII方法同前。將給藥4周后的小鼠經(jīng)腹腔注射lmL4%水合氯醛麻醉后，打開胸腔，從左心室抽 取動脈血約lmL，4°C條件下以4000轉(zhuǎn)/分速度離心5min，收集上層血清并在-80°C條件下 保存；打開腹腔，分離出整個主動脈主干，分段留取主動脈根部、主動脈弓部和腹主動脈。將 主動脈根部包括心臟長軸中上1/3段，和腹主動脈(從腸系膜上動脈分支到右腎動脈分支 間)分別包埋于OCT冷凍切片包埋劑，-80°C保存；將主動脈弓部浸泡于含10%福爾馬林的 溶液中，組織固定。將實驗過程中死亡的小鼠尸體進行解剖，查明死因，統(tǒng)計腹主動脈瘤和 胸主動脈瘤破裂的發(fā)生率。動脈粥樣硬化的定量檢測應(yīng)用en face技術(shù)對主動脈弓部粥樣硬化斑塊進行定 量評估，計算主動脈弓部內(nèi)膜層中粥樣硬化病變面積所占比例。對主動脈根部組織(從主 動脈竇到升主動脈)進行連續(xù)切片油紅染色，定量評價動脈粥樣硬化病變面積。腹主動脈瘤的定量檢測觀察小鼠腹主動脈瘤的發(fā)生率和發(fā)生破裂的并發(fā)癥。根 據(jù)活體超聲影像學探測結(jié)果，比較兩組間小鼠腎上動脈最大管腔內(nèi)徑和橫截面積。在冰上 將腹主動脈剪成小碎片，加0.5 LOmL預(yù)冷的組織細胞裂解液[50mM三羥甲基氨基甲烷-HCl (Tris-HCl，pH 7. 4)，0. 1 %聚乙二醇辛基苯基醚(Triton-X 100), 150mM NaCl,, 0.5%脫氧膽酸鈉(sodium deoxycholate)，0. 1 %十二烷基硫酸鈉(SDS)，2mM氟化鈉 (sodium fluoride)，ImM乙二胺四乙酸(EDTA)，用前加入2mM苯甲基硫酰氟(PMSF)]。采用玻璃勻漿器進行勻漿，直至充分裂解。4°C下12000g離心3 5min，取上清 液以BCA蛋白定量試劑(美國Pierce公司)進行組織蛋白定量測定。以酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)試劑盒(美國R&D公司)定量檢測腎上動脈組織裂解液中的MMP-9和AP-I轉(zhuǎn)錄因 子的含量。血清樣本檢測利用膽固醇氧化酶-HMMPS法檢測血清總膽固醇水平(日本W(wǎng)ako Chemical公司)；利用直接法檢測血清低密度脂蛋白膽固醇水平(LDL-C)；利用ELISA試劑 盒檢測血清中單核細胞趨化蛋白-I(MCP-I)和巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)的濃度。實驗 結(jié)果見圖1 圖6。實驗結(jié)論(1) 口服紅曲不僅能減慢腹主動脈瘤內(nèi)徑的擴張(從2. 3mm降到1. 7mm)，而且能 延緩腹主動脈瘤橫截面積的擴大(從3. 3mm2減到1. 9mm2)。(2) 口服紅曲能使主動脈弓部動脈粥樣硬化斑塊面積比例減小36% (動脈粥樣斑 塊面積占主動脈弓部總面積的比例從36%下降到23% )，主動脈根部動脈粥樣硬化面積縮 小47% (動脈粥樣斑塊面積從0. 38mm2縮小到0. 20mm2)。(3)紅曲還具有調(diào)節(jié)血脂的功效，能降低血清低密度脂蛋白膽固醇17% (從 329mg/dl 降低到 274mg/dl)。
權(quán)利要求
紅曲在制備防治腹主動脈瘤的藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物制成下述之一的劑型①片劑、②顆 粒劑、③膠囊劑、④注射劑、⑤口服液劑。
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述紅曲有效劑量為1.0 1.2g/天。
全文摘要
本發(fā)明提供了紅曲在制備防治腹主動脈瘤藥物中的新應(yīng)用。實驗發(fā)現(xiàn)，口服紅曲不僅能減慢腹主動脈瘤內(nèi)徑的擴張速度，延緩腹主動脈瘤橫截面積的擴大，還能減小主動脈弓部動脈粥樣硬化斑塊面積，縮小主動脈根部動脈粥樣硬化面積，同時紅曲還具有調(diào)節(jié)血脂的功效，能降低血清低密度脂蛋白膽固醇水平。
文檔編號A61P9/00GK101919882SQ201010256948
公開日2010年12月22日 申請日期2010年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月19日
發(fā)明者王建安, 王迤凡, 謝小潔 申請人:浙江大學