專利名稱：一種褐藻多酚的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及海洋生物領(lǐng)域，特別涉及一種從褐藻類生物中提取褐藻多酚的方法。
背景技術(shù)：
褐藻多酚廣泛存在于海洋植物褐藻中，它以苯三酚為結(jié)構(gòu)單元，主要分為寡聚間苯三酚和Eckol類多酚。研究證明褐藻多酚具有抗心血管疾病、抗菌、抗病毒、溶藻、抗氧化、抗糖尿病綜合征、保肝以及抑制賴氨酸酶透明質(zhì)酸酶等廣泛的生物活性。褐藻多酚具有不同于陸地植物多酚的結(jié)構(gòu)及活性，是一類獨(dú)特的天然物質(zhì)。目前有報(bào)道的關(guān)于褐藻多酚的提取方法主要采用乙醇溶液室溫避光提取得粗提液，然后經(jīng)有機(jī)溶劑洗滌、減壓蒸餾等步驟得到褐藻多酚精提物。但是這些方法得到的產(chǎn)品具有咖啡因、生物堿含量較高，產(chǎn)品安全性低、耗時(shí)長(zhǎng)等缺點(diǎn)，因此不利于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的是提供一種褐藻多酚的提取方法，與文獻(xiàn)中方法相比，具有純度高、收率高、生產(chǎn)成本低，有利于工業(yè)化生產(chǎn)的特點(diǎn)。本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案用含有褐藻多酚的生物材料作為原材料，進(jìn)行以下步驟的操作原料預(yù)處理稱取一定量新鮮的含有褐藻多酚的生物原材料，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，用自來水反復(fù)沖洗干凈，烘干、進(jìn)行破碎；浸取將破碎后的生物材料按濕重加入0. 002 0. 02%的抗氧化劑，與含有機(jī)溶劑50 90%的水溶液按1 2 9的比例混合，充分?jǐn)嚢韬笾糜诔暡ㄖ刑幚? 6min， 放入40 80°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取1 6小時(shí)，分離得上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；冷卻洗滌將浸取后溶液置于0 4°C冷柜中靜止2 8小時(shí)，分離得上清液，用體積比為1 1 4有機(jī)溶劑水溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；吸附將上述步驟得到的溶液用大孔樹脂進(jìn)行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；洗脫用含50 85%有機(jī)溶劑的洗脫劑進(jìn)行洗脫解吸，并收集目標(biāo)產(chǎn)物；冷凍干燥目標(biāo)產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥后得到成品褐藻多酚。所述含有褐藻多酚的生物材料為生活于海洋或淡水中，含有褐色色素的絲狀或絲原植體的藻類。所述含有褐藻多酚的生物材料為馬尾藻屬褐藻或海帶屬植物。所述浸取步驟中加入的抗氧化劑為叔丁基對(duì)羥基茴香醚(BHA) ,2,6- 二叔丁基化羥基甲苯(BHT)、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉中的一種或幾種。所述浸取步驟中用到的有機(jī)溶劑為丙酮、甲醇、甲苯、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚中的一種或幾種。
所述浸取步驟中上清液的分離方法為虹吸、離心、過濾中的一種或幾種。所述冷卻洗滌步驟中用到的有機(jī)溶劑為丙酮、甲醇、甲苯、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、 石油醚中的一種或幾種。所述洗脫步驟中的有機(jī)溶劑為乙醇、丙酮、甲醇、甲苯、乙酸乙酯、氯仿中的一種或幾種。所述最終獲得的褐藻多酚成品為固態(tài)或液態(tài)。所述最終獲得的褐藻多酚成品為固態(tài)。浸取過程中用到的溶液中還經(jīng)常加入微量的NaCl，(NH4)2SO4,KCl等鹽類用來加強(qiáng)浸取的效果；在第一次將上清液浸取完畢后，濾渣再重復(fù)浸提一次，合并兩次提取液減壓旋蒸除去有機(jī)溶劑。本發(fā)明與現(xiàn)有方法相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明首先采用有機(jī)溶劑粗提取多酚，產(chǎn)品純度、提取率相對(duì)水提取法均有提高，產(chǎn)品的氧化程度相對(duì)水提取法較低；(2)本發(fā)明中浸取步驟加入了一定量的抗氧化劑，有效地防止了褐藻多酚的氧化；C3)粗提之后采用大孔樹脂進(jìn)行吸附分離，這種方法簡(jiǎn)單，操作方便，能耗較低，操作條件溫和，避免了有效成分失活，產(chǎn)品收率和純度高利于工業(yè)化、規(guī)?；a(chǎn)。綜上所述，本發(fā)明具有收率高、生產(chǎn)成本低，利于工業(yè)化生產(chǎn)的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)行說明。實(shí)施例1通過以下步驟進(jìn)行褐藻多酚的提取第一步稱取IOOOg新鮮海帶，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，然后用自來水反復(fù)沖洗干凈，在105°C烘箱內(nèi)烘至恒重，得到固形物約為100g，用組織搗碎勻漿機(jī)破碎；第二步將破碎后的生物原材料按濕重加入0. 002%叔丁基對(duì)羥基茴香醚(BHA)， 與含乙醇70%的水溶液按1 2的比例混合，充分?jǐn)嚢韬笾糜诔暡ㄖ刑幚?3min，放入 60°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取1小時(shí)，分離上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；第三步置于4°C冷柜中靜止8小時(shí)，分離得上清液，用體積比為1 1氯仿水溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；第四步用大孔樹脂進(jìn)行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；第五步用含85%乙醇的洗脫劑進(jìn)行洗脫解吸，并收集目標(biāo)產(chǎn)物；第六步目標(biāo)產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥后得到0. 03g褐藻多酚固體，產(chǎn)率為0. 3%0。實(shí)施例2通過以下步驟進(jìn)行褐藻多酚的提取第一步稱取IOOOg新鮮海黍子，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，然后用自來水反復(fù)沖洗干凈，在105°C烘箱內(nèi)烘至恒重，得到固形物約為50g，用組織搗碎勻漿機(jī)破碎；第二步將破碎后的生物原材料的按濕重加入0.02%的2，6-二叔丁基化羥基甲苯(BHT)，與含丙酮80%的水溶液按1 4的比例混合，充分?jǐn)嚢韬笾糜诔暡ㄖ刑幚?br> 46min，放入40°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取2小時(shí)，分離上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；第三步置于2°C冷柜中靜止6小時(shí)，分離得上清液，用體積比為1 2石油醚水溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；第四步用大孔樹脂進(jìn)行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；第五步用含85%丙酮的洗脫劑進(jìn)行洗脫解吸，并收集目標(biāo)產(chǎn)物；第六目標(biāo)產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥后得到0. 15g褐藻多酚固體，產(chǎn)率為3%。。實(shí)施例3通過以下步驟進(jìn)行褐藻多酚的提取第一步稱取IOOOg新鮮鼠尾藻，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，然后用自來水反復(fù)沖洗干凈，在105°C烘箱內(nèi)烘至恒重，得到固形物約為50g，用組織搗碎勻漿機(jī)破碎；第二步將破碎后的生物原材料按濕重加入0. 004%的2，6- 二叔丁基化羥基甲苯 (BHT)和0. 004%的亞硫酸鈉，與含甲醇50 %、甲苯25 %的水溶液按1 3的比例混合，充分?jǐn)嚢韬笾糜诔暡ㄖ刑幚砑?xì)in，放入50°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取3小時(shí)，分離上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；第三步置于；TC冷柜中靜止6小時(shí)，分離得上清液，用體積比為1 1 3的氯仿石油醚水的溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；第四步用大孔樹脂進(jìn)行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；第五步用含體積比為2 1 2的甲醇乙酸乙酯水的溶液洗脫解吸，并收集目標(biāo)產(chǎn)物；第六步目標(biāo)產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥后得到0. 125g褐藻多酚固體，產(chǎn)率為2. 5%。。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種褐藻多酚的提取方法，其特征在于用含有褐藻多酚的生物作為原材料，進(jìn)行以下步驟的操作原料預(yù)處理稱取一定量新鮮的含有褐藻多酚的生物原材料，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，用自來水反復(fù)沖洗干凈，烘干、進(jìn)行破碎；浸取將破碎后的生物材料按濕重加入0. 002 0. 02%的抗氧化劑，與含有機(jī)溶劑 50 90%的水溶液按1 2 9的比例混合，充分?jǐn)嚢韬笾糜诔暡ㄖ刑幚? 6min，放入40 80°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取1 6小時(shí)，分離得上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；冷卻洗滌將浸取后溶液置于0 4°C冷柜中靜止2 8小時(shí)，分離得上清液，用體積比為1 1 4有機(jī)溶劑水溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑；吸附將上述步驟得到的溶液用大孔樹脂進(jìn)行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；洗脫用含50 85%有機(jī)溶劑的洗脫劑進(jìn)行洗脫解吸，并收集目標(biāo)產(chǎn)物；冷凍干燥目標(biāo)產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥后得到成品褐藻多酚。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于所述含有褐藻多酚的生物材料為生活于海洋或淡水中，含有褐色色素的絲狀或絲原植體的藻類。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于所述含有褐藻多酚的生物材料為馬尾藻屬褐藻或海帶屬植物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于所述浸取步驟中加入的抗氧化劑為叔丁基對(duì)羥基茴香醚(BHA)、2，6_ 二叔丁基化羥基甲苯(BHT)、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉中的一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于所述浸取步驟中用到的有機(jī)溶劑為丙酮、甲醇、甲苯、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚中的一種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于所述浸取步驟中上清液的分離方法為虹吸、離心、過濾中的一種或幾種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于所述冷卻洗滌步驟中用到的有機(jī)溶劑為丙酮、甲醇、甲苯、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚中的一種或幾種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于所述洗脫步驟中的有機(jī)溶劑為乙醇、丙酮、甲醇、甲苯、乙酸乙酯、氯仿中的一種或幾種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于所述最終獲得的褐藻多酚成品為固態(tài)或液態(tài)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于所述最終獲得的褐藻多酚成品為固態(tài)。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種從生物體中提取褐藻多酚的方法，采用以下步驟對(duì)褐藻多酚進(jìn)行提取原料預(yù)處理、浸取、冷卻洗滌、樹脂吸附、洗脫和冷凍干燥，借助于本發(fā)明提供的技術(shù)方案，可以達(dá)到收率高、成本低，便于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P1/16GK102397300SQ20101027790
公開日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2010年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月10日
發(fā)明者譚國(guó)民, 鄭春陽 申請(qǐng)人:天津強(qiáng)微特生物科技有限公司