專利名稱：一種刺梨黃酮的電離輻射防護新用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及刺梨黃酮在電離輻射防護中的應用，屬于醫(yī)藥技術領域。
技術背景
自1942年Hale報道輻射防護劑以來，國內(nèi)外已開展一系列抗輻射藥物的研究，我 國科技工作者亦做了大量的工作。目前，國際上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多對輻射具有防治作用的化 學藥物和生物制劑。但某些化學藥物在防治輻射的同時，也對機體產(chǎn)生了一系列毒副作用。 由美國Walter Reed陸軍研究所開發(fā)的氨磷汀(商品名amifostine)是目前唯一的一個 經(jīng)美國FDA認可的輻射防護藥物，被用于緩解頭頸癌癥病人輻射治療過程中的口腔干燥癥 狀。最近幾年，造血生長因子和細胞因子也被用于輻射傷害的治療，但它們在毒性、作用時 效、用藥的方便程度等方面都不太理想。人們期待開發(fā)出療效顯著、毒副作用小的抗輻射藥 物，因此開始重視從天然產(chǎn)物尋找抗輻射藥。已發(fā)現(xiàn)的天然藥物抗電離輻射成分主要為多 糖類、黃酮類物質(zhì)、多酚類、皂苷類、生物堿、肽類化合物。
刺梨(Rosa roxburghii Tratt.)，為薔薇科植物縹絲花或單瓣縹絲花的果實，始 載于《本草綱目遺拾》，產(chǎn)于中國，現(xiàn)代研究表明其含有刺梨黃酮、刺梨多糖、Ne、SOD等活性 成分。據(jù)報道，刺梨黃酮能很好地清除各種活性氧，并能顯著抑制紅細胞氧化溶血以及肝 組織MDA的產(chǎn)生[天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2005，17 ) =396-400]；刺梨黃酮能非常顯著地 降低造型后小鼠的血清葡萄糖和甘油三酯，升高血清胰島素，胰臟超氧化物歧化酶(SOD)， 過氧化氫酶(CAT)活性分別非常顯著和顯著上升，MDA明顯降低[營養(yǎng)學報，2004，沈(6) 474-476]。電離輻射使組織和細胞中產(chǎn)生大量活性氧(R0Q，通過直接和間接作用損傷生物 大分子(如DNA，蛋白質(zhì)，脂類等)，引起細胞死亡和機體功能喪失，刺梨黃酮具有抗氧化作 用，可以通過清除自由基發(fā)揮電離輻射防護作用。本發(fā)明提供了刺梨黃酮的電離輻射防護 新用途，現(xiàn)有技術未見報道。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供刺梨黃酮預防及治療電離輻射損傷的新用途。
本發(fā)明通過水提醇沉的方法從刺梨中提取分離黃酮，通過細胞、動物水平對刺梨 黃酮的抗電離輻射活性進行反復驗證，實驗結果表明刺梨黃酮可以抑制6°c。Y射線照射導 致的AHH-I細胞活力喪失，并能提高6°C。γ射線SGy —次全身照射昆明種小鼠的活存率，從 而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明中所述刺梨黃酮為從植物刺梨中提取的有效部位，經(jīng)測定黃酮純度大于 80%。
刺梨黃酮可與藥學上可接受的載體按本領域已知方法制備成各種藥物組合物，如 片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑等各種固體、液體制劑等；或和其他中藥有效成分組合制成各 種不同的劑型，通過不同的給藥途徑用于預防及治療電離輻射損傷。
本發(fā)明的優(yōu)點
1.發(fā)現(xiàn)了刺梨黃酮新的醫(yī)療用途。
2.刺梨黃酮作為刺梨的有效部位，天然存在于植物果實中，來源廣，原料易得，制 備工
藝簡單，得率高，成本低，藥用前景廣闊。
3.本發(fā)明將成為高效低毒抗電離輻射藥物的有益補充。


圖1刺梨黃酮對AHH-I細胞的細胞毒性
圖2不同濃度的刺梨黃酮對6°C0 γ射線4Gy照射的AHH-I細胞存活率的影響
圖3刺梨黃酮對6°C。γ射線SGy照射的昆明小鼠30天存活率的影響
圖4刺梨黃酮對6°C。γ射線6Gy照射的昆明小鼠SOD含量的影響具體實施方式
下面結合實施案例對本發(fā)明作進一步的說明
[實施例一]刺梨黃酮對AHH-I細胞的細胞毒性檢測
細胞特征人淋巴母細胞AHH-1，懸浮成簇生長，倍增時間16-19小時。
培養(yǎng)條件細胞培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)液(含10% FBS, 100U/mL青霉素和100U/mL 鏈霉素)，37°C、5% CO2培養(yǎng)箱，2-3天更換培養(yǎng)液，推薦細胞培養(yǎng)密度l_2X105/mL。
藥物準備將刺梨黃酮用DMEM培養(yǎng)液溶解，超聲助溶，配置儲存濃度10mg/ml母液
毒性檢測取對數(shù)生長期AHH-I細胞(IX IO5個/mL)接種于96孔培養(yǎng)板，100 μ L/ 孔，每孔藥物100 μ L，使終濃度為240、120、60、30、15、7. 5、3. 75 μ g/mL (簡稱藥物組)，每濃 度6孔，另設空白對照組細胞懸液。于藥物作用4 后每孔中加入CCK-8溶液10 μ L，繼續(xù)培 養(yǎng)4h，于多功能酶標儀490nm處測定各孔吸光值。細胞存活率％ =實驗組/正常組X 100%; 同時在倒置顯微鏡下每日觀察細胞形態(tài)。結果，藥物組細胞形態(tài)與對照組細胞形態(tài)沒有明 顯的變化，數(shù)據(jù)用spss 16.0進行統(tǒng)計分析，與正常組相比#，P<0.05。表明，刺梨黃酮在 3. 75-120 μ g/mL無明顯細胞毒性。(見附圖1)
[實施例2]刺梨黃酮對6°C。γ射線導致的AHH-I細胞活力喪失的保護作用
取對數(shù)生長期AHH-I細胞(1 X IO5個/mL)接種于96孔培養(yǎng)板，100 μ L/孔，每孔 藥物100 μ L，使終濃度為60、30、15、7· 5,3. 75、1. 875μ g/mL，每濃度6孔，另設空白對照組 細胞懸液、輻照組細胞懸液。于藥物作用24h后4Gy輻照，照后24h于每孔中加入CCK-8 溶液10 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)4h，于多功能酶標儀490nm處測定各孔吸光值。與輻照組相比#， P < 0. 05 ；##, P < 0. 01。結果表明，刺梨黃酮在1. 875-30 μ g/mL對6°C0 γ射線4Gy照射 的AHH-I細胞活力喪失呈劑量依賴的保護作用，對AHH-I細胞電離輻射防護的最優(yōu)濃度為 30 μ g/mL。
(見附圖2)
[實施例三]刺梨黃酮對6°C。Y射線SGy—次全身照射昆明種小鼠存活率的影響
將雄性昆明種種小鼠適應環(huán)境后根據(jù)需要分為正常組、照射組、陽性藥組和用藥 組，每組10只。正常組和照射組灌胃給予蒸餾水，用藥組照前灌胃給予相應藥物，連續(xù)3天，陽性藥組照前24h灌胃給予“E523”一次，劑量5mg/kg，給藥后全身一次性照射，劑量為8Gy， 照后連續(xù)觀察30天。結果表明，刺梨黃酮60mg/kg給予小鼠，30天存活率可達到80%，動 物實驗再次表明刺梨黃酮的較強的電離輻射防護作用。(見表1，附圖3)
表1刺梨黃酮對6°C。γ射線SGy照射的昆明
小鼠30天存活率和存活時間的影響
權利要求
1.刺梨黃酮用于細胞及動物電離輻射防護的實驗。
2.根據(jù)權利要求1所述的刺梨黃酮具有電離輻射防護的活性。
3.根據(jù)權利要求2所述的應用方面在于有效劑量的刺梨黃酮可以和一種或多種符合 藥典規(guī)定的其它藥用成分及藥用賦形劑制成制劑，用于電離輻射的預防和治療。
4.根據(jù)權利要求3所述的藥物制劑，其包括含有 99%的刺梨黃酮和99% 的藥用賦形劑及其它可組方的藥物制成口服制劑的劑型。
5.根據(jù)權利要求4所述的口服制劑包括片劑，丸劑，膠囊劑，軟膠囊劑，顆粒劑，混懸 劑，滴丸的任何一種。
6.根據(jù)權利要求5所述的制劑，活性成分為刺梨黃酮。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，提供了一種刺梨黃酮的電離輻射防護新用途。通過水提醇沉的方法，制備刺梨黃酮，經(jīng)過細胞及動物的電離輻射防護實驗，證明刺梨黃酮在3.75-120μg/mL濃度范圍內(nèi)對AHH-1細胞無毒性；在1.875-30μg/mL對60Coγ射線導致AHH-1細胞活力喪失呈劑量依賴的抑制作用；預防性給予30、60mg/kg可劑量依賴的提高60Coγ射線8Gy照射昆明小鼠的活存率，說明刺梨黃酮具有電離輻射防護的藥用活性。為開發(fā)新的口服途徑給藥的電離輻射防護藥物奠定了堅實的基礎。
文檔編號A61P17/16GK102028780SQ20101057087
公開日2011年4月27日 申請日期2010年11月26日 優(yōu)先權日2010年11月26日
發(fā)明者徐萍, 董若怡, 閻璽慶, 陳洪濤, 馬偉偉 申請人:新鄉(xiāng)醫(yī)學院