專利名稱：用于治療2型糖尿病的glp-1和fgf21組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及成纖維細(xì)胞生長因子21 (FGF21)化合物和胰高血糖素樣肽I (GLP-I)化合物組合用于制備用于治療糖尿病、更特別是2型糖尿病的藥物中的用途。本發(fā)明還涉及包含某些FGF21化合物和GLP-I化合物組合以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。
背景技術(shù)：
成纖維細(xì)胞生長因子為表達(dá)于正在發(fā)育的組織和成熟組織中的多肽。其涉及幾種
生理機(jī)制，包括例如代謝調(diào)控和細(xì)胞分化。整個(gè)家族(FGF家族)存在超過二十種成纖維細(xì)胞生長因子。包括FGF19、FGF21和FGF23在內(nèi)的FGF家族的三個(gè)成員形成起參與代謝調(diào)控的內(nèi)分泌因子作用的亞族。FGF21優(yōu)先表達(dá)于肝臟中并且已顯示出發(fā)揮激素樣代謝作用。成熟的人FGF21多肽具有SEQ ID NO : I的第1-181個(gè)氨基酸的序列。FGF21已被證明在小鼠的脂肪細(xì)胞中激活葡萄糖攝取，并且當(dāng)給予糖尿病嚙齒類動物時(shí)降低血糖和甘油三酯的水平(Kharitonenkov等，J. Clin. Invest. (2005), 115 1627-1635)。FGF21對血糖和甘油三酯的降低作用已在糖尿病猴中顯示。基于這些結(jié)果，已將FGF21提議作為具有治療尤其是糖尿病的潛能的藥理作用劑。GLP-I是在攝入食物后由腸的內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生的腸促胰島素激素。GLP-I是葡萄糖代謝和胰臟中胰島的P細(xì)胞分泌胰島素的調(diào)節(jié)物。GLP-I還導(dǎo)致糖尿病狀態(tài)中的胰島素分泌。然而GLP-I本身的體內(nèi)半衰期非常短，因此備受關(guān)注延長GLP-I在體內(nèi)的半衰期的方法。WO 98/08871公開了具有延長的半衰期的基于人GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO 3的第1-31個(gè)氨基酸)的延長GLP-I類似物和衍生物，包括利拉糖肽，其為由Novo Nordisk A/S開發(fā)的用于每日一次給藥的GLP-I衍生物并且有望很快上市用于治療2型糖尿病。艾塞那妝(Exenatide)是由Amylin Pharmaceuticals 和 Eli Lilly & Co 生產(chǎn)和銷售的用于2型糖尿病的治療的市售腸促胰島素模擬物。艾塞那肽基于毒蜥外泌肽-4 (7-45) (SEQ ID NO 4的第1-39個(gè)氨基酸)，存在于吉拉毒蜥(Gila monster)唾液中的激素。其展示出與人GLP-I類似的生物學(xué)性質(zhì)。US 5，424，286尤其涉及通過給予毒蜥外泌肽-4(7-45)(該美國專利中的SEQ ID NO I)在哺乳動物中刺激胰島素釋放的方法。WO 2009/020802涉及FGF21化合物和GLP-I化合物基于所謂的協(xié)同效應(yīng)在生產(chǎn)用于減少體重和用于治療肥胖癥的藥物中的用途。此外，所述組合被指出(但僅一次而且非常簡略地，僅僅附帶地在第7頁中)還導(dǎo)致“在降低提高的血糖水平方面的協(xié)同效應(yīng)，并且因此在治療糖尿病方面有潛在應(yīng)用”。然而，后來的宣稱完全未被支持。本發(fā)明提供關(guān)于通過使用FGF21化合物和GLP-I化合物的組合治療2型糖尿病的顯著作用的實(shí)現(xiàn)和證據(jù)。發(fā)明簡述本發(fā)明涉及FGF21化合物和GLP-I化合物組合用于制備用于治療2型糖尿病的藥物中的用途。本申請?zhí)峁┝擞绕溆梢韵卵芯恐С值脑摻M合的意外的和未預(yù)料的顯著作用的展示在游離脂肪酸存在下的離體P細(xì)胞的生存力的相關(guān)研究；在游離脂肪酸存在下的離體^細(xì)胞的胱天蛋白酶活性(細(xì)胞凋亡的衡量)的相關(guān)研究；和/或在體內(nèi)對db/db小鼠顯示出降血糖作用的研究。與FGF21聯(lián)合檢測的化合物之一為新型化合物N- e _37-[2-(2-{2-[2-(2-{2_[ (S)-4-羧基-4-(15-羧基十五酰氨基)丁酰氨基]-乙氧基}乙氧基)-乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Aib8，22，35，Lys37] GLP-I-(7-37)，在下文中為“化合物G4”。本發(fā)明還涉及用于治療2型糖尿病的FGF21化合物和GLP-I化合物的組合；包含F(xiàn)GF21化合物和GLP-I化合物以及藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中所述GLP-I化合物i)包含以下中的至少一種脫氨基 His7、Aib8、Aib22、Arg26、Aib35 和 / 或 Lys37 ；ii)為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物，所述結(jié)合部分包含至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)、更優(yōu)選兩個(gè)游離的羧酸基團(tuán)；或者其藥學(xué)上可接受的鹽；iii)為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物，所述結(jié)合部分包含二羧酸的?；鋬?yōu)選包含總計(jì)12-24個(gè)碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C16、C18或C20 ;其中優(yōu)選a)所述?；cGLP-I肽的賴氨酸殘基的e氨基經(jīng)由接頭連接；b)所述接頭包含至少一個(gè)OEG基團(tuán)和/或至少一個(gè)Trx基團(tuán)，并且任選還包含至少一個(gè)Glu ;和/或iv)選自除化合物Gl外的權(quán)利要求28的化合物；和/或所述FGF21化合物a)包含-11 、571(、1(561 、1(591 、1(691 和/或1(1221 中的至少一種；b)為經(jīng)由半胱氨酸殘基優(yōu)選內(nèi)部半胱氨酸殘基例如71C的巰基修飾的FGF21衍生物；c)為包含白蛋白結(jié)合部分的FGF21衍生物；d)并非聚乙二醇化的FGF21衍生物；e)為包含白蛋白結(jié)合部分的FGF21衍生物，所述結(jié)合部分包含至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)、更優(yōu)選兩個(gè)游離的羧酸基團(tuán)或者其藥學(xué)上可接受的鹽；f)為包含白蛋白結(jié)合部分的FGF21衍生物，所述結(jié)合部分包含?；?，例如脂肪酸或二羧酸的?；鲺；鶅?yōu)選包含總計(jì)12-24個(gè)碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C18或C20 ;或者其藥學(xué)上可接受的鹽；其中優(yōu)選i)所述?；cFGF21肽的N端氨基酸殘基的氨基例如與-IM的氨基或與FGF21肽的內(nèi)部半胱氨酸殘基的巰基例如與71C的巰基經(jīng)由接頭連接；并且優(yōu)選b)所述接頭包含至少一個(gè)OEG基團(tuán)和/或至少一個(gè)Glu基團(tuán)；和/或g)選自除具有SEQ ID NO : I的多肽之外的權(quán)利要求51的化合物；以及治療2型糖尿病、增強(qiáng)P細(xì)胞的生存力、減少P細(xì)胞的凋亡和降低血糖的方法，所有方法包括給予患者有效量的FGF21化合物和GLP-I化合物組合。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包含F(xiàn)GF21化合物和GLP-1化合物以及藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中所述GLP-I化合物
i)包含以下中的至少一種脫氨基 His7、Aib8、Aib22、Arg26、Aib35 和 / 或 Lys37 ；ii)為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物，所述結(jié)合部分包含至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)、更優(yōu)選兩個(gè)游離的羧酸基團(tuán)；或者其藥學(xué)上可接受的鹽；iii)為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物，所述結(jié)合部分包含二羧酸的酰基，其優(yōu)選包含總計(jì)12-24個(gè)碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C16、C18或C20 ;其中優(yōu)選a)所述?；cGLP-I肽的賴氨酸殘基的e氨基經(jīng)由接頭連接；b)所述接頭包含至少一個(gè)OEG基團(tuán)和/或至少一個(gè)Trx基團(tuán)，并且任選還包含至少一個(gè)Glu ;和/或iv)選自除化合物Gl外的權(quán)利要求2 8的化合物；和/或所述FGF21化合物a)與SEQ ID NO 1相比包含以下修飾中的至少一種:_1G、-1C、_1A、-IS、Q27E、Q28R、A31E、K56R、K59R、K69R、S71C、D102E、D102N、D102T、N121Q、desl21N、N121D、K122R、D159E、L166F、S167G、M168L、V169aT、G170T、P171L、S172E、Q173A、G174A、G174V、Y179F、A180E、S181K和/或S181R ;獨(dú)立地任選帶有N端的M(例如-1M);和/或b)與SEQ ID NO 1相比包含最多25個(gè)氨基酸殘基、優(yōu)選最多20個(gè)氨基酸殘基、更優(yōu)選最多15個(gè)氨基酸殘基、甚至更優(yōu)選最多10個(gè)氨基酸殘基或者最優(yōu)選最多6個(gè)氨基酸殘基的N端延伸,其中至少50%、優(yōu)選至少60%、更優(yōu)選至少70%、甚至更優(yōu)選至少80%或者最優(yōu)選至少90%的N端延伸的氨基酸殘基為G或S，前提條件是所述FGF21類似物包含不超過210個(gè)氨基酸殘基、優(yōu)選不超過209個(gè)氨基酸殘基、更優(yōu)選不超過206個(gè)氨基酸殘基，并且另外的前提條件是若N端延伸僅由單一氨基酸組成，則所述氨基酸不為Met，這樣的 FGF21 化合物的特定實(shí)例為[-1A, 71C, 121Q, 166F, 167G, 168L, 171L, 172E, 173A, 174V,179F,180E,desl81]FGF21。定義本文所用術(shù)語“FGF21化合物”是指天然的人FGF21以及保持FGF21活性的其類似物、融合肽及衍生物。天然的人FGF21蛋白的序列可來自UNIPR0T數(shù)據(jù)庫，登錄號Q9NSA1。209個(gè)氨基酸前體蛋白包含信號肽(氨基酸1-28)和成熟蛋白(氨基酸29-209)。將成熟蛋白作為SEQID NO :1(氨基酸1-181)包括在本文中，以及將信號肽作為SEQ ID NO :2 (氨基酸1_28)包括在本文中。在成熟蛋白的本文SEQ ID NO :1第146位用Pro代替Leu的天然人FGF21的同種型或等位基因形式，自尤其是US 2001012628A1(已公開的美國申請中SEQ ID NO 2的第174位殘基)獲知。天然的人FGF21的具體實(shí)例是成熟的部分，即SEQ ID NO :1及其L146P同種型。FGF21活性可使用本領(lǐng)域已知的任何方法確定，例如本文實(shí)施例8的測定法(3T3-L1脂肪細(xì)胞中的葡萄糖攝取)。本文所用術(shù)語“GLP-1化合物”是指人GLP-I (7-37) (SEQ ID NO 3的第1-31個(gè)氨基酸)、毒蜥外泌肽-4(7-45) (SEQ ID NO 4的第1_39個(gè)氨基酸)以及保持GLP-I活性的其類擬物、融合肽及衍生物。至于GLP-I化合物的位置編號對于本目的，將任何氨基酸取代、缺失和/或添加相對于SEQ ID N0:3和/或SEQ ID NO :4的序列指出。然而，序列表的氨基酸殘基的編號始終從第I號開始，而對于我們想要的本目的，按照本領(lǐng)域的已建立的實(shí)踐，以氨基酸殘基編號7起始并給其分配編號7。因此，一般而言，本文對GLP-I (7-37)或毒蜥外泌肽_4序列的位置編號的任何參考都是指在兩種情況下以第7位的His起始并分別以第37位Gly或者第45位Ser終止的序列。GLP-I活性可使用本領(lǐng)域已知的任何方法確定，例如本文實(shí)施例7的測定法(表達(dá)人GLP-I受體的細(xì)胞系中對cAMP形成的刺激)。在FGF21和GLP-I的情況下本文所用術(shù)語“類似物”是指以下多肽，其通過修飾其氨基酸序列或可通過修飾其氨基酸序列分別推導(dǎo)或衍生自SEQ ID NOs :1、3和4的各自的FGF2UGLP-1和毒蜥外泌肽-4序列。這樣的修飾可包括一個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代、缺失和/或添加。例如，氨基酸可在氨基酸序列的C端、N端或內(nèi)部添加和/或缺失。優(yōu)選氨基酸在C端和/或N端，更優(yōu)選在N端添加和/或缺失。帶有C端或N端缺失的氨基酸的氨基酸序列也可稱為截短序列，如本領(lǐng)域所已知。類似地，序列內(nèi)部添加的氨基酸可被稱作插入。本文在此和接下來使用術(shù)語“變體”或“突變蛋白質(zhì)”替代術(shù)語“類似物”。本文具體的實(shí)施方案部分、實(shí)驗(yàn)部分以及權(quán)利要求中公開FGF21類似物和GLP-I類似物的實(shí)例。在FGF21修飾和GLP-I修飾的情況下本文所指術(shù)語“氨基酸”或“氨基酸殘基”包括被細(xì)胞用于蛋白生物合成中并由遺傳密碼規(guī)定的二十種標(biāo)準(zhǔn)的a-氨基酸，即丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。所述術(shù)語還包括非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸，例如硒代半胱氨酸和吡咯賴氨酸，其也由遺傳密碼編碼但罕見于蛋白中。存在于蛋白中的其它非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸可通過翻譯后修飾形成，例如Y-羧基谷氨酸鹽/酯和羥脯氨酸。并非由遺傳密碼編碼的非標(biāo)準(zhǔn)或非天然的氨基酸的另外的實(shí)例為鳥氨酸和磷酸絲氨酸。非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的另外的實(shí)例還為合成的氨基酸，包括通過化學(xué)合成生產(chǎn)的氨基酸，例如由遺傳密碼編碼的氨基酸的D-異構(gòu)體，例如D-丙氨酸、D-谷氨酰胺、D-組氨酸和D-亮氨酸、Aib ( a -氨基異丁酸)、Abu ( a -氨基丁酸)Jle (叔丁基甘氨酸)、P -丙氨酸、3-氨甲基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、脫氨基組氨酸(縮寫為脫氨基His (或DesaH)，備選名咪唑基丙酸，縮寫為Impr)，氨基酸的P類似物例如￠-丙氨酸、2-氨基-組氨酸、￠-羥基-組氨酸、高組氨酸、N a -乙?；?組氨酸、a -氟甲基-組氨酸、a -甲基-組氨酸、a，a - 二甲基-谷氨酸、m-CF3-苯丙氨酸(縮寫為m-CF3-Phe)、a, P - 二氨基丙酸(縮寫為DAP)、3_吡啶基丙氨酸、2-吡啶基丙氨酸或4-吡啶基丙氨酸、(I-氨基環(huán)丙基)甲酸、(I-氨基環(huán)丁基)甲酸、(I-氨基環(huán)戊基)甲酸、(I-氨基環(huán)己基)甲酸、(I-氨基環(huán)庚基)甲酸和(I-氨基環(huán)辛基)甲酸。對于本目標(biāo)而言，標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的兩種公認(rèn)密碼(單字母和三字母)可互換使用，或者在此和接下來將氨基酸名稱完全拼出。顯然這些術(shù)語被認(rèn)為是完全相等的(例如C =Cys =半胱氨酸)。在FGF21和GLP-I的情況下本文所用術(shù)語“衍生物”是指已被共價(jià)修飾的多肽。所述術(shù)語并不限于所述而是描述性的，因?yàn)槠渲荚跇?biāo)出如所述對組成性多肽化合物作出的變化(“類似物”)和側(cè)鏈與多肽的共價(jià)結(jié)合(籍此其變成“衍生化的”)的區(qū)別。若需要的話，術(shù)語衍生物可被其它的普通化學(xué)術(shù)語例如化合物取代。衍生物的實(shí)例包括?；途垡叶蓟亩嚯?，如本領(lǐng)域所已知。衍生物的另外的實(shí)例公開于本文具體的實(shí)施方案部分、實(shí)驗(yàn)部分和權(quán)利要求中。
術(shù)語“白蛋白結(jié)合劑(albumin binder) ”也不意指限制于所述。此外,其相反地是描述性的，因?yàn)槠浞从沉藗?cè)鏈的總體目標(biāo)或目的，即所得化合物(衍生物)能夠結(jié)合人血清白蛋白，其提供或至少有利于本發(fā)明衍生物常常針對的延長作用。若需要的話，該術(shù)語還可用其它的普通化學(xué)術(shù)語例如化合物取代。白蛋白結(jié)合劑的實(shí)例公開于具體的實(shí)施方案部分、實(shí)驗(yàn)部分以及權(quán)利要求中。命名本文可互換地使用多肽命名、有機(jī)化學(xué)命名和化學(xué)式或其混合來命名類似物和衍生物，無論哪一種都被認(rèn)為最適合使討論中的技術(shù)問題易于理解。變體命名本文可互換地使用多肽命名、有機(jī)化學(xué)命名、化學(xué)式、氨基酸序列或其混合來命名FGF21、GLP-1和毒蜥外泌肽-4的變體，無論哪一種都被認(rèn)為最適合使討論中的技術(shù)問題易于理解。例如，變體的取代可表示為“原始的氨基酸-位置-取代的氨基酸”?？墒褂萌帜复a或單字母碼。因此，以FGF21為例，符號“K122C”或“Lysl22Cys”意指，討論中的FGF21
變體包括在FGF21(SEQ ID NO 1)中第122位氨基酸對應(yīng)的變體氨基酸位置用半胱氨酸取代賴氨酸。但取代可僅僅表示為位置和所得的氨基酸殘基，如122C被認(rèn)為等同于K122C，因?yàn)槠渲傅氖窍嗤乃梅肿?。若需要的話，可如下進(jìn)一步所述(“比對”)通過比對變體和FGF21證實(shí)位置。多個(gè)取代可通過逗號分隔，如果需要的話用括號包圍以明晰它們屬于同一變體。再次以FGF21為例，用于制備化合物F3(實(shí)施例2)的FGF21類似物可例如命名為“K56R，K59R, K69R, K122R Met_FGF21 ”，或其可被稱為“帶有 K56R，K59R, K69R, K122R 和 N 端 M 的SEQ ID N0:1”?；蛘?，“ + ”可用于分隔，如在 SEQ ID NO 1 的(-1M+56R+59R+69R+122R)變體中。另一實(shí)例為SEQ ID NO :3的GLP-I變體(8V+22E)，其中第8位的Ala(序列表中的第2位)被Val取代，并且在第22位的Gly (序列表中的第16位)被Glu取代?？扇缦旅枋鲅由焱ㄟ^添加位置編號(C端為繼續(xù)的正編號，而在N端為負(fù)編號)參考真實(shí)的SEQ ID NO來描述，或者更簡單地，通過利用其正確序列對討論中的化合物添加討論中的延伸的氨基酸，如例如在Met-FGF21 (-1M-FGF21)中。對于本發(fā)明的目標(biāo)，兩個(gè)相關(guān)氨基酸序列的比對，例如FGF21與其類似物的比對，可使用EMBOSS軟件包的Needle程序(http://emboss.org)進(jìn)行。優(yōu)選版本為2.8.0。Needle 程序?qū)崿F(xiàn)了 Needleman, S. B.和 Wunsch，C. D. (1970) J. MoI. Biol. 48，443-453 中所述的總體比對算法。所用取代矩陣為BL0SUM62，空位開放罰分為10，空位延伸罰分為0. 5。或者，可使用程序“比對”，其為Needleman-Wunsch比對(即總體比對)。序列通過該程序利用缺省打分矩陣BL0SUM50比對。對于空位的第一個(gè)殘基的罰分為12，對于空位的另外的殘基的罰分為2。Needleman-Wunsch算法描述于Needleman, S. B.和Wunsch,CD. , (1970) ,Journal of Molecular Biology, 48 :443-453,比對程序由 Myers 和 W. Miller在 Optimal Alignments in Linear Space " CABIOS(computer applications in thebiosciences (生物科學(xué)中的計(jì)算機(jī)運(yùn)用))(1988)4 :11-17描述。“比對”為FASTA軟件包版本 v20u6 的一部分(參見 W. R. Pearson 和 D. J. Lipman (1988), " Improved Tools forBiological Sequence Analysis" , PNAS 85 :2444-2448 和 W. R. Pearson(1990)" Rapidand Sensitive Sequence Comparison with FASTP and FASTA," Methods in Enzymology183 :63-98)。
包含本發(fā)明的FGF21化合物和GLP-I化合物的藥物組合物可進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體。對于注射，所述載體可為水，若需要的話，補(bǔ)充有其它物質(zhì)，例如鹽水，例如生理鹽水。還可使用其它藥學(xué)上可接受的物質(zhì)例如稀釋劑和適當(dāng)?shù)木彌_液。若需要的話，還可使用其它藥學(xué)上可接受的物質(zhì)，例如乳化劑、助懸劑、溶劑、填充劑、膨脹劑、佐劑、防腐齊U、抗氧化劑、著色劑和/或調(diào)味劑。所述FGF21化合物和GLP-I化合物可以純化的多肽的形式使用，或者利用合適的藥學(xué)上可接受的賦形劑配制，如本領(lǐng)域所已知。所述藥物組合物可以本領(lǐng)域已知的任何方式給予，例如注射，例如靜脈(i.v.)或皮下(s. c)注射。所述FGF21化合物和GLP-I化合物可以以治療有效量或預(yù)防有效量包含于藥物組合物中。所述量根據(jù)治療目的或預(yù)防目的而定，例如需要治療的患者的狀況、所需的給藥途徑等。如在本領(lǐng)域常規(guī)的，熟練的醫(yī)師可能不得不根據(jù)這些因素調(diào)整劑量和修改給藥。示例性和非限制性的劑量在本實(shí)施例中公開。根據(jù)本發(fā)明使用的很多FGF21化合物和GLP-I化合物為已知化合物。根據(jù)本發(fā)明使用的那些非已知化合物的FGF21化合物和GLP-I化合物可與相似化合物的制備類似地制
備。
具體實(shí)施方案以下為本發(fā)明的具體實(shí)施方案I. FGF21化合物和GLP-I化合物組合用于制備用于治療2型糖尿病的藥物中的用途。2.實(shí)施方案I的用途，其中所述GLP-I化合物包含SEQ ID NO :3、SEQ ID NO 4的氨基酸序列，或者為具有最多15個(gè)氨基酸取代、缺失和/或添加的SEQ ID NO :3或4的類似物。3.實(shí)施方案2的用途，其中所述GLP-I化合物包含SEQ ID NO 3的氨基酸序列，或者為其具有最多15個(gè)氨基酸取代、缺失和/或添加的類似物。4.實(shí)施方案2的用途，其中所述GLP-I化合物包含SEQ ID NO 4的氨基酸序列，或者為其具有最多15個(gè)氨基酸取代、缺失和/或添加的類似物；例如艾塞那肽。5.實(shí)施方案1-4中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物具有GLP-I活性。6.實(shí)施方案5的用途，其中所述GLP-I化合物與N-e 26-((S)-4-羧基-4-十六酰氨基丁酰)[Arg34]GLP-I-(7-37)(化合物Gl)相比具有一樣的活性、活性更高、或者為其活性的最少1/10，優(yōu)選最少1/8、1/6、1/5、1/4、1/3或1/2，其中所述活性優(yōu)選按照在含人GLP-I受體的培養(yǎng)基中刺激cAMP形成的能力來檢測，例如如實(shí)施例7中所述。7.實(shí)施方案5-6中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物的EC5tl值基于測量在含人GLP-I受體的培養(yǎng)基中刺激cAMP形成的能力的測定法來測定，所述EC5tl值優(yōu)選不超過1000pM、更優(yōu)選不超過800、600、500、400、300或200pM，其中所述測定優(yōu)選如實(shí)施例7中所述進(jìn)行。8.實(shí)施方案2-7中任一項(xiàng)的用途，其中氨基酸取代、缺失和/或添加的最大數(shù)目為14、優(yōu)選13、更優(yōu)選12、甚至更優(yōu)選11或者最優(yōu)選10。9.實(shí)施方案2-8中任一項(xiàng)的用途，其中氨基酸取代、缺失和/或添加的最大數(shù)目為9、優(yōu)選8、更優(yōu)選7、甚至更優(yōu)選6或者最優(yōu)選5。
10.實(shí)施方案2-9中任一項(xiàng)的用途，其中氨基酸取代、缺失和/或添加的最大數(shù)目為4、優(yōu)選3、更優(yōu)選2或者最優(yōu)選I。11.實(shí)施方案2-3和5-10中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物包含以下中的至少一種脫氨基 His7、Aib8、Aib22、Arg26、Aib35 和 / 或 Lys37。12.實(shí)施方案2-3和5-10中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物包含以下中的至少一種Glu22和/或Arg34。13.實(shí)施方案2-3和5-12中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物包含以下組合(34R)、(8Aib+22Aib+35Aib+37K)、(8Aib+34R)或(7DesaH+22E+26R+34R+37K)。
14.實(shí)施方案2和4-10的用途，其中所述GLP-I化合物包含以下中的至少一種8V、G ；22E ；33I ；36G ；37P ；38S ；39S ；40G ；41A ；42P ；43P ；44P ；45S ；46C ；46C-酰胺；優(yōu)選包含以下組合(8V+22E)、(8G+22E+36G)或(8V+22E+33I+36G+37P+38S+39S+40G+41A+42P+43P+44P+45S)。15.實(shí)施方案1-14中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物為任選經(jīng)由接頭的帶
有第二多肽的融合肽。16.實(shí)施方案15的用途，其中所述第二多肽選自免疫球蛋白的Fe部分、人白蛋白及其類似物和片段。17.實(shí)施方案1-14中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物為GLP-I衍生物。18.實(shí)施方案17的用途，其中所述GLP-I衍生物在C端氨基酸殘基或者內(nèi)部氨基酸殘基處修飾。19.實(shí)施方案18的用途，其中所述GLP-I衍生物經(jīng)由賴氨酸殘基例如26K或37K的e氨基修飾。20.實(shí)施方案17-19中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I衍生物包含白蛋白結(jié)合部分。21.實(shí)施方案20的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)、更優(yōu)選兩個(gè)游離的羧酸基團(tuán)或者其藥學(xué)上可接受的鹽。22.實(shí)施方案17-21中任一項(xiàng)的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含酰基，例如脂肪酸或二羧酸的?；?，例如十六酰-和15-羧基十五酰_，所述?；鶅?yōu)選包含總計(jì)12-24個(gè)碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C16、C18或C20 ;或者其藥學(xué)上可接受的鹽。23.實(shí)施方案22的用途，其中所述?；cGLP-I肽的賴氨酸殘基的e氨基經(jīng)由接頭連接。24.實(shí)施方案23的用途，其中所述接頭包含至少一個(gè)OEG基團(tuán)(0EG為8-氨基-3，6-二氧雜辛酸)、至少一個(gè)Trx基團(tuán)(Trx為氨甲環(huán)酸，或者反式-4-(氨甲基)環(huán)己烷甲
酸)
O H
和/或至少一個(gè)Glu (谷氨酰胺)基團(tuán)。25.實(shí)施方案24的用途，其中所述接頭包含二-OEG基團(tuán)，其中兩個(gè)OEG基團(tuán)已經(jīng)
由酰胺鍵結(jié)合。26.實(shí)施方案25的用途，其中所述接頭還包含Glu基團(tuán)，其中優(yōu)選Glu的氨基與所述酰基形成酰胺鍵，并且更優(yōu)選地，Glu的Y-?；c二 -OEG基團(tuán)的氨基形成酰胺鍵，所述二 -OEG基團(tuán)的羧基最優(yōu)選與GLP-I肽的Lys殘基的e -氨基形成酰胺鍵。27.實(shí)施方案24-25中任一項(xiàng)的用途，其中所述接頭還包含Trx基團(tuán)，其中優(yōu)選Trx的氨基與所述酰基形成酰胺鍵，并且更優(yōu)選地，Trx的?；cGlu的氨基形成酰胺鍵，所述Glu的Y -?；踔粮鼉?yōu)選與二 -OEG基團(tuán)的氨基形成酰胺鍵，所述二 -OEG基團(tuán)的羧基最優(yōu)選與GLP-I肽的Lys殘基的e -氨基形成酰胺鍵。28.實(shí)施方案1-27中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物選自以下化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酰胺、鏈烴基化合物(alkyls)或酯N- e 26- ((S) _4_ 羧基 _4_ 十六酰氨基丁酰)[Arg34] GLP-I- (7-37)
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H-H AEGTFTSDVSSYLEGQA A~N ^jj-E F I A W L V R G R~N 丫
OO(化合物Gl);N-e 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-( {反式 _4_[ (19-羧基十九酰氨基)_甲基]環(huán)己烷羰基}氨基)丁酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠-[脫氨基把87，611122，六找26，六找34，1^837]61^-1-(7-37)
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權(quán)利要求
1.FGF21化合物和GLP-I化合物組合用于制備用于治療2型糖尿病的藥物中的用途。
2.權(quán)利要求I的用途，其中所述GLP-I化合物包含SEQID NO :3、SEQ ID NO 4的氨基酸序列，或者為具有最多15個(gè)氨基酸取代、缺失和/或添加的SEQ ID NO :3或4的類似物。
3.權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物為包含白蛋白結(jié)合部分的GLP-I衍生物。
4.權(quán)利要求3的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)、更優(yōu)選兩個(gè)游離的羧酸基團(tuán)或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
5.權(quán)利要求3-4中任一項(xiàng)的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含酰基，例如脂肪酸或二羧酸的?；缡?和15-羧基-十五酰_，所述酰基優(yōu)選包含總計(jì)12-24個(gè)碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C16、C18或C20 ;或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
6.權(quán)利要求5的用途，其中所述?；cGLP-I肽的賴氨酸殘基的ε氨基經(jīng)由接頭連接，其中所述接頭優(yōu)選包含至少一個(gè)OEG基團(tuán)(0EG為8-氨基-3，6- 二氧雜辛酸)、至少一個(gè)Trx基團(tuán)(Trx為氨甲環(huán)酸，或者反式-4-(氨甲基)環(huán)己烷甲酸)
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的用途，其中所述GLP-I化合物選自以下化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酰胺、鏈烴基化合物或酯 N- ε 26- ((S) -4-羧基 _4_ 十六酰氨基丁酰)[Arg34] GLP-I- (7-37)
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的用途，其中所述FGF21化合物包含SEQID NO : I的氨基酸序列，或者為其具有最多30個(gè)氨基酸取代、缺失和/或添加的類似物。
9.權(quán)利要求1-40中任一項(xiàng)的用途，其中所述FGF21化合物為包含白蛋白結(jié)合部分的FGF21衍生物。
10.權(quán)利要求9的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)、更優(yōu)選兩個(gè)游離的羧酸基團(tuán)或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
11.權(quán)利要求9-10中任一項(xiàng)的用途，其中所述白蛋白結(jié)合部分包含?；?，例如脂肪酸或二羧酸的?；?7-羧基-十七酰-和19-羧基十九酰_，所述?；鶅?yōu)選包含總計(jì)12-24個(gè)碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最優(yōu)選C18或C20 ;或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述酰基與FGF21肽的N端氨基酸殘基的氨基例如與-IM的氨基經(jīng)由接頭連接，或與FGF21肽的內(nèi)部半胱氨酸殘基的巰基例如與71C的巰基經(jīng)由接頭連接，其中所述接頭優(yōu)選包含至少一個(gè)OEG基團(tuán)(OEG為8-氨基-3，6- 二氧雜辛酸)和/或至少一個(gè)Glu (谷氨酰胺)基團(tuán)。
13.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的用途，其中所述FGF21化合物選自以下化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、酰胺、鏈烴基化合物或酯 具有SEQ ID NO 1的多肽(人FGF21)； 具有SEQ ID NO 1和添加的N端Met的多肽((Met_FGF21_人，化合物Fl)； S-71-({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(19-羧基十九酰氨基)丁酰氨基]-乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙基氨甲?；鶀甲基)[Cys71]Met-FGF21(化合物 F2);和 Ν-α I-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七酰氨基)丁酰氨基]_乙氧基}乙氧基)乙酰氨基]乙氧基}乙氧基)乙?；鵠[Arg56，Arg59，Arg69，Argl22]-Met-FGF21 (化合物 F3)。
14.權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)的用途，其中所述化合物同時(shí)和/或序貫給予。
15.一種用于治療2型糖尿病的FGF21化合物和GLP-I化合物的組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及成纖維細(xì)胞生長因子21(FGF21)化合物和胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)化合物組合用于制備用于治療糖尿病、更特別是2型糖尿病的藥物中的用途，以及包含某些FGF21化合物和GLP-1化合物組合以及藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。所述組合對2型糖尿病相關(guān)參數(shù)(即在游離脂肪酸存在下的離體β細(xì)胞的生存力、離體β細(xì)胞的胱天蛋白酶活性(細(xì)胞凋亡的衡量))具有顯著的作用，并且在體內(nèi)對db/db小鼠具有降血糖作用。
文檔編號A61P3/10GK102802657SQ201080026383
公開日2012年11月28日 申請日期2010年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月11日
發(fā)明者B·安德森, A·M·K·漢森, B·C·羅林 申請人:諾沃-諾迪斯克有限公司