專利名稱：咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種藥物的用途，尤其涉及老年癡呆癥藥物的用途，特別涉及咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
老年癡呆癥是ー種神經(jīng)退行性疾病，其癥狀主要表現(xiàn)為患者記憶カ和認(rèn)知能力不同程度的喪失，行為活動(dòng)發(fā)生障礙。研究發(fā)現(xiàn)，患者腦細(xì)胞產(chǎn)生的神經(jīng)遞質(zhì)有許多缺損，其中こ酰膽堿能系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)缺損非常明顯。老年癡呆癥的疾病因素有很多，歸根到底都與神經(jīng)毒素和腦衰老物質(zhì)的漸進(jìn)性蓄積有密切相關(guān)，但神經(jīng)毒素和腦衰老物質(zhì)的蓄積達(dá)到一定程度時(shí)，會(huì)使腦細(xì)胞死亡速度加快，當(dāng)腦細(xì)胞死亡的數(shù)量達(dá)到人腦總量的百分之十以上時(shí)就會(huì)表現(xiàn)出腦萎縮的癥狀，當(dāng)腦萎縮繼續(xù)發(fā)展而不能得到控制，就會(huì)發(fā)展到老年癡呆癥的程度。目前治療老年癡呆癥的藥物一般都使用こ酰膽堿前體物、卵磷脂、三氟拉嗪和T588。こ酰膽堿前體物、卵磷脂療效輕微，副作用明顯；T588的副作用也非常明顯。而另ー類神經(jīng)肽及其類似藥物的臨床試驗(yàn)結(jié)果也不佳，僅有改善患者情緒的作用。臨床治療中還使用腦血管擴(kuò)張藥物如長(zhǎng)春胺等，但它只適合部分輕微患者，而且也具有副作用。綜上，目前沒(méi)有能夠有效治療老年癡呆癥的藥物?？Х纫?qū)儆诩谆S嘌呤的生物堿(B卩1，3，7 -三甲基黃嘌呤)，它的化學(xué)名稱是1，3，7-三甲基黃嘌呤或3，7- ニ氫-1，3，7-三甲基-IH-嘌呤-2，6- ニ酮，熱水中易溶，水和醇中略溶?？Х纫蚴签`種中樞神經(jīng)興奮類藥物，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有廣泛興奮作用。小劑量能增強(qiáng)大腦皮層及皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)的興奮過(guò)程，使人精神活潑，活動(dòng)能力增強(qiáng)。在我們?nèi)粘５娘嬃先绮?、咖啡和蘇打水以及某些食物，如巧克カ和可可也存在咖啡因。它可以加速人體的新陳代謝，使人保持頭腦清醒和思維靈敏，但未有報(bào)道發(fā)現(xiàn)咖啡因具有治療老年癡呆癥的作用，也沒(méi)有咖啡因在治療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供咖啡因在制藥中的新用途，即在制備治療老年癡呆癥藥物的用途。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物中的用途?？Х纫蛟谥苽渲委熇夏臧V呆癥藥物片劑中的用途。其有效劑量為50mg 200mg?？Х纫蛟谥苽渲委熇夏臧V呆癥藥物顆粒劑中的用途?？Х纫蛟谥苽渲委熇夏臧V呆癥藥物膠囊中的用途?？Х纫蛟谥苽渲委熇夏臧V呆癥藥物緩釋片劑中的用途?？Х纫蛟谥苽渲委熇夏臧V呆癥藥物緩釋微丸中的用途?？Х纫蛟谥苽渲委熇夏臧V呆癥藥物干混懸劑中的用途?？Х纫蛟谥苽渲委熇夏臧V呆癥藥物注射劑中的用途。、
為了更好的理解本發(fā)明，下面通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物中的用途?？Х纫?qū)夏臧V呆癥的動(dòng)物試驗(yàn)
(I)、試驗(yàn)?zāi)康?br> 通過(guò)β-淀粉樣蛋白所致大鼠癡呆模型試驗(yàn)，初歩了解咖啡因?qū)Ζ?淀粉樣蛋白所致大鼠癡呆模型的治療作用，為咖啡因的研究開發(fā)提供初歩依據(jù)。(2)、受試藥物
咖啡因，性狀白色粉狀物，批號(hào)20100819 (收樣日期)，提供単位杭州賽利藥物研究所有限公司，貯存方法避光、干燥、常溫(25°C以下)保存，配制方法臨用前在無(wú)菌條件下用生理鹽水溶解至不同濃度。(3)、試驗(yàn)動(dòng)物
品種品系SD大鼠，級(jí)別=SPF級(jí)，性另Ij :雄性，體重300-320g，數(shù)量50只，來(lái)源上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[生產(chǎn)許可證SCXK (滬)2008-0016]。(4)、試驗(yàn)條件
屏障系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)室，溫度22土1°C，濕度50-70%，光照150-200Lx，12小時(shí)明暗交替，噪音<50dB，使用許可證SYXK (浙)2003-0003。飲水自來(lái)水過(guò)濾滅菌，置于高壓滅菌的飲水瓶中自由飲用。飼料無(wú)菌全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料。飼養(yǎng)方式自由飲食，大鼠飼養(yǎng)籠中給予充足的飼料和水，姆籠飼養(yǎng)5只。(5)、試劑與儀器 (5. I)試劑與配制
5. I. I Αβ 1-42 :Sigma 產(chǎn)品，079Κ8729，0· lmg/ 瓶；
5. I. 2 O. 9%氯化鈉注射液浙江莎普恩制藥有限公司，090406-4，500ml/瓶。
5. 2 儀器
5. 2. I腦立體定位儀，上海奧爾科特儀器有限公司；
5. 2. 2微量注射泵，上海奧爾科特儀器有限公司；
5.2. 3顱骨鉆，深圳瑞沃德生命科技有限公司；
5.2. 4 STP120脫水機(jī)、AP280-2包埋機(jī)、HM335E切片機(jī)、HMS70染色機(jī)，MICROM公司； 5.2.5 YS100顯微鏡，日本NIKON公司；
5.2. 6 Simple PCI 圖像分析系統(tǒng)，Compix Inx 公司；
5.2. 7高壓滅菌鍋，日本三洋公司；
5.2. 8 AG204-電子分析天平，瑞士 METTLER公司。(5. 3)其它器械與材料
注射器、離心管，手術(shù)剪、鑷子、移液槍、剃毛刀、縫針、縫線等手術(shù)器械。(6)、分組與給藥 (6. I)劑量與組另Ij
6.I. I正常對(duì)照組:生理鹽水,IOml · kg-1 ；6. I. 2模型對(duì)照組生理鹽水，IOml · kg-Ι ；
6. I. 3試驗(yàn)組低劑量組咖啡因IOmg · kg-Ι，相當(dāng)于臨床用量5倍；
中劑量組咖啡因20mg · kg-1，相當(dāng)于臨床用量10倍；
高劑量組咖啡因40mg · kg-1，相當(dāng)于臨床用量20倍。(6. 2)劑量設(shè)置依據(jù) 根據(jù)委托方提供的人用劑量50-100mg/天。(6. 3)給藥途徑
經(jīng)ロ灌胃，與臨床給藥途徑基本一致。(6. 4)給藥濃度
6.4. I低劑量組咖啡因I. Omg · ml-1 ；
6.4. 2中劑量組咖啡因2. Omg · ml-1 ；
6.4. 3高劑量組咖啡因4. Omg · ml_l。(6.5)給藥容量 經(jīng)ロ灌胃10ml · kg-1。(7)、試驗(yàn)方法
(7. I) Αβ的孵育
未經(jīng)處理的A β 1-42為粉末狀態(tài)，先將500 μ g A β 1-42，溶于70 μ I I. 0%ΝΗ40Η中，離心機(jī)上混勻，再加入430 μ I無(wú)菌生理鹽水，充分混勻后37°C恒溫孵育箱中孵育I周，使其達(dá)到凝聚狀態(tài)。(7. 2)動(dòng)物模型的建立
取40只雄性SD大鼠，腹腔注射3%戊巴比妥鈉(45mg/kg)麻醉后，固定于立體定位儀上，常規(guī)備皮，消毒頭頂部皮膚，沿顱頂部正中切開，暴露前因，參照《大鼠腦立體定位圖譜》確定前囟后3. 3mm,中線左側(cè)旁開2. Omm為左側(cè)海馬CAl區(qū)所在體表投影位置，用牙科鉆鉆開骨窗，微量注射器自腦表面垂直進(jìn)針2. 8mm,緩慢注入I μ g/ μ I的Aβ 1-42溶液10 μ 1，5分鐘注射完畢，留針5分鐘以保證溶液充分彌散，后緩慢撤針，縫合皮膚切ロ，青霉素局部噴灑消毒，所有操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。(7. 3)動(dòng)物分組給藥
注射Αβ 1-42次日，將40只大鼠按體重隨機(jī)分為模型對(duì)照組、咖啡因低、中和高劑量組，每組10只大鼠；另取10只SD大鼠做正常對(duì)照組。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組大鼠灌胃給予IOml - kg-Ι生理鹽水，低、中和高劑量組大鼠分別灌胃給予10、20、40mg *kg-l的咖啡因，毎日一次，連續(xù)給藥2周。(7. 4)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力檢測(cè)
給藥2周后，各組大鼠采用Morris水迷宮測(cè)試學(xué)習(xí)記憶能力。水迷宮主要由一漆成暗灰色的圓柱形水池和一金屬站臺(tái)組成。水池高50cm,直徑80cm,站臺(tái)直徑10. 0cm。水池上方通過(guò)ー數(shù)字?jǐn)z像機(jī)與計(jì)算機(jī)監(jiān)視屏相連接。大鼠在水池中的全部活動(dòng)情況可在監(jiān)視屏中看到，利用計(jì)算機(jī)軟件對(duì)其活動(dòng)進(jìn)行全程跟蹤，并顯示整個(gè)活動(dòng)軌跡。當(dāng)設(shè)定的訓(xùn)練時(shí)間已到或動(dòng)物已爬上站臺(tái)，計(jì)算機(jī)停止跟蹤并記錄下游泳軌跡和自動(dòng)計(jì)算出動(dòng)物在水池中所游過(guò)的路程，及找到站臺(tái)所需的時(shí)間即潛伏期。用找到站臺(tái)所需的時(shí)間表示大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。水池里的水面高出站臺(tái)2cm，水溫控制在22±0. 5°C。實(shí)驗(yàn)在隔音安靜的房間內(nèi)進(jìn)行，水池、日光燈、鼠籠等實(shí)驗(yàn)室各種物件的位置保持不變。實(shí)驗(yàn)采用一天訓(xùn)練2次。若動(dòng)物2分鐘尚未找到站臺(tái)，將動(dòng)物拿到站臺(tái)上并使它在上面停留20秒。訓(xùn)練2天后進(jìn)行水迷宮測(cè)試，先記錄120s內(nèi)的逃避潛伏期，再進(jìn)行為空間搜索實(shí)驗(yàn)，撤掉平臺(tái)，僅在ー固定象限將大鼠放入水中，記錄120s內(nèi)大鼠穿過(guò)原平臺(tái)位置的平臺(tái)區(qū)路徑長(zhǎng)度、總路徑的百分比、平臺(tái)區(qū)持續(xù)時(shí)間和進(jìn)入平臺(tái)次數(shù)，作為記憶能力的指標(biāo)。(7. 5)腦海馬組織形態(tài)觀察
試驗(yàn)結(jié)束后，處死大鼠進(jìn)行心臟灌注用3%戊巴比妥鈉(45mg/kg)腹腔注射成功麻酔大鼠后仰臥固定，迅速開胸暴露心臟，穿刺針經(jīng)左心室穿刺至升主動(dòng)脈，結(jié)扎下腔動(dòng)靜脈，同時(shí)剪開右心耳，用O. OlM的PBS液200ml灌注沖洗血管床約20分鐘，然后予4%的多聚甲醛200ml灌注30分鐘(先快后慢)，斷頭后取完整腦組織，隨后置入4%多聚甲醛內(nèi)固定24h，修剪組織后室溫脫水取材組織塊，經(jīng)固定后，常規(guī)石蠟包埋，4 μ m切片。切片常規(guī)用ニ甲苯脫臘，經(jīng)各級(jí)こ醇至水洗ニ甲苯(I)5min — ニ甲苯(II)5min — 100%こ醇2min — 95%的こ醇Imin -80%こ醇Imin -75%こ醇Imin —蒸餾水洗2min。HE染色蘇木素染色5min，自來(lái)水沖洗。鹽酸こ醇分化30s(提插數(shù)下)。自來(lái)水浸泡15min或溫水(約50°C )5min。置伊紅液2min。常規(guī)脫水，透明，封片95%こ醇(I)min —95%こ醇(Il)lmin— 100%こ醇
(I)Imin — 100% こ醇(II) Imin — ニ甲苯石碳酸(3:1) Imin — ニ甲苯(I) Imin —ニ甲苯
(II)Imin—中性樹膠封固。剛果紅染色石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，加甲醇剛果紅染液10分鐘，傾去余液，加堿性酒精急速分化數(shù)秒，鏡下控制，流水沖洗，復(fù)染細(xì)胞核，常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固。(8).評(píng)價(jià)指標(biāo)
(8. I)水迷宮潛伏期、平臺(tái)區(qū)路徑長(zhǎng)度、總路徑的百分比、平臺(tái)區(qū)持續(xù)時(shí)間和進(jìn)入平臺(tái)次數(shù)。(8. 2)海馬組織形態(tài)改變。(9).統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
用SPSS11. 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(=土S)表示，計(jì)量資料應(yīng)用t檢驗(yàn)評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果。(10)、試驗(yàn)結(jié)果
(10.1)咖啡因?qū)ΠV呆大鼠平臺(tái)潛伏期的影響 表I咖啡因?qū)ΠV呆大鼠平臺(tái)潛伏期的影響(=土s，n=10)
權(quán)利要求
1.咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物中的用途。
2.如權(quán)利要求I或2所述的咖啡因的用途，其特征在于有效量為50mg 200mg。
3.如權(quán)利要求I或2所述的咖啡因的用途，其給藥方式為ロ服或注射。
4.如權(quán)利要求I所述的咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物片劑中的用途。
5.如權(quán)利要求I所述的咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物顆粒劑中的用途。
6.如權(quán)利要求I所述的咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物膠囊中的用途。
7.如權(quán)利要求I所述的咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物緩釋片劑中的用途。
8.如權(quán)利要求I所述的咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物緩釋微丸中的用途。
9.如權(quán)利要求I所述的咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物干混懸劑中的用途。
10.如權(quán)利要求I所述的咖啡因至制備治療老年癡呆癥藥物注射劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及咖啡因在制備老年癡呆癥藥物中的用途；本發(fā)明公開了咖啡因在制備治療老年癡呆癥藥物中的用途，為老年癡呆癥提供了更好的治療方法和藥物，和以前的治療老年癡呆癥的藥物相比，咖啡因具有副作用小、療效顯著的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K31/522GK102648914SQ20111004445
公開日2012年8月29日 申請(qǐng)日期2011年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月24日
發(fā)明者劉華, 劉海, 周學(xué)來(lái), 姜新東, 徐琨, 范敏華 申請(qǐng)人:杭州賽利藥物研究所有限公司, 浙江瑞達(dá)藥業(yè)有限公司, 海南普利制藥有限公司