專利名稱：泊洛沙姆用于預(yù)防和/或治療心力衰竭的用途的制作方法
泊洛沙姆用于預(yù)防和/或治療心力衰竭的用途此案是申請(qǐng)日為2007年8月1日、中國申請(qǐng)?zhí)枮?00780036781.8(國際申請(qǐng)?zhí)枮?PCT/US2007/017182)、發(fā)明名稱為“泊洛沙姆用于預(yù)防和/或治療心力衰竭的用途”的分案
申請(qǐng)°交叉參照相關(guān)申請(qǐng)此申請(qǐng)要求于2006年8月1日提交的美國序列號(hào)60/834，728的優(yōu)先權(quán)，本文包括上述申請(qǐng)的全部內(nèi)容。
背景技術(shù)：
心力衰竭(HF)是心臟不能維持充足的血液循環(huán)所導(dǎo)致的綜合征或臨床狀況。可為慢性或急性，并具有多種病因，包括缺血性梗塞或心肌梗塞。根據(jù)美國心臟協(xié)會(huì)(American Heart Association)，估算2005年美國心力衰竭的總直接和間接花費(fèi)為$279億元。一段時(shí)間，心力衰竭市場(chǎng)缺乏新藥，因?yàn)樾牧λソ呤袌?chǎng)藥物開發(fā)是晚期失敗率最高的之一。然而，由于人口老齡化和心血管病患者生存增加， 導(dǎo)致心力衰竭的流行和發(fā)病率增加。這導(dǎo)致對(duì)新治療的需求增加。美國心力衰竭市場(chǎng)預(yù)期從2004年的$13. 3億元增長到2011年的$43. 3億元。市售產(chǎn)品包括血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑例如依那普利(Vasotec)和雷米普利(Altace)、β -腎上腺素能阻斷劑 (ARBs)例如Troprol和Coreg、一氧化氮增強(qiáng)治療(BiDil)、血管緊張素II受體阻斷劑例如代文(Diovan)和坎地沙坦(Atacand)、鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑例如Inspra，和重組人B型利鈉尿肽(Natrecor)。還有一般正性肌力藥(inotropes)、血管擴(kuò)張劑和利尿藥。新出現(xiàn)的治療包括他汀類藥(statins)、伴隨鈣增敏劑和PDE性質(zhì)的正性肌力藥、重組紅細(xì)胞生成蛋白、α-人利鈉尿肽、加壓素拮抗劑、晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGE)交聯(lián)裂解劑，和黃嘌呤氧化酶抑制劑和其它。在美國，約有5百萬的心力衰竭患者，并且每年多于觀5，000人死于這種疾病 (美國心臟協(xié)會(huì)，Heart Diease and Stroke Statistics，2006 更新，Dallas，TX)?；颊叩臄?shù)量正在上升，預(yù)期在2011年達(dá)到1150萬(Frost & Sullivan，U. S. Heart Failure Therapeutics Markets, F666_52，2006 ；http://www. frost, com)。約 160 萬的患者患有紐約心臟學(xué)會(huì)分級(jí)III級(jí)或IV級(jí)的心力衰竭，包括具有中度至重度癥狀的人群。這些癥狀一般經(jīng)過3至10年從III級(jí)進(jìn)展到IV級(jí)，其中患者可能使用最佳的藥物治療，例如β -阻斷劑、1型血管緊張素II受體阻斷劑、血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶抑制劑、鈣通道阻斷劑和血管擴(kuò)張劑。當(dāng)其它的癥狀發(fā)生時(shí)，患者可能需要醫(yī)療裝置例如植入式起搏器或除顫器，并且可能需要左心室輔助裝置(LVADs)。除可能使用的LVADs外，這些治療延長生命，但不能阻止或逆轉(zhuǎn)心功能的衰退。在這種疾病的中期和晚期，患者經(jīng)常由于呼吸急促伴隨危險(xiǎn)的左心室射血分?jǐn)?shù)低(患有慢性心力衰竭或急性心力衰竭患者的急性代償失調(diào))而住院。這些患者需要IV類正性肌力藥，以增加心肌的收縮力，IV類利尿藥以降低液體負(fù)擔(dān)，和IV類血管擴(kuò)張劑以減少外周血管阻力(ACC 2005)。然而，患者出院時(shí)伴有心力衰竭體征和癥狀，且在出院后2個(gè)月內(nèi)，再入院率為約30%，并且死亡率為10%。見例如(iheorghiade，Μ.等人，Early Management of Acute Heart Failure Symptoms,CardiovascularEmergencies,2006，Omni ,Atlanta，2006年3月11日。因此，急需治療急性心力衰竭的更好的治療方法。心力衰竭表現(xiàn)為心肌功能障礙，例如心肌的異常收縮，例如舒張或收縮功能障礙。 雖然幾種治療方法可用于治療異常收縮，但是當(dāng)前沒有治療方法用于治療心肌舒張功能障礙，在約230萬患者中可見這種功能障礙。盡管心力衰竭有各種病因，但在大多數(shù)患者中其癥狀是高度相關(guān)的，并且收縮和舒張功能障礙共存。見，例如，Dyer，G. S. M.等人，Heart Failure, Pathophysiologyof Heart Disease (L. S. Lilly 編)，Lippincott Williams & ffilkins, Baltimore,MD, 2003, p. 234。心臟舒張功能障礙是由代償?shù)男氖倚呐K松弛(充盈) 導(dǎo)致，出現(xiàn)異常的心臟收縮和射血分?jǐn)?shù)。見，例如，Zile，M. R.等人，Circulation，2002，105 1387-1393。舒張性心力衰竭(DHF)最常伴隨冠狀動(dòng)脈疾病、高血壓、衰老和浸潤性心肌病。 當(dāng)前對(duì)于慢性心臟舒張功能障礙的治療沒有一致的指導(dǎo)方針，而對(duì)于收縮-相關(guān)心力衰竭有ACC/AHA治療作為指導(dǎo)方針。心臟功能障礙可伴隨心肌細(xì)胞膜中的肌養(yǎng)蛋白的喪失或缺少(Takahashi，Μ.等人’ Eur. J. Pharmacol. , 2005, 522 :84-93 ；Yasuda, S.等人，Supra ；Kaprielian, R. R.等人， Circulation, 2000，101:2586-2594 ；Toyo-Oka, Τ.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2004， 101 :7381-7385)。肌養(yǎng)蛋白是參與肌細(xì)胞中細(xì)胞組織并促進(jìn)肌原纖維和肌膜(肌細(xì)胞膜) 穩(wěn)定性的結(jié)構(gòu)蛋白。見，例如，1^口1^61土&11，1 ·! ·等人，Circulation，2000，101 :2586_2594。 遺傳性的肌養(yǎng)蛋白缺乏或異常肌養(yǎng)蛋白水平分別是Ducherme型肌營養(yǎng)不良(DMD)和 Becker型肌營養(yǎng)不良(BMD)的病因。在DMD和BMD中的心臟病表現(xiàn)為擴(kuò)張型心肌病(DCM)、 心律失?；騼烧呔?。在到6歲的青年患者中發(fā)病率為沈％，并且導(dǎo)致這些患者一般在20 歲早期死亡。約20%的DMD患者和50%的BMD患者死于心力衰竭?；加蠨MD或BMD的女性也存在心肌病的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于患者，發(fā)病年齡不清，但認(rèn)為是在成年發(fā)病。心臟損害范圍從無癥狀至重度心力衰竭。見，例如，American Academy of Pediatrics, ClinicalR印ort, Pediatrics,2005,116 :1569_1573。在肌細(xì)胞膜中的肌養(yǎng)蛋白也可被環(huán)境因素影響，例如病理性應(yīng)激，包括兒茶酚胺給藥、冠狀動(dòng)脈結(jié)扎導(dǎo)致的急性心肌缺血和心肌梗塞(MI)后的慢性心力衰竭。已明確在MI 后在心力衰竭中有細(xì)胞內(nèi)鈣(Cf2)的增加，伴隨鈣處理的變化，例如肌漿網(wǎng)(SR)細(xì)胞內(nèi)鈣去除受損，蘭諾定(ryanodine)受體外漏、鈉/鈣交換體活性的降低，和受磷蛋白活性的增加伴隨心臟松弛和收縮功能的損傷。見，例如，Morgan，J. P.等人，Circulation，1990，81 II121-III32 ；Iwanaga, Y.等人，J. Clin Invest. , 2004,113 :727-736 ；Zhang, X. -Q.等人， J. Appl. Physiol.，2002，93 :1925-1931 ；ffehrens, X. H.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006,103 :511-518 ；Angeja, B. G.等人，Circulation, 2003,107 :659_663。這些機(jī)理可作用于增加鈣，最初導(dǎo)致鈣蛋白酶(calpains)(鈣激活蛋白酶)和重塑通路的激活。鈣蛋白酶的激活可導(dǎo)致膜的肌養(yǎng)蛋白的最初喪失，導(dǎo)致膜不穩(wěn)定并易受收縮性應(yīng)激影響。心力衰竭患者和動(dòng)物心力衰竭模型的心肌細(xì)胞膜的肌養(yǎng)蛋白和肌養(yǎng)蛋白-相關(guān)蛋白的喪失已有充分記載。見，例如，Kawada，T.等人，Pharmacol. Therap.，2005，107 31-43 ；Kaprielian, R.R.等人，Circulation，2000，101 :2586-2594)。這些蛋白形成復(fù)合物，提供了對(duì)肌膜過度膨脹的機(jī)械阻力。這些蛋白的喪失與攝取膜不滲透的染料伊文思藍(lán)(EvansBlue)的心肌細(xì)胞數(shù)量的增加相關(guān)。見，例如，Takahashi, M.等人，Eur. J. Pharmacol.，2005，522 :84_93。此外，心肌炎模型中表明鈣蛋白酶的增加，其中肌養(yǎng)蛋白的喪失與功能缺陷相關(guān)(Lee, G. -H.等人，Circ. Res.，2000，87 :489-495)。已表明在肌膜中的撕裂(tears)是鈣進(jìn)入細(xì)胞的導(dǎo)管，并增加細(xì)胞內(nèi)鈣。已提出導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣持續(xù)增加的應(yīng)激直接或間接的導(dǎo)致晚期心力衰竭，這之間存在惡性循環(huán)。見， 例如，Kawada, T.等人，Pharmacol. Therap.，2005，107 :31_43。在此循環(huán)中，持續(xù)增加的鈣激活鈣蛋白酶分裂肌養(yǎng)蛋白。這導(dǎo)致更多的膜不穩(wěn)定性，更多的撕裂和更多的鈣。由于要求增加的作用導(dǎo)致剩余的心肌細(xì)胞是應(yīng)激的，因此它們也進(jìn)入此循環(huán)。ACE抑制劑和ARBs是已表現(xiàn)出改善心臟血流動(dòng)力學(xué)和患有心力衰竭的患者存活的藥物。在心力衰竭的大鼠MI模型中，MI后，推測(cè)通過降低總鈣蛋白酶含量，這些藥物都表現(xiàn)出阻止心肌細(xì)胞的膜碎片的肌養(yǎng)蛋白水平的降低。當(dāng)梗塞后，用這些藥物慢性治療大鼠 2-8 周時(shí)表現(xiàn)出這種作用。見 Takahashi，Μ.等人，Cardiovasc. Res. 2005,65 :356_365。細(xì)胞內(nèi)鈣的持續(xù)增加導(dǎo)致信號(hào)通路的激活也是確定的，隨后導(dǎo)致心臟的不適重塑，導(dǎo)致功能性問題。見，例如，Molkentin, J. D.等人，Cell, 1998,93 :215-228 ；ffilkins, B. J.等人，Circulation Research, 2004，94 :110-8)?？傊○B(yǎng)蛋白的喪失和膜的不穩(wěn)定性導(dǎo)致心力衰竭中的心肌功能障礙。發(fā)明概述本發(fā)明一方面涉及治療或預(yù)防受試者心力衰竭的方法，其中所述方法包括向有此需要的受試者給藥治療有效量的泊洛沙姆(Poloxamer)。如本文所用，術(shù)語“治療有效量” 指可導(dǎo)致受試者病情或臨床作用改善的泊洛沙姆的量。如本文所用，術(shù)語“受試者”指哺乳動(dòng)物，并且包括例如人、大鼠或馬。在一些實(shí)施方案中，心力衰竭是缺血性心力衰竭。在一些實(shí)施方案中，心力衰竭是由任何除肌養(yǎng)蛋白的遺傳性喪失之外的應(yīng)激物引起的。在一些實(shí)施方案中，心力衰竭是慢性或急性心力衰竭。在一些實(shí)施方案中，泊洛沙姆是泊洛沙姆188(下文表示為“？_188”)或泊洛沙姆 407(下文表示為叩-407”)。在一些實(shí)施方案中，泊洛沙姆恢復(fù)心力衰竭(例如，慢性心力衰竭)所影響的組織中的細(xì)胞膜的肌養(yǎng)蛋白水平。組織和膜的實(shí)例分別包括心肌和肌膜。在一些實(shí)施方案中，向有此需要的受試者給藥泊洛沙姆1至沈周，或所需要的時(shí)期，這由患有心力衰竭的受試者的病情決定。在一些實(shí)施方案中，泊洛沙姆每1至15周給藥1次。例如，泊洛沙姆可每1、2或 12周給藥1次。在一些實(shí)施方案中，每劑量(或給藥)泊洛沙姆約0. 15至約480mg/kg (例如，約 1至15mg/kg)，基于受試者體重。每劑量具體的實(shí)例包括約l、4.6、10、100、400mg/kg，和 460mg/kgo本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及改善心力衰竭受試者的心肌細(xì)胞膜功能的方法，其中該方法包括向受試者給藥治療有效量的泊洛沙姆。術(shù)語“改善膜的功能”包括改善膜結(jié)構(gòu)，并因此預(yù)防膜撕裂或滲漏。適合的泊洛沙姆的實(shí)例包括P-188和P-407。本發(fā)明的另一方面涉及用于恢復(fù)心力衰竭受試者的心肌細(xì)胞膜的完整性的方法， 其中該方法包括向受試者給藥治療有效量的泊洛沙姆。適合的泊洛沙姆的實(shí)例包括P-188和 P-407。此外，本發(fā)明的另一方面涉及用于治療患者伴隨肌養(yǎng)蛋白缺乏的骨骼肌疾病的方法，其中該方法包括向患者給藥治療有效量的泊洛沙姆。適合的泊洛沙姆的實(shí)例包括P-188 和 P-407。此外，本發(fā)明的另一方面涉及用于在心力衰竭患者中降低細(xì)胞內(nèi)鈣水平并且保持正常的細(xì)胞內(nèi)鈣水平的方法，其中該方法包括向患者給藥治療有效量的泊洛沙姆。適合的泊洛沙姆的實(shí)例包括P-188和P-407。此外，本發(fā)明的另一方面涉及在向患者給藥治療有效量的泊洛沙姆的幾小時(shí)內(nèi)， 左心室的快速和緩慢重塑。適合的泊洛沙姆的實(shí)例包括P-188和P-407。本發(fā)明還提供了在心力衰竭患者中用于降低左心室終末舒張壓(LVEDP)和增加左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)的方法，該方法包括向患者給藥泊洛沙姆。適合的泊洛沙姆的實(shí)例包括 P-188 和 P-407。本發(fā)明的范圍也包括用于修復(fù)除心臟外的肌肉組織的泊洛沙姆(例如，P-188或 P-407)的用途。肌肉組織可為，例如，骨骼肌。本發(fā)明還提供了通過使用不超過4. 6mg/kg的治療量的泊洛沙姆，降低LVEDP，這與增加LVEF的作用是獨(dú)立的。除上述給藥泊洛沙姆例如P-188或P-407外，本發(fā)明的方法還可包括與其它物質(zhì)的組合，例如ACE抑制劑、ARB、β-腎上腺素能阻斷劑、一氧化氮增強(qiáng)治療、鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑、重組人B-型利鈉尿肽、鈣通道阻斷劑、血管擴(kuò)張藥、利尿藥和正性肌力藥。本發(fā)明還提供了在受試者中密封劑(sealant)的細(xì)胞膜密封活性的測(cè)量方法， 所述方法包括給予受試者密封劑，測(cè)量并比較在給予受試者密封劑之前血清中滲漏蛋白 (leakage protein)的水平和給予受試者密封劑之后相同滲漏蛋白的水平。在一些實(shí)施方案中，在給予受試者密封劑之前滲漏蛋白的水平比給予受試者相同的密封劑之后高(例如，中度升高例如200%，或顯著升高例如10倍)。在一些實(shí)施方案中，密封劑是泊洛沙姆(例如，P-188或P-407)。在一些實(shí)施方案中，受試者患有心力衰竭。在一些實(shí)施方案中，滲漏蛋白來自受試者心臟的心肌細(xì)胞(例如，N末端B型利鈉尿月太原(N-terminal pro-B-type natriuretic peptide)、心肌肌 丐蛋白 T(cardiac troponin Τ)、肌鈣蛋白 I (troponin I)或肌酸激酶的 MB 亞型(MBisoform of creatine kinase))0下文為本發(fā)明的詳述，僅用作說明目的，并且不應(yīng)解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。所有出版物在此全部引用作為參考。附圖簡述

圖1表明P-188對(duì)心肌細(xì)胞順應(yīng)性和細(xì)胞內(nèi)鈣的作用。圖2表明P-188對(duì)左心室終末舒張壓的作用。用4.6mg/kg P188治療的中度至重度心力衰竭中的LV終末舒張壓。在假手術(shù)組、心力衰竭未治療動(dòng)物組(CHF無Rx)、用4.6mg/ kg P188治療的心力衰竭組(CHF+4. 6)和用4. 6mg/kg治療的假手術(shù)組中的LVEDP (mmHg)。*P < 0. 05，與 CHF 無 rx 組和 CHF4. 6 組相比；< 0. 05，與CHF無Rx組和假手術(shù)組士 4. 6mg/kg組相比。數(shù)據(jù)為均值士SE，假手術(shù)組η = 4，CHF組η = 6，4. 6假手術(shù)組和CHF組η = 11。 圖3表明Ρ-188對(duì)左心室射血分?jǐn)?shù)的作用。用標(biāo)準(zhǔn)和低劑量Ρ188治療的中度-重度心力衰竭動(dòng)物中的LVEF。在MI后，用標(biāo)準(zhǔn)和低劑量(4. 6mcg/kg)治療8周，在中度-重度心力衰竭動(dòng)物中的LVEF(百分?jǐn)?shù))。
數(shù)據(jù)為均值士SE，假手術(shù)組η = 4，CHF組η = 6，標(biāo)準(zhǔn)組n = 6，4. 6組η = 11。 *Ρ<0· 05，與所有組相比; **Ρ < 0. 05，與 CHF 組相比。
圖4表明Ρ-188對(duì)左心室終末舒張直徑的作用。用標(biāo)準(zhǔn)和低劑量Ρ188治療的中度-重度心力衰竭動(dòng)物中LV終末舒張直徑。在MI后，用標(biāo)準(zhǔn)和低劑量(4. 6mcg/kg)P188治療8 周的中度-重度心力衰竭動(dòng)物中LV終末舒張直徑。
數(shù)據(jù)為均值士 SE，假手術(shù)組η = 4，CHF和標(biāo)準(zhǔn)組η = 6，低劑量組η = 11。 *Ρ < 0. 05，與CHF和標(biāo)準(zhǔn)劑量組相比。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了通過使用治療有效量的泊洛沙姆(例如，Ρ-188)治療或預(yù)防受試者心力衰竭的方法。這基于發(fā)現(xiàn)泊洛沙姆(例如，Ρ-188)改善由MI引起的心力衰竭(由于它們與膜損傷區(qū)域的相互作用而產(chǎn)生，其中引起疏水區(qū)被暴露)中的心臟血流動(dòng)力學(xué)，恢復(fù)細(xì)胞膜的完整性。泊洛沙姆是非離子型嵌段共聚物，由聚氧丙烯的中心疏水鏈和側(cè)面的聚氧乙烯的兩個(gè)親水鏈組成。因?yàn)榭啥ㄖ乒簿畚锴抖蔚拈L度，所以存在許多性質(zhì)稍不同的不同型號(hào)的泊洛沙姆。這些聚合物通常稱為泊洛沙姆，后跟數(shù)字，以表明所討論的聚合物(例如泊洛沙姆407或泊洛沙姆188)。泊洛沙姆188(Ρ_188)是泊洛沙姆家族中的一種。它是非離子型三嵌段共聚合物，化學(xué)式為聚(氧乙烯)‘聚(氧丙烯)3。_聚(氧乙烯)8Q，分子量約8，400道爾頓。這種化合物有幾個(gè)商品名，例如Pluronic F68、RheothRx和FL0C0R。它的一些生物學(xué)用途包括作為幾種市售輕瀉藥中的軟便劑、作為化妝品中的成分，和作為藥物乳化劑。見，例如，Ho, H. -0.等人，J. Controlled Release, 2000,68 :433-440 已表明 P-188 插入脂質(zhì)單層(Maskarinec, S. A.，等人，Biophys. J.，2002，82 1453-1459)，并修復(fù)電損傷的細(xì)胞膜(Lee，R. C.，等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992,89 :4524-4528) 也用于控釋藥物的遞送，用于使腫瘤對(duì)化療敏化(Kabanov, Α. V等人，Adv. Drug Delivery Rev. ,2002,54 759-779)，并作為基因治療的載體。P-188已處于鐮狀紅細(xì)胞疾病的血管阻塞危象的III 期臨床實(shí)驗(yàn)(Adams-Graves, P.等人，Blood, 1997,90 :2041-2046 ；Emanuele, R. M.，Exp. Opin. Invest. Drugs，1998，7 :1193-1200)，并且在患有急性MI (CORE)患者中評(píng)價(jià)溶栓活性 (Schaer, G. L.,等人，Circulation, 1996,94 :298-307 ；Chareonthaitawe, P.,等人，Heart, 2000,84 :142-148)。在這些實(shí)驗(yàn)中，P-188的有效性是不明確的。當(dāng)急性給予P-188高達(dá) 72小時(shí)時(shí)，P-188是安全的，并且在反復(fù)暴露于兒童和成年人中是良好耐受的(高達(dá)6次暴露)。見，例如，Gibbs，W. J.等人，Ann. Pharmacother. ,2004,38 :320-3 。在用 RheothRx(較低純度的P-188)的研究中，最顯著的不良反應(yīng)為腎功能障礙，然而，在使用更純形式的 FL0C0R中沒有發(fā)現(xiàn)(Emanuele，R. Μ.，supra)。P-188在嚙齒類的血漿中的半衰期是7. 5小時(shí)，并且在人受試者中是18小時(shí)，在生物膜上的半衰期尚未確定。藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究已表明低于5%的純化的P-188代謝為更高分子量和較低清除率的單一代謝物。腎清除是消除的主要途徑。P-188是非致突變的，并且不引起染色體異常。 泊洛沙姆407 (P-407)是泊洛沙姆更常用類型共聚物的親水性非離子型表面活性劑。P-407三嵌段共聚物，含兩個(gè)親水性的嵌段(聚乙二醇)，它們被疏水性嵌段(聚丙二醇)分開。兩個(gè)PEG嵌段的每個(gè)的大致長度為約101個(gè)重復(fù)單元，而丙二醇嵌段的長度大約為56個(gè)重復(fù)單元。這種特殊的化合物也稱為商品名Lutrol F_127(BASF公司)。
不同級(jí)別的泊洛沙姆(包括P-188和P-407)可容易地從商業(yè)來源獲得，例如，BASF。此外，熟練的聚合物化學(xué)家也可合成所需性質(zhì)和分子量的泊洛沙姆，并且通過本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行純化。見，例如，美國專利號(hào)RE36，665，RE 37, 285, RE 38,558， 6，747，064，6，761，824dP6，977，045。&lReeve，L.E·，Poloxamers ；Their Chemistry and Applications, in Handbook ofBiodegradable polymers,Domb, A. J.等人(編)，Hardwood AcademicPublishers, 1997。所有出版物在此全部引用作為參考?？赏ㄟ^任何合適途徑向有此需要的受試者給藥泊洛沙姆，例如，口服或輸注(靜脈內(nèi))。本領(lǐng)域已知的實(shí)驗(yàn)可用于確定泊洛沙姆在治療心力衰竭中的有效性，例如，通過測(cè)量 LVEDP 或 LVEF。提供下列實(shí)施例以說明本發(fā)明并不用于以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1 小鼠體外和體內(nèi)的膜完整性和血流動(dòng)力學(xué)研究研究完整、單個(gè)、成人的心肌細(xì)胞的主動(dòng)和被動(dòng)力量(force)發(fā)育和膜中細(xì)胞內(nèi)鈣的功能實(shí)驗(yàn)方法在本領(lǐng)域是已知的。見，例如，Yasuda，S.等人，supra。此研究用于確定在單個(gè)的分離的mdx心肌細(xì)胞中細(xì)胞順應(yīng)性的主要缺陷，這由對(duì)拉伸介導(dǎo) (stretch-mediated)的膜不穩(wěn)定性和鈣依賴的過度收縮的易感性增加證明。如圖1所示，左圖A，在舒張期的肌節(jié)長度(SL)的生理范圍內(nèi)(1. 80-2. 20mm)， P-188完全恢復(fù)mdx心肌細(xì)胞順應(yīng)性和細(xì)胞內(nèi)鈣至對(duì)照水平。如圖1所示，左圖B，硝苯地平(Nifedipine)，L-型鈣通道阻斷劑，不能阻止拉伸引起的細(xì)胞鈣水平的升高，表明鈣水平通過不同的機(jī)理升高。由于鈣漏通道(calcium leak channels)不被拉伸激活，所以鈣必然通過另一種機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞，例如，通過膜上的顯微撕裂。使用脂質(zhì)染料實(shí)驗(yàn)證明了此觀點(diǎn)。見，例如，Yasuda，S.等人，supra。對(duì)從金毛尋回犬(golden retriever)肌肉肌養(yǎng)蛋白(GRMD)動(dòng)物分離的心室肌細(xì)胞的前期研究(見圖1，中間圖)表明被動(dòng)張力-拉伸曲線與對(duì)照犬心肌細(xì)胞相比顯著向上向左移動(dòng)。這證明來自mdx小鼠的心肌細(xì)胞中的顯著的細(xì)胞順應(yīng)性缺陷比GRMD犬中顯著得多。此外，表明P-188 (150 μ Μ)恢復(fù)細(xì)胞的順應(yīng)性，這可由被動(dòng)張力-拉伸(passivetension-extension)曲線的形狀和位置表明，其幾乎完全與對(duì)照相同(見圖1，右圖，A部分)。因此，P-188作用的強(qiáng)度比在小鼠心肌細(xì)胞中大。如圖1所示，右圖，A和B，P-188阻止mdx小鼠體內(nèi)心臟功能障礙，這與P-188阻止拉伸誘導(dǎo)的膜損傷的細(xì)胞作用一致。在mdx小鼠中，基線左心室血液動(dòng)力學(xué)行為被抑制， 包括左心室終末舒張容量(LVEDV)減少。P-188靜脈內(nèi)輸注增加LVEDV至對(duì)照心臟水平。下表1所示是輸注后血液動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)的總結(jié)。表1中提供的血液動(dòng)力學(xué)的變化指數(shù)表明急性P-188給藥的主要作用是恢復(fù)終末舒張容量，不顯著改變終末舒張壓或其它參數(shù)，這與P-188對(duì)改善體外mdx心肌細(xì)胞順應(yīng)性的作用一致(見圖1，左圖)。心血管應(yīng)激物可導(dǎo)致mdx小鼠的急性心肌病和衰竭(Danialou，G.等人，F(xiàn)ASEB J.，2001，15 :1655-1657)。其中一種應(yīng)激物，急性多巴酚丁胺應(yīng)激攻擊(challenge)，用于確定是否P-188可阻斷這些體內(nèi)事件。在30分鐘的應(yīng)激-檢測(cè)方案中，未處理的mdx小鼠對(duì)多巴酚丁胺輸注的血液動(dòng)力學(xué)響應(yīng)非常弱，且急性心臟衰竭顯著發(fā)生(見圖1，右圖，C)。使用P-188的mdx動(dòng)物預(yù)治療立即改善對(duì)多巴酚丁胺輸注的血液動(dòng)力學(xué)響應(yīng)并保護(hù)多巴酚丁胺-誘導(dǎo)的體內(nèi)急性心力衰竭(P = 0. 005)。這些結(jié)果表明急性心力衰竭患者的P-188治療改善心臟功能，并且改善正性肌力功能支持(inotropic functional support)。表l.mdx小鼠中基線血液動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)總結(jié)(數(shù)據(jù)為均數(shù)士SEM).
權(quán)利要求
1.測(cè)定受試者中密封劑的細(xì)胞膜封閉活性的方法，包括測(cè)定和比較在給予受試者密封劑前血清中滲漏蛋白的水平和在給予試者密封劑后相同滲漏蛋白的水平。
2.如權(quán)利要求1的方法，其中在給藥密封劑前的滲漏蛋白的水平比給藥相同密封劑后的滲漏蛋白的水平高。
3.如權(quán)利要求1的方法，其中所述密封劑是泊洛沙姆。
4.如權(quán)利要求3的方法，其中所述泊洛沙姆是P-188或P-407。
5.如權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者患有心力衰竭。
6.如權(quán)利要求5的方法，其中所述滲漏蛋白來自受試者心臟的心肌細(xì)胞。
7.如權(quán)利要求6的方法，其中所述滲漏蛋白是N末端B型利鈉尿肽原、心肌肌鈣蛋白 T、肌鈣蛋白I或肌酸激酶MB亞型。
全文摘要
本發(fā)明提供了治療或預(yù)防受試者心力衰竭的方法，所述方法包括向有此需要的受試者給藥治療有效量的泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆188)。
文檔編號(hào)A61K31/77GK102218077SQ201110047718
公開日2011年10月19日 申請(qǐng)日期2007年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月1日
發(fā)明者布魯斯.E.馬克哈姆 申請(qǐng)人:普里克薩斯醫(yī)藥股份有限公司