專利名稱：一種紅花有效組分制備方法與用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬中藥領域，涉及一種治療心血管疾病的中藥提取物，具體地說涉及一種 從紅花中提取有效組分的制備方法以及其制藥用途。
背景技術：
心血管疾病是危害人類健康的第一殺手，近年來，隨著我國人口老年化以及人們 工作、生活、飲食結構及環(huán)境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生率也逐年增多，嚴重 威脅著人民的身心健康。天然產物中許多活性物質具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已 開發(fā)成治療冠心病和心絞痛的新藥。因而從天然產物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活 性的有效物質，是發(fā)現(xiàn)、開發(fā)新藥的有效途徑之一。我國藥用生物資源十分豐富，其生理活 性物質是研究和發(fā)現(xiàn)新藥先導化學物，開發(fā)新藥的天然寶庫。目前，我國從天然產物中提取 活性物質，用于開發(fā)成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產物中提取活 性物質，開發(fā)成具有抗心肌缺血，用于治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應用價值和廣 闊發(fā)展前景。紅花為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的管狀花。性味性溫，味辛，具 有活血通徑、散瘀止痛的功效。含有紅花黃色素(Safflor yellow)、紅花苷(Carthamin)、 15 α，20β_ 二 羥基- Δ 4-娠烯 _3_ 酮(15 α，20 β -Dihydroxy-Δ 4-pregnen-3_one)、 木犀草素-7-葡萄糖苷(Luteolin-7-glucoside)、紅花醌苷(carthamone)、新紅花苷 (neo-cqrthamin)、腺嘌呤核苷(adenosine)、黃色素(safflor yellow Α)、山柰酚、槲皮素 及山柰酚-3-葡萄糖苷、槲皮素-3-葡萄糖苷、桷皮素-7-葡萄糖苷、山柰酚-3-蕓香糖苷 和蘆丁(rutin)、紅花多糖等化合物?，F(xiàn)代藥理研究表明紅花水提取物及紅花水溶性混合物-紅花黃色素有增加冠脈 血流量及心肌營養(yǎng)性血流量的作用，在兔、大鼠、犬等造成實驗性心肌缺血或心肌梗塞的動 物模型上，紅花及其制劑均有不同程度的對抗作用。紅花可使因垂體后葉素引起的大鼠或 家兔急性心肌缺血有明顯保護作用；可使反復短暫阻斷冠狀動脈血流造成麻醉犬急性心肌 缺血的程度明顯減輕，范圍縮小，心率減慢，并保護急性心肌梗塞區(qū)的邊緣，縮小梗塞范圍 及降低邊緣區(qū)心電圖ST段抬高的幅度，從而改善缺血心肌氧的供求關系。紅花具有非常顯 著地抑制ADP誘導的家兔血小板聚集作用，并對ADP已聚集的血小板也有非常明顯的解聚 作用。紅花尚可明顯延長家兔血漿復鈣時間、凝血酶原時間和凝血時間。表明它能同時影 響體內和體外的凝血系統(tǒng)。此外，紅花油有降低血脂作用。紅花具有以上對心血管系統(tǒng)的 明顯藥理作用，因此，從紅花中分離出有效組分，開發(fā)出治療心血管疾病的現(xiàn)代中藥具有重 要的意義。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種紅花有效組分的制備方法，通過以下步驟獲得將紅 花藥材加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進行拌樣，用正相硅膠柱對其進行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I，棄 之，然后改用氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備 液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動相為水和 乙腈，梯度洗脫。具體制備步驟如下取紅花藥材加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流 1小時，提取2次，濾液合并得提取液。將提取液濃縮成浸膏，并將其與硅膠進行拌樣，用正 相硅膠柱對其進行分離，首先用體積比為50:1的石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液 I，棄之，然后改用體積比為10:1的氯仿和甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃 縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為 制備柱(ZORBAX SB C18 ； 9. 4mmχ 250mm, 5 μιη ),流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min時，流動相A為70%的水， 流動相B為30%的乙腈溶液；18 min時，流動相A為60%的水，流動相B為40%的乙腈溶 液；流速為3ml/min，柱溫為室溫；經制備液相色譜分離，在時間段10. 2-12. 9min收集溶液， 溶液經濃縮干燥后得到有效組分。本發(fā)明的另一個目的是提供所述紅花有效組分在制備治療心血管疾病的藥物中 的應用。經藥理實驗證明，本發(fā)明提供的紅花有效組分對心肌細胞有保護作用。本發(fā)明的紅花有效組分可以作為活性成分，加入藥劑學上接受的輔料，按照藥劑 學上記載的制劑的制備方法制成制劑。所述的制劑包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片劑、沖劑、散劑、口服液、糖衣 片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、 丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。本發(fā)明的紅花有效組分及其制劑可在制備治療、預防心血管疾病藥物中應用。本 發(fā)明提供的制備方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在生產中更易于藥物的質量 控制。
具體實施例方式下面將結合實施例進一步詳細說明本發(fā)明的實質內容和有益效果，該實施例僅用 于說明本發(fā)明而非對本發(fā)明的限制。實施例一紅花有效組分的制備
將紅花藥材加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取得提取液，將提取液濃縮成浸膏，并將其與 硅膠進行拌樣，用正相硅膠柱對其進行分離，首先用石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫 液I，棄之，然后改用氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品； 用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動相 為水和乙腈，梯度洗脫。在10. 2-12. 9min時間段收集溶液，濃縮干燥后得到有效組分。實施例二紅花有效組分的制備
取紅花藥材250g加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取2次，濾 液合并得提取液I。將提取液濃縮成浸膏，用乙醇溶解浸膏，并將其與硅膠進行拌樣，用正 相硅膠柱對其進行分離，首先用體積比為50:1的石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液 I，棄之，然后改用體積比為10:1的氯仿和甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的樣品制備色譜的分離條件色譜柱為制 備柱(ZORBAX SB C18 ； 9. 4mm ‘ 250mm, 5 μπι )，流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下 Omin時，流動相A為70%的水，流動相B為30%的乙腈溶液；18 min時，流動相A為60% 的水，流動相B為40%的乙腈溶液；流速為3ml/min，柱溫為室溫；經制備液相色譜分離，在 10. 2-12. 9min時間段收集溶液，溶液經濃縮干燥后得到有效組分。實施例三滴丸制劑的制備
取紅花有效組分0. 5g與10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加熱熔融，化料后移至滴丸 滴灌中，藥液滴至6、°C液體石蠟中，除油，制得滴丸400粒。實施例四凍干粉針劑的制備
取紅花有效組分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸鈉0. 9g和蒸餾水1000ml，上述組分混合 均勻后，分裝400支，冷凍干燥，即得。實施例五紅花組分的活性評價實驗
1.紅花組分對H》2損傷心肌細胞的保護作用
體外培養(yǎng)H9C2心肌細胞，培養(yǎng)液為DMEM (高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%雙 抗。取對數生長期細胞置于96孔細胞培養(yǎng)板上，恒溫培養(yǎng)M h后，加入200 μ mol/mL H2O2 損傷心肌細胞30 min,再加入終濃度為50 μ g/mL的紅花組分孵育M h，采用MTT法測定細 胞活力。結果表明，該組分對H2O2損傷心肌細胞的保護率為14.5%。2.紅花組分對缺氧復氧損傷心肌細胞的保護作用
體外培養(yǎng)H9C2心肌細胞，培養(yǎng)液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%雙 抗。取對數生長期細胞置于96孔細胞培養(yǎng)板上，恒溫培養(yǎng)M h后，在缺氧小室中培養(yǎng)6 h。 缺氧結束后，取出細胞培養(yǎng)板加入經無糖Hank’ s稀釋的終濃度為50 μ g/mL的紅花組分，在 正常培養(yǎng)條件下孵育6 h，取細胞培養(yǎng)上清液測定乳酸脫氫酶(LDH)含量。結果表明，該組 分對缺氧復氧損傷的心肌細胞保護率為13. 7%。
權利要求
1.一種紅花有效組分，其特征在于，通過以下步驟獲得將紅花藥材加入體積比為1:1 的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取2次，合并濾液得提取液，將提取液濃縮成浸膏， 用乙醇溶解浸膏，并將其與硅膠進行拌樣，用正相硅膠柱對其進行分離，首先用體積比為 50:1的石油醚和乙酸乙酯作為洗脫劑，得洗脫液I，棄之，然后改用體積比為10:1的氯仿和 甲醇作為洗脫劑，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮干燥后得樣品；用制備液相色譜繼續(xù)分離 得到的樣品；制備色譜的分離條件色譜柱為半制備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，流 速為3ml/min，柱溫為室溫。
2.根據權利要求1所述的一種紅花有效組分，其特征在于，半制備柱是ZORBAXSB C18 ； 9. 4mm ^iOmm, 5 μ ι,流動相為水 A 和乙腈B，梯度洗脫程序如下=Omin, 30% B，18 min,40%B ；流速為3 ml/min，柱溫為室溫；經 制備液相色譜分離，在10. 2-12. 9 min時間段收集溶液，溶液經濃縮干燥后得到有效組分。
3.根據權利要求1所述的一種紅花有效組分在制備治療心血管疾病的藥物中的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述藥物由紅花有效組分加入藥劑學上 可接受的輔料，按照藥劑學上記載的制劑制備方法制成。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述的制劑包括液體制劑或固體制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種紅花有效組分的制備方法及用途，藥材通過加熱提取，濃縮，硅膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮干燥，再用制備液相色譜繼續(xù)分離，收集溶液，溶液經濃縮干燥后得到有效組分。本發(fā)明提供的紅花有效組分可在制備治療、預防心血管疾病藥物中的應用。本發(fā)明方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在生產中更易于藥物的質量控制。
文檔編號A61P9/10GK102125592SQ201110059030
公開日2011年7月20日 申請日期2011年3月13日 優(yōu)先權日2011年3月13日
發(fā)明者李云飛, 王毅, 程翼宇, 葛志偉 申請人:浙江大學