專利名稱：一種中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，具體涉及一種中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
苦黃注射劑是經(jīng)典中藥注射劑，具有穩(wěn)定和良好的臨床療效。處方源于《傷寒論》 中的“茵陳蒿湯”(茵陳、大黃、山桅)。此方歷來被公認(rèn)為治療濕熱黃疸的名方?？帱S注射液在此方基礎(chǔ)上，由茵陳45 120重量份、春柴胡45 120重量份、苦參15 40重量份、 大黃20 50重量份、大青葉35 100重量份制成的靜脈注射液。該注射劑最早于96年批準(zhǔn)上市銷售，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)(新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第30冊(cè))，為常熟雷允上制藥有限公司(前身國(guó)營(yíng)常熟制藥廠)開發(fā)的一種有效治療黃疸型病毒性肝炎的中藥注射劑(藥品批準(zhǔn)文號(hào)為國(guó)藥準(zhǔn)字Z10960004)，苦黃注射劑銷售近20多年來，臨床效果明顯，為肝病患者帶來了康復(fù)的機(jī)會(huì)，苦黃注射劑活性成分主要是黃酮類、蒽醌類及生物堿類化合物，但是目前苦黃注射劑活性成分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法只能一個(gè)一個(gè)對(duì)活性成分進(jìn)行單獨(dú)檢測(cè)，檢測(cè)工作繁瑣，檢測(cè)效率低，且檢測(cè)的活性成分?jǐn)?shù)量有限，不能很好的反應(yīng)制劑的質(zhì)量，且目前市場(chǎng)上同類產(chǎn)品的競(jìng)爭(zhēng)日益劇烈，因此為了維護(hù)患者的利益，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)之上研究設(shè)計(jì)出能同時(shí)檢測(cè)苦黃注射劑中黃酮類、蒽醌類及總生物堿類化合物的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能同時(shí)檢測(cè)苦黃注射劑中黃酮類、蒽醌類及總生物堿類化合物的新檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法可以客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)苦黃注射劑的質(zhì)量，對(duì)控制苦黃注射劑的質(zhì)量和保證療效具有重要意義。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所提供的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法， 包括以下步驟(1)高效液相色譜法測(cè)定黃酮類和蒽醌類化合物，精密吸取中藥苦黃注射劑 10μ 1，注入高效液相色譜儀分析120分鐘，色譜條件為色譜柱反相C18柱，流動(dòng)相Α相為濃度乙酸的水溶液，B相為體積比1 80 19的乙酸-乙腈-水，線性梯度洗脫，流速為0. 5mL/min ；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為262nm，柱溫為30°C。(2)高效液相色譜法測(cè)定生物堿類化合物，精密吸取中藥苦黃注射劑10μ 1，注入高效液相色譜儀分析70分鐘，色譜條件為色譜柱反相C18柱，流動(dòng)相Α相為體積比為 100 0. 1 0. 1水-四氫呋喃-氨水，B相為甲醇，線性梯度洗脫，流速0.8ml/min，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫為30°C。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，以上步驟(1)所述的黃酮類和蒽醌類化合物的檢測(cè)方法，其中線性梯度洗脫程序?yàn)?分鐘時(shí)流動(dòng)相A B 的比例為98 2，20分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為84 16，30分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為80 20，90分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為40 60，100分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為0 100，120分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為0 10。中藥苦黃注射劑含有大黃、春柴胡、大青葉、茵陳中藥成分，以上4味中藥含有大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、大黃酚等蒽醌類活性成分，并含有澤蘭黃酮、薊黃素、蘆丁等黃酮類活性成分。為了能高效的同時(shí)檢測(cè)以上不同結(jié)構(gòu)的化合物，減少檢測(cè)工作量，本發(fā)明經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)對(duì)流動(dòng)相組成、流動(dòng)相的洗脫程序、流速、檢測(cè)波長(zhǎng)及色譜柱進(jìn)行蹄選。1、本發(fā)明針對(duì)以上兩類活性成分，通過全波長(zhǎng)掃描和3D等高線觀察，確定蒽醌和黃酮兩類化合物在262nm處均有較大的吸收，因此本發(fā)明采用作為檢測(cè)波長(zhǎng)，可以準(zhǔn)確靈敏的檢測(cè)到蒽醌和黃酮兩類化合物。2、由于以上蒽醌類化合物和黃酮類化合物的極性存在較大的相似，因此在色譜柱上同時(shí)分離比較困難，本發(fā)明首先對(duì)流動(dòng)相的組成進(jìn)行了大量篩選，確定采用A、B兩相分別為濃度乙酸的水溶液，體積比1 80 19的乙酸-乙腈-水作為流動(dòng)相組成，由于部分蒽醌類化合物如大黃酸、大黃素等，含有羧基或多個(gè)酚羥基，具有一定的酸性，容易電離成離子狀態(tài)，導(dǎo)致分離和洗脫效果差，因此本發(fā)明在流動(dòng)相中添加一定量的乙酸調(diào)節(jié)PH 值，但是流動(dòng)相的酸性太強(qiáng)，又會(huì)導(dǎo)致酸性蒽醌或黃酮類化合物溶解性差，甚至?xí)恋矶氯V柱，因此調(diào)整流動(dòng)相到合適的PH值非常重要，本發(fā)明通過不同乙酸加入量的篩選，確定A、B兩相中最佳的乙酸濃度，可以有效防止如大黃酸、大黃酚等酸性成分的分離，從而可以保證在色譜柱上達(dá)到很好的分離效果，不會(huì)出現(xiàn)峰重疊或拖尾現(xiàn)象。本發(fā)明在確定流動(dòng)相后，經(jīng)色譜柱分析表明對(duì)于極性很類似的化合物，如大黃酚、大黃素甲醚等不能很好的分離，因此為了提高各成分的分離度，本發(fā)明對(duì)流動(dòng)相的洗脫程序進(jìn)行了大量篩選實(shí)驗(yàn)，通過不同時(shí)間段篩選A相和B相流動(dòng)相的必例，最終確定出分離蒽醌類化合物和黃酮類化合物的最佳流動(dòng)相洗脫程序，多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用本發(fā)明的流動(dòng)相洗脫程序能將蒽醌類化合物和黃酮類化合物進(jìn)行有效分離。3、同時(shí)由于中藥苦黃注射劑中蒽醌類和黃酮類化合物的數(shù)量較多，如流速過快， 分離度不夠理想，因此本發(fā)明對(duì)流動(dòng)相的流速進(jìn)行了考察，分別考察了 lmL/min、0. 8mL/ min、0. 6mL/min、0. 5mL/min、0. 4mL/min不同流速，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相的流速為 0. 5mL/min時(shí)，蒽醌類和黃酮類化合物的峰形最好、分離度最好，理論塔板數(shù)最高，因此本發(fā)明采用流動(dòng)相的流速為0. 5mL/min。4、同時(shí)本發(fā)明對(duì)色譜柱的柱溫進(jìn)行了篩選，考察了色譜柱在20 V、25 °C、28 V、 30°C和35°C條件下，蒽醌類和黃酮類化合物的分離效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，色譜柱在30°C條件下分離效果最好，分離重復(fù)性和穩(wěn)定性最好。因此本發(fā)明采用色譜柱的柱溫為30°C。5、同時(shí)本發(fā)明對(duì)色譜柱也進(jìn)行了篩選，分別考察了安捷倫(Agilent)反相C18、 C18柱，Waters C18、C8柱和國(guó)產(chǎn)C18進(jìn)行了考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以安捷倫(Agilent)反相 C18柱的分離效果最好。因此，本發(fā)明以安捷倫(Agilent)反相C18柱作為分析柱。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，以上步驟(2) 所述的生物堿類化合物的檢測(cè)方法，其中線性梯度洗脫程序?yàn)?分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為100 0，25分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為82 18，70分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為 28 72。
中藥苦黃注射劑中苦參含有苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿等生物堿的活性成分，部分生物堿的極性比較相似，因此在色譜柱上同時(shí)分離比較困難，本發(fā)明對(duì)流動(dòng)相的組成進(jìn)行了大量篩選，最后確定采用A、B兩相，A相為體積比為100 0.1 0.1水-四氫呋喃-氨水，B相為甲醇，因?yàn)樯飰A類化合物均具有一定的堿性，在溶液中會(huì)有一定程度的電離成離子狀態(tài)，導(dǎo)致分離和洗脫效果差，因此本發(fā)明在流動(dòng)相中添加一定量的堿氨水調(diào)節(jié)PH值，但是流動(dòng)相的堿性太強(qiáng)，又會(huì)導(dǎo)致生物堿化合物溶解性差，甚至?xí)恋矶氯V柱，因此調(diào)整流動(dòng)相到合適的PH值非常重要，本發(fā)明通過不同氨水加入量的篩選實(shí)驗(yàn)， 確定A、B兩相中最佳的氨水濃度。本發(fā)明在確定分離個(gè)生物堿的最佳流動(dòng)相后，為了進(jìn)一步提高分離效果，對(duì)流動(dòng)相的線性梯度洗脫程序進(jìn)行了篩選實(shí)驗(yàn)，最終確定生物堿線性梯度洗脫程序?yàn)?分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為100 0，25分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為 82 18，70分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為觀72，梯度洗脫可以在色譜柱上達(dá)到最佳的分離度。同時(shí)本發(fā)明在分析總生物堿時(shí)，對(duì)流動(dòng)相的流速進(jìn)行了考察，因?yàn)槿缌魉龠^快，分離度不夠理想，因此本發(fā)明對(duì)流動(dòng)相的流速進(jìn)行了考察，分別考察了 lmL/min、0. SmL/min、 0. 6mL/min、0. 5mL/min、0. 4mL/min不同流速，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相的流速為0. 8mL/min 時(shí)，生物堿類化合物的峰形最好、分離度最好，理論塔板數(shù)最高能達(dá)10000以上，因此本發(fā)明采用流動(dòng)相的流速為0. 8mL/min。同時(shí)本發(fā)明對(duì)生物堿類化合物的檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行了考察，通過全波長(zhǎng)掃描和3D等高線觀察，確定各生物堿類化合物在220nm處均有較大的吸收，因此本發(fā)明采用220nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，可以準(zhǔn)確靈敏的檢測(cè)到各生物堿類化合物。同時(shí)本發(fā)明對(duì)分析生物堿的色譜柱也進(jìn)行了篩選，作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，步驟( 所述的反相C18柱為安捷倫hrbaxExtend反相 C18柱。hrbax Extend反相C18柱(5 μ m，4. 6 X 250mm)鍵合了雙配位硅烷，結(jié)合雙封端處理使硅膠在高PH(高達(dá)pH 11.5)條件下也不會(huì)溶解，因此作為分析本發(fā)明所述的中藥苦黃注射劑中生物堿活性成分具有很好的峰形，且理論塔板數(shù)高，分離度好。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，步驟(1)和(2)所述的高效液相色譜儀為安捷倫110型分析儀。有益效果本發(fā)明提供的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明根據(jù)中藥苦黃注射劑中所含的活性成分，包括蒽醌類、黃酮類和生物堿類化合物的結(jié)構(gòu)性質(zhì)特點(diǎn)，通過大量實(shí)驗(yàn)篩選出最佳的流動(dòng)相組成，梯度洗脫程序、流速，檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜柱等分析條件，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明，本發(fā)明提供的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法可以在線同時(shí)檢測(cè)所含的蒽醌類和黃酮類化合物或總生物堿類化合物，因此具有很高的分析效率，可以克服現(xiàn)有技術(shù)需要多次檢測(cè)的缺點(diǎn)，且本發(fā)明提供的質(zhì)量檢測(cè)方法穩(wěn)定性好、對(duì)各分析成分的分離度好，可以靈敏準(zhǔn)確的定性、定量檢測(cè)分析各化合物。因此，本發(fā)明提供的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法可以可以客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)苦黃注射劑的質(zhì)量，對(duì)控制苦黃注射劑的質(zhì)量和保證臨床療效具有重要意義。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。實(shí)施列中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)1、實(shí)驗(yàn)材料(1)供試液的制備取苦黃注射液5批(0910191、0910151、0909072、 0909211、0907311)(藥品批準(zhǔn)文號(hào)為國(guó)藥準(zhǔn)字Z10960004)作為供試液稀釋10倍后， 0. 45 μ m微孔濾膜過濾后進(jìn)行分析；(2)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液的制備精密秤取大黃素、蘆薈大黃素、 大黃酸、大黃素甲醚、大黃酚、澤蘭黃酮、薊黃素、蘆丁各10毫克，配成1毫克/毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液。( 精密秤取苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿各10毫克，配成1毫克/毫升的混合標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液。2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備2. 1黃酮類和蒽醌類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密吸取大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、大黃酚、澤蘭黃酮、薊黃素、蘆丁混合標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液2 μ 1、4 μ 1、6 μ 1、8 μ 1和 10 μ 1，分別注入安捷倫110高效液相色譜儀分析120分鐘，色譜條件為色譜柱安捷倫反相C18柱，流動(dòng)相A相為濃度乙酸的水溶液，B相為體積比1 80 19的乙酸-乙腈-水，線性梯度洗脫(條件為0分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為98 2，20分鐘時(shí)流動(dòng)相 A B的比例為84 16，30分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為80 20，90分鐘時(shí)流動(dòng)相A B 的比例為40 60，100分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為0 100，120分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為0 10。)，流速為0. 5mL/min ；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為262nm，柱溫為30°C。然后以峰面積為縱坐標(biāo)、各標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線大黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 5733Χ-71. 53，r = 0. 9992蘆薈大黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 6538Χ-42. 52，r = 0. 9992大黃酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 6379Χ-42. 03，r = 0. 9993大黃素甲醚標(biāo)準(zhǔn)曲線=Y= 3771Χ-34. 49，r = 0. 9991大黃酚標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 7072Χ-118. 3, r = 0. 9993蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 3607Χ-28. 98，r = 0. 9998澤蘭黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 8739Χ-125. 2, r = 0. 9999薊黃素標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 4376Χ-68. 46，r = 0. 9994通過以上分析，大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素甲醚和大黃酚的蒽醌類化合物，澤蘭黃酮、薊黃素和蘆丁的黃酮類化合物在本發(fā)明提供的分析條件下，能夠很好的達(dá)到分離，分離度均達(dá)到1.5以上，各化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，！·值均達(dá)到0. 999以上。因此本發(fā)明提供的分析方法可以用于同時(shí)檢測(cè)中藥苦黃注射中的蒽醌類和黃酮類化合物。2. 2生物堿類化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，精密吸取苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿混合標(biāo)準(zhǔn)液2μ 1、4μ 1、6μ 1、8μ 1和10 μ 1，分別注入安捷倫110高效液相色譜儀分析 70分鐘，色譜條件為色譜柱安捷倫hrbax Extend反相C18柱，流動(dòng)相·Λ相為體積比為 100 0. 1 0. 1水-四氫呋喃-氨水，B相為甲醇，線性梯度洗脫(條件為0分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為100 0，25分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為82 18，70分鐘時(shí)流動(dòng)相 A B的比例為28 72。)，流速0.8ml/min，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫為30°C。
然后以峰面積為縱坐標(biāo)、各標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線苦參堿標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 1276Χ-9. 591, r = 0. 9999氧化苦參堿標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 2354Χ-4. 517，r = 0. 9999槐果堿標(biāo)準(zhǔn)曲線=Y= 1284Χ+6. 512，r = 0. 9998槐定堿標(biāo)準(zhǔn)曲線Y= 1723Χ-5. 533，r = 0. 9998通過以上分析，苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿、槐定堿四種生物堿類化合物在本發(fā)明提供的分析條件下，能夠很好的達(dá)到分離，分離度均達(dá)到1.5以上，各化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，r值均達(dá)到0.999以上。因此本發(fā)明提供的分析方法可以用于同時(shí)檢測(cè)中藥苦黃注射中苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿和槐定堿活性成分。3、中藥苦黃注射劑分析(1)高效液相色譜法測(cè)定黃酮類和蒽醌類化合物，分別精密吸取以上5批苦黃注射液(藥品批準(zhǔn)文號(hào)為國(guó)藥準(zhǔn)字Z10960004)的供試液各10μ1，注入安捷倫110高效液相色譜儀分析120分鐘，色譜條件為色譜柱反相C18柱，流動(dòng)相Α相為濃度1 %乙酸的水溶液，B相為體積比1 80 19的乙酸-乙腈-水，線性梯度洗脫(條件為0分鐘時(shí)流動(dòng)相 A B的比例為98 2，20分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為84 16，30分鐘時(shí)流動(dòng)相A B 的比例為80 20，90分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為40 60，100分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為0 100，120分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為0 10。)，流速為0. 5mL/min ；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為^2nm，柱溫為30°C。然后按2. 1所述蒽醌類和黃酮類化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線鑒定和檢測(cè)各化合物的含量。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1和表2所示。(2)高效液相色譜法測(cè)定生物堿類化合物，分別精密吸取以上5批苦黃注射液(藥品批準(zhǔn)文號(hào)為國(guó)藥準(zhǔn)字Z10960004)的供試液各10 μ 1，注入安捷倫110高效液相色譜儀分析70分鐘，色譜條件為色譜柱安捷倫hrbax Extend反相C18柱，流動(dòng)相A相為體積比為100 0.1 0. 1水-四氫呋喃-氨水，B相為甲醇，線性梯度洗脫(條件為0分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為100 0，25分鐘時(shí)流動(dòng)相A B的比例為82 18，70分鐘時(shí)流動(dòng)相 A B的比例為28 72。)，流速0.8ml/min，紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫為30°C。 然后按2. 2所述的總生物堿標(biāo)準(zhǔn)曲線鑒定和檢測(cè)各化合物的含量。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3和表4所示。表1中藥苦黃注射劑中蒽醌類和黃酮類化合物的檢測(cè)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟(1)高效液相色譜法測(cè)定黃酮類和蒽醌類化合物，精密吸取中藥苦黃注射劑10μ1，注入高效液相色譜儀分析120分鐘，色譜條件為色譜柱反相C18柱，流動(dòng)相Α相為濃度1 % 乙酸的水溶液，B相為體積比1:80:19的乙酸-乙腈-水，線性梯度洗脫，流速為0. 5mL/min ； 紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為^2nm，柱溫為30°C ；(2)高效液相色譜法測(cè)定生物堿類化合物，精密吸取中藥苦黃注射劑10μ 1，注入高效液相色譜儀分析70分鐘，色譜條件為色譜柱反相C18柱，流動(dòng)相Α相為體積比為 100 0. 1 0. 1水-四氫呋喃-氨水，B相為甲醇，線性梯度洗脫，流速0. 8ml/min,紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫為30°C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)所述的黃酮類和蒽醌類化合物的檢測(cè)方法，其中線性梯度洗脫程序?yàn)?分鐘時(shí)流動(dòng)相A:B的比例為98:2,20分鐘時(shí)流動(dòng)相A:B的比例為84:16,30分鐘時(shí)流動(dòng)相A:B的比例為80:20,90 分鐘時(shí)流動(dòng)相A:B的比例為40:60，100分鐘時(shí)流動(dòng)相A:B的比例為0:100，120分鐘時(shí)流動(dòng)相A:B的比例為0:10。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(2)所述的生物堿類化合物的檢測(cè)方法，其中線性梯度洗脫程序?yàn)?分鐘時(shí)流動(dòng)相A:B的比例為 100:0，25分鐘時(shí)流動(dòng)相A:B的比例為82:18，70分鐘時(shí)流動(dòng)相八:8的比例為28:72。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，步驟( 所述的反相Cw柱為安捷倫hrbax Extend反相Cw柱。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，步驟(1)和 (2)所述的高效液相色譜儀為安捷倫110分析儀。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法采用高效液相色譜法同時(shí)在線檢測(cè)8個(gè)黃酮類和蒽醌類活性化合物或同時(shí)在線檢測(cè)4個(gè)生物堿類活性化合物。本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出最佳的流動(dòng)相組成，梯度洗脫程序、流速，檢測(cè)波長(zhǎng)和色譜柱等分析條件，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明，本發(fā)明提供的中藥苦黃注射劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，穩(wěn)定性和重復(fù)性好、分析效率高、且對(duì)各分析成分的分離度好，可以靈敏準(zhǔn)確的定性、定量檢測(cè)各化合物，從而可以客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)苦黃注射劑的質(zhì)量，對(duì)控制苦黃注射劑的質(zhì)量和保證臨床療效具有重要意義。
文檔編號(hào)A61K36/85GK102279234SQ20111007293
公開日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2011年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月25日
發(fā)明者王恒斌, 荊海英, 闕瑞艷, 陳力建, 顧治平 申請(qǐng)人:常熟雷允上制藥有限公司