專利名稱：一種白樺樹皮取物及其制備方法和醫(yī)療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開一種白樺樹皮取物及提取方法，同時(shí)還提供了其在醫(yī)療用途，涉及中 醫(yī)藥學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前臨床上常將糖尿病分為胰島素依賴型(IDDM，I型糖尿病)和非胰島素依賴型 (NIDDM，II型糖尿病)兩類，其中II型糖尿病在糖尿病中占90%。WHO預(yù)計(jì)，由于人口老齡化、 肥胖、不健康的飲食以及缺乏運(yùn)動(dòng)的生活方式，到2025年，糖尿病患者的數(shù)目將由1995年 的1. 35億上升為3億。II型糖尿病的特征是胰島素敏感組織如骨骼肌、肝、脂肪組織對(duì)胰島素作用的抵 抗。雖然其具體機(jī)制尚不清楚，但胰島素信號(hào)在其傳導(dǎo)通路中的減弱甚至阻斷必定是直接 關(guān)系。PTPases在胰島素信號(hào)通路中多個(gè)環(huán)節(jié)起作用，如將自身磷酸活化的頂去磷酸化，從 而降低受體激酶活性；或?qū)RS-l、IRS_2、Shc等胰島素受體的底物中蛋白酪氨酸殘基至去 磷酸化，從而負(fù)調(diào)控胰島素作用受體后通路。特定Pleases和胰島素通路中的酪氨酸激酶 間的酶活性不平衡可能是引起II型糖尿病胰島素抵抗的原因。因此，通過尋找選擇性作用 于該通路中PTPases的抑制劑抑制其活性，加強(qiáng)和延長(zhǎng)胰島素信號(hào)，成為越來越受重視的 治療II型糖尿病的新途徑。PTPlB選擇性抑制劑的研究取得了一定的進(jìn)展，但大多研究局限于肽類和類 肽化合物，例比如根據(jù)PTPIB去磷酸化的底物序列設(shè)計(jì)的抑制劑EEDE (F2PMP ) M、 G1U-F2PMP-F2PMP,雖然這些肽類化合物具有較強(qiáng)高的選擇性和較強(qiáng)的抑制活性，但它們的 不易穿透細(xì)胞膜和其肽類磷酸結(jié)構(gòu)使很難成為藥物候選化合物。最近，在非肽類PTPlB抑 制劑的報(bào)道中2-羧甲氧基苯甲酸類化合物對(duì)PTPlB有很強(qiáng)的抑制作用，更重要的事，其中 (2S) -2- [4' - (2-芐基-苯并呋喃)-3-聯(lián)苯-4-氧]-3-苯基-丙酸化合物不僅對(duì)PTPlB有 很強(qiáng)的選擇抑制性，還對(duì)降低ob/ob小鼠血漿中的葡萄糖和胰島素水平有顯著作用。這是 第一例從藥理學(xué)上直接證明PTPlB抑制劑具有抗糖尿病活性的證據(jù)[Malamas，Μ. S. et al. J. Med. Chem. 2000, 43，1293-1310]。這為我們從天然資源里尋找高效、高選擇性 的小分子非肽類PTPlB抑制劑提供了機(jī)遇。白樺樹⑵etoh platyphylla Suk)為樺木科喬木植物，對(duì)土壤適應(yīng)性強(qiáng)，喜酸性 土，沼澤地、干燥陽坡及濕潤(rùn)陰坡都能生長(zhǎng)。本發(fā)明是首次從白樺樹皮中分離得到抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB活性組分，經(jīng) 多次藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，該組分具有顯著抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB的活性及降血糖作 用，經(jīng)文獻(xiàn)檢索，未見該類植物具有此方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種白樺樹皮提取物，為一種新的組合物，具有抑制蛋白酪氨酸磷酸 酯酶IB的活性，可以降低血糖。
本發(fā)明還進(jìn)一步提供白樺樹皮提取物的制備方法，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供了白樺樹皮提取物及其從中分離的活性組分的醫(yī)療 用途，作為抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB (PTPlB)的抑制劑和胰島素增敏劑，可用于治療各 種糖尿病、肥胖癥及其它由此引發(fā)的并發(fā)癥。本發(fā)明提供的白樺樹皮提取物是通過以下方法得到的
1)將干燥切碎的白樺樹、BetuleiρlatyphyIla Suk)樹皮，用5_10倍量有機(jī)醇(80%或 以上濃度)，加熱回流提取2-4次，每次30min-60min，合并提取液；
2)提取液減壓濃縮回收有機(jī)醇，至濃縮，合并濃縮液，放涼，加入1倍量水，析出沉淀， 過濾或離心取沉淀，得提取濃縮物；
3)提取濃縮物用1-2倍量水調(diào)節(jié)混懸液后，分別用1-2倍量二氯甲烷萃取3次，合并萃 取液；
4 )萃取液減壓濃縮回收二氯甲烷，至濃縮，合并濃縮液，放涼，干燥； 5)干燥品研磨后經(jīng)過200-300目硅膠柱層析，先用1-2倍量正己烷為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫； 之后用3-5倍量二氯甲烷與甲醇按10 1比例的洗脫液洗脫，收集該洗脫液，將洗脫液常溫 減壓濃縮，干燥，得本發(fā)明提取物。上述的有機(jī)醇包括甲醇、乙醇。用HPLC法測(cè)定發(fā)明提取物中羽扇豆醇的含量不低于20%。對(duì)所得本發(fā)明提取物進(jìn)行了蛋白酪氨酸磷酸酯酶IB抑制活性試驗(yàn)，表明其具有 明顯的抑制活性。測(cè)試原理利用分子生物學(xué)手段在大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)人源蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酯酶 IB (hPTPlB)催化結(jié)構(gòu)域，經(jīng)純化后的hPTPlB重組蛋白能水解底物/7NPP的磷脂鍵，得到的 產(chǎn)物在410 nm處有很強(qiáng)的光吸收，因此可以通過直接檢測(cè)410 nm處光吸收的變化以觀察 酶的活性變化以及化合物對(duì)酶活性的抑制情況。標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)活體系如下10 mM ,Tris. Cl， PH 7.6,10 mM pNPP，2% DMSO，100 nM hPTPlB。觀察指標(biāo)動(dòng)態(tài)測(cè)定波長(zhǎng)為410nm處的光吸收，時(shí)間為3分鐘，其動(dòng)力學(xué)曲線一級(jí) 反應(yīng)的斜率作為酶活性指標(biāo)。抑制率 試驗(yàn)例1
本發(fā)明提取物的抑制PTPlB活性試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)方法用于篩選的蛋白酪氨酸磷酸酯酶PTPlB是從大腸桿菌中表達(dá)并純化的GST 融合蛋白。采用紫外底物PNPP，觀察不同濃度對(duì)重組酶的活性抑制，以初步評(píng)價(jià)化合物的 藥用效果。PTPlB水解底物/7NPP的磷脂得到的產(chǎn)物在410nm處有很強(qiáng)的光吸收。因此可以 直接檢測(cè)410nm處光吸收的變化以觀察酶的活性變化以及化合物對(duì)其的抑制情況。陽性對(duì) 照正釩酸鈉的IC5tl為2. 0 uM。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.一種白樺樹皮取物，是通過以下方法得到的1)將干燥切碎的白樺樹樹皮，用5-10倍量有機(jī)醇，加熱回流提取2-4次，每次 30min-60min，合并提取液；2)提取液減壓濃縮回收有機(jī)醇，至濃縮，合并濃縮液，放涼，加入1倍量水，析出沉淀， 過濾或離心取沉淀，得提取濃縮物；3)提取濃縮物用1-2倍量水調(diào)節(jié)混懸液后，分別用1-2倍量二氯甲烷萃取3次，合并萃 取液；4 )萃取液減壓濃縮回收二氯甲烷，至濃縮，合并濃縮液，放涼，干燥； 5)干燥品研磨后經(jīng)過200-300目硅膠柱層析，先用1-2倍量正己烷為流動(dòng)相進(jìn)行洗脫； 之后用3-5倍量二氯甲烷與甲醇按10 1比例的洗脫液洗脫，收集該洗脫液，將洗脫液常溫 減壓濃縮，干燥，得本發(fā)明提取物；上述的有機(jī)醇包括甲醇、乙醇等有機(jī)物醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于白樺樹樹皮回流提取所用得有機(jī)醇濃度大于或 等于80%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述白樺樹皮提取物在治療各種糖尿病、肥胖癥及其并發(fā)癥藥物中應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性組分在制備胰島素增敏劑中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開一種白樺樹皮取物及提取方法，同時(shí)還提供了其在醫(yī)療用途，從白樺樹樹皮中提取、分離獲得的具有抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B活性的組份。經(jīng)多次體外蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B抑制實(shí)驗(yàn)表明，該組份具有明顯的PTP1B抑制活性，可在制備糖尿病、肥胖癥及并發(fā)癥藥物應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K36/185GK102138946SQ20111008818
公開日2011年8月3日 申請(qǐng)日期2011年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月9日
發(fā)明者吳學(xué), 孫亞楠, 崔龍, 李東浩, 苑廣信 申請(qǐng)人:北華大學(xué)