專利名稱：白脈軟膏在制備治療骨傷藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥的新用途。
背景技術(shù)：
藏藥白脈軟膏的主要分成是姜黃、肉豆蔻、甘松、陽起石、甘草、麝香、山柰、藏茴香、藏菖蒲、花椒、堿花。其性狀為黃灰色的軟膏，氣味芳香?？墒娼罨罱j(luò)，主要用于白脈病， 癱瘓，偏癱，筋腱強(qiáng)直，外傷引起的經(jīng)絡(luò)及筋腱斷傷、手足攣急、跛行等。根據(jù)藏醫(yī)理論，白脈是人體在胚胎階段首先生出的脈絡(luò)，也是胚胎發(fā)育獲得營養(yǎng)的脈絡(luò)，出生后這些脈絡(luò)又起著吸收飲食的精華，輸送糟粕，以保證三因素七物質(zhì)的正常循環(huán)作用，如若這些脈絡(luò)的功能發(fā)生紊亂，就會(huì)導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生。引起白脈病的主要發(fā)病原因是劇烈活動(dòng)，損傷機(jī)體脈絡(luò)；瘟毒熱邪等降入脈中；兵器棍棒等機(jī)械損傷引起風(fēng)之機(jī)能紊亂而入于脈道等形成白脈病，對(duì)治原則是理氣活血通絡(luò)。藏族民間醫(yī)生根據(jù)《四部醫(yī)典》、《晶珠本草》二書記載，結(jié)合實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)組成驗(yàn)方，時(shí)代相傳，沿用至今。白脈軟膏的各組成成分根據(jù)藏醫(yī)藥理論，同時(shí)結(jié)合中醫(yī)藥理論方法進(jìn)行分析姜黃破血行氣，通經(jīng)止痛；肉豆蔻溫中行氣，澀腸止瀉；甘松理氣止痛，開郁醒脾；陽起石強(qiáng)骨壯筋；甘草補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥；麝香開竅醒神， 活血通經(jīng)，消腫止痛。干姜溫中散寒，回陽通脈，燥濕消痰；藏茴香理氣，止痛，解毒；藏菖蒲溫胃，消炎止痛；花椒溫中止痛，殺蟲止癢；堿花解毒排膿，消食化痰，驅(qū)蟲通便。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供白脈軟膏的第二醫(yī)藥用途，即在制備治療骨傷藥物中的新用途。為了現(xiàn)實(shí)上述目的，本發(fā)明采用了家兔橈骨骨折動(dòng)物模型對(duì)白脈軟膏作為骨傷治療藥物進(jìn)行研究，并與傳統(tǒng)骨傷治療藥物——傷科接骨片進(jìn)行比較，結(jié)果表明低(O. 33g/ kg)、中(0.67g/kg)、高(1.34g/kg)劑量的白脈軟膏對(duì)骨折模型動(dòng)物骨傷愈合過程具有明顯的促進(jìn)作用，其促進(jìn)骨傷愈合作用與傳統(tǒng)藥物傷科接骨片相近，其對(duì)肌張力具有雙相調(diào)節(jié)的特點(diǎn)，并對(duì)骨痂形成過程中的骨代謝相關(guān)蛋白表達(dá)水平具有明顯的調(diào)節(jié)作用。具體地，本發(fā)明顯示上述三個(gè)劑量組的白脈軟膏及口服傷科接骨片對(duì)患側(cè)肢關(guān)節(jié)周長沒有明顯影響，但均可明顯增加骨折模型動(dòng)物患側(cè)足著地力及關(guān)節(jié)活動(dòng)度，白脈軟膏可明顯縮短患足功能恢復(fù)過程中加力著地時(shí)間，并提高骨折模型動(dòng)物血清鈣水平，表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)骨折愈合作用。此外，低、中劑量的白脈軟膏及口服傷科接骨片可以增加患側(cè)肢肌張力，而高劑量的白脈軟膏則表現(xiàn)出降低患側(cè)肢肌張力的作用，提示白脈軟膏對(duì)肌張力的調(diào)節(jié)作用具有雙相調(diào)節(jié)的特點(diǎn)。本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)白脈軟膏對(duì)骨痂形成處BMP及FGF的表達(dá)水平具有明顯的促進(jìn)作用并加速骨痂的愈合過程以及骨痂處骨小梁的成熟過程，提示白脈軟膏可能對(duì)骨痂形成局部的骨代謝相關(guān)蛋白表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用。更具體地，本發(fā)明所述的白脈軟膏的給藥方式為外敷。
本發(fā)明也提供白脈軟膏在制備促進(jìn)骨折愈合的藥物中應(yīng)用，


圖1是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿著地力的影響。 各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第13天開始檢測患側(cè)足著地力，給藥第60天處死動(dòng)物留取病理標(biāo)本。Con 正常對(duì)照組；Fracture 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組； BaiMai 白脈軟膏組。Means士SEM，*P < 0. 05，**P < 0. 01，與正常對(duì)照組相比;#P < 0. 05， ##P < 0.01，與骨折模型組相比。圖2是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿肌張力的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，檢測患側(cè)肢骨折處肌張力，以IOOg壓力下表皮下陷深度為觀察記錄指標(biāo)，給藥第60天處死動(dòng)物留取病理標(biāo)本。Con 正常對(duì)照組；Fracture 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai :白脈軟膏組。Means 士 SEM，*P <0.05，**P
<0. 01，與正常對(duì)照組相比；#P < 0. 05，##P < 0. 01，與骨折模型組相比。圖3是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿腫脹程度的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，檢測患側(cè)肢骨折處周長做為腫脹度指標(biāo)，給藥第 60天處死動(dòng)物留取病理標(biāo)本。Con 正常對(duì)照組；Fracture 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai 白脈軟膏組。Means士SEM，**P < 0. 01，與正常對(duì)照組相比。圖4是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿肘關(guān)節(jié)活動(dòng)度的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，檢測患側(cè)前肢肘關(guān)節(jié)張開最大角度為觀察記錄指標(biāo)，給藥第60天處死動(dòng)物留取病理標(biāo)本。Con 正常對(duì)照組；Fracture 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai :白脈軟膏組。Means士SEM，**P < 0. 01，與正常對(duì)照組相比。圖5是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿開始著地時(shí)間的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，檢測患側(cè)前肢開始著地時(shí)間為觀察記錄指標(biāo)，給藥第60天處死動(dòng)物留取病理標(biāo)本。Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai 白脈軟膏組。Means 士 SEM。圖6是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿加力著地時(shí)間的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，檢測患側(cè)前肢加力著地時(shí)間為觀察記錄指標(biāo)，給藥第60天處死動(dòng)物留取病理標(biāo)本。Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai 白脈軟膏組。Means 士 SEM，*P < 0. 05，**P < 0. 01，與骨折模型組相比。圖7是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中血清堿性磷酸酶水平的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第60天處死動(dòng)物，檢測血清堿性磷酸酶 (ALP)水平。Con 正常對(duì)照組；Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai 白脈軟膏組。Means 士 SEM，*P < 0. 05，**P < 0. 01，與骨折模型組相比。圖8是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中血清鈣含量的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第60天處死動(dòng)物，檢測血清鈣含量。Con 正常對(duì)照組；Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai 白脈軟膏組。Means士SEM，#P
<0. 05，##P < 0. 01，與骨折模型組相比。圖9是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中血清磷含量的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第60天處死動(dòng)物，檢測血清磷含量。Con 正常對(duì)照組；Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai 白脈軟膏組。Means士SEM。圖10是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程骨痂形成處骨形態(tài)發(fā)生蛋白水平的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第60天處死動(dòng)物，病理學(xué)檢測骨痂形成處骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)表達(dá)水平。Con 正常對(duì)照組；Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組； BaiMai 白脈軟膏組。Means 士 SEM，#P < 0. 05，與骨折模型組相比。圖11是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程骨痂形成處堿性成纖維細(xì)胞生長因子水平的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第60天處死動(dòng)物，病理學(xué)檢測骨痂形成處堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)表達(dá)水平。Con 正常對(duì)照組；Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai 白脈軟膏組。Means士SEM，*P < 0. 05，與正常對(duì)照組相比;#P < 0. 05， ##P < 0. 01，與骨折模型組相比。圖12是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程骨痂形成處新生骨小梁面積的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第60天處死動(dòng)物，病理學(xué)檢測骨痂形成處新生骨小梁面積。Con 正常對(duì)照組；Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai 白脈軟膏組。Means士SEM，*P < 0. 05，與正常對(duì)照組相比；#P < 0. 05，與骨折模型組相比。圖13是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折7天后骨痂形成處X射線掃描評(píng)分的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第7天進(jìn)行X射線掃描骨折處，進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分比較骨痂愈合狀態(tài)。Con 正常對(duì)照組；Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組；BaiMai 白脈軟膏組。Means士SEM，**P < 0. 01，與正常對(duì)照組相比。圖14是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折14天后骨痂形成處X射線掃描評(píng)分的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第14天進(jìn)行X射線掃描骨折處，進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分比較骨痂愈合狀態(tài)。Con 正常對(duì)照組；Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組； BaiMai 白脈軟膏組。Means士SEM廣P < 0. 01，與正常對(duì)照組相比;#P < 0. 05，與骨折模型組相比。圖15是外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折60天后骨痂形成處X射線掃描評(píng)分的影響。各組動(dòng)物造模后每天給藥一次，給藥第60天進(jìn)行X射線掃描骨折處，進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分比較骨痂愈合狀態(tài)。Con 正常對(duì)照組；Mod 骨折模型組；SKJGP 傷科接骨片組； BaiMai 白脈軟膏組。Means士SEM廣P < 0. 01，與正常對(duì)照組相比;#P < 0. 05，與骨折模型組相比。圖16是骨折第八周的家兔橈骨的病理組織學(xué)分析圖(正常對(duì)照組)。圖17是骨折第八周的家兔橈骨的病理組織學(xué)分析圖(骨折模型組)。圖18是骨折第八周的家兔橈骨的病理組織學(xué)分析圖(傷科接骨片組)。圖19是骨折第八周的家兔橈骨的病理組織學(xué)分析圖(白脈軟膏低劑量組)。圖20是骨折第八周的家兔橈骨的病理組織學(xué)分析圖(白脈軟膏中劑量組)。圖21是骨折第八周的家兔橈骨的病理組織學(xué)分析圖(白脈軟膏高劑量組)。
具體實(shí)施方式
材料白脈軟膏由西藏奇正藏藥股份有限公司提供，批號(hào)090910，規(guī)格20g/支X 1
支/盒；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由中國中醫(yī)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院基礎(chǔ)理論研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為4月齡大耳白家兔，體重3.0 士 0.5kg分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成6組，每組10-11只。正常組，模型組，陽性對(duì)照組(傷科接骨片0.35g/kg)，白脈軟膏低、中、高劑量組(0. 33,0. 67、1. 34g/kg)，共計(jì)60只，其中，劑量單位g/kg是指每Ikg體重的動(dòng)物給藥 Ig(注白脈劑量以5cm= Ig計(jì))。造模方法3%戊巴比妥鈉麻醉后，采用電子萬能材料實(shí)驗(yàn)機(jī)造成骨折模型，形成家兔橈骨骨折模型(造模后拍攝X光片，以確認(rèn)骨折模型是否成功)。該骨折動(dòng)物模型表現(xiàn)出多方面與臨床骨折相似的功能學(xué)、血生化、病理結(jié)構(gòu)等損傷性改變。傳統(tǒng)骨傷治療藥物一傷科接骨片可以促進(jìn)其患側(cè)肢功能的改善，提高其血清鈣水平，促進(jìn)其骨傷愈合過程，可以比較客觀地反映出骨折及愈合過程中的功能、生理及病理學(xué)改變，并可以用于相關(guān)干預(yù)藥物的研究，該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立及相關(guān)藥物研究數(shù)據(jù)可靠。實(shí)驗(yàn)用藥的給藥途徑及時(shí)間外敷。時(shí)間2個(gè)月，1次/日。陽性對(duì)照藥傷科接骨片，(市售，生產(chǎn)廠商大連美羅中藥廠有限公司，批號(hào)國藥準(zhǔn)字221021461，商品名傷科接骨片)，給藥途徑灌胃0. 35g/kg d。取材于給藥后2個(gè)月取各組家兔，心臟采血，測定血清堿性磷酸酶(ALP)、血 Ca2+、血P;取橈骨，固定，脫水，脫鈣，HE染色切片及骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)，堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)。實(shí)施例1外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿著地力的影響外用白脈軟膏高劑量組動(dòng)物骨折13天后患側(cè)足著地力明顯高于骨折模型組，外用白脈軟膏中低劑量及口服傷科接骨片可明顯升高骨折16天后動(dòng)物的患側(cè)足著地力，骨折47天后各組動(dòng)物患側(cè)足著地力均恢復(fù)至生理水平，各組間無顯著性差異，數(shù)據(jù)見圖1。實(shí)施例2外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿肌張力的影響骨折模型動(dòng)物傷腿肌張力明顯升高，口服傷科接骨片可進(jìn)一步升高模型動(dòng)物骨折后1至9天的患側(cè)肢肌張力，表現(xiàn)為下陷深度降低，白脈軟膏低、中劑量外用可升高患側(cè)肢肌張力，高劑量則表現(xiàn)出降低肌張力的作用，數(shù)據(jù)見圖2。實(shí)施例3外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿腫脹度的影響骨折模型動(dòng)物傷腿出現(xiàn)明顯的腫脹，表現(xiàn)為患側(cè)肢骨折處周長明顯增加，口服傷科接骨片及外用白脈軟膏各劑量均未表現(xiàn)出對(duì)骨折模型動(dòng)物患側(cè)肢骨折處周長的影響，數(shù)據(jù)見圖3。實(shí)施例4外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中傷腿肘關(guān)節(jié)活動(dòng)度的影響骨折后動(dòng)物肘關(guān)節(jié)活動(dòng)度明顯下降，至骨折后第13天模型動(dòng)物肘關(guān)節(jié)活動(dòng)度基本恢復(fù)至正常組水平，口服傷科接骨片可明顯增加骨折模型動(dòng)物骨折后1至4天患側(cè)前肢肘關(guān)節(jié)張開最大角度，外用白脈軟膏各劑量可明顯增加骨折模型動(dòng)物骨折后1至8天患側(cè)前肢肘關(guān)節(jié)張開最大角度，其效果與傷科接骨片相當(dāng)，藥效維持時(shí)間長于傷科接骨片。骨折 9天后模型及各給藥組動(dòng)物肘關(guān)節(jié)活動(dòng)度恢復(fù)至生理水平，數(shù)據(jù)見圖4。
實(shí)施例5外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中患足著地時(shí)間的影響口服傷科接骨片對(duì)骨折模型動(dòng)物患足恢復(fù)功能過程中開始著地及加力著地時(shí)間沒有影響，外用白脈軟膏低、高劑量可明顯縮短骨折模型動(dòng)物患足加力著地時(shí)間，數(shù)據(jù)見圖 5、60實(shí)施例6外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中血清骨代謝相關(guān)生化指標(biāo)的影響骨折模型動(dòng)物血清堿性磷酸酶水平有下降趨勢，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血鈣及血磷水平與正常組比較無明顯變化?？诜平庸瞧瑢?duì)骨折模型動(dòng)物血清堿性磷酸酶及血磷水平?jīng)]有影響，但可以明顯升高模型動(dòng)物血清鈣水平。外用白脈軟膏低劑量可明顯升高模型動(dòng)物血清鈣水平，其作用與傷科接骨片相似，數(shù)據(jù)見圖7、8、9。實(shí)施例7外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中骨痂病理結(jié)構(gòu)及骨代謝相關(guān)蛋白水平的影響骨折模型動(dòng)物骨痂形成處骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP)水平低于正常對(duì)照組，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)水平明顯低于正常對(duì)照組，骨折60天后模型動(dòng)物骨痂形成處骨小梁面積明顯高于正常對(duì)照組?？诜平庸瞧瑢?duì)骨折模型動(dòng)物骨痂處 BMP及FGF水平以及骨小梁面積沒有影響。外用白脈軟膏中及高劑量均可明顯升高模型動(dòng)物骨痂處BMP及FGF水平，白脈軟膏高劑量組骨折60天骨痂處骨小梁面積低于骨折模型動(dòng)物，數(shù)據(jù)見圖10、11、12。實(shí)施例8外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合過程中骨痂X射線掃描評(píng)分的影響骨折模型動(dòng)物骨折后第1、7、14及60天骨痂X射線掃描評(píng)分明顯低于正常對(duì)照組?？诜平庸瞧瑢?duì)骨折模型動(dòng)物骨痂處X射線評(píng)分沒有影響。外用白脈軟膏低及高劑量可分別升高模型動(dòng)物第14及60天骨痂處X射線掃描評(píng)分，數(shù)據(jù)見圖13、14、15。實(shí)施例9外用白脈軟膏對(duì)兔橈骨骨折愈合的病理組織學(xué)分析將六個(gè)實(shí)驗(yàn)組的骨折第八周的家兔橈骨送中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院藥理室進(jìn)行病理組織學(xué)分析，組織處理方式為HE染色。分析結(jié)果如下正常對(duì)照組鏡下可見密質(zhì)骨呈板層狀，骨陷窩排列整齊有序，結(jié)構(gòu)完整，未見骨組織缺損，如圖16所示。結(jié)論為骨組織形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常，未見病理改變。骨折模型組鏡下可見新骨生長，新生骨組織為骨小梁。新骨生長處有骨板形成， 如圖17所示。結(jié)論為新生骨小梁和間斷的骨板。傷科接骨片組鏡下可見新骨生長，新生骨組織為骨小梁。新骨生長處有骨板形成，如圖18所示。結(jié)論為新生骨小梁和間斷的骨板。白脈軟膏低劑量組鏡下可見新骨生長，新生骨組織為骨小梁。新骨生長處有骨板形成，如圖19所示。結(jié)論為新生骨小梁和間斷的骨板。白脈軟膏中劑量組鏡下可見新骨生長，新生骨組織為骨小梁。新骨生長處有骨板形成，如圖20所示。結(jié)論為新生骨小梁和間斷的骨板。白脈軟膏高劑量組鏡下可見新骨生長，新生骨組織為骨小梁，可見較多骨小梁間隙。新骨生長處有骨板形成，如圖21所示。結(jié)論為新生骨小梁和間斷的骨板。
權(quán)利要求
1.白脈軟膏在制備治療骨折藥物中的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述白脈軟膏的給藥途徑為外敷。
3.白脈軟膏在制備促進(jìn)骨折愈合藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了藏藥白脈軟膏在制備骨傷治療藥物中的新用途。白脈軟膏對(duì)骨折模型動(dòng)物的骨傷愈合過程具有明顯的促進(jìn)作用，效果與傳統(tǒng)藥物傷科接骨片的相近。
文檔編號(hào)A61K36/9066GK102441146SQ20111041260
公開日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2011年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月12日
發(fā)明者李恒方, 李敬濤, 陳麗娟, 陳維武 申請(qǐng)人:西藏奇正藏藥股份有限公司