專利名稱：一種glp-i類似物緩釋微球制劑及其制備方法
技術領域：

本發(fā)明涉及一種治療II型糖尿病的緩釋微球制劑，具體涉及一種含GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑及制備方法。
背景技術：
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糖尿病是一組以胰島素分泌缺陷和/或胰島素作用不足所致高血糖為特征的代謝紊亂。糖尿病的慢性高血糖狀態(tài)與長期并發(fā)癥顯著相關，即眾多器官的損害、功能障礙和功能衰竭，特別是腎臟、眼、神經(jīng)、心臟和血管等。糖尿病的綜合治療，不應該僅僅著眼于使血糖降至接近正常水平，而且應該積極糾正代謝異常和減少心血管危險因素。
糖尿病分為I型糖尿病和II型糖尿病，I型糖尿病是因胰島β細胞功能衰竭所致，易發(fā)生糖尿病急性并發(fā)癥，如酮癥酸中毒。I型糖尿病的主要治療目標是通過恰當?shù)囊葝u素替代治療、深入教育等來達到最佳的血糖控制水平。II型糖尿病是一組發(fā)病機制僅部分獲知的復雜代謝紊亂。它包括不同程度的胰島β細胞功能降低、周圍組織胰島素抵抗以及肝糖原代謝異常。II型糖尿病的血糖控制隨著時間的推移，呈進行性惡化的趨勢；當飲食控制和運動療法失效后，平均每3-4年需要使用一種新的降糖藥物干預治療手段，以達到或維持良好的血糖控制。最終，即使在目前的聯(lián)合藥物治療和/或胰島素治療情況下，仍有相當一部分病人無法達到良好的血糖控制。超重、高血壓以及高脂血癥往往與糖尿病合并存在，對多重心血管危險因素的干預治療是糖尿病綜合治療中值得考慮的重要因素。
糖尿病是一種全球性的高發(fā)病，隨著我國經(jīng)濟的發(fā)展，我國糖尿病的發(fā)病率逐年增高，一項“全國糖尿病流行病學調查(2007 2008) ”顯示，在我國20歲以上的人群中，男性和女性的糖尿病 患病率分別達10.6%和8.8%，總體糖尿病患病率為9.7%，由此，推算出全國糖尿病總患病人數(shù)約為9200萬人，已經(jīng)超過印度，成為世界上糖尿病患者最多的國家。
藥物治療是糖尿病治療的重點。除小部分經(jīng)飲食治療和運動治療就能控制病情的II型糖尿病病人以外，都需要進行藥物治療。糖尿病治療藥物有中成藥和西藥，其中西藥在糖尿病的治療中占主導地位，中成藥在糖尿病的治療處于輔助治療的地位。目前糖尿病的藥物治療主要分為三個方面，口服降糖西藥的治療；胰島素治療；中藥降糖藥物治療。隨著糖尿病治療機理的深入研究，發(fā)現(xiàn)保護胰島β細胞功能和降低血糖具有同等重要的意義，因此，以腸促胰島素為基礎的降糖藥物的研究，包括人胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)類似物具有潛在保護胰島β細胞功能的藥物成為研究的熱點。
利拉魯肽為人胰高糖素樣肽-1 (GLP-1)類似物，與天然GLP-1分子結構相比有一個氨基酸差異，并增加了一個16碳棕櫚酰脂肪酸側鏈，與天然人GLP-1有95%同源性。利拉魯肽保留了天然GLP-1的功效。
利拉魯肽(Liraglutide)是由諾和諾德公司研制開發(fā)的一種治療成年人的2型糖尿病藥物，于2010年I月25日在美國批準上市，每日注射一次。
利拉魯肽作為GLP-1類似物通過以下途徑改善II型糖尿病患者的代謝紊亂，:利拉魯肽是一種GLP-1類似物，與人GLP-1具有97%的序列同源性，人GLP-1可以結合并激活GLP-1受體。GLP-1受體為天然GLP-1的靶點，GLP-1是一種內(nèi)源性腸促胰島素激素，能夠促進胰腺β細胞葡萄糖濃度依賴性地分泌胰島素。與天然GLP-1不同的是，利拉魯肽在人體中的藥代動力學和藥效動力學特點均適合每天一次的給藥方案。皮下注射給藥后，其作用時間延長的機理包括:使吸收減慢的自聯(lián)作用；與白蛋白結合；對二肽基肽酶IV(DPP-1V)和中性內(nèi)肽酶(NEP)具有更高的酶穩(wěn)定性，從而具有較長的血漿半衰期。
利拉魯肽的活性由其與GLP-1受體間特定的相互作用介導，導致環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的增加。利 拉魯肽能夠以葡萄糖濃度依賴的模式刺激胰島素的分泌，同時以葡萄糖濃度依賴的模式降低過高的胰高糖素的分泌。因此，當血糖升高時，胰島素分泌受到刺激，同時胰高糖素分泌受到抑制。與之相反，在低血糖時利拉魯肽能夠減少胰島素分泌，且不影響胰高糖素的分泌。利拉魯肽的降血糖機理還包括輕微延長胃排空時間。利拉魯肽能夠通過減輕饑餓感和能量攝入降低體重和體脂量。
利拉魯肽注射劑已被證實在治療II型糖尿病方面具有良好效果，但需每日注射給藥一次，使患者順應性較差，因此將其制備成緩釋制劑，給藥頻率顯著減少，患者的接受程度大大提高。另外，它還消除了普通注射劑多次給藥產(chǎn)生的體內(nèi)藥物濃度峰谷現(xiàn)象，可獲得平穩(wěn)長時間的有效濃度，降低了毒副作用，并且總給藥劑量減少。發(fā)明內(nèi)容:
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種能有效延長利拉魯肽在體內(nèi)作用時間的利拉魯肽緩釋微球制劑，該制劑能減少注射次數(shù)和藥物耐受性，提高病人的適應性，方便臨床使用和患者接受。另外，它還消除了普通注射劑多次給藥產(chǎn)生的體內(nèi)藥物濃度峰谷現(xiàn)象，可獲得平穩(wěn)長時間的有效濃度，降低了毒副作用，并且總給藥劑量減少。
另外，本發(fā)明還提供了一種利拉魯肽緩釋微球制劑的制備方法，以及利拉魯肽緩釋微球制劑在制備II型糖尿病的藥物中的應用。
本發(fā)明制備了一種含GLP-1類似物利拉魯肽藥物的注射用的緩釋微球制劑，其特征在于，該緩釋微球包括以微球重量計，0.5%-30% (w/w)的GLP-1類似物利拉魯肽，占微球重量70% -99.5%的分子量為5，000-300，000道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0% -10%的藥學上可接受的其他輔料。本發(fā)明的緩釋微球平均粒徑為5-40 μ m，包封率大于90%。其中，利拉魯肽分子量為3751.20，分子式為C172H265N43O51。
所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料，可選自聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯-乙交酯(PLGA)、聚氰基丙烯酸烷酯、聚己內(nèi)酯(PCL)、聚羥丁酸(PHB)、聚羥戊酸(PVA)、聚癸酸(PDA)、聚酸酐、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥乙酸-聚乙二醇其中的一種或其混合物，優(yōu)選PLGA。所述的丙交酯和乙交酯分子量范圍均在5，000-20，000道爾頓，比例范圍是25: 75-75: 25。
所述的藥學上可接受的其他輔料包括明膠、甘油、乳化穩(wěn)定劑及賦形劑，所述乳化穩(wěn)定劑選自聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚甲基丙烯酸鈉、聚丙烯酸鈉、羧甲基纖維素鈉等。乳化穩(wěn)定劑優(yōu)選聚乙烯醇，其用量范圍為0.1% -10%。
賦形劑選自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖、甘氨酸中的一種或其混合物，優(yōu)選甘露醇，其用量范圍為0.1% -5%。
另外，本發(fā)明還提供了制備含GLP-1類似物利拉魯肽藥物的方法，第一步，首先將GLP-1類似物利拉魯肽溶于水，得內(nèi)水相；另將PLGA溶于有機溶劑中，得油相；將油相和內(nèi)水相置于攪拌器內(nèi)，高速乳勻，形成W/0乳液；然后將W/0乳液加入到聚乙烯醇水溶液中，高速乳勻，形成w/0/w復乳；
第二步，將W/0/W復乳移入聚乙烯醇水溶液中，低速攪拌，離心，收集所得微球，用蒸餾水洗滌多次后，再離心收集，冷凍干燥，即得GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球。


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以釋藥時間為橫坐標，累計釋放度為縱坐標，繪制實施例1、2、3制備的利拉魯肽緩釋微球制劑體外釋藥曲線圖，結果見說明書附圖1、2、3。
具體實施方式
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下面將結合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限定本發(fā)明的范圍。
實施例1
稱取20mg利拉魯肽溶于蒸餾水中，得內(nèi)水相；稱取IOOOmgPLGA (聚合比例=I: 3)溶于二氯甲烷中，得油相。配制濃度為5%的PVA溶液50ml和濃度為0.5%的PVA溶液500ml。先將利拉魯肽溶液移入溶有PLGA的二氯甲烷溶液中，室溫下置于乳化分散機上高速(30000rpm)乳勻30秒，然后將所得的W/0型乳劑轉移至20ml濃度為5%的PVA溶液中，置于乳化分散機上以5000rpm的轉速，乳勻I分鐘，得W/0/W型復乳，移入500ml0.5%的PVA溶液中，置于機械攪拌器上，以500rpm的轉速低速攪拌2小時,離心,收集所得微球，用蒸餾水多次洗滌，然后再離心收集，冷凍干燥，分裝成實際載藥量在4.2mg劑量的利拉魯肽緩釋微球制劑，粒徑平均20-40 μ m。
精密稱取實施例1制備的載藥利拉魯肽緩釋微球5mg溶于ImL 二氯甲烷，分次加入3mL和2mL重蒸餾水提取藥物，渦旋萃取lmin，15000rpm離心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸餾水定容至10mL，進樣20 μ 1，HPLC測定含量，繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線計算得實施例1制備的載藥利拉魯肽緩釋微球中藥物含量，據(jù)此計算收率和包封率載藥量分別是78.3%和66.4%。
實施例2
稱取15mg利拉魯肽溶于蒸餾水中，得內(nèi)水相；稱取IOOOmgPLGA (聚合比例=I: I)溶于二氯甲烷中，得油 相。配制濃度為5%的PVA溶液50ml和濃度為0.5%的PVA溶液500ml。先將利拉魯肽溶液移入溶有PLGA的二氯甲烷溶液中，室溫下置于乳化分散機上高速(30000rpm)乳勻30秒，然后將所得的W/0型乳劑轉移至20ml濃度為5%的PVA溶液中，置于乳化分散機上以5000rpm的轉速，乳勻I分鐘，得W/0/W型復乳，移入500ml0.5%的PVA溶液中，置于機械攪拌器上，以500rpm的轉速低速攪拌2小時,離心,收集所得微球，用蒸餾水多次洗滌，然后再離心收集，冷凍干燥，分裝成實際載藥量在4.5mg劑量的利拉魯肽緩釋微球制劑，粒徑平均10-40 μ m。
精密稱取實施例2制備的載藥利拉魯肽緩釋微球5mg溶于ImL 二氯甲烷，分次加Λ 3mL和2mL重蒸餾水提取藥物，渦旋萃取lmin，15000rpm離心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸餾水定容至IOmL,進樣20 μ 1，HPLC測定含量，繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線計算得實施例2制備的載藥利拉魯肽緩釋微球中藥物含量，據(jù)此計算收率和包封率載藥量分別是53.4%和54.8%。
實施例3
稱取25mg利拉魯肽溶于蒸餾水中，得內(nèi)水相；稱取500mgPLA和1500mgPLGA (聚合比例=3: I)溶于二氯甲烷中，得油相。配制濃度為5%的PVA溶液IOOml和濃度為0.5%的PVA溶液IOOOml。先將利拉魯肽溶液移入溶有PLA和PLGA的二氯甲烷溶液中，室溫下置于乳化分散機上高速(30000rpm)乳勻30秒，然后將所得的W/0型乳劑轉移至20ml濃度為5%的PVA溶液中，置于乳化分散機上以5000rpm的轉速，乳勻I分鐘，得W/0/W型復乳，移入500ml0.5%的PVA溶液中，置于機械攪拌器上，以500rpm的轉速低速攪拌2小時，離心，收集所得微球，用蒸餾水多次洗滌，然后再離心收集，冷凍干燥，分裝成實際載藥量在3.5mg劑量的利拉魯肽緩釋微球制劑，粒徑平均10-30 μ m。
精密稱取實施例3制備的載藥利拉魯肽緩釋微球5mg溶于ImL 二氯甲烷，分次加入3mL和2mL重蒸餾水提取藥物，渦旋萃取lmin，15000rpm離心3min，吸取合并上清液，移取上清液0.5mL以重蒸餾水定容至10mL，進樣20 μ 1，HPLC測定含量，繪制標準曲線，根據(jù)標準曲線計算得實施例3制備的載藥利拉魯肽緩釋微球中藥物含量，據(jù)此計算收率和包封率載藥量分別是57.2%和60.7%。
實施例4
分別對對實施例1、2、3制備的利拉魯肽緩釋微球制劑進行體外釋藥考察，方法如下:
分別精密稱取若干份實施例1、2、3制備的利拉魯肽緩釋微球，每份5mg，置于35個IOmL的西林瓶中，每份加入 含有0.1M的Na2HPO4和0.1M的NaH2PO4的pH7.4的磷酸緩沖溶液，置于37°C恒溫水浴中，分別在第0、4、8、12、16、20、24、28、32天取出，離心，重新分散在二氯甲烷醋酸緩沖液(I: lv/v)，色譜柱為C1850X2mm，流動相為1:1的含有0.1%三氟醋酸和含有I %三氟醋酸的50%乙腈混合溶液，流速1.0ml/min,在240nm處檢測，測定微球內(nèi)殘余藥量，按照外標法計算累計釋放度，實施例1、2、3制備的利拉魯肽緩釋微球制劑的體外釋藥測定結果如表I所示:
表I實施例1、2、3制備的利拉魯肽緩釋微球制劑的體外釋藥實驗結果
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權利要求
1.一種GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑，其特征是:所述制劑中的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球含占微球重量0.1%-15% (w/w)的利拉魯肽，占微球重量85% -99.9%的分子量為5，000-200，OOO道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0% -10%的藥學上可接受的其他輔料。所述緩釋微球粒徑為1_50μπι，平均10—50 μ mD
2.根據(jù)權利要求1所述的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑，其特征是:所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料，可選自聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚丙交酯-乙交酯(PLGA)、聚氰基丙烯酸烷酯、聚己內(nèi)酯(PCL)、聚羥丁酸(PHB)、聚羥戊酸(PVA)、聚癸酸(PDA)、聚酸酐、聚羥基丁酸酯-羥基戊酸酯、聚乳酸-聚乙二醇、聚羥乙酸-聚乙二醇其中的一種或其混合物。
3.根據(jù)權利要求2所述的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑，其特征是:所述可生物降解且具生物相容性的高分子材料，優(yōu)選PLGA。
4.根據(jù)權利要求3所述的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑，其特征是:所述的丙交酯和乙交酯分子量范圍均在5，000-20，000道爾頓，聚丙交酯中丙交酯和乙交酯的比例范圍是 25: 75-75: 25。
5.根據(jù)權利要求1所述的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑，其特征是:所述的藥學上可接受的其他輔料包括明膠、甘油、乳化穩(wěn)定劑及賦形劑，所述乳化穩(wěn)定劑選自聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚甲基丙烯酸鈉、聚丙烯酸鈉、羧甲基纖維素鈉等。
6.根據(jù)權利要求5所述的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑，其特征是:乳化穩(wěn)定劑優(yōu)選聚乙烯醇，其用量范圍為0.1% -10%。
7.根據(jù)權利要求5所述的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑，其特征是:賦形劑選自山梨醇、甘露醇、乳糖、蔗糖、甘氨酸中的一種或其混合物。
8.根據(jù)權利要求5所述的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑，其特征是:賦形劑優(yōu)選甘露醇，其用量范圍為0.1% -5%。
9.根據(jù)權利要求1所述的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑的制備方法，其特征在于采用優(yōu)選復乳-液中干燥法，分兩步制備微球，其特征是: 第一步，首先將GLP-1類似物利拉魯肽溶于水，得內(nèi)水相；另將PLGA溶于有機溶劑中，得油相；將油相和內(nèi)水相置于攪拌器內(nèi)，高速乳勻，形成W/0乳液；然后將W/0乳液加入到聚乙烯醇水溶液中，高速乳勻，形成W/0/W復乳； 第二步，將W/0/W復乳移 入聚乙烯醇水溶液中，低速攪拌，離心，收集所得微球，用蒸餾水洗滌多次后，再離心收集，冷凍干燥，即得GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球。
10.根據(jù)權利要求9所述的GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制備方法，其特征是:所述的有機溶劑包括二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、二氧六環(huán)或四氫呋喃等，優(yōu)選二氯甲烷。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種GLP-1類似物利拉魯肽緩釋微球制劑及其制備方法。該緩釋微球包括以微球重量計，0.5％-30％(w/w)的GLP-1類似物利拉魯肽，占微球重量70％-99.5％的分子量為5,000-300,000道爾頓的可生物降解且具生物相容性的高分子材料，以及占微球重量0％-10％的藥學上可接受的其他輔料。本發(fā)明的緩釋微球平均粒徑為5-40μm，包封率大于90％。該緩釋微球緩釋期長達數(shù)天或數(shù)月，明顯減少用藥次數(shù)，提高了一種GLP-1類似物利拉魯肽的生物利用度，降低了藥物的毒副作用，有利于臨床治療。
文檔編號A61K9/16GK103142488SQ201110427618
公開日2013年6月12日 申請日期2011年12月16日 優(yōu)先權日2011年12月16日
發(fā)明者支欽, 李新宇, 姚志勇 申請人:深圳市健元醫(yī)藥科技有限公司