專利名稱：免疫性習慣性流產的藥物治療及檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種治療反復自然流產的藥物和方法。
背景技術：
流產是妊娠28周前，胚胎及其附屬物被孕婦體內排除的現(xiàn)象。根據流產發(fā)生時間，12周以前發(fā)生者稱為早期流產，12周以后發(fā)生者稱為晚期流產。根據發(fā)生原因分為自然流產和人工流產兩類，人工流產是指通過手術或藥物終止妊娠的方法；自然流產是指沒有人エ干預，由于某種疾病引起的妊娠終止，包括偶然自然流產和反復自然流產兩類。反復自然流產(recurrent spontaneous abortion, RSA)是指連續(xù)2次以上在同一妊娠周內發(fā)生胎停育繼而流產的現(xiàn)象。在孕婦中反復自然流產的發(fā)病率為2-3%。根據流產發(fā)生的時間，可分為早期RsA和晩期RSA ;根據流產前有無正常懷孕史，可分為原發(fā)性RSA和繼發(fā)性RSA。臨床上將兩種分類結合起來，將RSA分為早期原發(fā)RSA，晩期原發(fā)RSA，早期繼發(fā)RSA和晚期繼發(fā)RSA。多種病因可以引起反復自然流產，其中有染色體異常、內分泌失調、生殖器官解剖結構異常、細菌或病毒感染、母嬰血型不合、環(huán)境污染等。但還有一半左右的反復自然流產沒有明確病因，被稱為不明原因的反復自然流產(unexplained RsA)。近年來隨著對生殖免疫機制認識的深入，以及免疫學檢查方法的進步，免疫因素被認為是不明原因反復自然流產的主要病因[Ksouri H, Zitouni M, Achour ff, Maknib, Ben Hassen A. , Recurrent pregnancy loss related to immune disorders,Ann Med Interne (Paris) 2003s 印；154 (4) :233-47.]。與免疫因素有關的 RSA 被稱為免疫性 RSA。流行病學調查顯示早期繼發(fā)RSA多為免疫性RSA。關于引起RsA的免疫學機制，幾種代表性觀點如下(I)夫婦HLA的相容性高(increased sharing of human leukocyte antigens (HLA)),抑制母體產生抗配偶細胞毒性抗體(anti-paternal cytotoxicantibodies, APCA)、抗個體基因型抗體(anti-idiotypic antibodies, Ab2)、混合淋巴細胞反應阻斷抗體(mixed lymphocyte reaction blocking antibodies, MLR-Bf)等阻止母親免疫系統(tǒng)對胚胎攻擊的封閉抗體(blocking antibodies, BA) ； (2)輔助T細胞I(Thl)來源的細胞因子和自然殺傷細胞的(natural killer cells, NK)過度活化(Overactivity of T helper-1 (Th-I) cytokines) ； (3)抗憐脂抗體(antiphosphokipidantibodies APA)水平的異常增高抗磷脂抗體是ー組自身免疫性抗體，其中包括抗心憐月旨抗體、各良瘡饑 7疑抗體(i.e., lupus anticoagulants and anticardiolipin [aCL]antibodies)等。由于對母體和胎兒之間的免疫相容機制缺乏透徹的了解，現(xiàn)在對反復自然流產的免疫學發(fā)病機制還沒有準確的認識，至今還沒有療效十分確定的治療方法?，F(xiàn)在應用比較廣泛的免疫性RSA的治療方法是淋巴細胞免疫治療。自Taylor和Faulk于1981年首次給不明原因RSA患者輸注取自配偶的混合白細胞懸液后，RSA的免疫治療在國內外均已開肢[batenby PA,しameron K, bimes RJ. Treatment of recurrent spontaneous abortionby immunization with paternal lymphocytes results of a controlled trial. Am JReprod Immunol. 1993Mar ；29(2) :88-94.]。免疫原多采用丈夫的淋巴細胞。方法為從配偶的靜脈血中分離提取淋巴細胞，皮內注射；也可以用丈夫的濃縮白細胞或全血進行靜脈注射；如果先用200radX射線照射滅活細胞再行皮內注射，可減少抗宿主反應。通常在妊娠前免疫2 4次，毎次間隔2周，妊娠后加強免疫I 3次。在淋巴細胞免疫治療RSA開展20年后的今天，經國內外學者大量研究，發(fā)現(xiàn)該治療方法治療效果不確定，副作用大。有學者檢索了 1981 1994. 9間發(fā)表的大部分RSA免疫治療的文獻，發(fā)現(xiàn)有嚴格實驗對照和具有分析價值的6份研究結果中中僅ー份顯示RSA免疫治療有效，其余研究中治療組與對 照組相比無統(tǒng)計學差異(顏建化、朱錫華，論反復自然流產免疫治療的科學性與研究対策，科學，1994. 6 59-62)。Charles A. Omwandho 等(Recurrent Pregnancy Losses and theRole of Immunotherapy. Review Article, Arch Gynecol Obstet (2000) 264 :3-12)發(fā)現(xiàn)，雖然ー些實驗數(shù)據看起來支持淋巴細胞免疫治療的有效性，但與用非免疫方法例如心理支持、關愛等治療的對照組相比，臨床治愈率沒有統(tǒng)計學差異。用失活的細菌或融血后UV照射的自身血液對RSA患者進行免疫治療，取得了同樣高的治愈率。這些實驗結果置疑了淋巴細胞免疫治療的有效性。此外，淋巴細胞治療有ー些嚴重的副作用，例如紅細胞致敏、血小板減少、胎兒宮內生長遲緩等。而且由于該方法使用的是具有完整核物質的活細胞，因此ー些通過血液傳播的疾病如AIDS等可以從ー個個體轉移到另ー個個體。因此，本領域迫切需要ー種療效確切、副作用小的針對免疫性RSA的治療方法。本發(fā)明人在對免疫性早期繼發(fā)RSA的發(fā)病機理的深入研究基礎上，建立了ー種高效、安全的RSA免疫治療方法。發(fā)明概述本發(fā)明提供I) 一種用于治療個體反復自然流產的藥物組合物，其特征在于含有治療有效量的來自所述個體配偶的2號染色體或其含有纖連蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)編碼基因的片段。2) 一種用于治療個體反復自然流產的藥物組合物，其特征在于其含有治療有效量的來自多個男性個體的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段的混合物。3)作為藥物的男性2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段。4)能夠降低體內抗核抗體水平的物質、特別是來自男性的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段在制備治療反復自然流產的藥物中的應用。5) ー種治療個體反復自然流產的方法，其包括給予需要治療的個體治療有效量的能夠降低體內抗核抗體水平的物質。6)根據上述5)的治療方法，其中所述能夠降低體內抗核抗體水平的物質是來自所述個體配偶的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段。7)根據上述5)的治療方法，其中所述能夠降低體內抗核抗體水平的物質是來自多個男性個體的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段的混合物。本發(fā)明提供的RSA治療藥物組合物和治療方法經臨床驗證，療效確切(有效率在95%以上)，未發(fā)現(xiàn)明顯副作用。發(fā)明詳沭本發(fā)明人對早期繼發(fā)RSA進行了臨床流行病學研究，發(fā)現(xiàn)在多種相關因素中人流與早期繼發(fā)RSA的相關性最高，并且其中大多數(shù)繼發(fā)自然流產發(fā)生的妊娠周與人流的妊娠周相同或相近，與對照組相比具有顯著的統(tǒng)計學差異(結果見表I)。因此，本發(fā)明人推測人流是早期繼發(fā)RSA的誘因。表I早期繼發(fā)RSA的流行病學調查
項目病例數(shù)(N)人流時間一致
例數(shù)百分比(％) 例數(shù)百分比(％ )
_ RSA3532 __ 913086
對照__MO__28— _20 _ ——— ——_
_x2 _ _52.4_ _
P _ <0.01 _ __ _為了探詢早期繼發(fā)RSA的發(fā)病機制，本發(fā)明人對有人流病史的早期繼發(fā)RSA患者的再次懷孕進行監(jiān)測，當發(fā)現(xiàn)胚胎停育后，通過藥物流產獲得具有完整胎盤絨毛的RSA胚胎標本。無反復自然流產患者藥物流產所獲得的胚胎標本作為對照。對所獲得的胚胎絨毛組織進行顯微水平和超微水平的觀察，并進行免疫組化研究。結果發(fā)現(xiàn)，在光鏡下這兩種絨毛結構沒有差別，但在電鏡下，對照標本的滋養(yǎng)層細胞外有一層致密的蛋白網結構，而RSA患者標本的滋養(yǎng)層細胞是裸露的(結果見圖I和圖2)。免疫組化顯示，對照標本的滋養(yǎng)細胞層與蛻膜之間存在纖連蛋白帶，并且滋養(yǎng)細胞之間也存在纖連蛋白帯，而RSA患者標本的滋養(yǎng)層細胞外沒有纖連蛋白。因此本發(fā)明人認為滋養(yǎng)細胞層外的纖連蛋白帶是構成胎盤免疫屏障的主要結構，該纖連蛋白帶缺失所導致的免疫屏障功能破壞是免疫性RSA的病因。為了研究免疫性RSA患者滋養(yǎng)細胞層外的纖連蛋白帶缺陷的原因，本發(fā)明人用檢測纖連蛋白抗體的試劑盒檢測了 30例有人流病史的早期繼發(fā)RSA患者血清中的抗FN抗體，結果與對照組相比無統(tǒng)計學差異。但令人驚異的是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這些患者血清中抗2號染色體(含F(xiàn)N編碼基因)的抗核抗體水平(按實施例2所述方法測定)與對照組相比明顯升高(見表2)。因此本發(fā)明人對免疫性RSA的發(fā)病機制提出如下假說在對妊娠進行人工干預例如人工流產的過程中，胚胎細胞破裂，配偶來源的處于表達狀態(tài)的FN編碼基因作為抗原被遞呈給母體的免疫系統(tǒng)，產生抗FN編碼基因的抗核抗體。與同一配偶再次懷孕時，抗FN編碼基因的抗核抗體進入滋養(yǎng)細胞，與處于表達狀態(tài)的FN基因結合，封閉該基因，使胚胎滋養(yǎng)層細胞外的纖連蛋白不能正常形成，胎盤免疫屏障的完整性被破壞，從而母體對胚胎產生排斥反應，胚胎停止發(fā)育，流產發(fā)生。 FN是ー種大分子多功能糖蛋白，存在于結締組織、細胞表面、細胞漿和其它體液中。已有研究發(fā)現(xiàn)胚胎滋養(yǎng)細胞外存在FN帶，但認為它僅在胎盤與蛻膜的連接[RonaldF. Femberg, Harvey J. Kiiman, ana しharles J. Lockwood, Is Oncofetal Fibronectma Trophoblast Glue for Human Implantation American Journal of Pathology,Vol. 138，No. 3，March 1991]、滋養(yǎng)細胞在蛻膜中的移動和侵襲中起作用[Chakraborty C，Gleeson LM, McKinnon T, Laia PK. , Regulation of numan trophoblast migration andinvasiveness. Can J Physiol Pharmacol. 2002 Feb ；80 (2) :116-24. Review.]。還有研究認為檢測孕婦宮頸分泌物中的FN水平能夠預測早產[Koenn ME. ,Fetal fibronectin,ClinLab Sci. 2002 Spring ；15(2) :96_8，115]。但現(xiàn)有技術對于FN在胚胎免疫屏障中的作用沒有明確的認識。1995年通過放射自顯影技術證實了人類FN基因位于2號染色體長臂3區(qū)4 帶(2q34)。本發(fā)明人在上述對免疫性RSA發(fā)病機制的研究基礎上，進行了進ー步的深入研究，試圖尋找對免疫性RSA的有效治療方法。結果驚人地發(fā)現(xiàn)，給免疫性早期繼發(fā)RSA患者懷孕前注射配偶來源的含F(xiàn)N編碼基因的2號染色體，可以有效地降低患者外周血中抗2號染色體的抗核抗體水平(表2)。更令人異的是，通過孕前和/或孕中顯著降低所述抗核抗體水平，可以使免疫性RSA患者正常妊娠和生育。表2治療前后免疫性RSA患者血清抗核抗體水平的變化
權利要求
1.一種用于治療個體反復自然流產的藥物組合物，其特征在于其含有治療有效量的來自所述個體配偶的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段。
2.根據權利要求I的藥物組合物，其特征在于其含有分離的完整2號染色體。
3.根據權利要求2的藥物組合物，其特征在于所述2號染色體是分離自M期體細胞的2號染色體。
4.一種用于治療個體反復自然流產的藥物組合物，其特征在于其含有治療有效量的來自多個男性個體的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段的混合物。
5.根據權利要求4的藥物組合物，其特征在于其含有分離的完整2號染色體。
6.根據權利要求5的藥物組合物，其特征在于所述2號染色體是分離自M期體細胞的2號染色體。
7.根據權利要求4的藥物組合物，其特征在于所述多個男性個體是指3名以上男性個體。
8.根據權利要求4的藥物組合物，其特征在于所述多個男性個體是指10名以上男性個體。
9.根據權利要求4的藥物組合物，其特征在于所述多個男性個體是指20名以上男性個體。
10.作為藥物的男性2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段。
11.能夠降低體內抗核抗體水平的物質在制備治療反復自然流產的藥物中的應用。
12.權利要求11的應用，其中所述能夠降低體內抗核抗體水平的物質是來自男性的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段。
13.ー種治療個體反復自然流產的方法，其包括給予需要治療的個體治療有效量的能夠降低體內抗核抗體水平的物質。
14.根據權利要求13的方法，其中所述能夠降低體內抗核抗體水平的物質是來自所述個體配偶的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段。
15.根據權利要求14的方法，其特征在于其中給予分離的完整2號染色體。
16.根據權利要求15的方法，其特征在于所述2號染色體是分離自M期體細胞的2號染色體。
17.根據權利要求13的方法，其中所述能夠降低體內抗核抗體水平的物質是來自多個男性個體的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片段的混合物。
18.根據權利要求17的方法，其特征在于其中給予分離的完整2號染色體的混合物。
19.根據權利要求18的方法，其特征在于所述2號染色體是分離自M期體細胞的2號染色體。
20.根據權利要求17的方法，其特征在于所述多個男性個體是指3名以上男性個體。
21.根據權利要求20的方法，其特征在于所述多個男性個體是指10名以上男性個體。
22.根據權利要求21的方法，其特征在于所述多個男性個體是指20名以上男性個體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療個體的免疫性反復自然流產的藥物組合物，其含有治療有效量的能夠降低體內抗核抗體水平的物質，特別是來自所述個體配偶的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片斷，或者治療有效量的來自多個男性個體的2號染色體或其含有纖連蛋白編碼基因的片斷的混合物。還公開了治療免疫性反復自然流產的方法。
文檔編號A61K48/00GK102657876SQ20121010874
公開日2012年9月12日 申請日期2004年2月20日 優(yōu)先權日2004年2月20日
發(fā)明者陳鳳林 申請人:北京新景安太醫(yī)療技術服務有限公司