專利名稱：何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位及其提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及何首烏的有效部位的提取，特別涉及一種何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位及其提取方法。
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松癥是以骨組織顯微結(jié)構(gòu)受損，骨礦成分和骨基質(zhì)等比例地不斷減少，骨質(zhì)變薄，骨小梁數(shù)量減少，骨脆性増加和骨折危險(xiǎn)度升高的ー種全身代謝障礙的疾病，是絕經(jīng)后婦女和老年人的一種常見病。糖尿病、甲狀旁腺疾病、甲亢、慢性腎小球腎炎、慢性腎盂腎炎等所致的腎性骨營養(yǎng)不良等多種疾病均可繼發(fā)骨質(zhì)疏松癥。此外，藥物性特別是長期應(yīng)用腎上腺糖皮質(zhì)激素、抗癌化療藥、維甲酸等，也可導(dǎo)致嚴(yán)重的骨質(zhì)疏松癥。骨質(zhì)疏松癥已經(jīng)成為人類最常見的疾病之一，嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量，防治骨質(zhì)疏松是人類健康領(lǐng)域的重要研究課題。
我國中醫(yī)認(rèn)為，骨質(zhì)疏松的根本原因在干“腎虛”。何首烏是我國的傳統(tǒng)中藥，為廖科植物何首烏的塊根，其性味苦、甘、溫，歸肝、腎經(jīng)，能夠補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、益精血、烏須發(fā)，具有促進(jìn)造血、提高機(jī)體免疫力、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、保肝、抗衰老、潤腸通便以及影響內(nèi)分泌等重要作用，臨床常用于高血壓、腎虛腰痛、腰膝無力、須發(fā)早白、風(fēng)疹瘙癢、瘡癰、瘰疬以及痔瘡等癥。CN 1114419C首次公開了何首烏及其提取物防治骨質(zhì)疏松癥的新用途，此后，眾多學(xué)者在何首烏對于骨質(zhì)疏松癥的治療方面展開了大量研究。CN 1475252A公開了ー種治療骨質(zhì)疏松的藥物及制備方法，是先將鹿茸、部分制何首烏、紫河車、三七粉碎成細(xì)粉；再將部分制何首烏用こ醇回流提取，合并提取液，濾過，回收こ醇，龜甲加水煎煮，濾過備用，當(dāng)歸、砂仁加水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油以環(huán)糊精迸行包合，蒸餾后水溶液另器收集，收集備用，杜仲、水蛭加水煎煮，濾過，濾液放置，藥渣與上述備用藥渣混合，加水煎煮，濾過，最后合并上述各煎煮液，與上述醇提取膏合井，加入上述細(xì)粉而得。CN 1911420Α公開了ー種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥復(fù)方制劑及制備方法。它由方海、熟地黃、續(xù)斷、骨碎補(bǔ)、制何首烏、土鱉蟲、煅自然銅、當(dāng)歸、川芎、莪術(shù)所制成。其制法是
(I)取當(dāng)歸、川芎、莪術(shù)水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，藥渣及少量水提液；(2)取方海、土鱉蟲，カロ水煎煮，水煎液濃縮；(3)取煅自然銅，加醋酸水煎煮，水煎液濾過，濾液濃縮；(4)取骨碎ネト、制何首烏、續(xù)斷、熟地黃，合并制法(I)的藥渣，加水提取こ醇沉淀或加こ醇提取，濃縮；
(5)將上述所有濃縮液合并濃縮，干燥，粉碎，得浸膏粉；(6)將干浸膏粉碎后，添加適宜的輔料可制成ロ服液、顆粒劑、膠囊劑、片劑或微丸等。具有抑制血小板聚集、改善血液循環(huán)、提高骨密度、促進(jìn)骨生長、加快骨質(zhì)疏松癥愈合、縮短愈合時(shí)間等功效。CN 101468104Α公開了ー種治療骨質(zhì)疏松癥的中藥復(fù)方制劑，其采用淫羊藿、黃芪、制何首烏、骨碎補(bǔ)和枸杞原料藥，通過大孔吸附樹脂、超濾等分離純化技木，提取純化上述復(fù)方中的截留分子量為〈I萬和1-5萬的總多糖和總黃酮部位為有效部位，制得治療骨質(zhì)疏松癥的中藥復(fù)方制劑。
CN 101361866A公開了ー種巴戟中藥組合物作為制備治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥藥物中的應(yīng)用，所述巴戟中藥組合物重量(份)配比是巴戟天16-24、何首烏12. 8-22. 4、杜仲9. 6-14. 4、肉蓯蓉6. 4-9. 6、續(xù)斷9. 8-10. 2、仙茅4. 8-7. 2、金纓子16-24、淫羊藿(葉)
I.6-2. 4、覆盆子8-12、當(dāng)歸6. 4-9. 6、黨參3. 2-4. 8、熟地黃8_12、枸杞子6. 4-9. 6、甘草12. 8-19. 2、黃芪4. 8-7. 2、狗脊12. 8-22. 4 ;采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成ロ服液、片劑、膠囊劑和顆粒劑。CN101112445A公開了ー種治療骨質(zhì)疏松癥的藥物配方。包括下列重量份的原料熟地200-1200，肉蓯蓉100-600，淫羊藿50-500，鹿銜草100-600，骨碎補(bǔ)100-600，川斷100-600，狗脊 100-600，杜仲 100-600，黃芪 100-1200，當(dāng)歸 50-500，何首烏 100-1000，雞血藤 100-1000，桑寄生 100-600，靈仙 50-600，白術(shù) 100-600，牛膝 50-600，枸杞子 100-600，鹿角霜100-600，巴戟天100-600，甘草50-400，牡蠣200-2000。主治肝腎虧虛、筋骨失養(yǎng)、瘀血阻滯、腰背疼痛、下肢痿弱疼痛等，主要適用于骨質(zhì)疏松癥上述癥候者。CN 1994140A公開了ー種含有中藥何首烏提取物首烏粉的首烏芝麻糊，其有促進(jìn) 骨形成的良好功能，還具有降血脂，保護(hù)肝臟、腎臟及抗衰老作用，是ー種適于骨質(zhì)疏松患者以及高血脂、肥胖及脂肪肝人群服用的保健食品。CN 101574498A公開了ー種治療骨質(zhì)疏松癥的復(fù)方鹿茸健骨膠囊及其制備方法和其質(zhì)量控制方法。其有效成分由鹿茸、制何首烏、龜甲、杜仲、紫河車、當(dāng)歸、三七、水蛭、砂仁原料藥制成，主要采用煎煮、こ醇回流提取等制備エ藝。CN 101953972A公開了ー種具有抗骨質(zhì)疏松功效的中藥復(fù)方，它包括如下重量份數(shù)的組分黃芪12-25份，熟地10-20份，茯苓10-18份，淮山藥12-25份，何首烏10-35份，淫羊霍12-25份，山茱萸10-20份，女貞子12-25份,旱蓮草12-20份,扁 12-20份。該發(fā)明還公開了上述具有抗骨質(zhì)疏松功效的中藥復(fù)方的制備方法及其應(yīng)用。CN 102166286Α公開了ー種治療骨質(zhì)疏松癥的藥物。由以下重量份的原料藥制成蒼術(shù)油3-5份、黃芪10-15份、黨參10-15份、麝香10-15份、蟾蜍10-15份、何首烏10-15份、血竭10-15份、牡礪10-15份、珍珠10-15份；所述倉術(shù)油是通過以下步驟制得取蒼術(shù)藥材，加水浸泡，水蒸汽蒸餾提取，分離得油狀物為蒼術(shù)油。上述公開的技術(shù)方案都是利用了本發(fā)明前期研究(CN 1114419C)中已經(jīng)證實(shí)的何首烏可用于防治骨質(zhì)疏松的性質(zhì)，何首烏在組方中或是作為主要成分或是作為輔助成分，與配方中的其它組分配伍共同發(fā)揮作用，而實(shí)際上對于含何首烏而言，其中究竟何種有效部位真正發(fā)揮了防治骨質(zhì)疏松癥的功效并不清楚，將何首烏中全部用于骨質(zhì)疏松癥的治療，不僅浪費(fèi)資源，而且藥效較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于，尋找何首烏中抗骨質(zhì)疏松癥的有效部位，進(jìn)而提供ー種該有效部位的提取方法，所述提取方法能夠最大限度地從何首烏中提取出防治骨質(zhì)疏松癥的有效部位，為以何首烏為原料制備防治骨質(zhì)疏松癥的高效藥物提供基礎(chǔ)，同時(shí)節(jié)約出何首烏中其他有效部位另作他用，從而最大限度地利用何首烏資源。現(xiàn)已知何首烏的活性成分主要包括蒽醌類(anthraquinones)、ニ苯こ烯苷類(stilbenes)、磷脂類(lecithin);此外，還含有五味子素、胡蘿卜苷、沒食子酸、兒茶素、β-谷留醇、苜蓿素等以及多種氨基酸和微量元素。其中蒽醌類物質(zhì)具有顯著的抑制腫瘤和癌癥的作用以及一定的抗炎抗菌作用，以往曾以其含量的高低來評價(jià)何首烏的質(zhì)量，現(xiàn)因其毒性較大已不用作評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。何首烏多糖可以提高體內(nèi)抗氧化酶活性，清除氧自由基及抑制脂質(zhì)過氧化。卵磷脂和鐵分別是細(xì)胞膜和血紅蛋白組分，能促進(jìn)紅細(xì)胞生成，有補(bǔ)血作用，卵磷脂還具有抗衰老及增強(qiáng)記憶カ的作用(譚凱麗，廖海民。何首烏的藥理作用研究進(jìn)展。山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2010,29 (1):72-75. )。ニ苯こ烯苷現(xiàn)已取代蒽醌類成為評價(jià)何首烏質(zhì)量的最重要指標(biāo)，原因在于已證實(shí)ニ苯こ烯苷具有清除氧化自由基、抗腫瘤、降血脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)肝臟、舒張血管、防治老年癡呆以及提高記憶功能等多種重要作用(謝嵐。何首烏及ニ苯こ烯苷的研究進(jìn)展。天津藥學(xué)，2010，22 (3) :70-74)，中華人民共和國藥典已將其作為檢測何首烏的定量指標(biāo)。 ニ苯こ烯苷類是中藥何首烏的特有成分，何首烏中已發(fā)現(xiàn)的ニ苯こ烯苷類包括2，3，5，4’-四羥基ニ苯こ烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(簡稱ニ苯こ烯苷 )、2，3，5，4’-四羥基ニ苯こ烯-2，3-ニ-O-β-D-葡萄糖苷(即何首烏丙素)、2，3，5，4’_四羥基ニ苯こ烯-2-0- (6〃 -Ο-α-D-吡喃葡萄糖)-β-D-吡喃葡萄糖苷、2，3，5，4’_四羥基ニ苯こ烯-O- (6〃 -O-こ?；?-β-D-葡萄糖苷等?；讠吮饯诚┸疹悶楹问诪醯奶赜谐煞智液问诪跻驯蛔C實(shí)的抗骨質(zhì)疏松作用，同時(shí)基于ニ苯こ烯苷類在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與雌激素的類似性，推測ニ苯こ烯苷類是何首烏抗骨質(zhì)疏松的主要活性成分。鑒于ニ苯こ烯苷類成分為單糖苷，易溶于こ酸こ酷，故選用こ酸こ酯作為溶劑以期從何首烏中萃取獲得ニ苯こ烯苷類。為此，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案ー種何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，包括如下步驟(I)提取以低碳醇溶液或水作為提取溶劑，超聲波提取何首烏原料，收集合并提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏。所述低碳醇溶液是指碳原子數(shù)< 5的醇的水溶液，例如可以是碳原子數(shù)為1、2、3、
4、5的醇的水溶液，典型但非限制性的例子有甲醇的水溶液、こ醇的水溶液、丙醇的水溶液、丁醇的水溶液、戊醇的水溶液，其中優(yōu)選こ醇的水溶液。所述こ醇的水溶液既可以提取極性小的成分也可以提取極性大的成分，而且穿透能力強(qiáng)，其濃度優(yōu)選為0-90%，例如可以是O、5%、12%、26%、38%、45%、50%、57%、61%、79%、84%、90% ;進(jìn)ー步優(yōu)選為 70-90%，最優(yōu)選為 85%。當(dāng)濃度為O時(shí)，是指溶液中不含有こ醇，即所述的提取溶劑為水。所述超聲波提取是本領(lǐng)域技術(shù)人員在提取中藥材和各種動(dòng)、植物有效成分時(shí)的慣用手段，具有提取溫度低、提取率高和提取時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，其具體的エ藝條件是本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)常識、經(jīng)驗(yàn)以及實(shí)際情況可以確定的。優(yōu)選地，所述超聲波提取次數(shù)為1-10次，例如可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10次；
進(jìn)ー步優(yōu)選為1-5次，最優(yōu)選為3次。優(yōu)選地，所述超聲波提取，其毎次的時(shí)間為O. 1-1小時(shí)，例如可以是O. 1,0. 2,0. 4、
O.45,0. 5,0. 6,0. 74,0. 8,0. 9、I小時(shí)；進(jìn)ー步優(yōu)選為O. 2-0. 8小時(shí)；最優(yōu)選為O. 5小時(shí)。優(yōu)選地，所述何首烏原料為野生何首烏、何首烏藥材或何首烏飲片。優(yōu)選地，所述提取溶劑與何首烏原料的體積/重量比(mL/g)為2-20:1，例如可以是 2 :1、3 :1、5 :1、7· 5 :1、8 :1、9· 2 :1、10 :1、11· 5 :1、13 :1、15 :1、16 :1、17 :1、19 :1、20 :1 ;進(jìn)ー步優(yōu)選為6-20 1 ;最優(yōu)選為10 :1。優(yōu)選地，所述濃縮為減壓濃縮；所述減壓是指將壓カ減至常壓的一半，即50kPa。(2)分離將步驟(I)所得何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，用石油醚和こ酸こ酯先后萃取混懸液，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液。優(yōu)選地，所述加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為 2-10:1，例如可以是 2 :1、3 :1、4 :1、5 :1、6 :1、7 :1、7· 5 :1、8 :1、9 :1、10 1 ;進(jìn)一步優(yōu)選為3-5 1 ;最優(yōu)選為4 :1。所述石油醚用于萃取極性小的成分，例如脂溶性成分和苷元，這部分成分屬于何首烏中沒有藥效的成分，因而棄去。所述こ酸こ酯屬于中等極性的溶剤，比石油醚萃取成分的極性大，容易溶解單糖 苷類成分，因此可以萃取到屬于單糖苷類的ニ苯こ烯苷成分。同時(shí)，こ酸こ酯容易揮發(fā)，多余的量可以從產(chǎn)物中完全除去，因此，得到的產(chǎn)物純度較高，雜質(zhì)較少。優(yōu)選地，所述用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液，次數(shù)為2-8次，例如可以為2、
3、4、5、6、7、8次；進(jìn)ー步優(yōu)選為4-6次；最優(yōu)選為5次。(3)干燥將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液減壓濃縮干燥。所述減壓是指將壓カ減至常壓的一半，即50kPa。優(yōu)選地，所述減壓的時(shí)間為30-60min,例如可以是30min、35min、38min、40min、42min、43. 5min、45min、47min、50min、51min、55min、56min、59min、60min ;進(jìn)一步優(yōu)選為35-55min ;最優(yōu)選為 40_50min。優(yōu)選地，所述濃縮在彡50°C的溫度下進(jìn)行，例如可以是50で、49 °C、47. 5 °C、45°C、44°C、40°C、35°C、30°C、25°C、2(rC、l(rC、5°C、(rC ;進(jìn)ー步優(yōu)選為彡 400C ;最優(yōu)選為10-30°C。優(yōu)選地，所述濃縮的時(shí)間為30-60min,例如可以是31min、34min、36min、40. 5min、43min、44min、46min、48min、49min、50min、54min、55min、57min、60min ;進(jìn)一步優(yōu)選為35-55min ;最優(yōu)選為 40_50min。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，步驟(3)所述濃縮干燥是指將こ酸こ酯提取液直接揮干溶劑，得到黃褐干膏，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，步驟(3)所述濃縮干燥是指將こ酸こ酯提取液濃縮后直接噴霧干燥成粉末，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。所述噴霧干燥是系統(tǒng)化技術(shù)應(yīng)用于物料干燥的ー種方法，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的那樣，是在干燥室中將稀料經(jīng)霧化后，使其在與熱空氣的接觸中，水分迅速汽化，從而得到干燥產(chǎn)品，即能夠直接使溶液干燥成粉狀或顆粒狀制品，省去了蒸發(fā)、粉碎等エ序。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，步驟(3)所述濃縮干燥是指將こ酸こ酯提取液濃縮成稠膏狀后再冷凍干燥，得到凍干粉末，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。所述冷凍干燥是指將待干燥物快速凍結(jié)后，再在高真空條件下將其中的冰升華為水蒸氣而去除的干燥方法，如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的那樣，由于冰的升華帶走熱量使整個(gè)凍干過程保持低溫凍結(jié)狀態(tài)，因而干燥后的物料完好地保持了原來的化學(xué)組成和物理性質(zhì)。綜上，本發(fā)明提供ー種何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，エ藝條件優(yōu)化后包括以下步驟
(I)提取以濃度為0-90%的こ醇溶液作為提取溶劑，超聲波提取何首烏原料1-5次，每次O. 1-1小時(shí)，所述こ醇溶液與何首烏原料的體積/重量比(mL/g)為2-20:1，收集合并提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；(2)分離將步驟(I)所得何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為2-10:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液2-8次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；(3)干燥將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及彡50°C的溫度下濃縮干燥30_60min。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，所述步驟(3)為將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在 50kPa的壓カ以及彡500C的溫度下，經(jīng)30-60min直接揮干溶劑，得到黃褐干膏，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，所述步驟(3)為將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及彡50°C的溫度下，經(jīng)30-60min濃縮后直接噴霧干燥成粉末，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，所述步驟(3)為將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及< 50°C的溫度下，經(jīng)30-60min濃縮成稠膏狀后再冷凍干燥，得到凍干粉末，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。ー種何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，エ藝條件進(jìn)ー步優(yōu)化后包括以下步驟(I)提取以濃度為70-90%的こ醇溶液作為提取溶劑，超聲波提取何首烏原料1-5次，每次O. 2-0. 8小時(shí)，所述こ醇溶液與何首烏原料的體積/重量比(mL/g)為6-20:1，收集合并提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；(2)分離將步驟(I)所得何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為3-5:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液4-6次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；(3)干燥將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及彡40°C的溫度下濃縮干燥35_55min。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，所述步驟(3)為將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及彡40°C的溫度下，經(jīng)35-55min直接揮干溶劑，得到黃褐干膏，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，所述步驟(3)為將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及< 40°C的溫度下，經(jīng)35-55min濃縮后直接噴霧干燥成粉末，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，所述步驟(3)為將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及< 40°C的溫度下，經(jīng)35-55min濃縮成稠膏狀后再冷凍干燥，得到凍干粉末，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。ー種何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其按照最優(yōu)的エ藝條件包括以下步驟(I)提取以濃度為85%的こ醇溶液作為提取溶剤，超聲波提取何首烏原料3次，每次O. 5小時(shí)，所述こ醇溶液與何首烏原料的體積/重量比(mL/g)為10 :1，收集合并提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；(2)分離將步驟(I)所得何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為4:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液5次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；(3)干燥將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及10_30°C的溫度下濃縮干燥40_50min。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，所述步驟(3)為將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及10-30°C的溫度下，經(jīng)40_50min直接揮干溶剤，得到黃褐干膏，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，所述步驟(3)為將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在 50kPa的壓カ以及10-30°C的溫度下，經(jīng)40-50min濃縮后直接噴霧干燥成粉末，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。作為ー個(gè)可選技術(shù)方案，所述步驟(3)為將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及10-30°C的溫度下，經(jīng)40_50min濃縮成稠膏狀后再冷凍干燥，得到凍干粉末，即為何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。本發(fā)明將何首烏醇水提取物經(jīng)こ酸こ酯萃取分離，并采用HPLC法對所得產(chǎn)物進(jìn)行定性定量檢測，經(jīng)多次重復(fù)操作，均獲得ニ苯こ烯苷類含量達(dá)72. 68%以上的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。而現(xiàn)有技術(shù)中公開的從野生何首烏中提取、精制ニ苯こ烯苷的方法，是通過75%こ醇加熱回流法常規(guī)提取后，采用HPD500大孔樹脂進(jìn)行分離提純，最終獲得含量僅為50. 35%的ニ苯こ烯苷(胡錫琴等。ニ苯こ烯苷對大鼠骨密度與骨強(qiáng)度的影響。中醫(yī)學(xué)報(bào)，2011,26 (6)696-698),并且該方法利用了屬于有機(jī)聚合物的大孔樹脂，在合成過程中會(huì)殘留部分有毒的有機(jī)聚合物成分，而這些殘留物在分離純化時(shí)容易混在待分離的組分中難以除去，現(xiàn)在的新藥開發(fā)過程已經(jīng)禁止使用大孔樹脂進(jìn)行分離純化。綜上所述，本發(fā)明提供的ー種何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位即為こ酸こ酯提取部位，該部位中二苯こ烯苷成分的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高出現(xiàn)有方法所能獲得的ニ苯こ烯苷成分的含量，并且產(chǎn)物純度高、雜質(zhì)少，為以何首烏為原料制備防治骨質(zhì)疏松癥的高效藥物提供了基礎(chǔ)。同時(shí)，單純利用何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位而非何首烏的全部來防治骨質(zhì)疏松癥，可以節(jié)約出何首烏的其它有效部位用于其它疾病的治療，提高了對于何首烏資源的利用效率。下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)ー步詳細(xì)說明。但下述的實(shí)例僅僅是本發(fā)明的簡易例子，并不代表或限制本發(fā)明的權(quán)利保護(hù)范圍，本發(fā)明的權(quán)利范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)。
具體實(shí)施例方式為更好地說明本發(fā)明，便于理解本發(fā)明的技術(shù)方案，本發(fā)明的典型但非限制性的實(shí)施例如下實(shí)施例I :取何首烏飲片100克，用IL濃度為85%的こ醇溶液作為提取溶劑超聲波提取3次，毎次O. 5小時(shí)，收集合并こ醇提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；將何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為4:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液5次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；在50kPa的壓カ以及30°C的溫度下將こ酸こ酯提取液經(jīng)40min直接揮干溶劑，得到的こ酸こ酯提取物為黃褐干膏。實(shí)施例2 取廣東德慶的道地何首烏100克，用2L濃度為90%的こ醇溶液作為提取溶劑超聲波提取4次，毎次O. 6小吋，收集合并こ醇提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；將何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為3:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液4次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；在50kPa的壓カ以及20°C的溫度下將こ酸こ酯提取液經(jīng)50min濃縮后直接噴霧干燥成粉末，即為こ酸こ酯提取物。實(shí)施例3
取何首烏藥材100克，用600mL濃度為70%的こ醇溶液作為提取溶劑超聲波提取5次，毎次O. 4小吋，收集合并こ醇提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；將何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為5:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液6次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；在50kPa的壓カ以及10°C的溫度下將こ酸こ酯提取液經(jīng)45min濃縮成稠膏狀后再冷凍干燥，得到凍干粉末，即為こ酸こ酯提取物。實(shí)施例4:取何首烏飲片100克，用800mL濃度為75%的こ醇溶液作為提取溶劑超聲波提取2次，毎次O. 7小吋，收集合并こ醇提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；將何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為10:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液8次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；在50kPa的壓カ以及35°C的溫度下將こ酸こ酯提取液經(jīng)60min直接揮干溶劑，得到黃褐干膏，即為こ酸こ酯提取物。實(shí)施例5 取廣東德慶產(chǎn)的何首烏100克，用I. 5L濃度為80%的こ醇溶液作為提取溶劑超聲波提取I次，毎次O. 2小時(shí)，收集合并こ醇提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；將何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為2:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液2次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；在50kPa的壓カ以及40°C的溫度下將こ酸こ酯提取液經(jīng)55min濃縮后直接噴霧干燥成粉末，即為こ酸こ酯提取物。實(shí)施例6 取何首烏藥材100克，用I. 2L濃度為85%的こ醇溶液作為提取溶劑超聲波提取6次，毎次O. 8小時(shí)，收集合并こ醇提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；將何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為6:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液3次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；在50kPa的壓カ以及25°C的溫度下將こ酸こ酯提取液經(jīng)35min濃縮成稠膏狀后再冷凍干燥，得到凍干粉末，即為こ酸こ酯提取物。
實(shí)施例7 取何首烏飲片100克，用200mL濃度為65%的こ醇溶液作為提取溶劑超聲波提取4次，毎次O. I小時(shí)，收集合并こ醇提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；將何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為8:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液5次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液；在50kPa的壓カ以及45°C的溫度下將こ酸こ酯提取液經(jīng)30min直接揮干溶劑，得到黃褐干膏，即為こ酸こ酯提取物。實(shí)施例8 取廣東德慶產(chǎn)的何首烏100克，用500mL濃度為60%的こ醇溶液作為提取溶劑超聲波提取I次，毎次I小時(shí)，收集合并こ醇提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏；將何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為7:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液7次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液； 在50kPa的壓カ以及50°C的溫度下將こ酸こ酯提取液經(jīng)45min濃縮后直接噴霧干燥成粉末，即為こ酸こ酯提取物。實(shí)驗(yàn)例成骨細(xì)胞在骨形成過程中要經(jīng)歷成骨細(xì)胞増殖、細(xì)胞外基質(zhì)成熟、細(xì)胞外基質(zhì)礦化和成骨細(xì)胞凋亡4個(gè)階段，體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞與體內(nèi)成骨細(xì)胞具有相似的代謝功能，細(xì)胞増殖可有效地反映成骨細(xì)胞的代謝?；谶@ー原理，利用體外培養(yǎng)的新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞為研究對象，觀察不同濃度的何首烏こ酸こ酯提取部位、何首烏石油醚提取部位以及何首烏正丁醇提取部位對于新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞的増殖作用的影響。具體方法為(I)取何首烏飲片100克，用IL濃度為85%的こ醇溶液作為提取溶劑超聲波提取三次，毎次O. 5小時(shí)，收集合并こ醇提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏。(2)將何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為4: I。(3)先用石油醚萃取混懸液5次，合并石油醚提取液；然后用こ酸こ酯萃取5次，合并こ酸こ酯提取液；再用正丁醇萃取5次，合并正丁醇提取液。(4)在50kPa的壓カ以及30°C的溫度下分別將石油醚提取液、こ酸こ酯提取液、正丁醇提取液直接揮干溶劑，得到固體的石油醚提取部位、こ酸こ酯提取部位、正丁醇提取部位。(5)將こ酸こ酯提取部位、石油醚提取部位、正丁醇提取部位分別取O. Img4次，分別溶于lmL、10mL、100mL、lL的PBS緩沖液中，得到濃度分別為10-lmg/mL、10_2mg/mL、10-3mg/mL、10-4mg/mL的こ酸こ酯提取液、石油醚提取液、正丁醇提取液共12組。(6)取步驟(5)得到的各組提取液以及作為空白對照組的PBS緩沖液分別作用于新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞24h、48h、72h，觀察各組的成骨細(xì)胞的増殖情況,結(jié)果如表I所示表I不同濃度何首烏提取部位對成骨細(xì)胞増殖的影響(n=6 _ 土S)
權(quán)利要求
1.ー種何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)提取以低碳醇溶液或水作為提取溶劑，超聲波提取何首烏原料，收集合并提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏； (2)分離將步驟(I)所得何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液； (3)干燥將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液減壓濃縮干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其特征在于，步驟(I)所述低碳醇溶液是指碳原子數(shù)< 6的醇的水溶液，優(yōu)選こ醇的水溶液；所述こ醇的水溶液其濃度優(yōu)選為0-90%，進(jìn)ー步優(yōu)選為70-90%，最優(yōu)選為85% ； 優(yōu)選地，所述何首烏原料為野生何首烏、何首烏藥材或何首烏飲片； 優(yōu)選地，所述超聲波提取次數(shù)為1-10次，進(jìn)ー步優(yōu)選為1-5次，最優(yōu)選為3次； 優(yōu)選地，所述提取溶劑與何首烏原料的體積/重量比(mL/g)為2-20:1，進(jìn)ー步優(yōu)選為6-20:1，最優(yōu)選為10:1 ； 優(yōu)選地，所述超聲波提取，其每次的時(shí)間為O. 1-1小吋，進(jìn)ー步優(yōu)選為O. 2-0. 8小時(shí)，最優(yōu)選為O. 5小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其特征在干，步驟(2)所述加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為2-10:1，進(jìn)ー步優(yōu)選為3-5:1，最優(yōu)選為4:1; 優(yōu)選地，所述用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液的次數(shù)為2-8次，進(jìn)ー步優(yōu)選為4-6次，最優(yōu)選為5次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其特征在于，步驟(3)所述減壓是指將壓カ減至常壓的一半，即50kPa ； 優(yōu)選地，所述減壓的時(shí)間為30-60min，進(jìn)ー步優(yōu)選為35_55min，最優(yōu)選為40_50min ； 優(yōu)選地，所述濃縮在< 50°C的溫度下進(jìn)行，進(jìn)ー步優(yōu)選為< 40°C，最優(yōu)選為10-30°C。
優(yōu)選地，所述濃縮的時(shí)間為30-60min，進(jìn)ー步優(yōu)選為35_55min，最優(yōu)選為40_50min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一所述的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)提取以濃度為0-90%的こ醇溶液作為提取溶劑，超聲波提取何首烏原料1-5次，每次O. 1-1小時(shí)，所述こ醇溶液與何首烏原料的體積/重量比(mL/g)為2-20:1，收集合并提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏； (2)分離將步驟(I)所得何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為2-10:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液2-8次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液； (3)干燥將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及<50°C的溫度下濃縮干燥30_60min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5之一所述的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其特征在于，包括如下步驟 (I)提取以濃度為70-90%的こ醇溶液作為提取溶劑，超聲波提取何首烏原料1-5次，每次O. 2-0. 8小時(shí)，所述こ醇溶液與何首烏原料的體積/重量比(mL/g)為6-20:1，收集合并提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏； (2)分離將步驟(I)所得何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為3-5:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液4-6次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液； (3)干燥將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及<40°C的溫度下濃縮干燥35_55min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6之一所述的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其特征在于，包括如下步驟 (1)提取以濃度為85%的こ醇溶液作為提取溶剤，超聲波提取何首烏原料3次，每次O.5小時(shí)，所述こ醇溶液與何首烏原料的體積/重量比(mL/g)為10:1，收集合并提取液，濃縮至無醇味，得何首烏浸膏； (2)分離將步驟(I)所得何首烏浸膏冷卻至室溫，加入水制成混懸液，水的加入量與何首烏浸膏的體積/重量比(mL/g)為4:1，用石油醚和こ酸こ酯分別萃取混懸液5次，棄去石油醚提取液，合并こ酸こ酯提取液； (3)干燥將步驟(2)所得的こ酸こ酯提取液在50kPa的壓カ以及10-30°C的溫度下濃縮干燥40_50min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7之一所述的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其特征在于，步驟(3)所述濃縮干燥是指將こ酸こ酯提取液直接揮干溶劑，得到黃褐干膏。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-7之一所述的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法，其特征在于，步驟(3)所述濃縮干燥是指將こ酸こ酯提取液濃縮后直接噴霧干燥成粉末或者將こ酸こ酯提取液濃縮成稠膏狀后再冷凍干燥，得到凍干粉末。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-7之一所述的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位的提取方法提取得到的何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及何首烏抗骨質(zhì)疏松有效部位及其提取方法，其通過先用醇水溶液提取何首烏，提取液濃縮致無醇味，得浸膏，然后在浸膏中加入水得到混懸液，混懸液經(jīng)石油醚、乙酸乙酯分別萃取，得石油醚提取液(棄去)和乙酸乙酯提取液，最后將所得的乙酸乙酯提取液減壓濃縮干燥的步驟得到何首烏抗骨質(zhì)疏松的有效部位。本發(fā)明能夠最大限度地從何首烏中提取出防治骨質(zhì)疏松癥的有效部位，為以何首烏為原料制備防治骨質(zhì)疏松癥的高效藥物提供基礎(chǔ)。
文檔編號A61P19/10GK102697870SQ201210174898
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月30日
發(fā)明者于恩江, 余娟定, 典靈輝, 吳鐵, 崔燎, 趙文昌 申請人:廣東醫(yī)學(xué)院