專利名稱：用源自hiv-tat的多肽片段穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素的組合物及其局部施用和透皮遞送的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的肉毒桿菌毒素組合物，其可以局部施用以用于多種治療、美容和/或化妝目的，并且其用源自HIV-TAT的多肽片段穩(wěn)定。
背景技術(shù)：
皮膚保護(hù)身體器官免受外部環(huán)境的威脅，并起保持體溫的恒溫器作用。其由幾個(gè)不同的層組成，每層都具有特定的功能。主要的層包括表皮、真皮和皮下組織。表皮是覆蓋真皮的上皮細(xì)胞的分化層，真皮由結(jié)締組織組成。表皮和真皮都受皮下組織的進(jìn)一步支持，皮下組織是脂肪組織的內(nèi)層。表皮，皮膚的最上層，僅僅為0.1至1. 5毫米厚(Inlander, Skin, NewYork, NY:People's Medical Society, 1-7(1998))。其由角質(zhì)形成細(xì)胞組成,根據(jù)它們的的分化狀態(tài)，其被分成幾層?？梢赃M(jìn)一步將表皮分成角質(zhì)層和有活力的表皮，該有活力的表皮由granularmelphigian和基細(xì)胞組成。角質(zhì)層是吸濕性的，需要至少10%重量的水分以保持其彈性和柔軟性。吸濕性部分歸于角蛋白的持水能力。當(dāng)角質(zhì)層喪失其柔軟性和彈性時(shí)，其變得粗糙且脆，產(chǎn)生干燥皮膚。真皮，其緊位于表皮之下，為1. 5至4毫米厚。其是皮膚的三個(gè)層中最厚的。另外，真皮還具有大部分皮膚結(jié)構(gòu)，包括汗腺和脂腺(其通過皮膚中稱為毛孔或痤瘡的孔分泌物質(zhì))、毛囊、神經(jīng)末梢和血管及淋巴管(Inlander, Skin, New York, NY:People's MedicalSociety, 1_7(1998))。然而,真皮的主要組分是膠原和彈性蛋白。皮下組織是皮膚的最深層。其起用于身體熱量保存的絕緣體和用于器官保護(hù)的減震器作用(Inlander, Skin, New York, NY:People' sMedical Society, 1-7 (1998))。另外，皮下組織也貯藏用于能量?jī)?chǔ)備的脂肪。皮膚的PH通常為5至6之間。該酸性是由于存在來自于皮脂腺分泌物的兩性氨基酸、乳酸和脂肪酸。術(shù)語“酸外膜(acidmantle) ”指在皮膚的大多數(shù)區(qū)域存在水溶性物質(zhì)。皮膚的緩沖能力部分由于儲(chǔ)存在皮膚角質(zhì)層中的這些分泌物。皺紋，年齡的指示特征之一，可能是由皮膚受環(huán)境損害而蓄積的生物化學(xué)、組織學(xué)和生理學(xué)變化引起(Benedetto, InternationalJournal ofDermatology, 38:641-655(1999))。另外，存在可能引起面部皺紋的皺裙、皺紋和皺痕(creases)的其他第二因子(Stegman 等人，The Skin of the Aging Face CosmeticDermatological Surgery,第 2 版，St. Louis 編著，M0:Mosby Year Book: 5-15 (1990))。這些第二因子包括重力的持續(xù)牽拉、皮膚上經(jīng)常和持續(xù)的位置壓力(例如，在睡眠期間)和由于面部肌肉收縮引起的反復(fù)面部運(yùn)動(dòng)(Stegman等人.，The Skin of the AgingFace Cosmetic Dermato logical Surgery,第 2 版，St. Louis 編著，MO: Mosby YearBook:5-15(1990))o為了可能緩和某些老化體征，已經(jīng)使用了不同的技術(shù)。這些技術(shù)從包含a羥酸和視黃醇的面部增濕劑到外科手術(shù)方法和注射神經(jīng)毒素。例如，在1986年,Jean和AlastairCarruthers，一對(duì)由眼整形外科醫(yī)生和皮膚科醫(yī)生組成的夫妻團(tuán)隊(duì)，研究了一種使用A型肉毒桿菌毒素治療眉間區(qū)域與運(yùn)動(dòng)相關(guān)的皺紋的方法(Schantz和Scott, In Lewis GE (Ed)Biomedical Aspects of Botulinum, New York:Academic Press, 143-150(1981))。 在1992年，Carruthers'使用A型肉毒桿菌毒素來治療皺紋引起該方法最初公布(Schantz和 Scott, In Lewis GE(Ed)Biomedical Aspects of Botulinum, New York: AcademicPress, 143-150(1981))。直到1994年，同一團(tuán)隊(duì)報(bào)道了對(duì)于面部的其它運(yùn)動(dòng)相關(guān)的皺紋的經(jīng)驗(yàn)(Scott, Ophthalmol, 87:1044-1049 (1980))。這依次引起使用A型肉毒桿菌毒素進(jìn)行 化妝處理的時(shí)代的誕生。有趣地，據(jù)認(rèn)為A型肉毒桿菌毒素是人類所知最致命的天然生物劑。肉毒桿菌(C. botulinum)的孢子可在土壤中找到，并可在不正確地殺菌和密封的食物容器中生長(zhǎng)。攝入該細(xì)菌可導(dǎo)致肉毒中毒，其可能是致命的。肉毒桿菌毒素通過阻止乙酰膽堿穿過神經(jīng)肌肉接點(diǎn)的突觸傳遞或釋放而導(dǎo)致產(chǎn)生肌肉麻痹，并且其被認(rèn)為也以其它方式起作用。其作用主要是阻斷通常引起肌肉痙攣或收縮的信號(hào)，導(dǎo)致麻痹。然而，已經(jīng)將肉毒桿菌毒素的肌肉-麻痹效應(yīng)用于治療功效。已經(jīng)使用控制施用肉毒桿菌毒素來提供肌肉麻痹以治療病癥，例如以骨骼肌活動(dòng)過度為特征的神經(jīng)肌肉失調(diào)。已經(jīng)用肉毒桿菌毒素治療的病癥包括偏側(cè)面肌痙攣、成年人發(fā)病的痙攣性斜頸、肛裂、眼瞼痙攣、大腦性癱瘓、頸張力障礙、偏頭痛、斜視、顳下頜關(guān)節(jié)障礙和各種類型的肌痛性痙攣和肌痙攣。近來，在治療和化妝性面部應(yīng)用中已經(jīng)利用肉毒桿菌毒素的肌肉-麻痹效應(yīng)，所述應(yīng)用例如治療皺紋、皺眉線(frownlines)及其它面部肌肉疫攣或收縮的后果。除了 A型肉毒桿菌毒素之外，存在七種其它的血清學(xué)不同形式的肉毒桿菌毒素，其也由革蘭氏陽性菌肉毒桿菌產(chǎn)生。在這八種血清學(xué)不同類型的肉毒桿菌毒素中，可引起麻痹的七種被稱為肉毒桿菌毒素血清型A、B、C (也稱為QXD'E'F和G。這些中的每種以用特定類型的抗體中和為特征。肉毒桿菌毒素蛋白分子的分子量，對(duì)于所有七種這些活性肉毒桿菌毒素血清型，為約150kD。不同血清型的肉毒桿菌毒素在動(dòng)物種類方面不同，它們影響它們引起的麻痹的嚴(yán)重性和持續(xù)時(shí)間。例如，已經(jīng)確定A型肉毒桿菌毒素的功效為B型肉毒桿菌毒素的500倍以上，如通過在大鼠中產(chǎn)生的麻痹速率所測(cè)定。另外，已經(jīng)確定B型肉毒桿菌毒素在靈長(zhǎng)類中以480U/kg的劑量是無毒的，為A型的靈長(zhǎng)類LD5tl的約12倍。由于肉毒桿菌毒素的分子尺寸和分子結(jié)構(gòu)，其不能穿過角質(zhì)層和多層皮下結(jié)構(gòu)。當(dāng)由肉毒桿菌細(xì)菌釋放時(shí)，肉毒桿菌毒素為毒素復(fù)合物的組分，所述毒素復(fù)合物包含約150kD的肉毒桿菌毒素蛋白分子和締合的非毒素蛋白。這些內(nèi)源性的非毒素蛋白被認(rèn)為包括血凝素蛋白家族和非血凝素蛋白家族。所述非毒素蛋白被認(rèn)為穩(wěn)定毒素復(fù)合物中的肉毒桿菌毒素分子和保護(hù)它防止變性，例如，當(dāng)毒素復(fù)合物被攝取時(shí)被消化酸變性。因此，所述毒素復(fù)合物的非毒素蛋白保護(hù)肉毒桿菌毒素的活性和增加全身穿透，特別是當(dāng)經(jīng)由胃腸道施用所述毒素復(fù)合物時(shí)。更特別地，據(jù)認(rèn)為某些非毒素蛋白特異性增加穿透胃腸上皮細(xì)胞，而其它非毒素蛋白穩(wěn)定血液中的肉毒桿菌毒素分子。另外，非毒素蛋白在毒素復(fù)合物中的存在通常引起毒素復(fù)合物具有比單純的肉毒桿菌毒素分子更大的分子量，所述單純的肉毒桿菌毒素分子的分子量為約150kD，如之前指出的。例如，肉毒桿菌細(xì)菌可以產(chǎn)生A型肉毒桿菌毒素復(fù)合物，其具有約900kD、500kD或300kD的分子量。有趣地，B型和C型肉毒桿菌毒素顯然產(chǎn)生僅為700kD或500kD的復(fù)合物。D型肉毒桿菌毒素產(chǎn)生300kD和500kD兩種復(fù)合物。E型和F型肉毒桿菌毒素產(chǎn)生僅僅為約300kD的復(fù)合物。為了向肉毒桿菌毒素提供另外的穩(wěn)定性，通常通過在制備期間將毒素復(fù)合物與外源性穩(wěn)定劑(例如明膠、多糖或最常見的另外的白蛋白)組合來穩(wěn)定它們。所述穩(wěn)定劑在不同的環(huán)境中起結(jié)合和穩(wěn)定毒素復(fù)合物的作用，所述環(huán)境包括與制備、運(yùn)輸、貯藏和給藥相關(guān)的那些。通常，通過仔細(xì)地控制包含肉毒桿菌毒素復(fù)合物和白蛋白的組合物的注射，給患 者施用肉毒桿菌毒素，但是存在與該方法相關(guān)的一些問題。例如，因?yàn)樽⑸涞亩舅貜?fù)合物包含非毒素蛋白和白蛋白，這二者穩(wěn)定肉毒桿菌毒素，且增加所述毒素復(fù)合物的分子量，所以該毒素復(fù)合物在體內(nèi)具有長(zhǎng)半衰期，不易擴(kuò)散進(jìn)入組織，可能在患者中引起不想要的抗原應(yīng)答。而且，因?yàn)樗龇嵌舅氐鞍缀桶椎鞍追€(wěn)定血液中的肉毒桿菌毒素，所以必須仔細(xì)地進(jìn)行注射，以便他們不會(huì)將大量毒素釋放到患者的血流中，導(dǎo)致致命的全身中毒。因此，通常必須由深入了解人體解剖學(xué)的受過高級(jí)訓(xùn)練的醫(yī)學(xué)專業(yè)人員精確地注射。鑒于前述討論的所有問題，非常期望提供一種不使用白蛋白的穩(wěn)定肉毒桿菌毒素的方法。另外，也非常希望這樣的方法能降低肉毒桿菌毒素的抗原性和血液穩(wěn)定性，同時(shí)增加肉毒桿菌毒素復(fù)合物在體內(nèi)的擴(kuò)散速率，從而使得肉毒桿菌毒素更安全地用于各種治療、美容和/或化妝目的。還期望提供一種給藥方法，其不會(huì)決定性地依賴醫(yī)學(xué)專業(yè)人士精確地注射肉毒桿菌毒素，以便實(shí)現(xiàn)毒素的安全施用。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)方面是認(rèn)識(shí)到，HIV-TAT的某些多肽片段、或源自HIV-TAT片段的多肽片段可以添加到肉毒桿菌毒素復(fù)合物、尤其是減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中，以穩(wěn)定它們。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽片段具有與HIV-TAT的氨基酸殘基49-57 (RKKRRQRRR, SEQ ID NO.1)相對(duì)應(yīng)的序列。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述多肽片段具有與HIV-TAT的氨基酸殘基49-57的反向序列(RRRQRRKKR，下文稱作SEQ ID NO. 2)相對(duì)應(yīng)的序列。另外，本發(fā)明也涉及在功能上等價(jià)的SEQ ID NO I和2序列的多肽類似物，例如其中已經(jīng)進(jìn)行保守置換的情況。如在本申請(qǐng)中使用的，術(shù)語“HIV-TAT片段衍生物”包含由SEQ ID NO. 2定義的反向的HIV-TAT多肽、以及其中已經(jīng)進(jìn)行保守置換的SEQ ID NO I或2的任何多肽類似物。本發(fā)明的另一個(gè)方面是認(rèn)識(shí)到，從肉毒桿菌細(xì)菌獲得的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中的內(nèi)源性非毒素蛋白(即無毒的血凝素和非血凝素蛋白)會(huì)不希望地增加所述毒素復(fù)合物的穩(wěn)定性和毒性，同時(shí)不希望地降低所述毒素?cái)U(kuò)散穿過皮膚上皮的能力。本發(fā)明進(jìn)一步認(rèn)識(shí)至IJ，當(dāng)在常規(guī)制備期間將外源性穩(wěn)定劑例如白蛋白結(jié)合到肉毒桿菌毒素時(shí)，會(huì)加強(qiáng)這些作用。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是，提供肉毒桿菌毒素復(fù)合物，其中血凝素、非毒素非血凝素和/或外源性白蛋白的量與常規(guī)市售可得的肉毒桿菌毒素(例如B0T0X 或MY0BL0C )相比選擇性地且獨(dú)立地減少。這樣的肉毒桿菌毒素復(fù)合物下文稱作“減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物”。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種組合物，其包含用具有與SEQID NO.1或2相對(duì)應(yīng)的序列的多肽穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素復(fù)合物(或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物)。所述組合物任選地可包含加入的外源性穩(wěn)定劑，例如白蛋白。本文使用的術(shù)語“穩(wěn)定”是指HIV-TAT片段(例如，SEQ ID NO.1)或HIV-TAT片段衍生物(例如，SEQ ID NO. 2)防止肉毒桿菌毒素變性和保持毒素活性的能力，這可以通過SNAPtide測(cè)定或DigitalAbduction Scoring(DAS)測(cè)定來測(cè)量。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的肉毒桿菌毒素組合物被充分穩(wěn)定，以在加工和患者給藥步驟中保留基本上所有的生物學(xué)活性，所述步驟包括、但不限于，填充、凍干、儲(chǔ)存和遞送重構(gòu)。本發(fā)明還涉及一種產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)的方法，其中將本發(fā)明的穩(wěn)定的肉毒桿菌復(fù)合物或穩(wěn)定的減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物施用給患者。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，所述穩(wěn)定的肉毒桿菌復(fù)合物或穩(wěn)定的減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物以有效量局部地施用于需要這種處 理的受試者或患者的(優(yōu)選)皮膚。所述生物學(xué)效應(yīng)可以包括，例如，肌肉麻痹、減少分泌過多或出汗、治療神經(jīng)性疼痛或偏頭痛、減少肌肉痙攣、預(yù)防或減少痤瘡、減少或增加免疫應(yīng)答、減少皺紋或預(yù)防或治療各種其它病癥。在其它實(shí)施方案中，所述穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素復(fù)合物或穩(wěn)定的減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物通過腸胃外注射例如皮下注射來施用。本發(fā)明還提供了試劑盒，其用于制備包含肉毒桿菌毒素復(fù)合物(或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物)和具有根據(jù)SEQ ID NO.1或2的序列的多肽的制劑，或可用于產(chǎn)生這種制劑的預(yù)混物。還提供了試劑盒，其包含用于向受試者順次施用肉毒桿菌毒素復(fù)合物(或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物)和粘附分子的工具。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及新的組合物，其包含肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物，如本文所述，它們通過添加多肽而被穩(wěn)定，所述多肽是HIV-TAT片段或HIV-TAT片段衍生物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述起穩(wěn)定作用的多肽具有根據(jù)SEQ ID NO I或2的序列，或可以通過保守置換而與那些序列相關(guān)聯(lián)。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素組合物能夠穿過皮膚上皮運(yùn)輸或遞送肉毒桿菌毒素(也稱作“透皮遞送”)，且具有提高的穿透性、減少的抗原性和血液穩(wěn)定性。如本文所述，本發(fā)明的組合物可以用作向受試者提供肉毒桿菌毒素的局部施用劑，用于各種治療、美容和/或化妝目的。本發(fā)明的組合物還具有比肉毒桿菌毒素的其它組合物和遞送方法更高的安全特征。本文使用的術(shù)語“肉毒桿菌毒素”指任一種已知類型的肉毒桿菌毒素(S卩，約150 kD的肉毒桿菌毒素蛋白分子)，無論是由細(xì)菌生成的還是通過重組技術(shù)生成的，和可能隨后發(fā)現(xiàn)的任何這樣的類型，包括新發(fā)現(xiàn)的血清型和工程改造的變體或融合蛋白。如上所述，目前已經(jīng)表征了七種免疫上不同的肉毒桿菌神經(jīng)毒素，即肉毒桿菌神經(jīng)毒素血清型A、B、C、D、E、F和G，其各自以用特定類型的抗體中和為特征。所述肉毒桿菌毒素血清型為市售可得的，例如，得自 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)和 Metabiologics, Inc.(Madison, Wisconsin)和其它來源。不同血清型的肉毒桿菌毒素隨動(dòng)物種類而不同，影響它們引起的麻痹的嚴(yán)重性和持續(xù)時(shí)間。至少兩種肉毒桿菌毒素，A型和B型，是以用于治療某些病癥的制劑市售可得的。例如，A型包含在具有商標(biāo)B0T0X 的Allergan制劑中和具有商標(biāo)DYSPORT 的I PS en制劑中，B型包含在具有商標(biāo)MY0BL0C㊣的Elan制劑中。在本發(fā)明的組合物中使用的術(shù)語“肉毒桿菌毒素”可以可選地指肉毒桿菌毒素衍生物，即，具有肉毒桿菌毒素活性但相對(duì)于天然存在的或重組的天然肉毒桿菌毒素在任何部分或任何鏈上包含有一個(gè)或多個(gè)化學(xué)或功能改變的化合物。例如，所述肉毒桿菌毒素可以是修飾的神經(jīng)毒素，即與天然的相比具有至少一個(gè)氨基酸被刪除、修飾或替換的神經(jīng)毒素，或者所述修飾的神經(jīng)毒素可以是重組生成的神經(jīng)毒素或其衍生物或片段。在本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，肉毒桿菌毒素衍生物是具有序列GDSCSVEAETAGK(SEQ IDNO. 3)的多肽。該序列與A型肉毒桿菌毒素分子負(fù)責(zé)所述毒素在人體中的生物學(xué)活性的部分相對(duì)應(yīng)。肉毒桿菌毒素也可以是已經(jīng)以一種方式修飾的毒素，所述方式例如增加其性質(zhì)或減少不想要的副作用，但仍然保持希望的肉毒桿菌毒素活性。所述肉毒桿菌毒素可以來自由細(xì)菌生成的任一種肉毒桿菌毒素復(fù)合物，如上所述?？蛇x地，本發(fā)明所用的肉毒桿菌毒素可以是使用重組或合成化學(xué)技術(shù)制備的毒素，例如重組肽、融合蛋白、或雜種神經(jīng)毒素，例如從不同肉毒桿菌毒素血清型的亞基或域制備(例如，參見美國(guó)專利6，444，209)。所述肉毒桿菌毒素也可以是整個(gè)分子的一部分，其已經(jīng)顯示具有必需的肉毒桿菌毒素活性，并 且在這種情況下，可以單獨(dú)使用或作為組合或綴合分子例如融合蛋白的一部分使用?；蛘?，所述肉毒桿菌毒素可以是肉毒桿菌毒素前體的形式，其本身可以是無毒的，例如無毒的鋅蛋白酶，在蛋白酶剪切后其變成有毒的。本文使用的術(shù)語“肉毒桿菌毒素復(fù)合物”或“毒素復(fù)合物”是指肉毒桿菌毒素(例如，屬于肉毒桿菌毒素血清型A-G的任一種的約150kD肉毒桿菌毒素蛋白分子或SEQ IDNO. 3的肉毒桿菌毒素片段)連同結(jié)合的內(nèi)源性非毒素蛋白(即，由肉毒桿菌細(xì)菌生成的血凝素蛋白和非毒素非血凝素蛋白)一起。然而，應(yīng)當(dāng)注意，所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物不必作為一種單一毒素復(fù)合物來源于肉毒桿菌細(xì)菌。例如，可以首先重組制備肉毒桿菌毒素或修飾的肉毒桿菌毒素，然后將其與非毒素蛋白混合。重組的肉毒桿菌毒素還可以是購(gòu)買的(例如，購(gòu)自ListBiological Laboratories, Campbell, CA)，然后將其與非毒素蛋白混合。本發(fā)明還涉及“減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物”，其中所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物(包括含有肉毒桿菌毒素衍生物、例如SEQ ID NO. 3中的多肽序列的那些)具有與在由肉毒桿菌細(xì)菌生成的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中天然發(fā)現(xiàn)的數(shù)量相比減少量的非毒素蛋白。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用任何常規(guī)蛋白分離方法，從來源于肉毒桿菌細(xì)菌的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中提取一部分血凝素蛋白或非毒素非血凝素蛋白，從而制備減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物。例如，減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物可以通過將其暴露在PH 7. 3下的紅細(xì)胞以分離肉毒桿菌毒素復(fù)合物來產(chǎn)生(例如參見EP 1514556 Al，其通過引用并入本文)?？梢允褂肏PLC、透析、柱、離心及其它方法來從蛋白中提取蛋白?；蛘?，當(dāng)通過混合合成產(chǎn)生的肉毒桿菌毒素與非毒素蛋白來產(chǎn)生減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物時(shí)，人們可僅僅向該混合物中加入比天然存在的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中所含的更少的血凝素或非毒素非血凝素蛋白。根據(jù)本發(fā)明，可以獨(dú)立地以任何量減少在減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中的任何非毒素蛋白(例如血凝素蛋白或非毒素非血凝素蛋白或兩者)。在某些示例性的實(shí)施方案中，一種或多種非毒素蛋白相對(duì)于在肉毒桿菌毒素復(fù)合物中通常發(fā)現(xiàn)的量減少了至少約0. 5%、1%、3%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80% 或 90%。MY0BL0C 含有 5000U 的 B 型肉毒桿菌毒素 /ml 和 0. 05%的人血清白蛋白、0. OlM 丁二酸鈉和0.1M氯化鈉。DYSPORT含有500U的A型肉毒桿菌毒素-血凝素復(fù)合物與125mcg的白蛋白和2. 4mg的乳糖。在一個(gè)特別感興趣的實(shí)施方案中，從所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物中除去了基本上所有通常在來源于肉毒桿菌細(xì)菌的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中發(fā)現(xiàn)的非毒素蛋白(例如>95%的血凝素蛋白和非毒素非血凝素蛋白)。此外，盡管在某些情況下可以以相同的數(shù)量減少內(nèi)源性非毒素蛋白的量，本發(fā)明還涉及以不同的量減少每種內(nèi)源性非毒素蛋白，和減少至少一種內(nèi)源性非毒素蛋白，但不減少其它的。除了(或代替)減少使肉毒桿菌毒素復(fù)合物不穩(wěn)定的內(nèi)源性非毒素蛋白的量之夕卜，本發(fā)明還涉及減少通常在制備期間加入的外源性穩(wěn)定劑的量。這種外源性穩(wěn)定劑的一個(gè)實(shí)例是白蛋白，其在制備肉毒桿菌毒素復(fù)合物期間通常加入的量等于在天然存在的肉毒桿菌毒素復(fù)合物的內(nèi)源性非毒素、非血凝素組分中發(fā)現(xiàn)的白蛋白量的1000倍。根據(jù)本發(fā)明，加入的外源性白蛋白的量可以是少于常規(guī)千倍過量的外源性白蛋白的任何量。在本發(fā)明的某些示例性的實(shí)施方案中，加入僅僅約500x、400x、300x、200x、100x、50x、10x、5x、lx、
0.5x、0.1 x或0.01 X在天然存在的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中的白蛋白的量。在一個(gè)實(shí)施方案中，不向本發(fā)明的組合物加入作為穩(wěn)定劑的外源性白蛋白。在其它實(shí)施方案中，將除了(或代替)白蛋白之外的外源性穩(wěn)定劑加入本發(fā)明的治療用局部組合物中。例如，本發(fā)明涉及的其它穩(wěn)定劑包括乳糖、明膠和多糖。盡管所述穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素復(fù)合物或穩(wěn)定的減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物可以從任一種肉毒桿菌毒素血清型(即，類型A-G)得到或衍生，但在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，它們從A型血清型肉毒桿菌毒素得到或衍生。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的肉毒桿菌毒素組合物通過添加非天然多肽來穩(wěn)定，所述非天然多肽是HIV-TAT片段(例如，SEQ ID NO.1)或源自HIV-TAT片段(例如，SEQID. NO 2，它是SEQ ID NO.1多肽的反向序列)。HIV-TAT片段或其衍生物可以與肉毒桿菌毒素分子共價(jià)地或非共價(jià)地結(jié)合，以穩(wěn)定肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，HIV-TAT片段或其衍生物與肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌復(fù)合物物理地結(jié)合，從而非共價(jià)地使它們穩(wěn)定。HIV-TAT片段或其衍生物的相對(duì)量取決于希望的穩(wěn)定程度。例如，當(dāng)起穩(wěn)定作用的HIV-TAT片段或其衍生物與SEQ IDN0.1或2的多肽相對(duì)應(yīng)時(shí)，起穩(wěn)定作用的肽的有用的濃度范圍是約0.1ng-約1. Omg/單位的肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物。更優(yōu)選地，SEQ ID NO.1或2的起穩(wěn)定作用的肽的范圍可以是約0. lmg-0. 5mg/單位的肉毒桿菌毒素?？蛇x地，使用本領(lǐng)域已知的連接化學(xué)，可以將起穩(wěn)定作用的HIV-TAT片段或其衍 生物共價(jià)連接至肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中的肉毒桿菌毒素分子。作為實(shí)例，通過偶聯(lián)劑或綴合劑，可以實(shí)現(xiàn)2個(gè)組分的偶聯(lián)?？梢允褂枚喾N分子間交聯(lián)劑(參見，例如，Means, G. E.和 Feeney, R. E.，Chemical Modification of Proteins, Holden-Day, 1974，pp. 39-43)。這些試劑是，例如，J-琥珀酰亞胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(STOP)或N，N’-(1，3-亞苯基)二馬來酰亞胺(二者都是對(duì)巰基高度特異性的，并形成不可逆連接)；N，N’ -亞乙基-二 _(碘代乙酰胺)或具有6至11個(gè)碳亞甲基橋的其它此類試劑(它們對(duì)巰基是相對(duì)特異性的)；和1，5- 二氟-2，4- 二硝基苯(它與氨基和酪氨酸基團(tuán)形成不可逆連接)?？捎糜谠撃康牡钠渌宦?lián)劑包括P，P’ 二氟二硝基二苯基砜(它與氨基和和酚基形成不可逆的交聯(lián))；二亞胺代己二酸二甲酯(它是氨基特異性的)；苯酚-1，4-二磺酰氯(它主要與氨基反應(yīng))；六亞甲基二異氰酸酯或二異硫代氰酸酯，或偶氮苯-對(duì)二異氰酸酯(它主要與氨基反應(yīng))；戊二醛(它與幾種不同的側(cè)鏈反應(yīng))和disdiazobenzidine (它主要與酪氨酸和組氨酸反應(yīng))。交聯(lián)劑可以是同雙功能的，即具有2個(gè)經(jīng)歷相同反應(yīng)的官能團(tuán)。優(yōu)選的同雙功能交聯(lián)劑是雙馬來酰亞胺基己烷(“BMH”)。BMH含有2個(gè)馬來酰亞胺官能團(tuán)，它們?cè)跍睾蜅l件(pH 6. 5-7. 7)下與含有巰基的化合物特異性地反應(yīng)，所述2個(gè)馬來酰亞胺基團(tuán)由烴鏈連接。因此，BMH可以用于不可逆地交聯(lián)含有半胱氨酸殘基的多肽。交聯(lián)劑也可以是異雙功能的。異雙功能交聯(lián)劑具有2個(gè)不同的官能團(tuán)，例如胺反應(yīng)性基團(tuán)和巰基反應(yīng)性基團(tuán) ，它們分別交聯(lián)具有游離胺基和巰基的2種蛋白。異雙功能交聯(lián)劑的實(shí)例是琥珀酰亞胺基4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸酯(“SMCC”)，間馬來酰亞胺基苯甲酰基-N-羥基琥珀酰亞胺酯(“MBS”)，和琥珀酰亞胺4-(對(duì)馬來酰亞胺基苯基)丁酸酯(“SMPB”)，MBS的延伸的鏈類似物。這些交聯(lián)物的琥珀酰亞胺基與伯胺反應(yīng)，巰基反應(yīng)性馬來酰亞胺與半胱氨酸殘基的巰基形成共價(jià)鍵。交聯(lián)劑在水中的溶解度通常較低?？梢詫⒂H水基團(tuán)例如磺酸酯基團(tuán)添加到交聯(lián)劑上，以提高它的水溶解度。磺基-MBS和磺基-SMCC是為水溶解度而改良的交聯(lián)劑的實(shí)例。許多交聯(lián)劑產(chǎn)生在細(xì)胞條件下基本上不可切割的綴合物。但是，有些交聯(lián)劑含有在細(xì)胞條件下可切割的共價(jià)鍵，例如二硫化物，例如，二硫雙(琥珀酰亞胺基丙酸酯)(“DSP”)。Trau t氏試劑和N-琥珀酰亞胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(“SPDP”)是眾所周知的可切割的交聯(lián)物?？汕懈畹慕宦?lián)劑的應(yīng)用，允許在遞送進(jìn)靶區(qū)域后將起穩(wěn)定作用的HIV-TAT片段或其衍生物與肉毒桿菌毒素分子分離。直接的二硫鍵也可能是有用的。有些新的交聯(lián)劑例如n- Y -馬來酰亞胺基丁酰氧基-琥珀酰亞胺酯(“GMBS”)和磺基-GMBS具有降低的免疫原性。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，這樣的降低的免疫原性可能是有利的。許多交聯(lián)劑，包括上面討論的那些，可商業(yè)上得到。關(guān)于它們的使用的詳細(xì)說明，可以容易地從商業(yè)供應(yīng)商得到。關(guān)于蛋白交聯(lián)和綴合物制備的一般參考文獻(xiàn)是S.S. Wong, Chemistry of ProteinConjugation and Cross-Linking, CRC Press (1991)?；瘜W(xué)交聯(lián)可以包括間隔臂的應(yīng)用。間隔臂提供分子內(nèi)柔性或調(diào)節(jié)綴合的部分之間的分子內(nèi)距離，從而可以輔助保持生物學(xué)活性。間隔臂可以是包含間隔氨基酸的多肽部分形式，可選地，間隔臂可以是交聯(lián)劑的一部分，例如在“長(zhǎng)鏈SPDP” (Pierce Chem.Co. , Rockford, 111. , cat. No. 21651 H)中的間隔臂。除了通過化學(xué)連接來生產(chǎn)穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物以外，本發(fā)明也涉及使用基因融合技術(shù)來生產(chǎn)這些穩(wěn)定的毒素復(fù)合物。例如，使用眾所周知的基因工程技術(shù)，可以將編碼融合的肉毒桿菌毒素/HIV-TAT片段或肉毒桿菌毒素/HIV-TAT片段衍生物的核酸序列植入細(xì)胞，使細(xì)胞表達(dá)所述穩(wěn)定的毒素復(fù)合物。在本發(fā)明的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，將HIV-TAT片段或HIV-TAT片段衍生物共價(jià)連接到肉毒桿菌毒素分子或其衍生物的末端，形成線性分子。在這樣的實(shí)施方案中，經(jīng)常有利地在肉毒桿菌毒素(或其衍生物)和HIV-TAT片段或HIV-TAT片段衍生物之間使用甘氨酸間隔物。例如，當(dāng)肉毒桿菌毒素衍生物是根據(jù)SEQ ID NO. 3的多肽時(shí)，所述穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素可以具有形式RRRQRRKKR-GG-GDSCSVEAETAGK(SEQ ID NO. 4)。當(dāng)希望向毒素分子添加超過一個(gè)的起穩(wěn)定作用的多肽時(shí)，所述穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素可以具有形式RRRQRRKKR-GG-毒素氨基酸-GG-RRRQRRKKR。但是，應(yīng)當(dāng)注意到，本發(fā)明也涉及HIV-TAT片段或其衍生物的重復(fù)單元(例如，RRRQRRKKR RRRQRRKKR)用于穩(wěn)定的應(yīng)用，無論是通過共價(jià)還是非共價(jià)連接。穩(wěn)定肉毒桿菌毒素分子所需的起穩(wěn)定作用的多肽鏈(無論它們是HIV-TAT片段還是其衍生物)的數(shù)目取決于多種因素，例如具體的目標(biāo)血清型，和考慮的肉毒桿菌毒素或肉毒桿菌毒素片段或衍生物的大小和化學(xué)組成。例如，當(dāng)使用肉毒桿菌毒素衍生物且其是相對(duì)較小的多肽(例如，根據(jù)SEQ ID NO. 3的多肽)時(shí)，需要共價(jià)連接更少的起穩(wěn)定作用的多肽鏈，一個(gè)共價(jià)連接的起穩(wěn)定作用的多肽鏈(例如，SEQID NO I或2的多肽，或其衍生物)可能足夠某些應(yīng)用。本發(fā)明的組合物優(yōu)選地是用于需要特別治療的受試者或患者(即人類或其它哺乳動(dòng)物)的皮膚或上皮的產(chǎn)品形式。術(shù)語“需要”包括藥物或健康相關(guān)的需要，例如治療涉及不希望的面部肌肉痙攣的病癥，及化妝和主觀需要，例如，改變或改善面部組織的外觀。通常，本發(fā)明的組合物可以通過本領(lǐng)域已知的任何方式來施用，其非限制性實(shí)例包括腸胃外注射(例如，皮下注射)，局部施用于皮膚上，或通過位于皮下或皮上的貼劑。·SEQ ID NO.1的HIV-TAT片段以前被認(rèn)為促進(jìn)不同“貨物分子”的細(xì)胞內(nèi)遞送(參見，例如，美國(guó)專利No. 5，804，604)。因而，當(dāng)已經(jīng)用SEQ ID NO.1的HIV-TAT片段穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物接觸患者組織時(shí)(例如，在局部給藥過程中)，會(huì)發(fā)生肉毒桿菌毒素的增強(qiáng)的細(xì)胞穿透。另外，具有序列SEQ ID NO. 2的HIV-TAT衍生的多肽也促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)穿透以及跨膜穿透。因此，當(dāng)已經(jīng)用SEQ ID NO. 2的多肽穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物接觸患者組織時(shí)，會(huì)發(fā)生肉毒桿菌毒素的增強(qiáng)的細(xì)胞內(nèi)和/或跨膜運(yùn)輸。通常，本發(fā)明的組合物通過混合所述穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素復(fù)合物或穩(wěn)定的減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物與一種或多種附加的藥學(xué)可接受的載體或者賦形劑來制備。在它們的最簡(jiǎn)單的形式中，它們可包含單一的水性藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑，例如緩沖鹽水。當(dāng)要注射施用本發(fā)明的組合物時(shí)，這樣的實(shí)施方案是特別優(yōu)選的。然而，當(dāng)要局部施用本發(fā)明的組合物時(shí)，它們可包含在局部藥用或化妝用組合物中常見的其它成分，即，皮膚用或藥學(xué)可接受的載體、媒介物或介質(zhì)，即與它們所要施用的組織相容的載體、媒介物或介質(zhì)。本文使用的術(shù)語“皮膚用或藥學(xué)可接受的”指如此描述的適于與這些組織接觸使用或用于患者而沒有異常毒性、不相容性、不穩(wěn)定性、變態(tài)反應(yīng)等的組分或成分。視情況而定，本發(fā)明的組合物可包括通常在本領(lǐng)域，特別是在化妝和皮膚病學(xué)中考慮使用的任何成分。關(guān)于它們的形式，本發(fā)明的組合物可包括溶液劑、乳劑(包括微乳劑)、混懸液、乳膏劑、洗劑、凝膠劑、散劑或其它用于施用到皮膚及其中可使用所述組合物的其它組織的典型的固體或液體組合物。這樣的組合物除了包含肉毒桿菌毒素和HIV-TAT片段或其衍生物之外，可包含通常在這樣的產(chǎn)品中使用的其它成分，例如抗微生物劑、增濕劑和水化劑、滲透劑、防腐劑、乳化劑、天然油或合成油、溶劑、表面活性劑、清潔劑、膠凝劑、潤(rùn)膚劑、抗氧化齊U、芳香劑、填充劑、增稠劑、蠟、去味劑、染料、著色劑、散劑、粘度調(diào)節(jié)劑和水，且任選地包括麻醉藥、抗癢活性劑、植物提取物、調(diào)節(jié)劑、染黑或光亮劑、閃光劑(glitter)、濕潤(rùn)劑、云母、礦物質(zhì)、多酹、娃酮或其衍生物、防曬劑(sunblocks)、維生素和phytomedicinals。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以是控釋或緩釋組合物的形式，其中所述穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素復(fù)合物或穩(wěn)定的減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物被封裝或者另外包含在物質(zhì)內(nèi)，使得它們以受控的方式隨著時(shí)間推移釋放在皮膚上。可以將所述包含肉毒桿菌毒素和HIV-TAT片段或其衍生物的組合物包含在基質(zhì)、脂質(zhì)體、囊泡、微膠囊、微球等之內(nèi)，或者包含在固體顆粒物質(zhì)之內(nèi)，所有這些選擇和/或構(gòu)建的物質(zhì)能釋放所述穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素一段時(shí)間。可以以產(chǎn)生麻痹、產(chǎn)生松弛、緩解收縮、預(yù)防或緩解痙攣、減少腺排出或其它預(yù)期效果的有效量，將肉毒桿菌毒素遞送至皮膚下的肌肉或皮膚內(nèi)的腺結(jié)構(gòu)。相對(duì)于可注射的或可植入的物質(zhì)，用這種方式局部遞送肉毒桿菌毒素可以提供減少的劑量、降低的毒性和得到用于預(yù)期效果的更精確的劑量最佳化。施用本發(fā)明的組合物以便施用有效量的肉毒桿菌毒素。本文使用的術(shù)語“有效量”指如上定義的肉毒桿菌毒素的量，其足夠產(chǎn)生希望的肌肉麻痹或其它生物學(xué)或美容效應(yīng)，但無疑是安全量，即，能避免嚴(yán)重副作用的足夠低的量。預(yù)期效果包括松弛某些肌肉，其目的是例如減少細(xì)紋線和/或皺紋的出現(xiàn)，特別是在臉上，或者以其它方式調(diào)整面部外觀例如增寬眼睛、提升嘴角或使從上唇散開的紋線平滑或一般性緩解肌緊張。最后提及的功效，一般性緩解肌緊張可以在面部或其它地方實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的組合物可包含用作單劑量治療的適當(dāng)有效量的肉毒桿菌毒素，或者可以是更濃縮的，用于在給藥部位稀釋或者用于多種應(yīng)用。所述穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素復(fù)合物或穩(wěn)定的減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物可以透皮施用給受試者，以治療病癥例如不想要的面部肌肉或其它肌痙攣、多汗、痤瘡或其中想要緩解肌肉疼痛或痙攣的體內(nèi)其它地方的病癥。局部施用肉毒桿菌毒素，用于透皮遞送至肌肉或其它皮膚相關(guān)結(jié)構(gòu)?？梢允┯弥晾缤?、肩部、背部(包括腰部)、腋下、掌心、足部、頸、腹股溝、手背或足背、肘、上肢、膝、大腿、臀、軀干、骨盆或其中希望施用肉毒桿菌毒素的身體的任何其它部分。也可以施用肉毒桿菌毒素以治療其它的病癥，包括但不限于治療神經(jīng)性疼痛、預(yù)防或減輕偏頭痛或其它的頭痛、預(yù)防或減輕痤瘡、預(yù)防或減輕張力障礙或張力障礙收縮(無論是主觀的或臨床的)、預(yù)防或減輕與主觀或臨床上的多汗相關(guān)的癥狀、減少分泌過多或出汗、減少或增加免疫應(yīng)答、或治療已經(jīng)建議或執(zhí)行通過注射施用肉毒桿菌毒素的其它病癥。最優(yōu)選地，由醫(yī)師或其它衛(wèi)生保健專業(yè)人員或在其指導(dǎo)下施用所述組合物。它們可以按單一的治療或在隨時(shí)間的一系列周期性治療中施用。為了透皮遞送肉毒桿菌毒素用于上述的目的，局部施用如上所述的組合物至其中希望該作用的部位的皮膚。因?yàn)槠湫再|(zhì)，最優(yōu)選應(yīng)當(dāng)以一定的施用速率和施用頻率慎重地施用一定量的所施用的肉毒桿菌毒素，所述速率和頻率將產(chǎn)生希望的結(jié)果而不會(huì)引起任何不良的或不希望的結(jié)果。因此，例如，本發(fā)明的局部組合物應(yīng)當(dāng)以如下速率施用從約IU至約20，000U,優(yōu)選從約IU至約2，000U的肉毒桿菌毒素/cm2的皮膚表面。例如，在這些范圍內(nèi)的較高劑量可以優(yōu)選地與控釋物質(zhì)組合，或在除去之前在皮膚上停留較短的時(shí)間。本發(fā)明還包括用于遞送如上所述的包含肉毒桿菌毒素的組合物透過皮膚的透皮遞送裝置。這樣的裝置可以象皮膚貼劑一樣結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，或者可以是更復(fù)雜的裝置，其包括用于施用和監(jiān)測(cè)組合物施用的工具，和任選的用于從一個(gè)或多個(gè)方面監(jiān)測(cè)受試者病癥包括監(jiān)測(cè)受試者對(duì)正在施用的物質(zhì)的反應(yīng)的工具。本發(fā)明的組合物適用于pH為約4. 5至約6. 3的生理環(huán)境，因此，其可具有這樣的pH。根據(jù)本發(fā)明的組合物可以貯藏在室溫下或者冷凍條件下。應(yīng)當(dāng)理解，本文描述的實(shí)施例和實(shí)施方案僅僅是用于闡述的目的，根據(jù)它們的各種改良和變化將容易地由本領(lǐng) 域技術(shù)人員提出，并且這些改良和變化包括在本申請(qǐng)的精神和范圍及附加的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。將所有本文弓I用的出版物、專利和專利申請(qǐng)以其全文通過引用并入本文用于所有的目的。
權(quán)利要求
1.一種穩(wěn)定肉毒桿菌毒素的方法,所述方法包括， 提供肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物； 提供一種多肽，其為HIV-TAT片段或HIV-TAT片段衍生物，和 將所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物與所述多肽組合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物共價(jià)連接至所述多肽。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物被所述多肽非共價(jià)地穩(wěn)定。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述HIV-TAT片段具有根據(jù)SEQID NO.1的序列。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述HIV-TAT片段具有根據(jù)SEQID NO. 2的序列。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物包含具有根據(jù)SEQ ID NO. 3的序列的多肽。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物包含與直接從肉毒桿菌中提取的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中天然存在的量相比減少量的血凝素蛋白或非毒素、非血凝素蛋白或兩者。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物含有白蛋白作為外源性穩(wěn)定劑。
9.權(quán)利要求6的方法，其中所述白蛋白的存在量等于在天然存在的肉毒桿菌毒素復(fù)合物中的白蛋白的量的約 500、400、300、200、100、50、10、5、1、0. 5,0.1 或 0. 01 倍。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物包含選自下述的肉毒桿菌毒素肉毒桿菌毒素衍生物、重組的肉毒桿菌毒素、修飾的肉毒桿菌毒素、A型肉毒桿菌毒素、B型肉毒桿菌毒素、C型肉毒桿菌毒素、D型肉毒桿菌毒素、E型肉毒桿菌毒素、F型肉毒桿菌毒素和G型肉毒桿菌毒素。
11.一種穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素組合物，其中所述穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素包含 肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物；和 具有根據(jù)SEQ ID NO. 2的序列的多肽。
12.根據(jù)權(quán)利要求8的穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素組合物，其中所述多肽非共價(jià)地結(jié)合所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物。
13.根據(jù)權(quán)利要求8的穩(wěn)定的肉毒桿菌毒素組合物，其中所述多肽共價(jià)地連接所述肉毒桿菌毒素復(fù)合物或減少的肉毒桿菌毒素復(fù)合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及使用HIV-TAT片段或HIV-TAT片段的衍生物穩(wěn)定的新的肉毒桿菌毒素組合物。該組合物可以用于多種治療、美容和/或化妝目的。本發(fā)明還提供了使用HIV-TAT片段或HIV-TAT片段的衍生物穩(wěn)定肉毒桿菌毒素的方法。
文檔編號(hào)A61P21/02GK102988995SQ20121040510
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2007年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月29日
發(fā)明者J·M·瓦烏戈, J·H·李 申請(qǐng)人:雷文斯治療公司