專利名稱：靶向復(fù)合納米粒子的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靶向診療一體化復(fù)合納米粒子的制備方法。
背景技術(shù)：
據(jù)世界衛(wèi)生組織官員指出到2010年，惡性腫瘤將取代心血管疾病成為世界死亡人數(shù)最多的疾病。目前臨床可用于 診斷腫瘤有光學(xué)成像、正電子發(fā)射斷層顯像、磁共振顯像、超聲以及計(jì)算機(jī)斷層掃描成像；治療腫瘤有手術(shù)、放療、藥物治療三大主要方法，光動(dòng)力學(xué)治療、熱療等輔助方法，以上各種療法均已收到很好的診療效果。如用卟啉類化合物進(jìn)行光學(xué)成像，通過其結(jié)構(gòu)卟吩環(huán)較強(qiáng)的吸收波長為405nm光吸收后激發(fā)產(chǎn)生630nm及690nm近紅外區(qū)熒光對(duì)腫瘤組織成像，具有低能量輻射、高敏感性等的優(yōu)勢；用羥基喜樹堿(HCPT)類藥物，通過選擇性抑制腫瘤細(xì)胞DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶，切斷DNA單鏈，干擾DNA鏈的復(fù)制，具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性；用卟啉類化合物進(jìn)行光動(dòng)力治療，通過卟啉選擇性的在腫瘤細(xì)胞上富集，當(dāng)使用一定波長的光照射腫瘤區(qū)時(shí)將誘發(fā)生物組織附近產(chǎn)生具有活性的單線態(tài)氧(·02)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞因氧化失活死亡，具有抗瘤譜廣、適應(yīng)癥廣、可多次重復(fù)治療的顯著優(yōu)點(diǎn)，并與化療聯(lián)合使用協(xié)同性好、與手術(shù)聯(lián)合縮小手術(shù)范圍和減少術(shù)后復(fù)發(fā)的優(yōu)異腫瘤治療效果；及用金殼納米粒子進(jìn)行光熱治療，通過其可調(diào)的表面縱向等離子吸收與其共振的近紅外波長，釋放熱量后殺死腫瘤干細(xì)胞，從而抑制腫瘤轉(zhuǎn)移；當(dāng)與藥物治療共同作用時(shí)具有化學(xué)增敏作用可改善腫瘤周邊的血液循環(huán)及增強(qiáng)細(xì)胞膜的通透性，增強(qiáng)藥物的滲透進(jìn)入腫瘤內(nèi)部。但在腫瘤診斷治療藥物中存在的三個(gè)共兩同問題是一、藥物靶向性差；以羥基喜樹堿(HCPT)類藥物為例，HCPT在不同的pH條件下存在兩種形式α -羥基-δ -內(nèi)酯環(huán)形式及羧酸乙酯形式，但是兩種形式中僅內(nèi)酯結(jié)構(gòu)形式具有抗腫瘤活性，并且內(nèi)酯結(jié)構(gòu)形式的水溶性較差，如何提高內(nèi)酯結(jié)構(gòu)喜樹堿類藥物靶向腫瘤細(xì)胞一直為此類藥物的研究難點(diǎn)；二、由于腫瘤組織特有的生物環(huán)境，使于診療藥物濃度難達(dá)到有效濃度；三、在腫瘤的診療中，使用單一療法療效低，無法治療惡性腫瘤。因此在目前的腫瘤診療研究中兩個(gè)核心問題是，如何選擇合適的藥物載體改進(jìn)各種治療方法本身以及構(gòu)建能夠科學(xué)和合理結(jié)合多種療法綜合治療腫瘤藥物。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以微納米制造技術(shù)與納米材料為基礎(chǔ)的腫瘤診斷治療技術(shù)為解決這兩大問題提供了一條有效途徑。將納米粒子用作載體后可以使藥物靶向作用于腫瘤細(xì)胞，后聚集病灶，并能增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)其藥物的滲透作用。目前已經(jīng)被研發(fā)出的納米載體有聚合物微球納米粒子、微囊脂質(zhì)和微乳液、金納米粒子等；在諸多納米粒子中，金納米粒子具有能夠進(jìn)一步表面功能化對(duì)腫瘤細(xì)胞有靶向作用的生物分子如單克隆抗體、葉酸、蛋白、糖類等的優(yōu)點(diǎn)，修飾后能夠使納米粒子準(zhǔn)確定位于特定的腫瘤細(xì)胞，顯著提高藥物在特定腫瘤組織的濃度，進(jìn)一步減小副作用；并且金納米粒子還可制備成多種在特定部位及條件下釋放藥物控釋系統(tǒng)，在不減弱診療療效的前提下同時(shí)減少藥物的用量，因而金納米粒子是一類理想的納米載體。
近幾年在上述納米載體研究基礎(chǔ)上，構(gòu)建多重靶向能力、并能將多種診療方法結(jié)合的一體化復(fù)合納米已經(jīng)成為一個(gè)新的研究熱點(diǎn)，如基于脂質(zhì)體納米材料以Fe3O4磁性納米粒子與突光染料構(gòu)建的磁祀向光學(xué)成像復(fù)合納米粒子；基于金納米粒子構(gòu)建的光學(xué)成像和磁共振成像復(fù)合納米粒子、光熱治療和傳統(tǒng)藥物治療復(fù)合納米粒子。但是此類復(fù)合納米粒子的研究處于初級(jí)階段，仍存在三方面的缺陷，第一方面是此類載藥系統(tǒng)的載藥量較少、穩(wěn)定性及靶向性較低；第二方面是制備過程中需要使用有機(jī)溶劑、表面活性劑、超聲或同質(zhì)化，這都將限制腫瘤藥物的診療過程；第三方面難以有機(jī)結(jié)合多種診療方式，具有較長的診療時(shí)間。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決目前抗腫瘤藥物載體穩(wěn)定性差、載藥量小的技術(shù)問題，提供了一種靶向復(fù)合納米粒子的制備方法。靶向復(fù)合納米粒子的制備方法按照以下步驟進(jìn)行
一、制備磁性納米粒子將IOmL 濃度為 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL濃度為O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，繼續(xù)攪拌30min，離心分離并收集上清液中的產(chǎn)物，將上清液中的產(chǎn)物用去離子水洗滌3次，然后再分散在150mL去離子水中，得到Fe3O4納米粒子溶液；所述的Fe804 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的濃度為2mol/L、HCl的濃度為2mol/L ；二、制備 Fe3O4-HCPT 納米粒子將IOmLFe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超聲反應(yīng)30min,磁力分離，然后用濃度為O. 51mol/L的NaCl溶液洗滌，最后分散在水中，得到濃度為7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液；步驟二中所述的聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氫氯丙烯胺濃度為lmg/ml，NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ；三、將IOmLPAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min,得到Fe3O4磁性納米粒子前體；步驟三中所述的聚苯乙烯磺酸酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為lmg/ml, NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ；四、將364mgl0-羥基喜樹堿溶解在150mLNa0H溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOmlFe3O4磁性納米粒子前體加入到IOmLHCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離收集沉淀，并用PH值為4. 8的HCl溶液洗滌，然后加入150mL去離子水中，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液；五、制備Fe3O4-HCPTIgSiO2 :將ImL正硅酸乙酯與30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，將2. 5mLNH3 · H20、38mLH20、38mL乙醇及IOmL聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反應(yīng)4小時(shí)，磁力分離，收集沉淀，并用水與乙醇的混合溶液洗滌3次，再分散在IOOmL去離子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；
六、然后在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入乙醇洗滌，超聲分散15-20min ；七、重復(fù)步驟六3-4次，得到濃度為7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；八、將IOmLFe3O4-HCPTIgSiO2乙醇溶液與O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的條件下攪拌3小時(shí)，然后按照在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心30min，向沉淀中加入乙醇，超聲分散15-20min的順序，重復(fù)5次，得到表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；九、制備金納米粒子向40mL蒸餾水中加入O. Olml濃度為O. 25mol/L氯金酸水溶液 、O. 2mL濃度為
0.2mol/L碳酸鉀水溶液、O. 6mL濃度為O. 5mol/L硼氫化鈉水溶液，在600rpm的條件下攪拌lOmin，再加入濃度為O. 5mol/L的硼氫化鈉水溶液，直到溶液的藍(lán)紫色變?yōu)槌燃t色停止加入硼氫化鈉水溶液，再攪拌5min，得到金納米粒子溶液；十、制備草莓狀金納米復(fù)合粒子將O. 07ml表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀釋至50ml，然后再滴入到金納米粒子溶液中，然后以600rpm的速度離心90min，得到Au/Si02溶液；^^一、制備金納米殼將25mg碳酸鉀溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度攪拌IOmin,然后加入
1.5ml濃度為O. 25mol/L的氯金酸水溶液，繼續(xù)攪拌30分鐘，得混合液，將4ml混合液與Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm離心30min，然后再將離心后的沉淀分散于IOmL水中并超聲lOmin，得到包裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液；十二、將0.03g 1，2-二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3 4ml四氫呋喃加入到離心管中，再加入I 5ml裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液和50mg卟啉類光敏劑分子,反應(yīng)72小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后在轉(zhuǎn)速為6000rpm的條件下離心10分鐘，收集沉淀，并將沉淀分散在甲醇中，得到濃度為7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液；十三、將50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、lOmLN，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，然后在轉(zhuǎn)速為HOOOrpm、溫度為4°C的條件下離心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向復(fù)合納米粒子的甲醇溶液；步驟十二中所述的卟啉類光敏劑分子為5-(4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20_三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉；步驟十三中所述的靶向性生物分子為葉酸；步驟十三中所述的抗腫瘤藥物為單克隆抗體赫賽汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶或甲氨蝶吟。本方明將聚苯乙烯磺酸(PSS)與10-羥基喜樹堿自組裝方式吸附在Fe3O4磁性納米粒子，本發(fā)明首先得到了一種高效的疏水藥物載藥系統(tǒng)；本方法可行性高；具有本身Fe3O4磁性納米粒子的物理靶向作用及進(jìn)一步表面功能化修飾生物分子的主動(dòng)靶向作用，在雙重靶向作用下顯著增加病變部位的藥物濃度，以達(dá)到副作用最小的條件下，有高效的診療效果。此種制備方法能夠解決載藥體系生物相容性差載藥量及靶向性低、藥物在運(yùn)輸過程中易發(fā)生自組裝的技術(shù)難題。
此種載藥體系另外還是一種新型的靶向性一體化納米粒子在Fe3O4-IO-羥基喜樹堿OSiO2包覆金納米殼，第一能夠通過金納米殼的熱療殺死腫瘤細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞，不僅能夠治療腫瘤而且能抑制腫瘤轉(zhuǎn)移；第二可通過熱療化學(xué)增敏作用增強(qiáng)細(xì)胞膜的通透性提高藥物的滲透吸收，及改善腫瘤周邊的血液循環(huán)增加藥物進(jìn)入腫瘤內(nèi)部以提高腫瘤/正常組織的藥物濃度比。由雙硫鍵連接的生物分子葉酸的卟啉類光敏劑，使Fe3O4-IO-羥基喜樹堿OSiO2OAu具備光動(dòng)力學(xué)診療的作用。


圖I是實(shí)驗(yàn)一制備的靶向復(fù)合納米粒子的SEM圖像；圖2是實(shí)驗(yàn)一制備靶向復(fù)合納米粒子中步驟二所得Fe3O4-HCPT納米粒子TEM圖像；圖3是實(shí)驗(yàn)一制備的靶向復(fù)合納米粒子的TEM圖像； 圖4是在水溶液中單分散的實(shí)驗(yàn)一制備的靶向復(fù)合納米粒子的動(dòng)態(tài)激光光散射圖像；圖5是實(shí)驗(yàn)一制備的靶向復(fù)合納米粒子在不同pH值的37°C的PBS溶液中的藥物自發(fā)釋放累積行為曲線，其中一零^代表pH值為9. 2的37°C的PBS溶液中的藥物自發(fā)釋放累積行為曲線，一#_代表pH值為8. O的37°C的PBS溶液中的藥物自發(fā)釋放累積行為曲線，
代表PH值為7. 4的37°C的PBS溶液中的藥物自發(fā)釋放累積行為曲線。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式靶向復(fù)合納米粒子的制備方法按照以下步驟進(jìn)行一、制備磁性納米粒子將IOmL 濃度為 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL濃度為O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，繼續(xù)攪拌30min，離心分離并收集上清液中的產(chǎn)物，將上清液中的產(chǎn)物用去離子水洗滌3次，然后再分散在150mL去離子水中，得到Fe3O4納米粒子溶液；所述的FeSO4 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的濃度為2mol/L、HCl的濃度為2mol/L ；二、制備 Fe3O4-HCPT 納米粒子將IOmLFe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超聲反應(yīng)30min,磁力分離，然后用濃度為O. 51mol/L的NaCl溶液洗滌，最后分散在水中，得到濃度為7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液；步驟二中所述的聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氫氯丙烯胺濃度為lmg/ml，NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ；三、將IOmLPAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min,得到Fe3O4磁性納米粒子前體；步驟三中所述的聚苯乙烯磺酸酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為lmg/ml, NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ；
四、將364mgl0-羥基喜樹堿溶解在150mLNa0H溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOmlFe3O4磁性納米粒子前體加入到IOmLHCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離收集沉淀，并用PH值為4. 8的HCl溶液洗滌，然后加入150mL去離子水中，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液；五、制備Fe3O4-HCPTIgSiO2 :將ImL正硅酸乙酯與30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，將
2.5mLNH3 · H20、38mLH20、38mL乙醇及IOmL聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反應(yīng)4小時(shí)，磁力分離，收集沉淀，并用水與乙醇的混合溶液洗滌3次，再分散在IOOmL去離子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；
六、然后在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入乙醇洗滌，超聲分散15-20min ；七、重復(fù)步驟六3-4次，得到濃度為7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；八、將IOmLFe3O4-HCPTlgSiO2乙醇溶液與O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的條件下攪拌3小時(shí)，然后按照在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心30min，向沉淀中加入乙醇，超聲分散15-20min的順序，重復(fù)5次，得到表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；九、制備金納米粒子向40mL蒸餾水中加入O. Olml濃度為O. 25mol/L氯金酸水溶液、O. 2mL濃度為
0.2mol/L碳酸鉀水溶液、O. 6mL濃度為O. 5mol/L硼氫化鈉水溶液，在600rpm的條件下攪拌lOmin，再加入濃度為O. 5mol/L的硼氫化鈉水溶液，直到溶液的藍(lán)紫色變?yōu)槌燃t色停止加入硼氫化鈉水溶液，再攪拌5min，得到金納米粒子溶液；十、制備草莓狀金納米復(fù)合粒子將O. 07ml表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀釋至50ml，然后再滴入到金納米粒子溶液中，然后以600rpm的速度離心90min，得到Au/Si02溶液；-| 、制備金納米殼將25mg碳酸鉀溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度攪拌IOmin,然后加入
1.5ml濃度為O. 25mol/L的氯金酸水溶液，繼續(xù)攪拌30分鐘，得混合液，將4ml混合液與Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm離心30min，然后再將離心后的沉淀分散于IOmL水中并超聲lOmin，得到包裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液；十二、將0.03g 1，2-二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3 4ml四氫呋喃加入到離心管中，再加入I 5ml裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液和50mg卟啉類光敏劑分子,反應(yīng)72小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后在轉(zhuǎn)速為6000rpm的條件下離心10分鐘，收集沉淀，并將沉淀分散在甲醇中，得到濃度為7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液；十三、將50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、lOmLN，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，然后在轉(zhuǎn)速為HOOOrpm、溫度為4°C的條件下離心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向復(fù)合納米粒子的甲醇溶液；步驟十二中所述的卟啉類光敏劑分子為5-(4-氯乙酰氧基苯基)_10，15，20-三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉；步驟十三中所述的靶向性生物分子為葉酸；步驟十三中所述的抗腫瘤藥物為單克隆抗體赫賽汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶或甲氨蝶吟。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟十二中將O. 03gI，2-二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3. 5ml四氫呋喃加入到離心管中。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟十三中將60mg 90mgFe304-HCPTiSi02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟十三中將70mg 80mgFe304-HCPTiSi02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟十三中將75mgFe304-HCPTiSi02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式靶向復(fù)合納米粒子的制備方法按照以下步驟進(jìn)行一、制備磁性納米粒子將IOmL 濃度為 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL濃度為O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，繼續(xù)攪拌30min，離心分離并收集上清液中的產(chǎn)物，將上清液中的產(chǎn)物用去離子水洗滌3次，然后再分散在150mL去離子水中，得到Fe3O4納米粒子溶液；所述的FeSO4 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的濃度為2mol/L、HCl的濃度為2mol/L ；二、制備 Fe3O4-HCPT 納米粒子將IOmlFe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超聲反應(yīng)30min,磁力分離，然后用濃度為O. 51mol/L的NaCl溶液洗滌，最后分散在水中，得到濃度為7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液；步驟二中所述的聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氫氯丙烯胺濃度為lmg/ml，NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ；三、將IOmLPAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液分散到IOmL聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min,得到Fe3O4磁性納米粒子前體；步驟三中所述的聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為Img/ml, NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ；四、將364mgl0-羥基喜樹堿溶解在150mLNa0H溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOmLFe3O4磁性納米粒子前體加入到IOmLHCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離，并用PH值為4. 8的HCl溶液洗滌，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子；五、將聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子分散到150ml去離子水中，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子分散液，將IOmL聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子分散液分散到IOmL聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子前體a ；將364mgl0_羥基喜樹堿溶解在150mLNa0H溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOmLFe3O4磁性納米粒子前體a加入到IOmLHCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離，并用PH值為4. 8的HCl溶液洗滌，得到2層聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子；所述的聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為lmg/ml，NaCl 的濃度為O. 5mol/L ；六、重復(fù)步驟五，然后加入150mL去離子水中，得到n+2層聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液，其中η為正整數(shù)；七、制備Fe3O4-HCPTOSiO2 將ImL正硅酸乙酯與30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，將
2.5mLNH3 ·Η20、38ιΛΗ20、38ιΛ乙醇及10mLn+2層聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反應(yīng)4小時(shí)，磁力分離，收集沉淀，并用水與乙醇的混合溶液洗滌3次，再分散在IOOmL去離子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；八、然后在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入適量的乙醇洗滌，超聲分散15-20min ；九、重復(fù)步驟八3-4次，得到濃度為7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；十、將IOmLFe3O4-HCPTIgSiO2乙醇溶液與O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的條件下攪拌3小時(shí)，然后按照在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心30min，向沉淀中加入乙醇，超聲分散15-20min的順序，重復(fù)5次，得到表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；^^一、制備金納米粒子向40mL蒸餾水中加入O. Olml濃度為O. 25mol/L氯金酸水溶液、O. 2mL濃度為
0.2mol/L碳酸鉀水溶液、O. 6mL濃度為O. 5mol/L硼氫化鈉水溶液，600rpm攪拌lOmin，再加入濃度為O. 5mol/L的硼氫化鈉水溶液，直到溶液的藍(lán)紫色變?yōu)槌燃t色停止加入硼氫化鈉水溶液，再攪拌5min，得到金納米粒子溶液；十二、制備草莓狀金納米復(fù)合粒子將O. 07ml表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀釋至50ml，然后再滴入到金納米粒子溶液中，然后以600rpm的速度離心90min，得到Au/Si02溶液；十三、制備金納米殼將25mg碳酸鉀溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度攪拌IOmin,然后加入
1.5ml濃度為O. 25mol/L的氯金酸水溶液，繼續(xù)攪拌30分鐘，得混合液，將4ml混合液與Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm離心30min，然后再將離心后的沉淀分散于IOmL水中并超聲lOmin，得到包裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液；
十四、將0.03g 1，2-二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3 4ml四氫呋喃加入到離心管中，再加入I 5ml裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液和50mg卟啉類光敏劑分子,反應(yīng)72小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后在轉(zhuǎn)速為6000rpm的條件下離心10分鐘，收集沉淀，并將沉淀分散在甲醇中，得到濃度為7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子；十五、將50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、lOmLN，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，然后在轉(zhuǎn)速為HOOOrpm、溫度為4°C的條件下離心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向復(fù)合納米粒子的甲醇溶液；步驟十三中所述的卟啉類光敏劑分子為5-(4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20_三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉；步驟十四中所述的靶向性生物分子為葉酸；步驟十四中所述的抗腫瘤藥物為單克隆抗體赫賽汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶 或甲氨蝶吟。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
六不同的是步驟十四中將O. 03gI，2-二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3. 5ml四氫呋喃加入到離心管中。其它與具體實(shí)施方式
六相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
六不同的是步驟十五中將60mg 90mgFe304-HCPTiSi02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。其它與具體實(shí)施方式
六相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
六不同的是步驟十五中將70mg 80mgFe304-HCPTiSi02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。其它與具體實(shí)施方式
六相同。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
六不同的是步驟十五中將75mgFe304-HCPTiSi02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。其它與具體實(shí)施方式
六相同。采用下述實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明效果實(shí)驗(yàn)一靶向復(fù)合納米粒子的制備方法按照以下步驟進(jìn)行一、制備磁性納米粒子將IOmL 濃度為 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL濃度為O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，繼續(xù)攪拌30min，離心分離并收集上清液中的產(chǎn)物，將上清液中的產(chǎn)物用去離子水洗滌3次，然后再分散在150mL去離子水中，得到Fe3O4納米粒子溶液；所述的FeSO4 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的濃度為2mol/L、HCl的濃度為2mol/L ；二、制備 Fe3O4-HCPT 納米粒子將IOmLFe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超聲反應(yīng)30min,磁力分離，然后用濃度為O. 51mol/L的NaCl溶液洗滌，最后分散在水中，得到濃度為7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液；步驟二中所述的聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氫氯丙烯胺濃度為lmg/ml，NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ；三、將IOmLPAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min,得到Fe3O4磁性納米粒子前體；步驟三中所述的聚苯乙烯磺酸酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為lmg/ml, NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ； 四、將364mgl0-羥基喜樹堿溶解在150mLNa0H溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOmlFe3O4磁性納米粒子前體加入到IOmLHCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離收集沉淀，并用PH值為4. 8的HCl溶液洗滌，然后加入150mL去離子水中，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液；五、制備Fe3O4-HCPTIgSiO2 :將ImL正硅酸乙酯與30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，將2. 5mLNH3 · H20、38mLH20、38mL乙醇及IOmL聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反應(yīng)4小時(shí)，磁力分離，收集沉淀，并用水與乙醇的混合溶液洗滌3次，再分散在IOOmL去離子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；六、然后在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入乙醇洗滌，超聲分散20min ；七、重復(fù)步驟六3次，得到濃度為7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；八、將IOmLFe3O4-HCPTIgSiO2乙醇溶液與O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的條件下攪拌3小時(shí)，然后按照在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心30min，向沉淀中加入乙醇，超聲分散15-20min的順序，重復(fù)5次，得到表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；九、制備金納米粒子向40mL蒸餾水中加入O. Olml濃度為O. 25mol/L氯金酸水溶液、O. 2mL濃度為
0.2mol/L碳酸鉀水溶液、O. 6mL濃度為O. 5mol/L硼氫化鈉水溶液，在600rpm的條件下攪拌lOmin，再加入濃度為O. 5mol/L的硼氫化鈉水溶液，直到溶液的藍(lán)紫色變?yōu)槌燃t色停止加入硼氫化鈉水溶液，再攪拌5min，得到金納米粒子溶液；十、制備草莓狀金納米復(fù)合粒子將O. 07ml表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀釋至50ml，然后再滴入到金納米粒子溶液中，然后以600rpm的速度離心90min，得到Au/Si02溶液；^^一、制備金納米殼將25mg碳酸鉀溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度攪拌IOmin,然后加入
1.5ml濃度為O. 25mol/L的氯金酸水溶液，繼續(xù)攪拌30分鐘，得混合液，將4ml混合液與Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm離心30min，然后再將離心后的沉淀分散于IOmL水中并超聲lOmin，得到包裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液；十二、將0.03g 1，2-二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和4ml四氫呋喃加入到離心管中，再加入5ml裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液和50mg卟啉類光敏劑分子，反應(yīng)72小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后在轉(zhuǎn)速為6000rpm的條件下離心10分鐘，收集沉淀，并將沉淀分散在甲醇中，得到濃度為7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液；十三、將50mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOmLN, N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，然后在轉(zhuǎn)速為HOOOrpm、溫度為4°C的條件下離心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向復(fù)合納米粒子的甲醇溶液；步驟十二中所述的卟啉類光敏劑分子為5-(4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20_三(4-羧基苯基)卟啉；步驟十三中所述的靶向性生物分子為葉酸。
實(shí)驗(yàn)二靶向復(fù)合納米粒子的制備方法按照以下步驟進(jìn)行一、制備磁性納米粒子將IOmL 濃度為 lmol/L 的 FeCljK溶液、2. 5mLFeS04 ·7Η20 的 HCl 溶液加入到 125mL濃度為O. 7mol/L的NH3 ·7Η20，繼續(xù)攪拌30min，離心分離并收集上清液中的產(chǎn)物，將上清液中的產(chǎn)物用去離子水洗滌3次，然后再分散在150mL去離子水中，得到Fe3O4納米粒子溶液；所述的FeSO4 · 7H20的HCl溶液中FeSO4 · 7H20的濃度為2mol/L、HCl的濃度為2mol/L ；二、制備 Fe3O4-HCPT 納米粒子將IOmlFe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超聲反應(yīng)30min,磁力分離，然后用濃度為O. 51mol/L的NaCl溶液洗滌，最后分散在水中，得到濃度為7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液；步驟二中所述的聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氫氯丙烯胺濃度為lmg/ml，NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ；三、將IOmLPAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液分散到IOmL聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min,得到Fe3O4磁性納米粒子前體；步驟三中所述的聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為Img/ml, NaCl 的濃度為 O. 5mol/L ；四、將364mgl0_羥基喜樹堿溶解在150mLNa0H溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOmLFe3O4磁性納米粒子前體加入到IOmLHCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離，并用PH值為4. 8的HCl溶液洗滌，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子；五、將聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子分散到150ml去離子水中，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子分散液，將IOmL聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子分散液分散到IOmL聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子前體a ；將364mgl0_羥基喜樹堿溶解在150mLNa0H溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOmLFe3O4磁性納米粒子前體a加入到IOmLHCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離，并用PH值為4. 8的HCl溶液洗滌，得到2層聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子；所述的聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為lmg/ml, NaCl的濃度為O. 5mol/L ；六、重復(fù)步驟五，然后加入150mL去離子水中，得到n+2層聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液，其中η為正整數(shù)；七、制備Fe3O4-HCPTIgSiO2 :將ImL正硅酸乙酯與30mL乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，將
2.5mLNH3 ·Η20、38ιΛΗ20、38ιΛ乙醇及10mLn+2層聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反應(yīng)4小時(shí)，磁力分離，收集沉淀，并用水 與乙醇的混合溶液洗滌3次，再分散在IOOmL去離子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液；八、然后在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入適量的乙醇洗滌，超聲分散15-20min ；九、重復(fù)步驟八4次，得到濃度為7. 5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液；十、將IOmLFe3O4-HCPTlgSiO2乙醇溶液與O. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的條件下攪拌3小時(shí)，然后按照在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心30min，向沉淀中加入乙醇，超聲分散15-20min的順序，重復(fù)5次，得到表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；^^一、制備金納米粒子向40mL蒸餾水中加入O. Olml濃度為O. 25mol/L氯金酸水溶液、O. 2mL濃度為
0.2mol/L碳酸鉀水溶液、O. 6mL濃度為O. 5mol/L硼氫化鈉水溶液，600rpm攪拌lOmin，再加入濃度為O. 5mol/L的硼氫化鈉水溶液，直到溶液的藍(lán)紫色變?yōu)槌燃t色停止加入硼氫化鈉水溶液，再攪拌5min，得到金納米粒子溶液；十二、制備草莓狀金納米復(fù)合粒子將O. 07ml表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀釋至50ml，然后再滴入到金納米粒子溶液中，然后以600rpm的速度離心90min，得到Au/Si02溶液；十三、制備金納米殼將25mg碳酸鉀溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度攪拌IOmin,然后加入
1.5ml濃度為O. 25mol/L的氯金酸水溶液，繼續(xù)攪拌30分鐘，得混合液，將4ml混合液與Au/SiO2溶液混合，然后以5000rpm離心30min，然后再將離心后的沉淀分散于IOmL水中并超聲lOmin，得到包裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液；十四、將0.03g 1，2-二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3ml四氫呋喃加入到離心管中，再加入4ml裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液和50mg卟啉類光敏劑分子，反應(yīng)72小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后在轉(zhuǎn)速為6000rpm的條件下離心10分鐘，收集沉淀，并將沉淀分散在甲醇中，得到濃度為7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子；十五、將80mgFe304-HCPT@Si02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、lOmLN，N-二甲基甲酰胺和50mg抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，然后在轉(zhuǎn)速為HOOOrpm、溫度為4°C的條件下離心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向復(fù)合納米粒子的甲醇溶液；
步驟十三中所述的卟啉類光敏劑分子為四氯乙酰氧基苯基卟啉； 步驟十四中所述的抗腫瘤藥物為單克隆抗體赫賽汀。
權(quán)利要求
1.靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于靶向復(fù)合納米粒子的制備方法按照以下步驟進(jìn)行 一、制備磁性納米粒子 將IOml濃度為lmol/L的FeCl3水溶液、2. 5ml FeSO4 7H20的HCl溶液加入到125ml濃度為0. 7mol/L的NH3 *7H20，繼續(xù)攪拌30min，離心分離并收集上清液中的產(chǎn)物，將上清液中的產(chǎn)物用去離子水洗滌3次，然后再分散在150ml去離子水中，得到Fe3O4納米粒子溶液； 所述的FeSO4 7H20的HCl溶液中FeSO4 7H20的濃度為2mol/L、HCl的濃度為2mol/L ； 二、制備Fe3O4-HCPT納米粒子 將IOml Fe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超聲反應(yīng).30min,磁力分離，然后用濃度為0. 5ImoI/L的NaCl溶液洗滌，最后分散在水中，得到濃度為.7. 5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液； 步驟二中所述的聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氫氯丙烯胺濃度為lmg/ml，NaCl的濃度為0. 5mol/L ； 三、將IOmlPAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min,得到Fe3O4磁性納米粒子前體； 步驟三中所述的聚苯乙烯磺酸酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為Img/ml, NaCl 的濃度為 0. 5mol/L ； 四、將364mgl0-羥基喜樹堿溶解在150mlNaOH溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOmlFe3O4磁性納米粒子前體加入到IOml HCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離收集沉淀，并用pH值為4. 8的HCl溶液洗滌，然后加入150mL去離子水中，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液；五、制備Fe3O4-HCPTlgSiO2 將Iml正硅酸乙酯與30ml乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，將2. 5mLNH3 H2O,.38mL H20、38mL乙醇及IOmL聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反應(yīng)4小時(shí)，磁力分離，收集沉淀，并用水與乙醇的混合溶液洗滌3次，再分散在IOOml去離子水中，得到Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液； 六、然后在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入乙醇洗漆,超聲分散15-20min ； 七、重復(fù)步驟六3-4次，得到濃度為7.5mg/mLFe304-HCPTiSi02乙醇溶液； 八、將IOmlFe3O4-HCPTiSiO2乙醇溶液與0. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的條件下攪拌3小時(shí)，然后按照在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心30min，向沉淀中加入乙醇，超聲分散15-20min的順序，重復(fù)5次，得到表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液； 九、制備金納米粒子 向40ml蒸餾水中加入0. Olml濃度為0. 25mol/L氯金酸水溶液、0. 2ml濃度為0. 2mol/L碳酸鉀水溶液、0. 6ml濃度為0. 5mol/L硼氫化鈉水溶液,在600rpm的條件下攪拌IOmin,再加入濃度為0. 5mol/L的硼氫化鈉水溶液，直到溶液的藍(lán)紫色變?yōu)槌燃t色停止加入硼氫化鈉水溶液，再攪拌5min，得到金納米粒子溶液；十、制備草莓狀金納米復(fù)合粒子 將0. 07ml表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTIgSiO2溶液稀釋至50ml，然后再滴入到金納米粒子溶液中，然后以600rpm的速度離心90min，得到Au/Si02溶液； i 、制備金納米殼 將25mg碳酸鉀溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度攪拌IOmin,然后加入I. 5ml濃度為0. 25mol/L的氯金酸水溶液，繼續(xù)攪拌30分鐘，得混合液，將4ml混合液與Au/Si02溶液混合，然后以5000rpm離心30min，然后再將離心后的沉淀分散于IOml水中并超聲IOmin,得到包裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液； 十二、將0.03g I，2-二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3 4ml四氫呋喃加入到離心管中，再加入I 5ml裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液和50mg卟啉類光敏劑分子,反應(yīng)72小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后在轉(zhuǎn)速為6000rpm的條件下離心10分鐘，收集沉淀，并將沉淀分散在甲醇中，得到濃度為7. 5mg/mL的Fe3O4-HCPTlgSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液； 十三、將50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOml N，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，然后在轉(zhuǎn)速為14000rpm、溫度為4°C的條件下離心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向復(fù)合納米粒子的甲醇溶液； 步驟十二中所述的卟啉類光敏劑分子為5- (4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20-三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉； 步驟十三中所述的靶向性生物分子為葉酸； 步驟十三中所述的抗腫瘤藥物為單克隆抗體赫賽汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶或甲氨蝶吟。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟十二中將0.03gl，2- 二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3. 5ml四氫呋喃加入到離心管中。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟十三中將60mg 90mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、lOmlN，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟十三中將70mg 80mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、lOmlN，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟十三中將75mgFe304-HCPTiSi02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOml N，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。
6.靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于靶向復(fù)合納米粒子的制備方法按照以下步驟進(jìn)行 一、制備磁性納米粒子 將IOml濃度為lmol/L的FeCl3水溶液、2. 5ml FeSO4 7H20的HCl溶液加入到125ml濃度為0. 7mol/L的NH3 *7H20，繼續(xù)攪拌30min，離心分離并收集上清液中的產(chǎn)物，將上清液中的產(chǎn)物用去離子水洗滌3次，然后再分散在150ml去離子水中，得到Fe3O4納米粒子溶液；所述的FeSO4 7H20的HCl溶液中FeSO4 7H20的濃度為2mol/L、HCl的濃度為2mol/L ； 二、制備Fe3O4-HCPT納米粒子 將IOmlFe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中，超聲反應(yīng)30min,磁力分離，然后用濃度為0. 51mol/L的NaCl溶液洗滌，最后分散在水中，得到濃度為7.5mg/ml的PAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液； 步驟二中所述的聚氫氯丙烯胺的NaCl水溶液中聚氫氯丙烯胺濃度為lmg/ml，NaCl的濃度為0. 5mol/L ； 三、將IOmlPAH-包裹的Fe3O4納米粒子溶液分散到IOml聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min,得到Fe3O4磁性納米粒子前體； 步驟三中所述的聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為lmg/ml,NaCl 的濃度為 0. 5mol/L ； 四、將364mgl0-羥基喜樹堿溶解在150mlNaOH溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOml Fe3O4磁性納米粒子前體加入到IOml HCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離，并用PH值為4. 8的HCl溶液洗滌，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子； 五、將聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子分散到150ml去離子水中，得到聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子分散液，將IOml聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子分散液分散到IOml聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中超聲反應(yīng)30min，F(xiàn)e3O4磁性納米粒子前體a ； 將364mgl0-羥基喜樹堿溶解在150ml NaOH溶液中，調(diào)節(jié)pH值為11，在加入濃度為lmol/L的HCl調(diào)節(jié)pH值為4. 8，得到HCPT微乳液，將IOml Fe3O4磁性納米粒子前體a加入到IOml HCPT微乳液中，攪拌并通過紫外吸收監(jiān)測反應(yīng)，當(dāng)10-羥基喜樹堿的特征吸收峰消失時(shí)，停止反應(yīng)，磁力分離，并用PH值為4. 8的HCl溶液洗滌，得到2層聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子； 所述的聚苯乙烯磺酸鈉的NaCl水溶液中聚苯乙烯磺酸鈉的濃度為lmg/ml, NaCl的濃度為 0. 5mol/L ； 六、重復(fù)步驟五，然后加入150mL去離子水中，得到n+2層聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液，其中n為正整數(shù)；七、制備Fe3O4-HCPTlgSiO2 將Iml正硅酸乙酯與30ml乙醇混合，得到正硅酸乙酯的乙醇溶液，將2. 5mLNH3 H2O,38mL H20、38mL乙醇及IOmL n+2層聚苯乙烯磺酸鈉/HCPT的Fe3O4磁性納米粒子水溶液混合，然后加入正硅酸乙酯的乙醇溶液，反應(yīng)4小時(shí)，磁力分離，收集沉淀，并用水與乙醇的混合溶液洗滌3次，再分散在IOOml去離子水中，得到Fe304-HCPT@Si02水溶液； 八、然后在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心Fe3O4-HCPTlgSiO2水溶液30min，去掉上清液，加入適量的乙醇洗滌，超聲分散15-20min ； 九、重復(fù)步驟八3-4次，得到濃度為7.5mg/mL Fe3O4-HCPTiSiO2乙醇溶液； 十、將IOml Fe3O4-HCPTiSiO2乙醇溶液與0. 03ml氨基丙基三乙氧基硅烷在80°C的條件下攪拌3小時(shí)，然后按照在轉(zhuǎn)速為IOOOOrpm的條件下離心30min，向沉淀中加入乙醇，超聲分散15-20min的順序，重復(fù)5次，得到表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液；i^一、制備金納米粒子 向40ml蒸餾水中加入0. Olml濃度為0. 25mol/L氯金酸水溶液、0. 2ml濃度為0. 2mol/L碳酸鉀水溶液、0. 6ml濃度為0. 5mol/L硼氫化鈉水溶液，600rpm攪拌lOmin，再加入濃度為0. 5mol/L的硼氫化鈉水溶液，直到溶液的藍(lán)紫色變?yōu)槌燃t色停止加入硼氫化鈉水溶液，再攪拌5min,得到金納米粒子溶液； 十二、制備草莓狀金納米復(fù)合粒子 將0. 07ml表面氨基化修飾的Fe3O4-HCPTlgSiO2溶液稀釋至50ml，然后再滴入到金納米粒子溶液中，然后以600rpm的速度離心90min，得到Au/Si02溶液； 十三、制備金納米殼 將25mg碳酸鉀溶解在IOOml蒸懼水中，以600rpm的速度攪拌IOmin,然后加入I. 5ml濃度為0. 25mol/L的氯金酸水溶液，繼續(xù)攪拌30分鐘，得混合液，將4ml混合液與Au/Si02溶液混合，然后以5000rpm離心30min，然后再將離心后的沉淀分散于IOml水中并超聲IOmin,得到包裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液； 十四、將0.03g I，2-二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3 4ml四氫呋喃加入到離心管中，再加入I 5ml裹金納米殼的SiO2納米離子水溶液和50mg卟啉類光敏劑分子,反應(yīng)72小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后在轉(zhuǎn)速為6000rpm的條件下離心10分鐘，收集沉淀，并將沉淀分散在甲醇中，得到濃度為7. 5mg/mL的Fe304-HCPT@Si02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子； 十五、將50mg IOOmg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOml N，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，然后在轉(zhuǎn)速為14000rpm、溫度為4°C的條件下離心，收集沉淀后分散在甲醇中，得到靶向復(fù)合納米粒子的甲醇溶液； 步驟十三中所述的卟啉類光敏劑分子為5- (4-氯乙酰氧基苯基)-10，15，20-三(4-羧基苯基)P卜啉或四氯乙酰氧基苯基P卜啉； 步驟十四中所述的靶向性生物分子為葉酸； 步驟十四中所述的抗腫瘤藥物為單克隆抗體赫賽汀、紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶或甲氨蝶吟。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟十四中將0.03gl，2- 二巰基-3-環(huán)己烷基聚乙二醇和3. 5ml四氫呋喃加入到離心管中。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟十五中將60mg 90mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、lOmlN，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟十五中將70mg 80mg Fe3O4-HCPTiSiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、10mlN，N- 二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于步驟十五中將75mgFe304-HCPTiSi02偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、IOml N，N-二甲基甲酰胺和50mg靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)。
全文摘要
靶向復(fù)合納米粒子的制備方法，它涉及一種靶向診療一體化復(fù)合納米粒子的制備方法。本發(fā)明解決了目前抗腫瘤藥物載體穩(wěn)定性差、載藥量小的技術(shù)問題。本方法如下制備Fe3O4-HCPT@SiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液；將Fe3O4-HCPT@SiO2偶聯(lián)卟啉類光敏劑的一體化納米粒子的甲醇溶液、N，N-二甲基甲酰胺和靶向性生物分子或抗腫瘤藥物在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，然后離心，即得；本方明將聚苯乙烯磺酸(PSS)與10-羥基喜樹堿自組裝方式吸附在Fe3O4磁性納米粒子上，本方法可行性高；具有本身磁性納米粒子的物理靶向作用及進(jìn)一步表面功能化修飾生物分子的主動(dòng)靶向作用，在雙重靶向作用下能增加藥物濃度。
文檔編號(hào)A61K39/395GK102961337SQ201210543590
公開日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月14日
發(fā)明者郭喜明, 郭斌, 薄璇 申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)