一種納米靶向載藥膠束及其制備方法和一種抗癌藥物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，設(shè)及一種納米祀向載藥膠束及其制備方法和一種抗癌 藥物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近紅外染料（Near-infrared imaging,NIR imaging)是一類波長范圍在700- 1000皿的小分子巧光探針，其發(fā)射出的巧光有很強的組織穿透性，深度可達4-10皿，且在相 同波段生物體自發(fā)巧光弱，因而是目前光學成像中較理想的方法之一同時，在吸收近紅外 波段的激光后，能局部產(chǎn)生熱量和活性氧成分，因而在探測腫瘤部位的同時實現(xiàn)光熱治療 及光動力治療。因而，近紅外巧光探針極有潛力實現(xiàn)腫瘤的診療一體化。
[0003] IR780艦化物是一種新型的近紅外屯甲川花菁類巧光探針，具有高量子產(chǎn)率和良 好的光穩(wěn)定性。其結(jié)構(gòu)比FDA批準的嗎I噪菁綠（ICG)更加穩(wěn)定，同時結(jié)構(gòu)中C1離子的存在使 其易于修飾而增加其祀向及其他功能材料。因而它在未來生物學應用上具有極大的潛力。 但由于IR780艦化物自身結(jié)構(gòu)存在疏水基團，其水溶性很差，因而限制了其臨床應用，同時， IR780艦化物的毒性較大，也影響了其生物應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種納米祀向載藥膠束，所述納米祀向載藥膠束 包括透明質(zhì)酸和IR780艦化物，所述透明質(zhì)酸與所述IR780艦化物通過二硫鍵連接，所述納 米祀向載藥膠束水溶性較好且毒性較低。另外，本發(fā)明還提供了所述納米祀向載藥膠束的 制備方法，制備方法簡單易行。
[0005] 第一方面，本發(fā)明提供了一種納米祀向載藥膠束，所述納米祀向載藥膠束為核殼 結(jié)構(gòu)，所述內(nèi)核為IR780艦化物，所述外殼為透明質(zhì)酸，所述IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸通 過二硫鍵連接。
[0006] 優(yōu)選地，所述IR780艦化物和所述透明質(zhì)酸的摩爾比為2-6:1。
[0007] 優(yōu)選地，所述納米祀向載藥膠束的粒徑為50-200nm。
[000引在運樣粒徑范圍內(nèi)的所述納米祀向載藥膠束更容易進入細胞內(nèi)。
[0009] 優(yōu)選地，所述透明質(zhì)酸的分子量為10K-100K。
[0010] 優(yōu)選地，所述納米祀向載藥膠束的劑型為凍干粉針劑或水溶液針劑。
[0011] 可W將所述納米祀向載藥膠束凍干形成凍干粉針劑，也可W所述納米祀向載藥膠 束置于溶劑中形成水溶液針劑。
[0012] 所述納米祀向載藥膠束中所述IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸通過二硫鍵連接，所 述納米祀向載藥膠束的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。
[0013] 所述納米祀向載藥膠束包括透明質(zhì)酸，所述透明質(zhì)酸可W作為主動祀向因子，與 腫瘤細胞表面的特異性受體CD44結(jié)合，進入細胞并在細胞內(nèi)釋放藥物。因此，所述納米祀向 載藥膠束祀向性良好。另外，當所述納米祀向載藥膠束進入腫瘤細胞時，腫瘤細胞內(nèi)的谷脫 甘膚能會還原二硫鍵從而使二硫鍵斷裂，進而釋放IR780艦化物，實現(xiàn)對IR780艦化物在腫 瘤部位的響應型釋放。
[0014] 由于透明質(zhì)酸具有水溶性好、生物相容性高等特點，包裹在IR780艦化物的表面改 善了 IR780艦化物的水溶性，有助于IR780艦化物在生物體內(nèi)中的應用。同時透明質(zhì)酸包裹 所述IR780艦化物，可W降低所述IR780艦化物的毒性，另外，透明質(zhì)酸可生物降解并通過正 常的生理途徑吸收或排出體外，不會對生物體造成損害，提高了其生物相容性。
[0015] IR780艦化物作為一種近紅外染料，具有良好的光譜特性，能同時實現(xiàn)光聲及巧光 的雙模成像，也可W對腫瘤進行光熱治療，能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤部位的診療一體化。
[0016] 本發(fā)明第一方面提供的納米祀向載藥膠束，采用透明質(zhì)酸為外殼來包覆IR780艦 化物內(nèi)核，由于透明質(zhì)酸具有水溶性好、生物相容性高等特點，改善了IR780艦化物的水溶 性，降低其毒性。同時納米祀向載藥膠束中所述IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸通過二硫鍵連 接，當所述納米祀向載藥膠束進入腫瘤細胞時，腫瘤細胞內(nèi)的谷脫甘膚能會還原二硫鍵從 而釋放IR780艦化物，實現(xiàn)對IR780艦化物在腫瘤部位的響應型釋放。
[0017] 第二方面，本發(fā)明提供了一種納米祀向載藥膠束的制備方法，包括W下步驟：
[001引（1)將透明質(zhì)酸、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酷二亞胺鹽酸鹽巧DC .肥1)和N- 徑基班巧酷亞胺(NHS)混合，室溫下攬拌2-化后加入脫胺，在20-40°C下反應12-2地，得到反 應液，將所述反應液透析后、凍干，制得透明質(zhì)酸-二硫鍵-氨基；
[0019] (2)將簇基被活化的氨基酸、IR780艦化物和縛酸劑混合，在60-80°C下反應過夜， 制得含有活化簇基的IR780艦化物；
[0020] (3)將所述含有活化簇基的IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸-二硫鍵-氨基混合，在 20-40°C下反應12-2地，制得納米祀向載藥膠束;所述納米祀向載藥膠束為核殼結(jié)構(gòu)，所述 內(nèi)核為IR780艦化物，所述外殼為透明質(zhì)酸，所述IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸通過二硫鍵 連接。
[0021] 將所述含有活化簇基的IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸-二硫鍵-氨基混合，含有活 化簇基的IR780艦化物中的簇基與透明質(zhì)酸-二硫鍵-氨基中的氨基發(fā)生酷胺化反應，得到 所述納米祀向載藥膠束，所述納米祀向載藥膠束中所述IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸之間 連接有二硫鍵。
[0022] 優(yōu)選地，所述透明質(zhì)酸的分子量為10K-100K。
[0023] 優(yōu)選地，步驟(1)中，所述透明質(zhì)酸與所述脫胺的摩爾比為1:2-6。
[0024] 優(yōu)選地，步驟（1)中，所述透明質(zhì)酸、所述抓C .肥1和所述NHS的摩爾比為1:2-6:2- 6。
[0025] 優(yōu)選地，步驟(1)中，將所述反應液透析后、凍干后得到白色固體，所述白色固體為 透明質(zhì)酸-二硫鍵-氨基。
[0026] 優(yōu)選地，步驟(2)中，所述簇基被活化的氨基酸由抓C · HC1和NHS活化氨基酸中的 簇基制得。
[0027] 更優(yōu)選地，步驟(2)中，所述簇基被活化的氨基酸采用W下方法制得:將氨基酸、 EDC ·肥1和畑S混合，在室溫下攬拌2-化后制得所述簇基被活化的氨基酸。
[002引優(yōu)選地，步驟(2)中，所述氨基酸、所述邸C ·肥巧日所述N服的摩爾比為1:2-6:2-6。
[0029] 更優(yōu)選地，步驟(2)中，所述氨基酸為丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸或天冬氨酸。
[0030] 優(yōu)選地，步驟(2)中，所述縛酸劑為Ξ乙胺。
[0031] 優(yōu)選地，所述Ξ乙胺與所述IR780艦化物的摩爾比是1-3:1。
[0032] 優(yōu)選地，步驟(2)中，所述簇基被活化的氨基酸與所述IR780艦化物的摩爾比為1- 3:1。
[0033] 優(yōu)選地，步驟(2)中，反應完全后，將得到的反應液采用硅膠柱層析分離，得到所述 含有活化簇基的IR780艦化物。
[0034] 優(yōu)選地，步驟(2)中，將所述含有活化簇基的IR780艦化物溶于甲酯胺或二甲基甲 酷胺(DM巧中，得到含有活化簇基的IR780艦化物溶液。
[0035] 優(yōu)選地，將所述透明質(zhì)酸-二硫鍵-氨基溶于甲酯胺或二甲基甲酯胺(DMF)中，得到 透明質(zhì)酸-二硫鍵-氨基溶液。
[0036] 優(yōu)選地，將所述含有活化簇基的IR780艦化物溶液與所述透明質(zhì)酸-二硫鍵-氨基 溶液混合，在20-40°C下反應12-24h，制得納米祀向載藥膠束。
[0037] 優(yōu)選地，步驟(3)中，所述含有活化簇基的IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸-二硫鍵- 氨基的摩爾比為2-6:1。
[0038] 優(yōu)選地，步驟(3)中，所述含有活化簇基的IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸-二硫鍵- 氨基反應后，得到反應液，將所述反應液減壓抽濾，除去大顆粒不溶物，得到濾液，將所述濾 液置于纖維素透析袋中，于蒸饋水中透析24小時得到所述納米祀向載藥膠束。
[0039] 優(yōu)選地，步驟(3)中，制得所述納米祀向載藥膠束后，將所述納米祀向載藥膠束凍 干。
[0040] 本發(fā)明制得所述納米祀向載藥膠束后，可W凍干所述納米祀向載藥膠束后得到凍 干粉針劑，或者不凍干，透析后得到水溶液針劑。
[0041 ] 優(yōu)選地，所述納米祀向載藥膠束的粒徑為50-200nm。
[0042] 步驟（1)中，將透明質(zhì)酸（用HA表示）、抓C ·肥1、N服和脫胺混合，制得透明質(zhì)酸-二 硫鍵-氨基(用HA-S-S-N出表示）。步驟(1)的反應方程式如下所示：
[0043]
[0044] 步驟(2)中，氨基酸W丙氨酸為例，將丙氨酸采用抓C ·肥1和NHS活化，得到簇基被 活化的氨基酸;反應方程式如下所示：
[0045]
[0046] 然后將IR780艦化物（用IR780表示）、簇基被活化的氨基酸和縛酸劑混合，制得含 有活化簇基的IR780艦化物(用IR780-NHS表示）；反應方程式如下所示：
[0047]
[004引步驟(3)中，將IR780-NHS與HA-S-S-N也混合，制得納米祀向載藥膠束（用HA-S-S- IR780表示）；反應方程式如下所示：
[0049]
[0050] 本發(fā)明第二方面提供的納米祀向載藥膠束的制備方法，條件溫和、制備方法簡單， 便于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0051] 第Ξ方面，本發(fā)明提供了一種抗癌藥物，包括納米祀向載藥膠束和疏水性藥物，所 述納米祀向載藥膠束包括IR780艦化物和透明質(zhì)酸，所述抗癌藥物為核殼結(jié)構(gòu)，所述IR780 艦化物和所述疏水性藥物形成內(nèi)核，所述透明質(zhì)酸包裹在所述內(nèi)核的表面形成外殼，所述 IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸通過二硫鍵連接。
[0052] 優(yōu)選地，所述納米祀向載藥膠束與所述疏水性藥物的質(zhì)量比為1:0.1-0.2。
[0053] 優(yōu)選地，所述疏水性藥物為阿霉素、紫杉醇和喜樹堿中的至少一種。
[0化4] 優(yōu)選地，所述抗癌藥物的粒徑為50-200nm。
[0055]所述抗癌藥物采用所述納米祀向載藥膠束作為載體，所述疏水性藥物與所述 IR780艦化物通過物理作用混合在一起形成內(nèi)核，透明質(zhì)酸包裹疏水性藥物和所述IR780艦 化物形成核殼結(jié)構(gòu)，透明質(zhì)酸作為殼增強了疏水性藥物的水溶性，同時降低疏水性藥物的 毒性，所述抗癌藥物生物相容性良好。另外，所述納米祀向載藥膠束的祀向性良好。由于所 述IR780艦化物與所述透明質(zhì)酸通過二硫鍵連接，所述抗癌藥物在進入腫瘤細胞中后，腫瘤 細胞內(nèi)的谷脫甘膚能會還原二硫鍵從而打開殼，釋放內(nèi)核中的IR780艦化物和疏水性藥物， 可W實現(xiàn)藥物的響應型釋放。所述納米祀向載藥膠束中含有IR780艦化物，IR780艦化物可 w與疏水性藥物進行協(xié)同作用，實現(xiàn)熱療和化療聯(lián)合的治療功能。
[0056] 第四方面，本發(fā)明提供了一種抗癌藥物的制備方法，包括W下步驟：
[0057] 將納米祀向載藥膠束和疏水性藥物溶于有機溶劑中，在20-40°C下反應12-2地，得 到抗癌藥物，所述抗癌藥物為核殼結(jié)