專利名稱：具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物、其制備方法及其在制備口服抗肺癌藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥多組分抗肺癌微乳，該納米組合物將水不溶性藥物靈芝總?cè)萍稗曹尤术ポd入非水相中，將靈芝多糖及薏苡仁多糖載入水相中，制備成多組分微乳組合物。本發(fā)明還涉及這種微乳組合物的制備 方法。
背景技術：
肺癌是目前全球第一癌癥殺手,全世界每年新增肺癌病例120萬例，每30秒就有一人死于肺癌。在我國，肺癌同樣是發(fā)病率與死亡率最高的癌癥，據(jù)預測，到2025年，我國每年肺癌患者將超過100萬，成為世界第一肺癌大國。2012年肺癌已被納入醫(yī)保救助試點范圍。因此抗肺癌藥物的研發(fā)將具有極大的社會效益及經(jīng)濟效益。目前國內(nèi)外關于肺癌的治療主要是手術及放療、化療，但是這些方法易對患者的正常器官造成較大的副作用，使患者的存活率較低。以“祛邪扶正”為特色的傳統(tǒng)中藥在治療肺癌方面發(fā)揮了巨大作用，其療效不僅鞏固，而且毒副作用小，增加了對機體用藥的安全性，與化療并用可起到減毒增效的作用。靈芝為多孔菌科真菌赤芝fefloofe/ma lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang)的干燥子實體。性味甘、平；歸心、肺、肝、腎經(jīng)。具有補氣安神，止咳平喘之功效。用于心神不寧，肺虛咳喘，虛勞短氣，不思飲食等?，F(xiàn)代科學研究表明，靈芝具有較強的抗腫瘤作用，其中靈芝總?cè)剖瞧淇鼓[瘤的主要有效組分，靈芝多糖是提高機體免疫力的主要有效組分，但二者口服吸收較差，因而影響其口服藥效的發(fā)揮。薏該仁為禾本科植物薏該Cbiz lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman. ) Stapf的干燥成熟種仁。性味甘、淡、涼；歸脾、胃、肺經(jīng)。具有利水滲濕，健脾止瀉，除痹，排膿，解毒散結(jié)之功效。用于水腫，腳氣，小便不利，脾虛泄瀉，濕痹拘攣，肺癰，腸癰，贅疣，癌腫?，F(xiàn)代研究表明，薏苡仁亦具有較好的抗腫瘤作用，其中薏苡仁酯是其主要的抗腫瘤有效組分，薏苡仁多糖是提高機體免疫力的主要有效組分，但二者口服后生物利用度較低，從而影響了其臨床療效的發(fā)揮。本發(fā)明多組分微乳組合物的藥物組成來源于臨床抗肺癌驗方，該驗方由靈芝和薏苡仁兩味中藥組成，具有補氣養(yǎng)陰，利水滲濕，消瘤軟堅的作用。其中靈芝總?cè)坪娃曹尤术樵搹头街饕鼓[瘤有效組分，靈芝多糖和薏苡仁多糖是提高機體免疫力的主要有效組分。目前該復方仍以傳統(tǒng)水煎煮的方法用于患者，但靈芝總?cè)坪娃曹尤术ニ苄暂^差，靈芝多糖及薏苡仁多糖為大分子物質(zhì)，口服均難于吸收，影響其藥效的發(fā)揮。因此本發(fā)明采用微乳作為口服藥物載體，以靈芝總?cè)啤⑥曹尤术?、靈芝多糖及薏苡仁多糖四種組分配伍，薏苡仁酯兼具輔料的作用，多糖既可增強免疫作用又可增加微乳體系的穩(wěn)定性，制備靈薏方多組分微乳組合物，以促進藥物吸收，發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤的作用，使抗腫瘤效果增強。微乳是一種由油相、水相、表面活性劑及助表面活性劑在適當比例自發(fā)形成的一種透明或半透明、低黏度、各向同性且熱力學穩(wěn)定的油水混合系統(tǒng)，具有可提高水難溶性藥物的溶解度，促進脂溶性及水溶性大分子藥物的吸收；提高藥物的生物利用度等優(yōu)點。由于微乳既含有水相又含有非水相，因此適宜于既有脂溶性組分又有水溶性組分的中藥復方的負載。經(jīng)檢索，現(xiàn)有技術已有對靈芝或薏苡仁抗腫瘤的相關制劑報道。有關單一薏苡仁油的中國專利申請有一種治療前列腺疾病的薏苡仁油軟膠囊及其應用(02137311. 6)，一種薏該仁油微乳的制備方法(2010101934956. 6), 一種薏該仁油自乳化制劑及其制備方法(200710027400. I)及一種薏苡仁油前體脂質(zhì)體及其制備方法(201010130883. X)等。有關單一靈芝總?cè)频膶＠幸环N抗腫瘤活性的靈芝三萜提取物的自微乳化納米組合物及其制備方法(200910031997. 6)。有關靈芝及薏苡仁的專利有一種靈芝孢子油與薏苡仁油復合靜脈注射乳劑及其制備方法(200510135357. I)。但經(jīng)文獻與專利檢索尚未見有將靈芝和 薏苡仁中上述四類組分配伍的制劑報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物及其制備方法，以及該納米組合物在制備口服抗肺癌藥物中的應用。該多組分微乳可促進脂溶性組分靈芝總?cè)萍稗曹尤术サ奈眨宜姆N組分配伍具有協(xié)同抗腫瘤作用，使抗腫瘤效果增強。本發(fā)明的第一個發(fā)明目的是通過以下的技術方案來實現(xiàn)的
一種具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物，以靈芝總?cè)?、薏苡仁酯及靈芝多糖、薏苡仁多糖作為原料藥，其中薏苡仁酯兼做油相，靈芝多糖、薏苡仁多糖溶于水相，其特征在于，所述原料藥與表面活性劑和助表面活性劑組成的納米組合物，各組分重量份如下靈芝總?cè)?-30份，薏苡仁酯45-150份，表面活性劑45-200份，助表面活性劑20-100份，靈芝多糖5-50份，薏苡仁多糖20-100份，蒸餾水300-900份。各組分重量份的優(yōu)化比例是
靈芝總?cè)?0-25份，薏苡仁酯60-120份，表面活性劑60-150份，助表面活性劑30-80份，靈芝多糖10-40份，薏苡仁多糖50-90份，蒸餾水400-800份。各組分重量份的更為優(yōu)化的比例是
靈芝總?cè)?2-20份，薏苡仁酯75-90份，表面活性劑75-100份，助表面活性劑35-60份，靈芝多糖15-25份，薏苡仁多糖60-80份，蒸餾水500-600份。上述的靈芝總?cè)剖侵笇㈧`芝子實體通過超臨界CO2萃取的方法萃取得到，具體流程如下將靈芝粗粉裝入萃取釜中，設定萃取釜的壓力為25 MPa，萃取溫度為45°C，萃取時間為I. 5 h，夾帶劑(95%乙醇)的用量為3倍量的藥材；分離釜I壓力為7 MPa，溫度為500C ;分離釜II壓力為4 MPa，溫度為36°C ;萃取裝置內(nèi)CO2流量控制在30 L · h—1。當達到試驗設定的萃取時間后，從分離釜I和分離釜II出料口接收萃取液，合并萃取液，回收溶齊U，50°c真空干燥，得靈芝總?cè)萍兌葹?1% (分光光度法測定，以熊果酸計)的提取物。上述的薏苡仁酯是指將薏苡仁通過超臨界CO2萃取的方法萃取得到，具體流程如下將薏苡仁粗粉裝入萃取釜中，設定萃取釜的壓力為22 MPa，萃取溫度為38°C ;萃取時間為2. 5 h，萃取兩次；夾帶劑(95%乙醇)的用量為3倍量的藥材；分離釜I壓力為8 MPaJ^度為48°C ;分離釜II壓力為4 MPa，溫度為26°C ;萃取裝置內(nèi)CO2流量控制在30 L · h'當達到試驗設定的萃取時間后，從分離釜I和分離釜II出料口接收萃取液，合并萃取液，回收溶劑，50°C真空干燥，得薏苡仁酯純度為74% (分光光度法測定，以甘油三油酸酯計)的提取物。上述的靈芝多糖、薏苡仁多糖是指分別將靈芝子實體、薏苡仁超臨界CO2萃取后的藥渣水提醇沉后得到，具體流程如下取超臨界CO2萃取后的靈芝子實體粗粉或薏苡仁粗粉殘渣，加入12倍量的水，回流提取2次，每次I h，合并兩次提取液，離心濾過，濾液濃縮，力口乙醇沉淀，使溶液含醇量為80%，靜置過夜，濾過，將沉淀用水溶解，加入1/5體積的Sevag試劑(正丁醇氯仿=1:5)振搖30 min，離心，分去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質(zhì)，將分離得到的水層，濃縮，真空干燥，即得靈芝或薏苡仁多糖提取物，其多糖純度分別為55%、58%(分光光度法測定，以葡萄糖計)。 上述的表面活性劑可選自以下化合物中的一種或多種吐溫80，吐溫60，吐溫20，泊洛沙姆，卵磷脂，司盤80，司盤60，0P乳化劑，聚氧乙烯氫化蓖麻油，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚；
上述助表面活性劑可選自以下化合物中的一種或多種乙醇，異丙醇，1，2-丙二醇，丙三醇，正丁醇，聚乙二醇300，聚乙二醇400，或乙二醇單乙基醚。本發(fā)明基于臨床抗肺癌驗方“靈薏方”，在中醫(yī)藥理論的指導下，充分發(fā)揮了中藥多組分多靶點及配伍給藥的用藥特點設計出一種多組分微乳載藥系統(tǒng)，且在現(xiàn)有專利及文獻中尚未發(fā)現(xiàn)關于靈芝總?cè)?、薏苡仁酯、靈芝多糖及薏苡仁多糖配伍的微乳及其制備方法的報道。配伍是中醫(yī)藥用藥的一大特色，本發(fā)明中的靈芝總?cè)婆c薏苡仁酯均是抗腫瘤療效確切的組分，靈芝多糖與薏苡仁多糖均是提高免疫力療效確切的組分。本發(fā)明通過大量的實驗研究發(fā)現(xiàn)靈芝總?cè)?、薏苡仁酯、靈芝多糖及薏苡仁多糖配伍后，靈芝總?cè)坪娃曹尤术ヅ湮閷φT導細胞凋亡抑制腫瘤細胞增殖及細胞周期阻滯方面均顯示出協(xié)同作用。靈芝總?cè)毰c薏該仁酯配伍使用能激活Caspase-3, Caspase-9及Caspase-8,明顯下調(diào)Bcl_2蛋白水平，表明靈芝總?cè)坪娃曹尤术ヅ湮榭烧{(diào)控細胞凋亡的相關蛋白來促進對腫瘤細胞增殖的抑制作用。靈芝總?cè)坪娃曹尤术ピ谂湮殪`芝多糖與薏苡仁多糖口服后，荷瘤動物的肝指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和血漿中TNF-α、IL-6含量等免疫學指標與不配伍多糖相比均顯著提高(P〈0. 05)，體現(xiàn)了多途徑協(xié)同抗腫瘤作用。本發(fā)明前期研究亦發(fā)現(xiàn)靈芝總?cè)?、薏苡仁酯、靈芝多糖及薏苡仁多糖的腸道吸收較差，為克服上述缺陷，更好的發(fā)揮靈薏方中組分配伍的抗腫瘤效果，本發(fā)明針對靈芝總?cè)?、薏苡仁酯、靈芝多糖及薏苡仁多糖的理化性質(zhì)，采用適合中藥多組分的微乳作為載體，通過大量的篩選試驗克服了多組分難以制備成微乳的技術難點，靈芝總?cè)茷橹苄运幬?，薏苡仁酯兼做油相，載入非水相中，靈芝多糖及薏苡仁多糖為水溶性藥物，載入水相中，選擇適宜的表面活性劑及助表面活性劑，制備中藥多組分載藥的微乳給藥系統(tǒng)，該給藥系統(tǒng)既發(fā)揮了靈芝總?cè)?、薏苡仁酯、靈芝及薏苡仁多糖配伍協(xié)同抗腫瘤作用，又促進了上述四種組分的吸收，同時降低了輔料的用量，多糖加入水相還能增加微乳體系的穩(wěn)定性，此外口服給藥途徑增強了患者的順應性，避免了注射給藥潛在的安全性問題，使制劑更安全、穩(wěn)定。
完成本申請第二個發(fā)明任務的技術方案是，上述具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物的制備方法，步驟如下
(1)按比例精密稱取靈芝多糖和薏苡仁多糖，溶于處方量的蒸餾水中，制備成水相，備
用；
(2)另取容器，按比例精密稱取靈芝總?cè)品庞谌萜髦?，加入薏苡仁酯，磁力攪拌器下混勻，使藥物溶解?br>
(3)接步驟2，再加入表面活性劑、助表面活性劑，磁力攪拌器下混勻；
(4)接步驟3，用步驟I制備的水相，滴入含有靈芝三萜、薏苡仁酯、表面活性劑及助表面活性劑的非水相中，攪拌混勻，即得一種多組分抗肺癌微乳組合物；
本發(fā)明制備的中藥多組分微乳是在磁力攪拌器下攪拌即可形成。 本發(fā)明的中藥多組分微乳可以以口服液的形式直接服用。與常規(guī)乳劑和亞微乳(100-10000 nm)相比，微乳粒徑更小(10-100 nm)，屬于熱力學穩(wěn)定體系；0/w型微乳處方中由于存在水相和非水相，適宜于中藥復方含有水溶性及脂溶性有效組分的負載，微乳制劑制備工藝簡單，易于工業(yè)化，具有良好的產(chǎn)業(yè)化前景。本發(fā)明的第三個發(fā)明目的的技術方案是上述具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物在制備口服抗肺癌藥物中的應用。I.采用動物模型對“靈薏方”多組分微乳的抗肺癌作用進行藥效評價。將細胞密度調(diào)至為I X IO7個/mL的Lewis肺癌細胞懸液接種于C57BL/6小鼠右腋部皮下，每只0.2 mL。接種后次日，稱重，隨機分組，每組8只?？瞻讓φ战M生理鹽水，每曰O. 4 mL/次；陽性對照組:環(huán)磷酰胺(20 mg · g-1 · cf1)，每日O. 2 mL/次；藥物組靈芝總?cè)?薏苡仁酯+靈芝多糖+薏苡仁多糖混懸液(重量比1:5:1. 2:4. 7)、靈芝總?cè)?薏苡仁酯+靈芝多糖+薏苡仁多糖(重量比1:5:1. 2:4. 7)組成的微乳，給藥劑量均為3. Og· kg—1· Cf1，每日O. 4 mL/次。環(huán)磷酰胺陽性對照組為腹腔注射，其他為灌胃給藥。連續(xù)給藥14 d，期間每天稱重，觀察小鼠的一般活動、毛發(fā)等狀況。停藥次日，稱重，脫頸處死小鼠，剝離腋下腫瘤、肝臟、胸腺和脾臟。計算抑瘤率、肝指數(shù)、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。結(jié)果見表1，2。抑瘤率(%)=(模型組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/模型組平均瘤重X 100% ； 肝指數(shù)(mg/g) =肝臟重量(mg)/小鼠體重(g)；
胸腺指數(shù)(mg/g) =胸腺重量(mg)/小鼠體重(g)；
脾指數(shù)(mg/g) =脾臟重量(mg)/小鼠體重(g)。表I “靈薏方”有效組分配伍混懸液及其微乳對Lewis荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用(
X ±5； /7=8)
組別I體重(g) I瘤重(g) I抑瘤率(%
生理鹽水23. 86±2· 36 5. 42±0· 91 ~~
環(huán)磷酰胺16·73±1·69 I. 38±0· 48* Τ~4· 59
靈芝總?cè)?薏苡仁酯+靈芝多糖+薏苡仁多糖(1:5:1.2:4.7)混懸液 9. 94±2. 02 5.93±0. 44* 45.89
靈芝總?cè)?薏苡仁酯+靈芝多糖+薏苡仁多糖(1:5:1.2:4.7)微乳|20. 81±1.02|2. 32±0. 71*|57.25
注為各組與生理鹽水組比較(* p〈0. 05)。結(jié)果表明與生理鹽水組比較，本發(fā)明所得到的靈芝總?cè)啤⑥曹尤术?、靈芝多糖、薏苡仁多糖四組分混懸液及微乳對體內(nèi)Lewis腫瘤的生長均有顯著性抑制作用，且微乳的抗腫瘤效果要遠優(yōu)于混懸液。說明采用現(xiàn)代提取分離手段及新型納米給藥系統(tǒng)將本藥物組合物中的有效組分最大程度地提取分離、配伍并制備成微乳，可以更好地發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用。表2 “靈薏方”有效組分配伍混懸液及其微乳對Lewis荷瘤小鼠免疫器官的影響Cx +51, /7=8)
權利要求
1.一種具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物，以靈芝總?cè)啤⑥曹尤术ゼ办`芝多糖、薏苡仁多糖作為原料藥，其中薏苡仁酯兼做油相，靈芝多糖、薏苡仁多糖溶于水相，其特征在于，所述的中藥多組分微乳組合物是由原料藥、表面活性劑和助表面活性劑組成的納米組合物，其各組分重量份如下 靈芝總?cè)?-30份，薏苡仁酯45-150份，表面活性劑45-200份，助表面活性劑20-100份，靈芝多糖5-50份，薏苡仁多糖20-100份，蒸餾水300-900份。
2.根據(jù)權利要求I所述的具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物，其特征在于，所述各組分的重量份比例是 靈芝總?cè)?0-25份，薏苡仁酯60-120份，表面活性劑60-150份，助表面活性劑30-80份，靈芝多糖10-40份，薏苡仁多糖50-90份，蒸餾水400-800份。
3.根據(jù)權利要求2所述的具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物，其特征在于，所述各組分的重量份比例是 靈芝總?cè)?2-20份，薏苡仁酯75-90份，表面活性劑75-100份，助表面活性劑35-60份，靈芝多糖15-25份，薏苡仁多糖60-80份，蒸餾水500-600份。
4.根據(jù)權利要求I所述的具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物，其特征在于，所述的靈芝總?cè)剖侵笇㈧`芝子實體粗粉通過超臨界CO2萃取的方法得到的靈芝總?cè)铺崛∥?，其總?cè)萍兌?gt;50% ;薏苡仁酯是指將薏苡仁粗粉通過超臨界CO2萃取的方法得到的薏苡仁提取物，其甘油三油酸酯純度>50% ;靈芝多糖是指將靈芝子實體超臨界CO2萃取后的藥渣水提醇沉后得到的多糖提取物，多糖純度>50% ;薏苡仁多糖是指將薏苡仁超臨界CO2萃取后的藥渣水提醇沉后得到的多糖提取物，多糖純度>50%。
5.根據(jù)權利要求I或2或3或4所述的具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物，其特征在于， 所述的表面活性劑選自以下化合物中的一種或多種吐溫80，吐溫60，吐溫20，泊洛沙姆，卵磷脂，司盤80，司盤60，OP乳化劑，聚氧乙烯氫化蓖麻油，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚； 所述的助表面活性劑選自下以下化合物中的一種或多種乙醇、正丙醇、異丙醇、1，2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、或乙二醇單乙基醚。
6.權利要求I所述的具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物的制備方法，其特征在于，步驟如下 (1)按比例精密稱取靈芝多糖和薏苡仁多糖，溶于處方量的蒸餾水中，制備成水相，備用； (2)另取容器，按比例精密稱取靈芝總?cè)品庞谌萜髦?，加入薏苡仁酯，磁力攪拌器下混勻，使藥物溶解? (3)接步驟2，再加入表面活性劑、助表面活性劑，磁力攪拌器下混勻； (4)接步驟3，用步驟I制備的水相，滴入含有靈芝三萜、薏苡仁酯、表面活性劑及助表面活性劑的非水相中，攪拌混勻，即得一種多組分抗肺癌微乳組合物； 其中，各組分重量份如下靈芝總?cè)?-30份，薏苡仁酯45-150份，靈芝多糖5-50份，薏苡仁多糖10-90份，表面活性劑45-200份，助表面活性劑20-100份，蒸餾水300-900份。
7.根據(jù)權利要求6所述的具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物的制備方法，其特征在于，所述各組分的重量份比例是 靈芝總?cè)?-30份，薏苡仁酯45-150份，靈芝多糖5-50份，薏苡仁多糖10-90份，表面活性劑45-200份，助表面活性劑20-100份，蒸餾水300-900份； 所述的表面活性劑選自以下化合物中的一種或多種吐溫80，吐溫60，吐溫20，泊洛沙姆，卵磷脂，司盤80，司盤60，OP乳化劑，聚氧乙烯氫化蓖麻油，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，或聚氧乙烯蓖麻油甘油醚； 所述的助表面活性劑選自以下化合物中的一種或多種乙醇、正丙醇、異丙醇、1，2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、或乙二醇單乙基醚。
8.根據(jù)權利要求6或7所述的具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物的制備方法，其特征在于，所述各組分的重量份比例是 靈芝總?cè)?0-25份，薏苡仁酯60-120份，表面活性劑60-150份，助表面活性劑30-80 份，靈芝多糖10-40份，薏苡仁多糖50-90份，蒸餾水400-800份。
9.根據(jù)權利要求6或8所述的具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物的制備方法，其特征在于，所述各組分的重量份比例是 靈芝總?cè)?2-20份，薏苡仁酯75-90份，表面活性劑75-100份，助表面活性劑35-60份，靈芝多糖15-25份，薏苡仁多糖60-80份，蒸餾水500-600份。
10.根據(jù)權利要求I所述的具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物在制備抗肺癌口服藥物中的應用。
全文摘要
具有抗肺癌作用的中藥多組分微乳組合物、其制備方法及其在制備口服抗肺癌藥物中的應用以靈芝總?cè)?、薏苡仁酯及靈芝多糖、薏苡仁多糖為原料藥，加入表面活性劑和助表面活性劑組成的納米藥物組合物，各組分重量份是靈芝總?cè)?-30份，薏苡仁酯45-150份，靈芝多糖5-50份，薏苡仁多糖10-90份，表面活性劑45-200份，助表面活性劑20-100份，蒸餾水300-900份。本發(fā)明還公開了該組合物的制備方法。本發(fā)明將靈芝總?cè)萍稗曹尤术ポd入非水相中，將靈芝、薏苡仁多糖載入水相中，其中薏苡仁酯既為藥物又具有輔料的作用，多糖既可增強免疫作用又可增加微乳體系的穩(wěn)定性。該微乳可促進脂溶性組分靈芝總?cè)萍稗曹尤术サ奈眨宜姆N組分配伍具有協(xié)同抗腫瘤作用，使抗腫瘤效果增強。
文檔編號A61P35/00GK102961417SQ20121055221
公開日2013年3月13日 申請日期2012年12月18日 優(yōu)先權日2012年12月18日
發(fā)明者陳彥, 賀俊杰 申請人:陳彥