多組分組合物以及它們的用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種多組分組合物及使用它們的方法。本發(fā)明的一些實(shí)施方式包括含有第一組分和第二組分的多組分組合物，其中，所述第一組分含有Notch影響分子，且第二組分含有GPCR靶分子。還公開了含有所述多組分組合物的試劑盒。另外提供了用于向一種或多種細(xì)胞提供所述多組分組合物的方法。其他的實(shí)施方式包括使用所述多組分組合物的方法，例如，所述多組分組合物的給藥方法，使用所述多組分組合物治療生物體（例如，哺乳動(dòng)物）的方法。
【專利說明】多組分組合物以及它們的用途
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002]本申請(qǐng)要求于2011年2月17日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)N0.61/463，482的優(yōu)先權(quán)，并將其全部內(nèi)容通過引用并入本申請(qǐng)。本申請(qǐng)還要求于2011年11月10日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)N0.61/558，227的優(yōu)先權(quán)，并將其全部內(nèi)容通過引用并入本申請(qǐng)。
【背景技術(shù)】
[0003]Notch基因家族編碼單向的I型異源二聚體跨膜受體。Notch信號(hào)通過兩個(gè)相鄰細(xì)胞之間的跨膜配體的DSL (061丨3、36?^丨6、]^^-2)家族被激活，并參與細(xì)胞-細(xì)胞通訊。迄今為止，已鑒定了 4種Notch受體和至少5種哺乳動(dòng)物配體。Notch受體為異源二聚體，各自包括胞外域(ECN)、跨膜域以及胞內(nèi)域(ICN)。ICN包括參與CSL結(jié)合、錨蛋白重復(fù)序列(ankyrin repeats, ANK)、核定位信號(hào)(NLS)和PEST序列的RAM結(jié)構(gòu)域。轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(TAD)與4種受體不同。ECN含有多個(gè)類EGF重復(fù)序列和LIN12/Notch重復(fù)序列(LNR)。
[0004]Notch信號(hào)能夠以配體結(jié)合在Notch的胞外域(ECN)開始,誘導(dǎo)溶蛋白性裂解,并釋放激活的Notch的胞內(nèi)域(ICN)。然后，ICN轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，并結(jié)合CSL (DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子)，起始依賴CSL的Notch靶基因的轉(zhuǎn)錄。
[0005]已知G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)具有7個(gè)跨膜域受體。GPCRs可以通過G蛋白調(diào)節(jié)下游信號(hào)通路。參與GPCRs的兩個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路為cAMP和磷脂酰肌醇信號(hào)通路。存在均屬于GPCR超家族的5種生長激素抑制素受體(SSTR)亞型、3種蛙皮素受體亞型和3種PACAP受體亞型。
[0006]已知生長激素抑制素 (SST)(—種生長激素釋放抑制因子(SRIF)，還被稱為生長激素抑制激素(GHIH))為具有兩種激活形式(SST-14和SST-28)的肽激素，并且能夠由內(nèi)分泌細(xì)胞分泌。SST能夠作為多種細(xì)胞功能(例如，細(xì)胞增殖和激素釋放)的內(nèi)源性抑制調(diào)節(jié)劑發(fā)揮作用。SST能夠通過激活G蛋白偶聯(lián)SSTR或抑制生長因子的釋放發(fā)揮其作用。
[0007]本發(fā)明的一些實(shí)施方式包括含有可以利用上述功能的組合物或分子的組合物。通過以下描述，本發(fā)明的其它實(shí)施方式、目的和優(yōu)點(diǎn)將是顯而易見的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的一些實(shí)施方式包括含有第一組分和第二組分的多組分組合物，其中，所述第一組分為含有Notch影響分子的組合物，且所述第二組分為含有GPCR靶分子的組合物。在某些情況下，所述Notch影響分子可以為Notch配體，Notch受體、激活Notch信號(hào)的分子或抑制Notch信號(hào)的分子。在特定的實(shí)施方式中，所述Notch影響分子可以為VPA、SBHA、DBZ或NLE。在特定的實(shí)施方式中，所述GPCR靶分子具有細(xì)胞毒性。在其它實(shí)施方式中，所述GPCR靶分子對(duì)癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒性。在某些情況下，所述GPCR靶分子可以為選自式(I)的綴合物(conjugate)、可以為SST-14或者可以為SST類似物。例如，所述綴合物可以為COL-SST、CPT-SST或CPT-BN。在一些實(shí)施方式中，所述Notch影響分子為VPA，且所述GPCR靶分子為CPL-SST。在其他實(shí)施方式中，所述Notch影響分子為VPA，且所述GPCR靶分子為COL-SST。在一些典型的實(shí)施方式中，所述Notch影響分子為VPA，VPA的濃度在約0.25mM到約20mM的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為CPT-SST，CPT-SST的濃度在約0.01 μ M到約50 μ M的范圍內(nèi)。在其它的實(shí)施方式中，所述Notch影響分子為VPA’ VPA的濃度在約0.25mM到約20mM的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為COL-SST，COL-SST的濃度在約0.01 μ M到約50 μ M的范圍內(nèi)。
[0009]本發(fā)明其它的實(shí)施方式還包括含有所述多組分組合物的藥物組合物。在某些情況下，所述Notch影響分子為VPA, VPA的劑量濃度在約lmg/kg到約50mg/kg的范圍內(nèi)。在另外其它的實(shí)施方式中，所述Notch影響分子為SBHA，SBHA的劑量濃度在約0.0 lmg/kg到約25mg/kg的范圍內(nèi)。在其它的實(shí)施方式中，所述GPCR靶分子為CPT-SST、COL-SST或CPT-BN，且所述GPCR靶分子的劑量濃度在約0.0 lmg/kg到約10mg/kg的范圍內(nèi)。其它的例子包括藥物組合物，其中，所述Notch影響分子為VPA，VPA的劑量濃度在約lmg/kg到約50mg/kg的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為CPT-SST ,CPT-SST的濃度在約0.0 lmg/kg到約10mg/kg的范圍內(nèi)。在該藥物組合物的其它例子中，所述Notch影響分子為VPA，VPA的劑量濃度在約Img/kg到約50mg/kg的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為C0L-SST，COL-SST的濃度在約0.01mg/kg到約10mg/kg的范圍內(nèi)。另外,其它的例子包括藥物組合物,其中，所述Notch影響分子為SBHA，SBHA的劑量濃度在約0.0 lmg/kg到約25mg/kg的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為CPT-SST、C0L-SST或CPT-BN，所述GPCR靶分子的濃度在約0.0 lmg/kg到約10mg/kg的范圍內(nèi)。
[0010]本發(fā)明的其它實(shí)施方式包括對(duì)至少一種細(xì)胞進(jìn)行所述多組分組合物給藥的方法。在某些情況下，所述多組分組合物為藥物組合物。在該方法的一些實(shí)施方式中，所述細(xì)胞為癌細(xì)胞，其中，所述癌細(xì)胞可以為來自宮頸癌、胰腺癌、胰腺類癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌(SCLC)、皮膚癌、甲狀腺髓樣癌(MTC )、皮膚鱗狀細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、骨肉瘤、肝癌、白血病、卵巢癌、腫瘤或內(nèi)分泌腫瘤的細(xì)胞。在另外的其它實(shí)施方式中，所述給藥針對(duì)生物體，例如，動(dòng)物(例如，人或嚙齒動(dòng)物)。所述給藥的方法可以為，例如，口服給藥、鼻內(nèi)給藥，或通過注射給藥(例如，通過靜脈注射、腹腔注射 、肌肉注射或皮下注射)。
[0011]本發(fā)明的其他實(shí)施方式包括用于在動(dòng)物中治療癌癥的方法，該方法包括對(duì)動(dòng)物進(jìn)行所述多組分組合物的給藥。在某些情況下，所述多組分組合物為藥物組合物。所述動(dòng)物可以為，例如，哺乳動(dòng)物(例如，人或嚙齒動(dòng)物)。所述給藥可以通過，例如，口服給藥、鼻內(nèi)給藥，或通過注射給藥(例如，通過靜脈注射、通過腹腔注射、通過肌肉注射或通過皮下注射)而進(jìn)行。在一些實(shí)施方式中，待治療的癌癥可以為宮頸癌、胰腺癌、胰腺類癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌(SCLC)、皮膚癌、甲狀腺髓樣癌(MTC)、皮膚鱗狀細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、骨肉瘤、肝癌、白血病、卵巢癌、腫瘤或內(nèi)分泌腫瘤。在某些情況下，所述治療抑制癌細(xì)胞中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
[0012]本發(fā)明其它的實(shí)施方式包括含有所述多組分組合物的試劑盒。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]以下附圖來自說明書的一部分，以進(jìn)一步證明本發(fā)明特定方面。在本文中，通過參考這些附圖中的一幅或多幅，并結(jié)合本文中示出的【具體實(shí)施方式】的描述可以更好的理解本發(fā)明。
[0014]圖1，在正常的Hela細(xì)胞中，4種Notch受體表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)。Notchl和Notch2發(fā)生表達(dá)，Notch3和Notch4沒有發(fā)生表達(dá)或微量表達(dá)。
[0015]圖2，在正常的Hela細(xì)胞中，5種Notch配體表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)。Notch配體JAGl發(fā)生表達(dá)。
[0016]圖3，具有Notchl信號(hào)激活的穩(wěn)定細(xì)胞系Hela-1CNl的建立。抗-Notchl抗體(sc-6014-R)用于蛋白免疫印跡。
[0017]圖4，通過細(xì)胞增殖試驗(yàn)(MTT)，Notch信號(hào)的激活抑制Hela細(xì)胞增殖(Hela-1CN)0
[0018]圖5，通過腫瘤重量的測(cè)定，Notch信號(hào)的激活抑制腫瘤生長。在體內(nèi)，與對(duì)照Hela-GFP腫瘤相比，Hela-1CNl腫瘤顯示出較低的腫瘤重量。
[0019]圖6，通過腫瘤生長曲線的繪制，Notch信號(hào)的激活抑制Hela腫瘤生長(Hela-1CNl)。
[0020]圖7，Notchl信號(hào)激活對(duì)cAMP產(chǎn)生的影響。在Hela-GFP和Hela-1CNl細(xì)胞中，毛喉素均刺激cAMP產(chǎn)生，但Notchl激活(在Hela-1CNl細(xì)胞中)促進(jìn)cAMP產(chǎn)生，并且是劑量依賴的。
[0021]圖8，使用實(shí)時(shí)定量PCR，在Notch激活的Hela-1CNl細(xì)胞中，檢測(cè)到SST表達(dá)在mRNA水平上上調(diào)。在Hela-1CNl細(xì)胞中，SST比在Hela-GFP細(xì)胞中增加了 2200倍以上。
[0022]圖9，使用ELISA，與對(duì)照Hela-GFP細(xì)胞相比，在來自Notch激活的Hela-1CNl細(xì)胞的培養(yǎng)基中檢測(cè)到了 SST在蛋白水平上的增加。
[0023]圖10，使用蛋白免疫 印跡，在Notch激活的Hela-1CNl細(xì)胞中檢測(cè)到了 SSTR2表達(dá)的增強(qiáng)。
[0024]圖11，受體結(jié)合試驗(yàn)證明，在Hela-1CNl中，通過Notchl激活，SSTR2的密度增加。
[0025]圖12，原生SST-14以劑量依賴的方式抑制Hela-GFP細(xì)胞增殖，在20 μ M下，產(chǎn)生約40%的抑制率。SST-14加強(qiáng)了 Notchl激活的Hela-1CNl細(xì)胞生長的抑制，在20 μ M下，產(chǎn)生了 12%的抑制率。
[0026]圖13，Notch激活抑制宮頸癌Hela細(xì)胞克隆的形成。平板BI顯示了 Hela-GFP克隆，平板B2顯示了呈現(xiàn)激活的Notch信號(hào)的Hela-1CN克隆。Hela-1CN證明了比Hela-GFP對(duì)照細(xì)胞克隆更低的細(xì)胞增殖。
[0027]圖14，Hela-GFP對(duì)照沒有顯示細(xì)胞凋亡。
[0028]圖15，箭頭顯示了 Hela-1CN細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。與對(duì)照Hela-GFP相比，顯示在圖14中的這些結(jié)果證明了激活Notch信號(hào)會(huì)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
[0029]圖16，以肌動(dòng)蛋白作為對(duì)照，在宮頸癌Hela細(xì)胞中，不同濃度的Notch激活劑VPA對(duì)Notchl、SST和SSTR2表達(dá)的影響。VPA激活Notchl、SST和SSTR2的表達(dá)。
[0030]圖17，以肌動(dòng)蛋白作為對(duì)照，在胰腺類癌BON細(xì)胞中，不同濃度的VPA對(duì)Notchl、SST和SSTR2表達(dá)的影響。在BON細(xì)胞中，VPA激活Notchl、SST和SSTR2的表達(dá)。
[0031]圖18，小分子Notch激活劑VPA和SBHA抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的生長。
[0032]圖19，VPA和CPT-SST綴合物(JF-10-81)對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞生長的結(jié)合治療結(jié)果?？梢?，2.5mM的VPA加強(qiáng)了 CPT-SST綴合物(JF-10-81)對(duì)Hela細(xì)胞生長的抑制。
[0033]圖20，VPA/SBHA和CPT-SST綴合物(JF-10-81)對(duì)胰腺類癌BON細(xì)胞生長的結(jié)合治療結(jié)果。2.5mM的VPA或IOuM的SBHA加強(qiáng)了 CPT-SST綴合物(JF-10-81)對(duì)BON細(xì)胞生長的抑制。
[0034]圖21，VPA/SBHA和CPT-SST綴合物(JF-10-81)對(duì)肺癌DMS-53細(xì)胞生長的結(jié)合治療結(jié)果。2.5mM的VPA或IOuM的SBHA加強(qiáng)了 CPT-SST綴合物(JF-10-81)對(duì)DMS-53細(xì)胞生長的抑制。
[0035]圖22，VPA和秋水仙素-SST綴合物(JF-16-87)對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞生長的結(jié)合治療結(jié)果。2.5mM的VPA加強(qiáng)了秋水仙素-SST綴合物(JF-16-87)對(duì)Hela細(xì)胞生長的抑制。
[0036]圖23，VPA和秋水仙素-SST綴合物(JF_16_87)對(duì)胰腺類癌BON細(xì)胞生長的結(jié)合治療結(jié)果。2.5mM的VPA加強(qiáng)了秋水仙素-SST綴合物(JF-16-87)對(duì)BON細(xì)胞生長的抑制。
[0037]圖24，VPA和秋水仙素-SST綴合物(JF-16-87)對(duì)肺癌DMS-53細(xì)胞生長的結(jié)合治療結(jié)果。2.5mM的VPA加強(qiáng)了秋水仙素-SST綴合物(JF-16-87)對(duì)DMS-53細(xì)胞生長的抑制。
[0038]圖25，使用8mM的VPA處理后Hela細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，表明可能的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。
[0039]圖26，在原生Hela細(xì)胞中SSTR亞型的表達(dá)。存在大量的SSTR2和SSTR5，少量的SSTR1，沒有或微量的SSTR3和SSTR4。
[0040]圖27，Notch信號(hào)的激活(Hela-1CNl)上調(diào)SST的表達(dá)。在Hela-GFP對(duì)照中，SST沒有表達(dá)或微量表達(dá)。
[0041]圖28，在Hela-1CNl細(xì)胞中，Notch信號(hào)的激活誘導(dǎo)SSTRl和SSTR2的上調(diào)，SSTR3的下調(diào)，而SSTR4和SSTR5沒`有變化。GFP表示Hela-GFP，ICNl表示Hela-1CNl。
[0042]圖29，SST通過SST siRNA而發(fā)生基因沉默(knockdown)。使用5 μ I (泳道I)、15 μ I (泳道2)、30μ I (泳道3)的SST siRNAU5y I的對(duì)照siRNA (泳道4)處理的過表達(dá)SST的Hela-1CNl細(xì)胞。泳道5和泳道6分別為對(duì)照Hela-1CNl細(xì)胞和Hela-GFP細(xì)胞。
[0043]圖30，在Hela-1CNl細(xì)胞中，通過SST siRNA的SST基因沉默對(duì)特定基因表達(dá)的影響。通過Notchl激活的抗細(xì)胞凋亡基因BCL-2的基因沉默通過SST siRNA得到逆轉(zhuǎn)，表明Notchl介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通過SST信號(hào)通路。對(duì)照siRNA (15μ I), SST siRNA (15μ1)。
[0044]圖31，SST-14抑制Hela-GFP細(xì)胞增殖，DC-53-22加強(qiáng)所述抑制。
[0045]圖32，綴合物JF-10-81和DC-53-22均加強(qiáng)了通過在Hela-1CNl細(xì)胞中激活Notchl誘導(dǎo)的抑制。
[0046]圖33，SST-14抑制Hela-GFP細(xì)胞增殖，綴合物CPT-SST (JF-10-81)加強(qiáng)所述抑制。
[0047]圖34，綴合物JF-10-81對(duì)胰腺類癌BON腫瘤生長的影響。在該實(shí)驗(yàn)中，使用2mg/kg的JF-10-81處理BON腫瘤，每天I次，每周5次，總共進(jìn)行21次注射。所述綴合物JF-10-81抑制胰腺類癌BON細(xì)胞的生長。
[0048]圖35，綴合物JF-10-81和/或Notch/SSTR2誘導(dǎo)物VPA對(duì)胰腺類癌BON腫瘤生長的影響。對(duì)攜帶BON腫瘤的裸鼠進(jìn)行隔一天一次，每周3次，總共21次注射的治療。低劑量的VPA (50mg/kg)和綴合物JF-10-81 (0.5mg/kg)的結(jié)合治療比較高劑量的單獨(dú)的VPA(200mg/kg,高4倍)或單獨(dú)的JF-10-81 (lmg/kg,高2倍)顯示出更有效地抗腫瘤能力。VPA和SSTR2特異性綴合物JF-10-81的結(jié)合治療加強(qiáng)了對(duì)胰腺類癌BON腫瘤生長的抑制。
[0049]圖36，細(xì)胞增殖試驗(yàn)顯示了單獨(dú)的VPA和綴合物CPT-SST以劑量依賴的方式抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的生長，但在一起的結(jié)合處理加強(qiáng)了所述抑制。
[0050]圖37，用VPA和CPT-SST處理來自宮頸癌Hela細(xì)胞生長的腫瘤。由200mg/kg劑量的VPA和lmg/kg劑量的CPT-SST誘導(dǎo)的腫瘤抑制率分別為46%和57%。VPA和CPT-SST結(jié)合處理的抑制效果增加為85%。
[0051]圖38，VPA誘導(dǎo)了胰腺類癌BON細(xì)胞的生長停滯，并加強(qiáng)了綴合物C0L-SST (秋水仙素-SST)對(duì)BON細(xì)胞的抑制。
[0052]圖39，VPA誘導(dǎo)了宮頸癌Hela細(xì)胞的生長停滯，并加強(qiáng)了綴合物C0L_SST(秋水仙素-SST)對(duì)Hela細(xì)胞的抑制。
[0053]圖40, SBHA (辛二酰雙輕廂酸,Suberoyl Bis-hydroxamic Acid)誘導(dǎo)了胰腺類癌BON細(xì)胞的生長抑制，并加強(qiáng)了綴合物CPT-SST對(duì)BON細(xì)胞生長的抑制。
[0054]圖41，SBHA誘導(dǎo)了小細(xì)胞肺癌(SCLC) DMS53細(xì)胞的生長抑制，并加強(qiáng)了綴合物CPT-SST對(duì)DMS-53細(xì)胞生長的抑制。
[0055]圖42，在裸鼠中，VPA誘導(dǎo)了宮頸癌Hela腫瘤的抑制，并加強(qiáng)了綴合物COL-SST對(duì)Hela腫瘤的抑制。
[0056]圖43，在裸鼠中，VPA誘導(dǎo)了胰腺類癌BON腫瘤的抑制，并加強(qiáng)了綴合物COL-SST對(duì)BON腫瘤的抑制。
[0057]圖44，綴合物CPT-SST和Notch抑制劑DBZ (二苯并氮卓，dibenzazepine)以及NLE對(duì)卵巢癌0VCAR8細(xì)胞生長的影響，與使用CPT-SST及DBZ和CPT-SST及Nle的結(jié)合處理的加強(qiáng)效果。
[0058]圖45，綴合物CPT-SST和Notch抑制劑DBZ和NLE對(duì)胰腺癌CFPAC-1細(xì)胞生長的影響，與使用CPT-SST及DBZ和CPT-SST及Nle的結(jié)合處理的加強(qiáng)效果。
[0059]圖46，綴合物CPT-SST和Notch抑制劑DBZ和NLE對(duì)結(jié)直腸癌HT-29細(xì)胞生長的影響，與使用CPT-SST及DBZ和CPT-SST及Nle的結(jié)合處理的加強(qiáng)效果。
[0060]圖47，細(xì)胞增殖試驗(yàn)。在胰腺類癌BON細(xì)胞和宮頸癌Hela細(xì)胞中，VPA加強(qiáng)了綴合物COL-SST的抗增殖能力。
[0061]圖48，VPA抑制胰腺類癌BON細(xì)胞的生長，并加強(qiáng)CPT-BN誘導(dǎo)的抑制。
[0062]圖49，VPA抑制CNDT2細(xì)胞的生長，并加強(qiáng)CPT-BN誘導(dǎo)的抑制。
[0063]圖50，VPA抑制白血病M0LT-4細(xì)胞的生長，并加強(qiáng)CPT-BN誘導(dǎo)的抑制。
[0064]圖51，細(xì)胞增殖試驗(yàn)。顯示的是使用VPA測(cè)試的選自16種不同類型的癌細(xì)胞的6株典型的癌細(xì)胞系。在白血病M0LT-4細(xì)胞、前列腺癌DU-145細(xì)胞、前列腺癌PC-3細(xì)胞、結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞、卵巢癌0VCAR8、SK0V3和NCI/ADR-RES細(xì)胞中，VPA顯示了其抗增殖的能力，但在肺癌A549細(xì)胞中不明顯。
[0065]圖52，在宮頸癌Hela、胰腺類癌BON、SCLC DMS-53、MTC TT細(xì)胞和肝癌HTB-52細(xì)胞中，VPA介導(dǎo)的Notch表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)。
[0066]圖53，在Hela細(xì)胞 中，VPA介導(dǎo)的特定癌相關(guān)基因(BCL-2、C0X2、MMP2、PCNA、p53、p21和p63)的表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)。在Hela細(xì)胞(Hela-1CNl)中，還研究了 ICNl激活對(duì)這些基因的影響。
[0067]圖54，VPA和ICNl誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。(A) Hela-GFP細(xì)胞(對(duì)照)，(B)Hela-1CNl 細(xì)胞(Notchl 由 ICNl 激活)，(C)和(D)顯示了 O (C)和 8mM (D)的 VPA 處理的Hela細(xì)胞。
[0068]圖55，在宮頸癌Hela細(xì)胞、胰腺類癌B0N、SCLC DMS-53,MTC TT和肝癌HTB-52細(xì)胞中以及在具有Notchl激活的宮頸癌Hela-1CNl細(xì)胞中，VPA介導(dǎo)的特定GPCR成員和生長激素抑制素(SST)的表達(dá)的RT-PCR檢測(cè)。測(cè)試的GPCRs包括SSTRl、SSTR2、SSTR3、SSTR4、SSTR5、GRPR、BRS3、NMBR、PACl、VPACl 和 VPAC2。
【具體實(shí)施方式】
[0069]本發(fā)明的一些實(shí)施方式包括含有兩種組分(第一組分和第二組分)的多組分組合物。
[0070]所述第一組分含有第一組合物，該第一組合物可以含有Notch影響分子。所述Notch-影響分子可以包括,但并不限于Notch配體(例如，JaggedU Jagged2、Deltal、類Deltal (Dill)、D113 和 D114)、Notch 受體(例如，NotchK Notch2、Notch3 和 Notch4)、激活Notch信號(hào)的分子(例如，丙戊酸(valproic acid, VPA)和辛二酰雙羥肟酸(SBHA))或抑制Notch信號(hào)的分子(例如，Z-Leu-Leu-Nle-CHO (Nle=正亮氨酸)(NLE)和二苯并氮卓(DBZ))。在一些實(shí)施方式中，所述Notch影響分子為組蛋白脫乙酰酶抑制劑，所述組蛋白脫乙酰酶抑制劑可以為但并不限于，羧化物(例如，丁酸鈉、丙戊酸、苯丁酸鈉和丁酸新戍酰氧甲酯(pivaloyloxymethyl butyrate))、異輕廂酸(例如，辛二酰苯胺異輕月虧酸(suberoylanilide hydroxamic acid) (SAHA)、曲古抑菌素 A (7_[4_( 二甲氛基)苯基]-N-羥基-4, 6- 二甲基-rJ-氧代-2, 4- 二酸胺(7-[4_(dimethylamino)phenyl] -N-hydroxy-4, 6 - dimethyl-7-oxohepta_2，4-dienamide)、SBHA)、苯甲酸胺(例如，C1-994(4-乙酰氨基-N-(2'-氨基苯基)_苯甲酰胺))和MS-275 (N-(2-氨基苯基)4[N-(批啶-3-基-甲氧基-羰基)氨甲基]苯甲酰胺)、環(huán)氧酮(例如，Trapoxin B和2-氨基-8-氧代-9，10-環(huán)氧癸酸)、環(huán)肽(例如，Apicidin(環(huán)(N-0-甲基-L-色氨酸-L-異亮氨酸-D-甲基哌唳-L-2-氨基-8-氧癸基)，cyclo (Ν-0-methy 1-L-tryptophany 1-L-1soleuciny 1-D-pipecolinyl -L-2-amino-8 -oxodecanoyl))和縮妝類)、雜分子(例如，CHAP31 和 CHAP50)、環(huán)海洋生物堿(cyclostellettamines)和卡馬西平(carbamazepines)。在其它實(shí)施方式中，所述Notch影響分子可以為Notch抑制劑，例如，但并不限于，Z-Leu-Leu-Nle-CHO (Nle=正亮氨酸)(NLE)、二苯并氮卓(DBZ)、Y-分泌酶抑制劑(例如，MRK003)、苯甲基羰基氧化酶-Leu-Leu-Nle-CHO (Benzyloxicarbonyl-Leu-Leu-Nle-CHO, LLNle)> N-[N-(3, 5_ 雙氟酹內(nèi)氨酰)_L_丙氨酰]-S-苯基甘氨酸叔丁基酯(N-[N-(3, 5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester, DAPT)和 L685458 ( (5S) -(t_ 丁氧基擬基氨基)_6_ 苯基 _(4R)羥基-(2R)苯甲己酸)-L-leu-L-phe-氛基，(5S) - (t-Butoxycarbonylamino) -6-phenyl- (4R) hydroxy- (2R) benzylhexanoyl) -L-1e u-L-phe-amide)。在一些實(shí)施方式中，組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑，可以為，但并不限于，丙戊酸(VPA)或辛二酰雙羥肟酸(SBHA)。
[0071]在一些實(shí)施方式中，所述Notch影響分子靶向Notch受體。在一些實(shí)施方式中，所述Notch影響分子導(dǎo)致SST表達(dá)的增強(qiáng)、一種或多種SSTRs表達(dá)的增強(qiáng)、SST信號(hào)的上調(diào)、GPCR表達(dá)的改變，或它們的組合。在某些情況下，所述GPCR可以為SSTR (例如，SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4 或 SSTR5)、胃泌素-釋放肽受體(GRPR)、BRS3、NMBR、PACl、VPACl 和VPAC2。在一些實(shí)施方式中，所述Notch影響分子增強(qiáng)Notch的胞內(nèi)域(ICN)的表達(dá)、增加ICN的胞內(nèi)量、或增加ICN的胞外量。
[0072]在一些實(shí)施方式中，所述Notch影響分子為VPA，且VPA的濃度范圍為約0.1mM到約50mM，約ImM到約10mM，可以為，例如，約0.1mM、約0.2mM、約0.3mM、約0.4mM、約0.5mM、約0.6mM、約0.7mM、約0.8mM、約0.9mM、約IOmM或約25mM。在一些實(shí)施方式中，所述Notch影響分子為SBHA、DBZ或NLE，且Notch影響分子的濃度范圍為約0.1 μ M到約100 μ Μ，約0.ΙμΜ到約50μΜ，或者約ΙμΜ至約10μΜ，并且可以為，例如，約0.ΙμΜ、約0.2μΜ、約0.3μΜ、約 0.4 μ Μ、約 0.5 μ Μ、約 0.6 μ Μ、約 0.7 μ Μ、約 0.8 μ Μ、約 0.9 μ Μ、約 10 μ Μ、約 20 μ Μ、約30 μ Μ、約 40 μ M 或約 50 μ Mo
[0073]所述多組分組合物的第二組分含有第二組合物，該第二組合物可以含有GPCR靶分子。在某些情況下，GPCR靶分子可以為綴合物或多肽(例如，SST-14、SST-28或SST類似物)。在一些實(shí)施方式中，GPCR靶分子對(duì)細(xì)胞具有細(xì)胞毒性。在其它實(shí)施方式中，GPCR靶分子對(duì)癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒性。在一些情況下，靶向的GPCR可以為SSTR (例如，SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4 或 SSTR5)、胃泌素-釋放肽受體(GRPR)、BRS3、NMBR、PACl、VPACl 或 VPAC2。在其它實(shí)施方式中，GPCR靶分子能夠?qū)е耂ST表達(dá)的增強(qiáng)、一種或多種SSTRs表達(dá)的增強(qiáng)、SST信號(hào)的上調(diào)，或它們的組合。在另外的其它實(shí)施方式中，所述Notch影響分子能夠增強(qiáng)GPCR (例如，SSTR)的表達(dá)，隨后能夠加強(qiáng)GPCR靶分子的作用。所述GPCR靶分子的加強(qiáng)能夠，例如，產(chǎn)生加強(qiáng)的癌癥治療，包括但并不限于癌細(xì)胞生長抑制或腫瘤生長抑制。
[0074]在一些實(shí)施方式中，當(dāng)GPCR靶分子為多肽時(shí)，其可以為SST-14或SST類似物。SST-14為Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Se;r-Cys(SEQ ID NO:1)。本文中，SST-14也被稱為DC-53-99。在特定的實(shí)施方式中，SST類似物可以為與SST-14序列相似但仍然靶向GPCR的多肽。在某些情況下，SST類似物包括一個(gè)或多個(gè)來自SST-14的保守突變。在某些情況下，SST類似物含有至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個(gè)與SST-14相同的氨基酸(例如，在相同的相對(duì)位置上)。在某些情況下，SST類似物含有5、6、
7、8、9、10、11、12、13、1 4、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29 或 30 個(gè)氨基酸。在某些情況下，SST類似物可以為生長激素抑制素類似物。在特定的實(shí)施方式中，SST類似物可以是環(huán)形的或者含有至少一個(gè)環(huán)形結(jié)構(gòu)；例如，可以通過在兩個(gè)半胱氨酸之間形成二硫鍵而發(fā)生環(huán)化。在一些實(shí)施方式中，SST類似物可以為奧曲肽(octreotide)、奧曲鹽(octreotate)、蘭瑞妝(Ianreotide)或帕瑞妝(pasireotide)。
[0075]在一些實(shí)施方式中，當(dāng)GPCR靶分子為綴合物時(shí)，所述綴合物可以為
[0076]X-Y-Z-Q (式 I)
[0077]其中，X為單價(jià)部分(univalent moiety), Y為鍵(bond)或二價(jià)的第一連結(jié)物，Z為鍵或二價(jià)的第二連結(jié)物，Q為單價(jià)的氨基酸鏈。在一些實(shí)施方式中，X具有細(xì)胞毒性。在其它實(shí)施方式中，X為抗癌部分。在另外的其它實(shí)施方式中，Q可以含有D-氨基酸、L-氨基酸，或兩種均含有。Q可以，例如，含有環(huán)形的氨基酸結(jié)構(gòu)(例如，由兩個(gè)半胱氨酸之間的二硫鍵形成的環(huán)形結(jié)構(gòu))。
[0078]在一些實(shí)施方式中，X可以為
[0079]
【權(quán)利要求】
1.一種多組分組合物，該多組分組合物含有第一組分和第二組分，其中，所述第一組分為含有Notch影響分子的組合物，所述第二組分為含有GPCR靶分子的組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多組分組合物，其中，所述Notch影響分子選自由Notch配體、Notch受體、激活Notch信號(hào)的分子和抑制Notch信號(hào)的分子所組成的組中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多組分組合物，其中，所述Notch影響分子選自由VPA、SBHA、DBZ和NLE所組成的組中。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多組分組合物，其中，所述GPCR靶分子選自由式(I)、SST-14和SST類似物所組成的組中。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多組分組合物，其中，所述GPCR靶分子選自由C0L-SST、CPT-SST和CPT-BN所組成的組中。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多組分組合物，其中，所述Notch影響分子為VPA，且所述GPCR靶分子為CPT-SST。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多組分組合物，其中，所述Notch影響分子為VPA，且所述GPCR靶分子為COL-SST。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多組分組合物，其中，所述Notch影響分子為VPA，VPA的濃度在約0.25mM到約20mM的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為CPT-SST，CPT-SST的濃度在約0.01 μ M到約50 μ M的范圍內(nèi)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多組分組合物，其中，Notch影響分子為VPA，VPA的濃度在約0.25mM到約20mM的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為COL-SST，COL-SST的濃度在約0.01 μ M到約50 μ M的范圍內(nèi)。
10.一種藥物組合物，該藥物組合物含有權(quán)利要求1所述的多組分組合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中，所述Notch影響分子為VPA，VPA的劑量濃度在約lmg/kg到約50mg/kg的范圍內(nèi)。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中，所述Notch影響分子為SBHA，SBHA的劑量濃度在約0.0 lmg/kg到約25mg/kg的范圍內(nèi)。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中，所述GPCR靶分子為CPT-SST、COL-SST或CPT-BN，所述GPCR靶分子的劑量濃度在約0.0 lmg/kg到約10mg/kg的范圍內(nèi)。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中，所述Notch影響分子為VPA，VPA的劑量濃度在約lmg/kg到約50mg/kg的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為CPT-SST，CPT-SST的濃度在約0.0 lmg/kg到約10mg/kg的范圍內(nèi)。
15.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中，所述Notch影響分子為VPA，VPA的劑量濃度在約lmg/kg到約50mg/kg的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為C0L-SST，COL-SST的濃度在約0.0 lmg/kg到約10mg/kg的范圍內(nèi)。
16.根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物組合物，其中，所述Notch影響分子為SBHA，SBHA的劑量濃度在約0.0 lmg/kg到約25mg/kg的范圍內(nèi)；且所述GPCR靶分子為CPT-SST、COL-SST或CPT-BN，且所述GPCR靶分子的濃度在約0.0 lmg/kg到約10mg/kg的范圍內(nèi)。
17.一種方法，該方法包括對(duì)至少一種細(xì)胞進(jìn)行權(quán)利要求1所述的多組分組合物的給藥。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法,其中，所述Notch影響分子選自由Notch配體、Notch受體、激活Notch信號(hào)的分子和抑制Notch信號(hào)的分子所組成的組中。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述Notch影響分子選自由VPA、SBHA、DBZ和NLE所組成的組中。
20.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述GPCR靶分子選自由式(I)、SST-14和SST類似物所組成的組中。
21.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述GPCR靶分子為COL-SST、CPT-SST或CPT-BN。
22.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述Notch影響分子為VPA，且綴合物為CPT-SST。
23.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述Notch影響分子為VPA，且綴合物為COL-SST。
24.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述Notch影響分子為VPA，VPA的濃度在約0.25mM到約20mM的范圍內(nèi)；且綴合物為CPT-SST，CPT-SST的濃度在約0.01 μ M到約50 μ M的范圍內(nèi)。
25.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述Notch影響分子為VPA，VPA的濃度在約0.25mM到約20mM的范圍內(nèi)；且綴合物為COL-SST，COL-SST的濃度在約0.01 μ M到約50 μ M的范圍內(nèi)。
26.根據(jù)權(quán)利要求 17所述的方法，其中，所述細(xì)胞為癌癥細(xì)胞。
27.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述細(xì)胞為癌癥細(xì)胞，且癌癥選自由宮頸癌、胰腺癌、胰腺類癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌(SCLC)、皮膚癌、甲狀腺髓樣癌(MTC)、皮膚鱗狀細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、骨肉瘤、肝癌、白血病、卵巢癌、腫瘤和內(nèi)分泌腫瘤所組成的組中。
28.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述給藥是針對(duì)生物體的。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述給藥通過口服給藥、鼻內(nèi)給藥或通過注射給藥而進(jìn)行。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中，所述給藥通過靜脈注射、通過腹腔注射、通過肌肉注射或通過皮下注射而進(jìn)行。
31.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述生物體為哺乳動(dòng)物。
32.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中，所述生物體為人或嚙齒動(dòng)物。
33.一種用于在動(dòng)物中治療癌癥的方法，該方法包括:對(duì)動(dòng)物進(jìn)行權(quán)利要求1所述的多組分組合物的給藥。
34.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法,其中，所述Notch影響分子選自由Notch配體、Notch受體、激活Notch信號(hào)的分子和抑制Notch信號(hào)的分子所組成的組中。
35.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述Notch影響分子選自由VPA、SBHA、DBZ和NLE所組成的組中。
36.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述GPCR靶分子選自由式(I)、SST_14和SST類似物所組成的組中。
37.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述GPCR靶分子選自由COL-SST、CPT-SST和CPT-BN所組成的組中。
38.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述Notch影響分子為VPA，且綴合物為CPT-SST。
39.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述Notch影響分子為VPA，且綴合物為COL-SST。
40.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述給藥通過口服給藥、鼻內(nèi)給藥或通過注射給藥而進(jìn)行。
41.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述給藥通過靜脈注射、通過腹腔注射、通過肌肉注射或通過皮下注射而進(jìn)行。
42.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述動(dòng)物為哺乳動(dòng)物。
43.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述動(dòng)物為人或嚙齒動(dòng)物。
44.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述癌癥選自由宮頸癌、胰腺癌、胰腺類癌、肺癌、小細(xì)胞肺癌(SCLC)、皮膚癌、甲狀腺髓樣癌(MTC)、皮膚鱗狀細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、骨肉瘤、肝癌、白血病、卵巢癌、腫瘤和內(nèi)分泌腫瘤所組成的組中。
45.根據(jù)權(quán)利要求33所述的方法，其中，所述治療抑制癌癥細(xì)胞中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
46.一種試劑盒，該試劑盒含`有權(quán)利要求1所述的多組分組合物。
【文檔編號(hào)】A61K38/17GK103501823SQ201280009550
【公開日】2014年1月8日 申請(qǐng)日期:2012年2月16日 優(yōu)先權(quán)日:2011年2月17日
【發(fā)明者】D·H·蔻易, L·孫 申請(qǐng)人:杜蘭教育基金委員會(huì)