具有增強(qiáng)的cck和glp-1釋放活性的蛋白水解產(chǎn)物組合物的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了具有增強(qiáng)的膽囊收縮素(CCK)和／或胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)釋放活性的蛋白水解產(chǎn)物組合物，以及摻入了所述蛋白水解產(chǎn)物組合物的食品形式，其能用于提升飽腹感。
【專(zhuān)利說(shuō)明】具有增強(qiáng)的CCK和GLP-1釋放活性的蛋白水解產(chǎn)物組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明一般涉及蛋白水解產(chǎn)物。具體地，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物具有膽囊收縮素(CCK)和/或胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)釋放活性。該蛋白水解產(chǎn)物可用于提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和/或提升飽腹感。
【背景技術(shù)】
[0002]在美國(guó)和全世界，超重和肥胖者以及與體重增加相關(guān)聯(lián)的疾病的數(shù)量和比例正在上升。雖然深層的原因不是單一的，一個(gè)誘因可能是許多人久坐不動(dòng)的生活方式以及同時(shí)增加的高熱量食物消費(fèi)，其中包括“快餐”。大多數(shù)“快餐”趨于高脂和/或高糖。
[0003]對(duì)抗流行性體重增加的一個(gè)可行目標(biāo)是CCK。CCK是一種由腸胃細(xì)胞響應(yīng)于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)而釋放至循環(huán)系統(tǒng)的肽激素，具體地為一餐攝入的蛋白或脂質(zhì)。在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中CCK充當(dāng)神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)調(diào)節(jié)物質(zhì)。CCK從響應(yīng)于餐后進(jìn)入胃腸空腔的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(例如，蛋白和脂肪)的十二指腸和空腸的細(xì)胞中釋放出來(lái)。一旦釋放出來(lái)，CCK啟動(dòng)了許多協(xié)調(diào)的反應(yīng)以促進(jìn)消化并調(diào)節(jié)食物攝入量，包括介導(dǎo)膽汁從膽囊排空，調(diào)節(jié)從胰腺釋放消化酶，通過(guò)調(diào)節(jié)幽門(mén)括約肌控制胃排空，以及通過(guò)迷走神經(jīng)傳入神經(jīng)元將神經(jīng)信號(hào)傳入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。據(jù)信神經(jīng)元CCK介導(dǎo)了在CNS內(nèi)的許多事件，包括調(diào)節(jié)多巴胺神經(jīng)傳遞和致焦慮作用，以及影響認(rèn)知和痛覺(jué)(參見(jiàn)例如J.N.Crawley和R.L.Corwin, 1994, Peptides,15:731-755 ；N.S.Baber, C.T.Dourish 和 D.R.Hill, Pain (1989)，39 (3)，307-28 ；以及 P.DeTullio, J.Delarge 和 B.Pirotte, Expert Opinion on Investigational Drugs (2000),9(1)，129-146)。CCK已經(jīng)表明通過(guò)兩種受體亞型介導(dǎo)了各種不同的激素和神經(jīng)調(diào)節(jié)功能:CCK-A (CCK-1)和 CCK-B (CCK-2)亞型(參見(jiàn)例如 G.N.Woodruff 和 J.Hughes, Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.(1991)，31:469-501)。CCK-1 和 CCK-2 受體亞型屬于七跨膜 G 蛋白偶聯(lián)受體超家族。許多研究表明CCK通過(guò)CCK-1受體介導(dǎo)了飽腹感效應(yīng)，其通過(guò)迷走神經(jīng)傳入將中繼餐后飽腹信號(hào)傳入CNS從而引起飽腹的“感覺(jué)”(參見(jiàn)例如G.P.Smith等人，Science213 (1981)，第 1036-1037 頁(yè);和 J.N.Crawley 等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.，257 (1991)，第 1076-1080 頁(yè))。
[0004]CCK施加了一些產(chǎn)生飽腹感的直接作用，包括抑制胃排空，抑制胃酸分泌，以及刺激膽囊收縮。無(wú)論是通過(guò)這些直接影響胃排空及小腸消化或通過(guò)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的途徑，CCK引起飽腹感，這通常會(huì)導(dǎo)致更少的熱量(卡路里)消耗。
[0005]對(duì)抗流行性體重增加的另一個(gè)可行目標(biāo)是GLP-1。GLP-1已被描述為具有大陣列效應(yīng)的腸促胰島素。GLP-1發(fā)現(xiàn)于1984年，被認(rèn)為是重要的腸促胰島素(Nauck，M.A.；Kleine, N.；Orskov, C.；Hoist, J.J.；ffillms, B.；Creutzfeldt, ff.，Diabetologial993,36,741-744)。GLP-1由響應(yīng)于葡萄糖和脂肪酸的遠(yuǎn)側(cè)回腸釋放，然而，已知肽類(lèi)直接誘導(dǎo)和 / 或調(diào)節(jié) GLP-1 的釋放(Hira T 等人，(2009)Am J Physiol Gastrointest LiverPhysiol297:G663_G671)。GLP-1在餐后被釋放至循環(huán)系統(tǒng)并強(qiáng)效刺激葡萄糖依賴性的β-胰腺細(xì)胞釋放胰島素。許多附加的效應(yīng)也歸因于GLP-1，包括刺激胰島素生物合成、恢復(fù)胰島的葡萄糖敏感性以及刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT-2和葡糖激酶表達(dá)的增加。GLP-1還具有許多效應(yīng):調(diào)節(jié)細(xì)胞群、刺激現(xiàn)有的細(xì)胞的復(fù)制和生長(zhǎng)、抑制細(xì)胞凋亡以及來(lái)自導(dǎo)管前體細(xì)胞的新細(xì)胞的再生，這導(dǎo)致減少肝臟葡萄糖輸出。GLP-1的有益的胰外作用也有報(bào)道諸如直接作用于降低肝脂含量和改善心功能(Abu-Hamdah R.等人，J Clin Endocrinol Metab.2009Jun ;94(6): 1843-52.Epub2009Mar31)。在食道，GLP-1是強(qiáng)效的蠕動(dòng)和胃排空的抑制劑，并已被證明能夠抑制胃酸分泌。抑制胃排空導(dǎo)致降低食物攝入以及隨著時(shí)間推移降低體重(Flint, A.；Raben, A.；Astrup, A.；Hoist, J.J.,J Clin Inv1998,101,515-520 ；Zander, M.；Madsbad, S.；Madsen, J.L.；Hoist, J.J.,Lancet2002，359，824-830)。GLP-1也被證明對(duì)食物攝入有中樞影響，其通過(guò)控制食欲的下丘腦中心的GLP-1受體的作用控制食欲(Barber TM等人，(2010)Maturitas doi:10.1016/j.maturitas.2010.06.018)。
[0006]鑒于肥胖流行以及缺乏有效對(duì)抗方法，人們需要有營(yíng)養(yǎng)的、容易獲得的成分或食物產(chǎn)品，其可以食用并促進(jìn)體重減輕或控制體重。食品應(yīng)不僅美味而且還應(yīng)是富有營(yíng)養(yǎng)的；這就是說(shuō)，食品應(yīng)相對(duì)低脂、高蛋白、并含有必需的微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(例如，維生素和礦物質(zhì))。此外，如果成分或食品能夠增加CCK和/或GLP-1的釋放也將會(huì)是十分有益的。
[0007]為此，發(fā)明涉及新的蛋白水解產(chǎn)物，以及包含相同蛋白水解產(chǎn)物的食物形式，其能夠促進(jìn)體重控制和飽腹感。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明提供了能夠刺激CCK和/或GLP-1釋放活性的蛋白水解產(chǎn)物組合物，并且其能用于促進(jìn)體重控制和飽腹感。
[0009]在某些實(shí)施例中，本發(fā)明涉及包含多肽片段混合物的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK和GLP-1釋放活性。
[0010]在其它的某些實(shí)施例中，本發(fā)明涉及包含蛋白水解產(chǎn)物組合物的食物產(chǎn)品，所述蛋白水解產(chǎn)物組合物包含多肽片段混合物，其中蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK和GLP-1釋放活性。
[0011]在其它的某些實(shí)施例中，本發(fā)明涉及誘發(fā)飽腹感的方法，其包括攝入包含多肽片段混合物的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK和GLP-1釋放活性。
[0012]在其它的某些實(shí)施例中，本發(fā)明涉及誘發(fā)飽腹感的方法，其包括攝入包含蛋白水解產(chǎn)物組合物的食物產(chǎn)品，所述蛋白水解產(chǎn)物組合物包含多肽片段混合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK和GLP-1釋放活性。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013]圖1A =STC-1細(xì)胞與未消化或已消化的完整蛋白或蛋白水解產(chǎn)物孵育后釋放的CCK。
[0014]圖1B =STC-1細(xì)胞與未消化或已消化的完整蛋白或蛋白水解產(chǎn)物孵育后釋放的GLP-1。
[0015]圖2:根據(jù)尺寸排阻色譜法的例證性的色譜。[0016]圖3:—定pH值范圍內(nèi)的蛋白水解產(chǎn)物組合物的溶解度。
[0017]圖4:在本文所述不同酶和處理?xiàng)l件下生成的不同大豆蛋白水解產(chǎn)物的CCK和GLP-1釋放活性圖。
[0018]圖5A:由與也刺激GLP-1釋放的大豆水解產(chǎn)物孵育后的STC-1細(xì)胞釋放的CCK的
劑量反應(yīng)。
[0019]圖5B:由與也刺激CCK釋放的大豆水解產(chǎn)物孵育后的STC-1細(xì)胞釋放的GLP-1的
劑量反應(yīng)。
【具體實(shí)施方式】
[0020]一般來(lái)講，已知蛋白刺激動(dòng)物(包括人)腸道的腸內(nèi)分泌細(xì)胞釋放CCK而葡萄糖刺激釋放 GLP-1 (Liddle, R.A.等人，(1986) Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.251(14):G243_G248 Jang H-J 等人(2007)PNAS104(38):15069-15074)。在腸內(nèi)分泌細(xì)胞模型STC-1中大豆蛋白水解產(chǎn)物質(zhì)已表明刺激了 CCK的釋放(PCT申請(qǐng)PCT/US2009/069867)。由于蛋白被認(rèn)為調(diào)節(jié)了 GLP-1 的釋放(Hira T 等人(2009)Am J PhysiolGastrointest Liver Physiol297:G663_G671),本發(fā)明研究蛋白水解產(chǎn)物誘導(dǎo)GLP-1釋放的效應(yīng)，并且其是本發(fā)明的主題。
[0021]在餐后，蛋白在低pH下經(jīng)過(guò)胃酶諸如胃蛋白酶消化，進(jìn)入到腸道，在腸道上部被胰消化酶(胰酶)混合物進(jìn)一步消化。我們?cè)趫D1中表明經(jīng)受胃蛋白酶和胰酶消化的蛋白水解產(chǎn)物沒(méi)有喪失誘導(dǎo)腸內(nèi)分泌細(xì)胞的CCK和GLP-1釋放活性的能力。在體外消化的蛋白或蛋白水解產(chǎn)物的可溶性級(jí)份(2mg/mL蛋白濃度)與STC-1細(xì)胞分別孵育4小時(shí)和2小時(shí)以測(cè)量CCK和GLP-1。收集細(xì)胞培養(yǎng)基并用ELISA檢測(cè)CCK和GLP-1。對(duì)照大豆蛋白水解產(chǎn)物為FXP950 (可以商品名SU`PRO? FP950商購(gòu)自Solae, LLC)。測(cè)試的未受損的蛋白為大豆蛋白分離物Supro? 661和乳清分離蛋白ΑΡι?‘.:水解的大豆蛋白是由酶TL-1 (來(lái)自尖抱鍵抱菌(Fusarium oxysporum)的膜蛋白酶樣蛋白酶(TL-1) (SWISSPR0T N0.P35049)(美國(guó)專(zhuān)利5，288，627和5，693，520，其中每個(gè)據(jù)此全文引入以供參考))消化產(chǎn)生的。本文所述用以生成數(shù)據(jù)的刺激蛋白水解產(chǎn)物消化的方法修改自以前公布的Schasteen的步驟，模擬了體內(nèi)胃腸的消化(Schasteen, C.S.等人，(2007)Correlation of an ImmobilizedDigestive Enzyme Assay With Poultry True Amino Acid Digestibility for SoybeanMeal.Poultry Science86(2), 343-348)和 Higaki([Higaki, N.等人，(2006)Biosc1.Biotechnol.，Biochem.70 (12)，2844-2852)。蛋白樣品溶解在 20 體積的 0.01M HCl 中，并且用胃蛋白酶(Sigma-Aldrich P7012)以I:200(w/w)的酶-底物比率在pH2.3和37°C下消化I小時(shí)。在胃蛋白酶消化后，將2.5M NaOH加入到混合物中以將pH調(diào)節(jié)至8.0,并且以1:200 (w/w)的比率加入胰酶(Sigma-Aldrich P3292)并繼續(xù)再消化4小時(shí)。通過(guò)在預(yù)消化或已消化樣品中的伯胺基團(tuán)和鄰苯二甲醛(OPA)的反應(yīng)，對(duì)比酸水解后(110°C，24小時(shí))樣品中存在的伯胺的總量，來(lái)測(cè)定水解的程度(被稱(chēng)為“0ΡΑ方法”)。
[0022]如本文所教授和所述，體外已消化的水解產(chǎn)物與體外已消化的未受損大豆蛋白對(duì)照相比，顯示出在STC-1細(xì)胞中顯著更高的CCK和GLP-1誘導(dǎo)作用。以五個(gè)蛋白濃度檢測(cè)已消化的樣品。對(duì)于CCK釋放，蛋白濃度范圍為0.07至6.0mg/mL,并且對(duì)于GLP-1釋放，蛋白濃度范圍為0.25至4.0mg/mL。在體外消化的水解產(chǎn)物(以模擬體內(nèi)消化)與體外消化的未受損的大豆蛋白相比，可看到更高水平的CCK和GLP-1釋放，這表明在體內(nèi)所述水解產(chǎn)物將會(huì)誘導(dǎo)腸里的腸內(nèi)分泌細(xì)胞釋放更多CCK和GLP-1，其將導(dǎo)致增加動(dòng)物包括人的飽腹感。
[0023]另外，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物展示出一個(gè)或多個(gè)優(yōu)點(diǎn)，包括例如增加了相對(duì)于例如在酸性PH(例如3-4)下未水解的大豆蛋白的溶解度和基于感官數(shù)據(jù)的快感得分計(jì)，表明在各種各樣的食品應(yīng)用中這些將是合適的成份。因此，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物是具有良好前景的新成份，其可被摻入各種食品中，或單獨(dú)使用，并且它們可定向用于并由尋找具有增強(qiáng)飽腹感效果的食品的個(gè)人用于幫助控制食品攝入、保持或增加瘦身體質(zhì)量和/或維持或失去非瘦身體質(zhì)量。
[0024]1.制備蛋白水解產(chǎn)物的方法。
[0025]本發(fā)明一方面提供了蛋白水解產(chǎn)物及其制備方法。所述方法包括將蛋白材料與一種或多種酶接觸，這些酶將蛋白材料裂解為可誘導(dǎo)CCK和/或GLP-1釋放的多肽片段。在本發(fā)明的某些方面，多肽片段誘導(dǎo)CCK的釋放。在本發(fā)明的其它方面，多肽片段誘導(dǎo)GLP-1的釋放。在本發(fā)明另外的其它方面，多肽片段誘導(dǎo)CCK和GLP-1的釋放。反應(yīng)物和反應(yīng)參數(shù)在下文中詳述。
[0026](a)蛋白材料。
[0027]合適的蛋白材料的非限制性例子包括植物，諸如豆科或非豆科植物(例如大豆和其它豆科植物，桃豆(埃及豆)、扁豆、玉米、豌豆、卡諾拉、向日葵、高粱、稻、莧屬植物、馬鈴薯、木薯、竹竽、美人蕉、羽扇豆、油菜、小麥、燕麥、黑麥、大麥、蕎麥、木薯、黑小麥、粟、大麻等)，堅(jiān)果和種子(例如，杏仁、腰果、榛子、大麻種子、花生、南瓜種子、芝麻、向日葵種子、核桃仁等)，動(dòng)物蛋白(例如，蛋類(lèi)蛋白、乳品蛋白、肌肉蛋白、明膠等)，以及它們的組合。
[0028]在具體的實(shí)施例中，所述蛋白材料來(lái)源于大豆?？稍诒景l(fā)明方法中使用多種大豆蛋白以生成大豆蛋白水解產(chǎn)物。一般來(lái)講，大豆蛋白材料根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)源于全大豆。全大豆可以是標(biāo)準(zhǔn)大豆(即，非轉(zhuǎn)基因大豆)、轉(zhuǎn)基因大豆(例如具有修飾的油的大豆、具有修飾的碳水化合物的大豆、具有修飾的蛋白亞基的大豆等等)或它們的組合。大豆蛋白材料的合適例子包括大豆提取物、豆?jié){、豆?jié){粉、大豆凝乳、脫脂大豆粉、部分脫脂大豆粉、全脂大豆粉、大豆蛋白分離物、大豆蛋白濃縮物、大豆乳清蛋白、以及它們的級(jí)份和混合物。
[0029]在一個(gè)實(shí)施例中，所述方法中所用的大豆蛋白材料為大豆蛋白分離物(也稱(chēng)為大豆分離蛋白或ISP)。一般來(lái)講，大豆蛋白分離物具有按無(wú)水基計(jì)至少約90%大豆蛋白的蛋白含量。大豆蛋白分離物可包括完整的大豆蛋白或部分水解的大豆蛋白。大豆蛋白分離物可具有高含量的不同亞基如7S、11S、2S等。本發(fā)明可使用的大豆蛋白分離物的非限制性例子可商購(gòu)獲得，例如從Solae，LLC (St.Louis, MO)商購(gòu)獲得，并且包括SUP丨<(廣
500E、SUPRO* 620、SUPRO'* 760, SUPRO# 670、SUPEO* 710, SUPRO* EX33、
SlJPROli 313。
[0030]在另一個(gè)實(shí)施例中，大豆蛋白材料為大豆蛋白濃縮物，其具有按無(wú)水基計(jì)約65%至小于約90%大豆蛋白的蛋白含量。用于本發(fā)明中的合適的大豆蛋白濃縮物的例子包括例如 ALPHA* DSP-C、Procon?, ALPHA* 12 和 ALPHA* 5800，其從 Solae，LLC 商購(gòu)獲得。作為另外一種選擇，大豆蛋白濃縮物可與大豆蛋白分離物共混作為蛋白材料的來(lái)源替代部分大豆蛋白分離物。
[0031]在另一個(gè)實(shí)施例中，大豆蛋白材料是大豆粉，其具有按無(wú)水基計(jì)約49%至約65%大豆蛋白的蛋白含量。大豆粉可以是脫脂大豆粉、部分脫脂大豆粉、或全脂大豆粉。大豆粉可以與大豆蛋白分離物或大豆蛋白濃縮物共混。
[0032]當(dāng)使用大豆粉時(shí)，原料通常為脫脂大豆粉或大豆片。全脂大豆包含按重量計(jì)約40%的蛋白和按重量計(jì)約20%的油脂。當(dāng)脫脂大豆粉或大豆薄片構(gòu)成起始蛋白材料時(shí)，所有全脂大豆可經(jīng)由常規(guī)方法脫脂。例如，可將大豆清洗、脫殼、破碎、通過(guò)一系列壓片輥，然后使用己烷或其它適宜溶劑使其經(jīng)受溶劑萃取，以提取油并且制得“脫脂薄片”。脫脂薄片可被碾磨以制得大豆粉。雖然所述方法目前還沒(méi)有用于全脂大豆粉，但是據(jù)信全脂大豆粉也可用作蛋白源。然而，在處理全脂大豆粉時(shí)，很可能需要采用分離步驟，諸如三級(jí)離心以移除油脂。
[0033]在另一個(gè)實(shí)施例中，大豆蛋白材料為一種或多種大豆儲(chǔ)存蛋白，其已經(jīng)在例如離心沉淀的基礎(chǔ)上被分離成主要級(jí)份(15S、11S、7S和2S)。一般來(lái)講，IlS級(jí)份高度富集了大豆球蛋白，并且7S級(jí)份高度富集了 β_大豆伴球蛋白。
[0034]在另一個(gè)實(shí)施例中，蛋白材料可來(lái)自非大豆的植物。作為非限制性的例子，合適的植物包括其它豆科植物、桃豆(埃及豆)、扁豆、玉米、豌豆、卡諾拉、向日葵、高粱、稻、莧屬植物、馬鈴薯、木薯、竹竽、美人蕉、羽扇豆、油菜、小麥、燕麥、黑麥、大麥、蕎麥、木薯、黑小麥、粟、大麻，以及它們的混合物。在具體的實(shí)施例中，植物蛋白材料為卡諾拉粗粉、低芥酸菜籽蛋白物、低芥酸菜籽蛋白濃縮物、或它們的組合。在另一個(gè)實(shí)施例中，植物蛋白材料為玉米或谷物蛋白粉、玉米或谷物蛋白濃縮物、玉米或谷物分離蛋白、玉米或谷物胚芽、玉米或谷物谷蛋白、玉米或谷物谷蛋白粗粉、玉米或谷物面粉、玉米蛋白、或它們的組合。在另一個(gè)實(shí)施例中，植物蛋白材料為大麥粉、大麥濃縮蛋白、大麥分離蛋白、大麥粗粉、大麥面粉、或它們的組合。在另一個(gè)替代實(shí)施例中，植物蛋白材料為羽扇豆粉、羽扇豆分離蛋白、羽扇豆蛋白濃縮物、或它們的組合。在另一個(gè)替代實(shí)施例中，植物蛋白材料為燕麥片、燕麥粉、燕麥蛋白粉、燕麥分離蛋白、燕麥蛋白濃縮物、或它們的組合。在另一個(gè)實(shí)施例中，植物蛋白材料為豌豆粉、豌豆分離蛋白、豌豆蛋白濃縮物、或它們的組合。在另一個(gè)實(shí)施例中，植物蛋白材料為馬鈴薯蛋白粉、馬鈴薯分離蛋白、馬鈴薯蛋白濃縮物、馬鈴薯粉、或它們的組合。在另一個(gè)實(shí)施例中，植物蛋白材料為是米粉、稻米粗粉、稻米蛋白粉、稻米分離蛋白、稻米蛋白濃縮、或它們的組合。在另一個(gè)替代實(shí)施例中，植物蛋白材料為小麥蛋白粉、小麥谷朊粉、麥芽精、面粉、小麥分離蛋白、小麥蛋白濃縮物、可溶性小麥蛋白、或它們的組合。
[0035]在其它實(shí)施例中，所述蛋白材料來(lái)源于動(dòng)物來(lái)源。在一個(gè)實(shí)施例中，所述動(dòng)物蛋白材料來(lái)源于蛋類(lèi)。合適的蛋類(lèi)蛋白的非限制性例子包括蛋粉、干燥蛋固體、干燥蛋清蛋白、液體蛋清蛋白、蛋清蛋白粉、分離卵清蛋白、以及它們的組合。蛋類(lèi)蛋白可來(lái)源于例如雞蛋、鴨蛋、鵝蛋、鵪鶉蛋、或其它鳥(niǎo)類(lèi)的蛋。在另一個(gè)替代實(shí)施例中，所述蛋白材料來(lái)源于乳品來(lái)源。合適的乳品蛋白包括例如脫脂奶粉、分離乳蛋白、乳蛋白濃縮物、酸酪蛋白、酪蛋白酸鹽(例如酪蛋白酸鈉、酪蛋白酸鈣等)、乳清分離蛋白、乳清濃縮蛋白、以及它們的組合。所述乳蛋白材料可來(lái)源于例如奶牛、山羊、綿羊、驢子、駱駝、羊駝、牦牛、水牛等。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述蛋白可來(lái)源于陸棲動(dòng)物或水棲動(dòng)物的肌肉、器官、結(jié)締組織、或骨骼。在某些實(shí)施例中，所述動(dòng)物蛋白為明膠，它通過(guò)部分水解膠原制備，膠原提取自?；蚱渌鼊?dòng)物的骨、結(jié)締組織、器官等等。
[0036]在本發(fā)明中也設(shè)想了使用大豆蛋白材料和至少一種其它蛋白材料的組合。即，可由大豆蛋白材料和至少一種其它蛋白材料的組合來(lái)制備蛋白水解產(chǎn)物組合物。在一個(gè)實(shí)施例中，由大豆蛋白材料和一種其它蛋白材料的組合來(lái)制備蛋白水解產(chǎn)物組合物。在另一個(gè)實(shí)施例中，由大?蛋白材料和兩種其它蛋白材料的組合來(lái)制備蛋白水解廣物組合物。在另外的實(shí)施例中，由大豆蛋白材料和三種其它蛋白材料的組合來(lái)制備蛋白水解產(chǎn)物組合物。
[0037]在其它實(shí)施例中，蛋白水解產(chǎn)物組合物還包含至少一種源于蛋白材料的未水解蛋白。適用的未水解蛋白的非限制性例子包括干奶粉、脫脂干奶粉、乳蛋白、酸酪蛋白、酪蛋白酸鹽(例如酪蛋白酸鈉、酪蛋白酸鈣等)、乳清濃縮蛋白、乳清分離蛋白、和大豆蛋白分離物。
[0038]組合物中使用的來(lái)源于大豆蛋白材料的蛋白和來(lái)源于其它蛋白原料的蛋白的濃度可能并且將有所不同。所述大豆蛋白材料的蛋白量的范圍可為用于組合物的總蛋白的約1%至約99%。在某些實(shí)施例中，來(lái)源于所述大豆蛋白材料的蛋白量的范圍可為用于組合物的總蛋白的約I %至約99、約5%至約95%、約10%至約90%、約15%至約85%、約20%至約80%、約25%至約75%、約30%至約70%、約35%至約65%、約40%至約60%、約45%至約55%、或約50%。同樣，所述其它(至少一種)蛋白材料的范圍可為用于組合物的總蛋白的約1%至約99、約5%至約95%、約10%至約90%、約15%至約85%、約20%至約80%、約25%至約75%、約30%至約70%、約35%至約65%、約40%至約60%、約45%至約55%、或約50%。
[0039](b)蛋白漿液。
[0040]在本發(fā)明的方法中，通常將蛋白材料混合或分散在水中以形成按重量計(jì)包括約1%至約40%蛋白(按原樣計(jì))的漿液。在某些實(shí)施例中，漿液可包含(按原樣)按重量計(jì)約1%至約40%的蛋白、約5%至約35%的蛋白、約10%至約25%的蛋白、或約15%至約20%的蛋白。在具體的實(shí)施例中，漿液可包含(按原樣)按重量計(jì)少于約10%的蛋白。在另一個(gè)具體的實(shí)施例中，漿液可包含(按原樣)按重量計(jì)約2%、約4%、約6%、約8%、或約10%的蛋白。水可包括食品級(jí)分散劑諸如乙醇、甘油等。
[0041 ] 蛋白材料分散在水中后，蛋白材料的漿液可加熱至約70V至約90°C，時(shí)間約2分鐘至約20分鐘(或至較高溫度約110°C至約177°C，時(shí)間約2秒至約30秒)以使假定的內(nèi)源性蛋白酶抑制劑失活。通常，對(duì)蛋白漿液的PH和溫度進(jìn)行調(diào)節(jié)以優(yōu)化水解反應(yīng)，特別是確保水解反應(yīng)中使用的消化酶的功能接近其最佳活性水平。所述蛋白漿液的PH可根據(jù)本領(lǐng)域一般已知的方法進(jìn)行調(diào)節(jié)及監(jiān)控。所述蛋白漿液的PH可調(diào)節(jié)并保持在約pH2.0至約pHll.0。在其它實(shí)施例中，所述蛋白漿液的pH可調(diào)節(jié)并保持在約2.0至約3.0、約3.0至約
4.0、約4.0至約5.0、約5.0至約6.0、約6.0至約7.0、約7.0至約8.0、約8.0至約9.0、約9.0至約10.0、或約10.0至約11.0。在另一個(gè)實(shí)施例中，蛋白漿液的pH可調(diào)節(jié)并保持在約pH6.0至約pH9.0。在另一個(gè)實(shí)施例中，蛋白漿液的pH可調(diào)節(jié)并保持在約pH7.0至約PH8.0。根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，在水解反應(yīng)期間所述蛋白漿液的溫度可調(diào)節(jié)并保持在約25°C至約80°C。在某些實(shí)施例中，根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，在水解反應(yīng)期間所述蛋白漿液的溫度可調(diào)節(jié)并保持在約50°C。所述溫度不應(yīng)到達(dá)讓顯著量的水解酶失活的地步(例如，通過(guò)變性)。
[0042](C)酶消化。
[0043]一般通過(guò)將酶或組合酶加入到蛋白材料漿液中啟動(dòng)水解反應(yīng)。酶通?？蔀槭称芳?jí)酶，在約2.0至約11.0的pH和約25°C至約80°C的溫度具有最佳活性。酶可來(lái)源于植物、動(dòng)物或微生物。
[0044]在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，所述酶為內(nèi)肽酶。內(nèi)肽酶優(yōu)選作用于遠(yuǎn)離N和C末端的肽鏈內(nèi)部區(qū)域。多個(gè)內(nèi)肽酶適用于實(shí)施本發(fā)明。在一個(gè)實(shí)施例中，肽酶為T(mén)L-1。在另一個(gè)實(shí)施例中，肽酶為來(lái)自解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)的細(xì)菌蛋白酶，商售名為NFUTRASF,'.[0045]在本發(fā)明的其它實(shí)施例中，內(nèi)肽酶為來(lái)自Nocardiopsis prasina的絲氨酸蛋白酶(SEQ ID N0:2國(guó)際申請(qǐng)WO 2005035747)。在另一個(gè)實(shí)施例中，內(nèi)肽酶為來(lái)自地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)的枯草桿菌蛋白酶，該菌株以商品名/\LC/\l..,ASL.:1:購(gòu)自Novozymes (Bagsvaerd, Denmark)。在另一個(gè)實(shí)施例中，內(nèi)肽酶為絲氨酸蛋白酶，也稱(chēng)為谷氨酰基內(nèi)肽酶(稱(chēng)為“GE”)，它來(lái)自地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)(UNIPROT:P80057公布并表征于美國(guó)專(zhuān)利4，266,031,5,874, 278和5, 459, 064以及國(guó)際申請(qǐng)W001/16285、W092/13964、W091/13553和W091/13554中，所述文獻(xiàn)均全文以引用方式并入本文)。在一個(gè)替代實(shí)施例中，內(nèi)肽酶為賴氨酰內(nèi)肽酶(稱(chēng)為“LE”)，它來(lái)自水解無(wú)色桿菌(Achromobacter lyticus) (UNIPROT:P15636)。在另一個(gè)實(shí)施例中，內(nèi)妝酶為來(lái)自地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)的更純化形式的枯草桿菌蛋白酶(稱(chēng)為“Aka丨asef 2”)。在其它實(shí)施例中，內(nèi)肽酶為來(lái)自茄病鐮孢菌(Fusarium solani)的胰蛋白酶樣蛋白酶(GENESEQP:ADZ80577)。合適的酶還包括例如SPl (蛋白酶來(lái)自擬諾卡氏菌屬(Nocardiopsis sp.)的 NRRL 18262，公開(kāi)于 WO 2001/058276 和 WO 2009/155557)、枯草桿菌蛋白酶2(S2)、金屬蛋白酶I (MPl)、以及天門(mén)冬氨酸蛋白酶I (ASP-1)。其它合適的酶包括例如菠蘿蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、和彈性蛋白酶。在本發(fā)明的其它實(shí)施例中，使用了內(nèi)肽酶的組合。
[0046]在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，內(nèi)肽酶混合了至少一種外肽酶。一般來(lái)講，外肽酶僅僅作用于接近肽鏈N或C末端的端部。那些作用于游離N末端釋放例如單氨基酸殘基(即氨基肽酶)、二肽(即二肽肽酶)或三肽(即三肽肽酶)。所述外肽酶作用于游離C末端釋放例如單氨基酸(即羧肽酶)或二肽(即肽基二肽酶)。一些外肽酶是二肽特異性的(即二肽酶)或除去異肽鍵取代的、環(huán)化的或連接的末端殘基。異肽鍵為排除那些羧基基團(tuán)與α-氨基連接的肽鍵，并且酶的這種基團(tuán)特征在于Ω肽酶。
[0047]外肽酶的非限制性例子包括例如來(lái)自米曲霉(Aspergillus oryzae) (UNIPROT:Q2TZ11)的羧肽酶 D、來(lái)自米曲霉(Aspergillus oryzae) (UNIPROT:Q2TYA1)的羧肽酶 Y、來(lái)自米曲霉(Aspergillus oryzae)(國(guó)際申請(qǐng)W096/28542,其全文以引用方式并入本文)的氨基肽酶、和來(lái)自地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis) (UNIPROT:Q65DH7)的氨基肽酶。
[0048]取決于所需的水解度和水解反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間，加入到蛋白材料中的酶量可能并且將會(huì)不同。所述酶量的范圍可為每千克固體約Img至約5000mg酶蛋白。在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，所述酶量的范圍為每千克固體約Img至約IOOOmg酶蛋白、每千克固體約Img至約900mg酶蛋白、每千克固體約Img至約800mg酶蛋白、每千克固體約Img至約700mg酶蛋白、每千克固體約Img至約600mg酶蛋白、每千克固體約Img至約500mg酶蛋白、每千克固體約Img至約400mg酶蛋白、每千克固體約Img至約300mg酶蛋白。
[0049]在其它某些實(shí)施例中，所述酶量的范圍為每千克固體約Img至約250mg酶蛋白。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述酶量的范圍為每千克固體約Img至約200mg酶蛋白。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述酶量的范圍為每千克固體約Img至約IOOmg酶蛋白。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述酶量的范圍為每千克固體約Img至約50mg酶蛋白。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述酶量的范圍為每千克固體約Img至約25mg酶蛋白。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述酶量的范圍為每千克固體約Img至約IOmg酶蛋白。在具體的實(shí)施例中，所述酶量的范圍為每千克固體約75mg至約150mg酶蛋白。在其它具體的實(shí)施例中，所述酶量為每千克固體約75mg酶蛋白。在另外的其它具體的實(shí)施例中，所述酶量為每千克固體約IOOmg酶蛋白。在其它具體的實(shí)施例中,所述酶量為每千克固體約150mg酶蛋白。
[0050]技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，取決于酶、蛋白材料和期望的水解度，水解反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間可能并且將會(huì)不同。一般來(lái)講，水解反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間可以在幾分鐘至多個(gè)小時(shí)的范圍內(nèi)，諸如約30分鐘至約48小時(shí)。為了終止水解反應(yīng)，可將所述組合物加熱至足以失活酶的溫度。例如，把所述組合物加熱至大約90°C將基本上熱失活大多數(shù)酶。取決于所用的酶，其它失活方法包括冷卻至低于10°C和/或?qū)H降低至低于約2.0。
[0051]I1.蛋白水解產(chǎn)物。
[0052]本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物一般來(lái)講增強(qiáng)了 CCK和GLP-1的釋放，從而在食用時(shí)提升了飽腹感。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物包含可溶性級(jí)份，不溶性級(jí)份、或它們的組合。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物具有一個(gè)或多個(gè)本文所述的性質(zhì)(包括例如所用的酶、DH、CCK釋放活性的效能、GLP-1釋放活性的效能、分子量分布、溶解度、或其它特性)。
[0053]如例子中所示，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激了 CCK和/或GLP-1釋放活性。具體地，經(jīng)受胃蛋白酶和胰酶消化的本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物沒(méi)有喪失誘導(dǎo)腸內(nèi)分泌細(xì)胞的CCK和GLP-1釋放活性的能力。體外已消化的水解產(chǎn)物(以模擬體內(nèi)消化)與體外已消化的未受損的大豆蛋白相比，可看到更高水平的CCK和GLP-1釋放，這表明在體內(nèi)所述水解產(chǎn)物將誘導(dǎo)腸里的腸內(nèi)分泌細(xì)胞釋放更多CCK和GLP-1，其將導(dǎo)致增加動(dòng)物包括人的飽腹感。
[0054]在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，本文所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激了 CCK釋放活性。在其它的某些實(shí)施例中，本文所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激了 GLP-1釋放活性。在其它的某些實(shí)施例中，本文所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激了 CCK和GLP-1釋放活性。在特定實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物是已消化的(即，胃蛋白酶-胰酶消化的)、未消化的(即未被胃蛋白酶-胰酶消化的)，或它們的組合。
[0055]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞4小時(shí)而釋放的CCK的約50%至約1000%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞4小時(shí)而釋放的CCK的約50%至約500%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞4小時(shí)而釋放的CCK的約50%至約400%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞4小時(shí)而釋放的CCK的約50%至約300%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞4小時(shí)而釋放的CCK的約50%至約200%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞4小時(shí)而釋放的CCK的約50% 至約 100%。
[0056]在特定實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK釋放活性為用2mg/mlFXP950刺激STC-1細(xì)胞4小時(shí)而釋放的CCK的約50 %、約60 %、約70 %、約80 %、約90 %、約 100%、約 110%、約 120%、約 130%、約 140%、約 150%、約 160%、約 170%、約 180%、約190%、或約 200% ο
[0057]在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激GLP-1釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞2小時(shí)而釋放的GLP-1的約50%至約1000%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激GLP-1釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞2小時(shí)而釋放的GLP-1的約50%至約500%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激GLP-1釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞2小時(shí)而釋放的GLP-1的約50%至約400%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激GLP-1釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞2小時(shí)而釋放的GLP-1的約50%至約300%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激GLP-1釋放活性為用2mg/mlFXP950刺激STC-1細(xì)胞2小時(shí)而釋放的GLP-1的約50%至約200%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激GLP-1釋放活性為用2mg/ml FXP950刺激STC-1細(xì)胞2小時(shí)而釋放的GLP-1的約50%至約100%。
[0058]在特定實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激GLP-1釋放活性為用2mg/mlFXP950刺激STC-1細(xì)胞2小時(shí)而釋放的GLP-1的約50 %、約60 %、約70 %、約80 %、約90 %、約 100%、約 110%、約 120%、約 130%、約 140%、約 150%、約 160%、約 170%、約 180%、約190%、或約 200% ο
[0059]取決于蛋白材料的來(lái)源、使用的蛋白酶和水解反應(yīng)的條件，蛋白水解產(chǎn)物組合物的水解度(DH)可能并且將會(huì)不同。DH是指裂解的肽鍵相對(duì)于肽鍵起始數(shù)目的百分比。例如，如果包含五百個(gè)肽鍵的起始的蛋白水解至五十個(gè)肽鍵裂解，那么所得的水解產(chǎn)物的DH為10%。DH可使用本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的三硝基苯磺酸(TNBS)法或鄰苯二甲醛(OPA)法。DH越高，蛋白水解程度就越大。通常，因?yàn)榈鞍妆贿M(jìn)一步水解(即DH升高)，肽段的分子量降低，相應(yīng)的肽特征圖發(fā)生改變。DH可在整個(gè)水解產(chǎn)物(B卩，全級(jí)份)中測(cè)量，或DH可在水解產(chǎn)物的某個(gè)級(jí)份(例如，可溶性級(jí)份、分子量級(jí)份等)中測(cè)量。
[0060]通常，本發(fā)明的每個(gè)蛋白水解產(chǎn)物組合物將具有范圍為約0.01%至約35%的水解度。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的DH范圍為約0.0I %至約20 %。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的DH范圍為約0.01%至約10%。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的DH范圍為約0.05%至約10%。在具體的實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的DH范圍為約0.0I %、約0.05 %、約0.1 %、約
0.2%、約 0.3%、約 0.4%、約 0.5%、約 1.0%、約 1.5%、約 2.0%、約 2.5%、約 3.0%、約
3.5%、約 4.0%、約 4.5%、約 5.0%、約 5.5%、約 6.0%、約 6.5%、約 7.0%、約 7.5%、約8.0%、約8.5%、約9.0%、約9.5%、約 10.0%、約 10.5%、約 11.0%、約 11.5%、約 12.0%、約 12.5%、約 13.0 %、約 13.5%、約 14.0 %、約 14.5%、約 15.0 %、約 15.5%、約 16.0 %、約 16.5%、約 17.0 %、約 17.5%、約 18.0 %、約 18.5 %、約 19.0 %、約 19.5 %、約 20.0%、約 20.5%、約 21.0%、約 21.5%、約 22.0%、約 22.5%、約 23.0%、約 23.5%、約 24.0%、約 24.5 %、約 25.0%、約 25.5%、約 26.0 %、約 26.5 %、約 27.0%、約 27.5%、約 28.0 %、約 28.5%、約 29.0%、約 29.5%、約 30.0%、約 30.5%、約 31.0%、約 31.5%、約 32.0%、約
32.5%、約 33.0%、約 33.5%、約 34.0%、約 34.5%、或約 35.0V0o
[0061]一般來(lái)講，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物與蛋白原料相比將包含不同長(zhǎng)度和分子量的多肽片段的混合物。肽片段的分子量可在75道爾頓(即游離甘氨酸)至大于100，000道爾頓的范圍內(nèi)，例如用尺寸排阻色譜法所測(cè)量。一般來(lái)講，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的多肽片段具有不同長(zhǎng)度和分子量的多肽片段級(jí)份。每個(gè)所述水解產(chǎn)物的代表性樣品如實(shí)例中所述制備，并重新懸浮于固體濃度為2.5%的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，pH值7.4，Sigma貨號(hào)P5368)中。不溶解的材料用16，OOOXg離心10分鐘以去除，所得的上清液通過(guò)0.45微米注射器過(guò)濾器以去除任何殘余的細(xì)小顆粒。
[0062]在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約30%至約50%的多肽具有大于約20kDa的分子量。在具體的實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約30%、約31%、約32%、約33%、約34%、約35%、約36%、約37%、約 38%、約 39%、約 40%、約 41%、約 42%、約 43%、約 44%、約 45%、約 46%、約 47%、約48%、約49%、或約50%的多肽具有大于約20kDa的分子量。
[0063]在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約15%至約20%的多肽具有在約IOkDa和約20kDa之間的分子量。在具體的實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約15%、約16%、約17%、約18%、約19%、或約20%的多肽具有在約IOkDa和約20kDa之間的分子量。
[0064]在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約15%至約20%的多肽具有在約5kDa和約IOkDa之間的分子量。在具體的實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約15%、約16%、約17%、約18%、約19%、或約20%的多肽具有在約5kDa和約IOkDa之間的分子量。
[0065]在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約15%至約20%的多肽具有在約2kDa和約5kDa之間的分子量。在具體的實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約15%、約16%、約17%、約18%、約19%、或約20%的多肽具有在約2kDa和約5kDa之間的分子量。
[0066]在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約5%至約10%的多肽具有在約IkDa和約2kDa之間的分子量。在具體的實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約5 %、約6 %、約7 %、約8 %、約9 %、或約10 %的多肽具有在約IkDa和約2kDa之間的分子量。
[0067]在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中少于約5%的多肽具有小于約IkDa的分子量。在具體的實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中少于約I %、少于約2%、少于約3%、少于約4%、或少于約5%的多肽具有小于約IkDa的分子量。[0068]一般來(lái)講，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物與蛋白原料相比具有增加的溶解度。所述溶解度在一定pH范圍內(nèi)將會(huì)有變化。
[0069]在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物在約pH3至約pH8之間是可溶解的。
[0070]在其它的某些實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物在約pH3至約pH5之間為約10%至約60%可溶的。在具體的實(shí)施例中，在這個(gè)pH范圍所述溶解度為約30%至約60%、約35%至約55%、或約40%至約50%。在其它具體的實(shí)施例中，在這個(gè)pH范圍所述溶解度為約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、或約60%。在另外的其它具體的實(shí)施例中，在這個(gè)pH范圍所述pH為約pH3.0、約ρΗ3.25、約 ρΗ3.5、約 ρΗ3.75、約 ρΗ4.0、約 ρΗ4.25、約 ρΗ4.5、約 ρΗ4.75、或約 ρΗ5.0。在其它具體的實(shí)施例中，在該P(yáng)H范圍的pH為約pH3至約pH4。
[0071]在另外的某些實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物在約pH5至約pH6之間為約20%至約75%可溶。在具體的實(shí)施例中，在該pH范圍的溶解度為約20%、約25%、約30%、約 35%、約 40%、約 45%、約 50%、約 55%、約 60%、約 65%、約 70%、或約 75%。在其它具體的實(shí)施例中，在該P(yáng)H范圍的pH為約pH5.0、約pH5.25、約pH5.5、約pH5.75、或約pH6.00
[0072]在另外的某些實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物在約ρΗ6至約ρΗ8之間為約40 %至約85 %可溶。在具體的實(shí)施例中，在該pH范圍的溶解度為約55 %至約85 %、約60%至約80%、或約65%至約75%。在其它具體的實(shí)施例中，在該pH范圍的溶解度為約 40%、約 45%、約 50%、約 55%、約 60%、約 65%、約 70%、約 75%、約 80%、或約 85%。在其它具體的實(shí)施例中，在該P(yáng)H范圍的pH為約ρΗ6.0、約ρΗ6.25、約ρΗ6.5、約ρΗ6.75、約ρΗ7.0、約 ρΗ7.25、約 ρΗ7.5、約 ρΗ7.75、或約 ρΗ8.0。
[0073]在其它實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物具有降低血液膽固醇效應(yīng)，只要滿足終端食品形式的所有必需要求，其能夠?qū)崿F(xiàn)FDA批準(zhǔn)的心臟健康權(quán)利要求(例如，每份蛋白的數(shù)量、每份飽和脂肪的數(shù)量等)。測(cè)定降低血液膽固醇效應(yīng)是本領(lǐng)域已知的，因此能夠?qū)Ρ景l(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物或摻入相同成份的食物產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)定。
[0074]II1.包含蛋白水解產(chǎn)物的食物產(chǎn)品。
[0075]本發(fā)明的另一方面是包括可食用材料和本文所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物的食品
女口
廣叩ο
[0076]取決于所需食物產(chǎn)品，選擇的與可食用材料組合的特定蛋白水解產(chǎn)物組合物能夠并且將會(huì)不同。
[0077]在一些實(shí)施例中，食品中包括的蛋白水解產(chǎn)物組合物包含“前肽”，它在受試者的胃和/或腸中經(jīng)由蛋白分解消化轉(zhuǎn)化成“活性”肽。在其它實(shí)施例中，蛋白水解產(chǎn)物組合物包含“活性”肽，它不需要在受試者的胃或腸中進(jìn)行附加的蛋白分解消化。
[0078]在一些實(shí)施例中，包括在期望的食物產(chǎn)品中的本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物為全部未分離組合物，其包括例如所有的可溶性和不溶性級(jí)份。例如，本發(fā)明的全部未分級(jí)蛋白水解產(chǎn)物組合物可用于焙烤食品中。在其它實(shí)施例中，包括在期望的食物產(chǎn)品中的本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物為分級(jí)的組合物，其包括例如所有的可溶性和不溶性級(jí)份。例如參照可溶性級(jí)份，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份能用于酸性飲料。由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能測(cè)定所述可溶性級(jí)份并摻入至期望的食物產(chǎn)品中例如調(diào)節(jié)PH至期望的水平并用本領(lǐng)域已知的方法除去任何殘余的不溶解的材料，其包括例如離心、膜分級(jí)、以及它們的組合。例如參照不溶性級(jí)份，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的不溶性級(jí)份能用于谷類(lèi)食品。
[0079]在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的不溶性級(jí)份是重要的。發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，除了本發(fā)明的蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份誘導(dǎo)CCK和GLP-1釋放的能力，不溶性級(jí)份也有這些生物活性。因此，本發(fā)明涵蓋了可溶性級(jí)份、不溶性級(jí)份、或它們的組合，以誘導(dǎo)CCK和GLP-1釋放并用于包括本文所述可食用材料和蛋白水解產(chǎn)物組合物的食物產(chǎn)品。
[0080]取決于所需食物產(chǎn)品，合適可食用材料的選擇也將會(huì)不同。所述可食用材料可為植物來(lái)源的材料(例如，蔬菜汁、谷類(lèi)食物等)、動(dòng)物來(lái)源的材料(例如，乳品產(chǎn)品、蛋類(lèi)產(chǎn)品等)、或生物材料(例如，蛋白、碳水化合物、脂質(zhì)等)，其分離自植物來(lái)源的材料或動(dòng)物來(lái)源的材料等。
[0081]本發(fā)明的食物產(chǎn)品可包括例如熱或冷的谷類(lèi)食品、巴、烘焙食品、飲料、酸奶、甜點(diǎn)、小吃、面食和肉類(lèi)(包括家禽和海鮮)。
[0082]在一個(gè)實(shí)施例中，所述食物產(chǎn)品可為液體飲料。液體飲料的非限制性例子包括果汁、水果飲料、果味飲料、蔬菜飲料、營(yíng)養(yǎng)飲料、能量飲料、運(yùn)動(dòng)飲料、豆?jié){飲料、大豆風(fēng)味飲料、米乳飲料、風(fēng)味乳飲料、基于酸奶的飲料、嬰兒代乳品、荼飲料、咖啡飲料、膳食替代飲料、蛋白混合飲料、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充飲料、體重控制飲料、以及它們的組合。
[0083]包含飲料食物產(chǎn)品的可食用材料可能并且將會(huì)不同。適用的可食用材料的非限制性例子包括果汁、蔬菜汁、脫脂乳、減脂乳、2%乳、全脂乳、奶油、淡奶、酸奶、酪乳、巧克力、可可粉、咖啡、茶等。
[0084]飲料食物產(chǎn)品可還包括天然和人造的甜味劑(例如，葡萄糖、蔗糖、果糖、麥芽糖糊精、三氯蔗糖、天冬甜素、糖精、甜葉菊、玉米糖漿、蜂蜜、楓糖漿等)、風(fēng)味劑(例如，巧克力、可可、巧克力風(fēng)味劑、香草精、香草風(fēng)味劑、水果風(fēng)味劑等)、乳化或增稠劑(例如，卵磷月旨、角叉菜膠、纖維素膠、纖維素凝膠、淀粉、阿拉伯樹(shù)膠、黃原膠凝膠等)、穩(wěn)定劑、脂質(zhì)材料(例如，卡諾拉油、向日葵油、高油酸向日葵油、脂肪粉等)、防腐劑和抗氧化劑(例如，山梨酸鉀、山梨酸、BHA, BHT、TBHQ、迷迭香提取物、維生素A、維生素C和維生素E及它們的衍生物、以及各種植物提取物諸如那些包含具有抗氧化性質(zhì)的類(lèi)胡蘿卜素、生育酚和類(lèi)黃酮等)、著色劑、維生素、礦物質(zhì)、以及它們的組合。
[0085]在另一個(gè)實(shí)施例中，所述食物產(chǎn)品是一種食物巴(壓成塊的加工食品)，諸如格蘭諾拉巴、谷類(lèi)食物巴、營(yíng)養(yǎng)巴、代餐巴、或能量巴。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述食物產(chǎn)品是基于谷類(lèi)的食物產(chǎn)品?；诠阮?lèi)的食物產(chǎn)品的非限制性例子包括早餐谷類(lèi)食物、早餐巴、意大利面食、面包、焙烤產(chǎn)品(即，粉餅、餡餅、卷狀食品、餅干、薄脆餅干)和小吃產(chǎn)品(例如炸土豆片、脆餅干等)。基于谷類(lèi)的食品的可食用材料可以例如來(lái)源于小麥(例如漂白面粉、全麥面粉、麥芽精、麥麩等)、玉米(例如玉米面、玉米粗粉、玉米淀粉等)、燕麥(例如膨化燕麥、燕麥片、燕麥粉等)、稻米(例如膨化稻米、米粉、稻米淀粉)等等。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述食物產(chǎn)品可以是基于乳品的“固體”食品。合適的“固體”基于乳品的食品的非限制性例子包括硬奶酪產(chǎn)品、軟奶酪產(chǎn)品、冰激凌產(chǎn)品、酸奶產(chǎn)品、凍酸奶產(chǎn)品、攪打類(lèi)乳品產(chǎn)品、果汁冰霜等。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述食物產(chǎn)品是營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑可以是液體或固體。在另一個(gè)替代實(shí)施例中，所述食物產(chǎn)品是肉類(lèi)產(chǎn)品或仿肉產(chǎn)品。肉類(lèi)食物產(chǎn)品的例子包括例如加工肉制品、碎肉制品和全肉制品。肉類(lèi)材料可以是動(dòng)物肉或海產(chǎn)品肉。肉類(lèi)類(lèi)似物可以是組織化植物蛋白或組織化乳品蛋白，它們的質(zhì)地模仿動(dòng)物或海產(chǎn)品的肉。在肉類(lèi)食物產(chǎn)品中肉類(lèi)類(lèi)似物可以是部分或全部肉類(lèi)材料。
[0086]IV.定義。
[0087]為了更好的理解本發(fā)明，下文定義了幾個(gè)術(shù)語(yǔ)。
[0088]術(shù)語(yǔ)“約”是指數(shù)值，包括例如整數(shù)，分?jǐn)?shù)和百分?jǐn)?shù)，不論是否明確說(shuō)明。一般來(lái)講，術(shù)語(yǔ)“約”是指一定的數(shù)值范圍(例如，引用值的+/-5-10% )，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將考慮其等同于引用值(例如，具有相同的功能或結(jié)果)。在一些情況下，術(shù)語(yǔ)“約”可包括四舍五入到最接近的顯著數(shù)字的數(shù)值。
[0089]術(shù)語(yǔ)“水解度”(DH)是指具體肽鍵水解的百分比(即，裂解的肽鍵數(shù)量和未受損蛋白中總肽鍵數(shù)量之比)。用三硝基苯磺酸(TNBS)法或鄰苯二醛(OPA)法來(lái)估算％ DH0這些方法對(duì)于測(cè)定蛋白水解產(chǎn)物的DH是準(zhǔn)確的、可再現(xiàn)的、一般來(lái)講適用的方法。
[0090]術(shù)語(yǔ)“內(nèi)肽酶”是指在低聚肽或多肽鏈中水解內(nèi)部肽鍵的酶。內(nèi)肽酶類(lèi)包括酶亞類(lèi)EC3.4.21-25 (國(guó)際生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)盟酶分類(lèi)體系)。
[0091]術(shù)語(yǔ)“外肽酶”是指在或靠近其氨基-或羧基末端水解肽鍵的酶。外肽酶類(lèi)包括酶亞類(lèi)EC3.4.11-18(國(guó)際生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)盟酶分類(lèi)體系)。
[0092]“食品級(jí)酶”是公認(rèn)安全(GRAS)認(rèn)可的酶并且當(dāng)被生物體如人消耗時(shí)是安全的。通常，酶和可從其中得到酶的產(chǎn)品可根據(jù)適用的法律法規(guī)進(jìn)行制備。
[0093]“水解產(chǎn)物”是通過(guò)鍵裂解獲得的反應(yīng)產(chǎn)物。蛋白水解產(chǎn)物或水解蛋白是通過(guò)蛋白肽鍵裂解獲得的反應(yīng)產(chǎn)物。蛋白水解產(chǎn)物產(chǎn)生在熱反應(yīng)、化學(xué)反應(yīng)和/或酶反應(yīng)之后。在反應(yīng)期間，將蛋白分解成多肽和/或游離的氨基酸。這些產(chǎn)品可為可溶于或不溶于水或水基緩沖液。水解產(chǎn)物不應(yīng)和用胃蛋白酶-胰酶消化的蛋白組合物相混淆。
[0094]如本文所用的“0ΡΑ方法”是指下述的步驟:將0.25g大豆蛋白水解產(chǎn)物溶解在50mL萃取緩沖液(0.025N氫氧化鈉中含1% SDS,0.6mM DTT)中，在65°C振蕩5分鐘，然后冷卻至25°C。然后在5000Xg離心樣品5分鐘以除去任何未溶解的材料。接下來(lái)，將0.2mL樣品等分試樣、絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)物(3.6mM，在去離子水中)、和萃取緩沖液(用作空白對(duì)照)轉(zhuǎn)移到(三等分)測(cè)試管中，用IOmL OPA顯色劑(0.012M 0ΡΑ,0.1M四硼酸鈉，2% SDS)稀釋?zhuān)瑴u旋混合。允許反應(yīng)進(jìn)行30分鐘，其時(shí)用分光光度計(jì)測(cè)量340nm的吸光度。使用每個(gè)三等分樣品的均值測(cè)定％ DH,如 Nielsen 所述(Nielsen, P.M 等人,(2001) “Improved Methodfor Determining Food Protein Degree of Hydrolysis' ’，J.Food Sc1.66 (5):642-646)。
[0095]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“大豆蛋白分離物”或“大豆分離蛋白”是指按無(wú)水計(jì)具有至少約90%的大豆蛋白的蛋白含量的大豆材料。大豆蛋白分離物由大豆形成，其形成方式為:將大豆的皮和胚芽從子葉上去除，將子葉壓成片或碾碎并將片狀或碾碎的子葉去油，將子葉的大豆蛋白和碳水化合物與子葉纖維分離開(kāi)，然后將大豆蛋白與碳水化合物分離。
[0096]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“大豆蛋白濃縮物”是指基于無(wú)水計(jì)具有約65%至小于約90%大豆蛋白的蛋白含量的大豆材料。大豆蛋白濃縮物也可包含大豆子葉纖維，通常基于不含水分按重量計(jì)約3.5%至最多約20%的大豆子葉纖維。大豆蛋白濃縮物由大豆形成，其形成方式為:去除大豆的皮和胚芽，將子葉壓成片或碾碎并將片狀或碾碎的子葉去油，然后將大豆蛋白和大豆子葉纖維與子葉的可溶碳水化合物分離。
[0097]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“大豆粉”是指全脂大豆粉、酶活性大豆粉、脫脂大豆粉、部分脫脂大豆粉、以及它們的混合物。脫脂大豆粉是指脫脂大豆材料的粉碎形式，優(yōu)選包含小于約1%的油，由尺寸使得顆?？赏ㄟ^(guò)100目(美國(guó)標(biāo)準(zhǔn))篩網(wǎng)的顆粒形成。利用常規(guī)的大豆研磨方法將大豆餅、碎片、薄片、粗粉、或這些材料的混合物粉碎成大豆粉。大豆粉具有基于不含水分約49%至約65%的大豆蛋白含量。優(yōu)選將所述粉末研磨得非常細(xì)，最優(yōu)選使得有小于約I %的粉末留在300目(美國(guó)標(biāo)準(zhǔn))篩網(wǎng)上。全脂大豆粉是指碾磨全大豆，其包含所有的原有油脂，通常為18%至20%。所述粉可為酶活性的，或可為熱處理的或烘烤的以最小化酶活性。酶活性大豆粉是指被最小程度熱處理以不會(huì)使其天然酶無(wú)效的全脂大豆粉。
[0098]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“豆?jié){”指下列的任意一種或多種含水混合物:細(xì)磨大豆、大豆粉、大豆薄片、大豆?jié)饪s液、大豆分離蛋白、大豆乳清蛋白、以及下列的任意一種或多種含水提取物:大豆、大豆薄片或大豆粉，其中已經(jīng)除去了不溶解材料。豆?jié){可包含附加組分，其包括例如脂肪、碳水化合物、甜味劑、著色劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、風(fēng)味劑、酸和堿。
[0099]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“豆?jié){粉”指脫水的豆?jié){。豆?jié){可通過(guò)多種方法脫水，其包括例如噴霧干燥、盤(pán)式干燥、隧道式干燥和冷凍干燥。
[0100]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“簡(jiǎn)化三硝基苯磺酸(S-TNBS)方法”指一種用于測(cè)定食物蛋白水解產(chǎn)物的水解度的精確的、可再現(xiàn)的、以及一般適用的方法。對(duì)該方法而言，將0.1g大豆蛋白水解產(chǎn)物溶解在IOOmL的0.025NNa0H中。將水解產(chǎn)物溶液的等分試樣(2.0mL)與8mL的0.05M硼酸鈉緩沖液(pH9.5)混合。用0.20mL10 %的三硝基苯磺酸處理兩mL經(jīng)緩沖的水解產(chǎn)物溶液，然后室溫暗處孵育15分鐘。加入4mL0.1M亞硫酸鈉-0.1M磷酸鈉溶液(I: 99比率)以終止反應(yīng)，在420nm處讀取吸光度。使用0.1mM的甘氨酸溶液作為標(biāo)準(zhǔn)物。下述的計(jì)算是用來(lái)確定對(duì)于甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的百分回收率:[(甘氨酸在420nm的吸光度-空白對(duì)照在420nm的吸光度)X (100/0.710)]。94%或更高的值被認(rèn)為是可接受的。(Jens Adler-Nissen(1979) “Determination of the Degree of Hydrolysis ofFood Protein Hydrolysates by Trinitrobenzenesulfonic Acid,”J.Agric.Food Chem.,27(6):1256-1262)。
[0101]當(dāng)介紹本發(fā)明或其實(shí)施例的要素時(shí)，冠詞“一個(gè)”、“一種”和“所述”旨在表示有一個(gè)或多個(gè)要素。術(shù)語(yǔ)“包含”和其所有形式和時(shí)態(tài)(包括例如包含(comprise, comprised))與“包括”、“含有”或“其特征在于”為同義詞，是包容性或開(kāi)放式語(yǔ)言，并且不排除任何額外的未列舉的元素、步驟或成分。術(shù)語(yǔ)“組成”和其所有形式和時(shí)態(tài)(包括例如組成(consist, consisted))是封閉式的語(yǔ)言,并且排除任何未列舉的元素、步驟或成分。術(shù)語(yǔ)“基本上由...組成”及其所有形式和時(shí)態(tài)將本發(fā)明的范圍限于指定的元件、步驟、或成分以及不會(huì)實(shí)質(zhì)上影響受本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)的基本和新型特性的那些。 申請(qǐng)人:注意到，某些實(shí)施例中引用了過(guò)渡性短語(yǔ)包括(comprising);不論在任何地方 申請(qǐng)人:引用了這個(gè)過(guò)渡性短語(yǔ)，所述過(guò)渡性短語(yǔ)由...組成(consisting of)或基本上由...組成(consistingessentially of)也被 申請(qǐng)人:考慮到并形成了本發(fā)明的一部分。
[0102]在不脫離本發(fā)明范圍的條件下，可對(duì)以上組合物、產(chǎn)品和方法進(jìn)行各種更改，這意味著可將上文描述和下文實(shí)例中包含的所有內(nèi)容理解為例證性的而非限定性的。[0103]V.實(shí)例。
[0104]實(shí)例1:TL1蛋白水解產(chǎn)物。
[0105]按下述制備TLl水解產(chǎn)物。將240g蛋白(lot#M310007644)重新懸浮于2760g溫的自來(lái)水中，用適度的螺旋槳葉片在室溫下混合，制備成3L8%固體濃度的含水的Supro?760大豆分離蛋白(ISP)蛋白溶液。所述懸浮液在熱板上加熱至50°C，用IN食品級(jí)NaOH調(diào)節(jié)至PH8，然后分裝成4個(gè)650ml的等份。然后將TLl酶(Novozymes NS12001)加到每個(gè)小份中至終濃度為150mg酶/kg固體，用Hanson Research Dissolution Station將懸浮液在50°C孵育。在30和60分鐘的間隔將兩份樣品轉(zhuǎn)移到IL的燒杯中，用鋁箔覆蓋，并在熱板上加熱至80°C。一旦到達(dá)指定溫度，去除鋁箔并繼續(xù)加熱5分鐘以失活TL-1酶。最后，用濕冰浴將所述水解產(chǎn)物冷卻至40°C，然后在凍干前凍至_40°C。
[0106]實(shí)例2:中性蛋白酶蛋白水解產(chǎn)物。
[0107]按下述制備中性蛋白酶水解產(chǎn)物。2L燒杯中裝入1380g自來(lái)水，然后水浴加熱至50°C。將120g SupTO? 760(lot#M310007644)ISP重新懸浮于水中并溫和攪拌，用IN食品級(jí)NaOH調(diào)節(jié)懸浮液pH至7或8.5。接下來(lái)，懸浮液中加入Neutrasey I.5mg(lot#PW200921)至終濃度為75或150mg酶蛋白/kg固體，然后所述懸浮液在50°C孵育120分鐘。對(duì)于一些水解產(chǎn)物，在水解周期中用Mettler Toledo DL50 Graphix Titrator滴定NaOH來(lái)保持pH恒定。在孵育周期結(jié)束時(shí)，將燒杯移至熱板加熱水解產(chǎn)物至80°C，5分鐘，以終止反應(yīng)。然后在水浴和冰浴中冷卻樣品，再凍至-40 V并冷凍干燥。
[0108]實(shí)例3:SP~1蛋白水解產(chǎn)物。
[0109]按下述制備SP-1水解產(chǎn)物。在2L燒杯中裝入920g自來(lái)水，然后水浴加熱至70°C。將80gSupro? 760(lot#P220014935) ISP重新懸浮于水中并溫和攪拌，用IN食品級(jí)NaOH調(diào)節(jié)懸浮液pH至9。接下來(lái),懸浮液中加入絲氨酸蛋白酶SP-1至終濃度為IOOmg酶蛋白/kg固體，然后所述懸浮液在70°C孵育30分鐘。在孵育周期結(jié)束時(shí)，將燒杯移至熱板加熱水解產(chǎn)物至80°C，5分鐘，以終止反應(yīng)。然后在水浴和冰浴中冷卻樣品，再凍至-40°C并冷凍干燥。
[0110]實(shí)例4:S2蛋白水解產(chǎn)物。
[0111]按下述制備S2水解產(chǎn)物。2L燒杯中裝入1150g自來(lái)水，然后水浴加熱至70°C。將120g Supro'8 760 (lot#M310007644) ISP重新懸浮于水中并溫和攪拌，用IN食品級(jí)NaOH調(diào)
節(jié)懸浮液PH至7。接下來(lái)，懸浮液中加入枯草桿菌蛋白酶家族的蛋白酶S2至終濃度為75或150mg酶蛋白/kg固體，然后懸浮液在70°C孵育30或120分鐘。在水解周期中用MettlerToledo DL50 Graphix Titrator滴定NaOH來(lái)保持pH恒定。在孵育周期結(jié)束時(shí)，將燒杯移至熱板加熱水解產(chǎn)物至80°C，5分鐘，以終止反應(yīng)。然后在水浴和冰浴中冷卻樣品，再凍至-40°C并冷凍干燥。
[0112]實(shí)例5:S1蛋白水解產(chǎn)物。
[0113]按下述制備SI水解產(chǎn)物。2L燒杯中裝入1150g自來(lái)水，然后水浴加熱至70°C。將IOOg Supro? 760 (lot#M310007644) ISP重新懸浮于水中并溫和攪拌，用IN食品級(jí)NaOH調(diào)節(jié)懸浮液pH至8.0或9.0。接下來(lái),懸浮液中加入枯草桿菌蛋白酶家族的蛋白酶SI至終濃度為IOOmg酶蛋白/kg固體，然后懸浮液在70°C孵育120分鐘。在水解周期中用MettlerToledo DL50 Graphix Titrator滴定NaOH來(lái)保持pH恒定。在孵育周期結(jié)束時(shí),用蒸汽爸加熱水解產(chǎn)物至90°C，然后在這個(gè)溫度再保持2分鐘以終止反應(yīng)。然后在水浴和冰浴中冷卻樣品，再凍至_40°C并冷凍干燥。
[0114]下表給出了本發(fā)明的各種蛋白水解產(chǎn)物組合物的水解條件和水解度(用Nielsen, Petersen,和 Damdmann (2001)，].Food Sci66 (5):642-646 的 OPA 方法測(cè)定)。
[0115]
【權(quán)利要求】
1.包含多肽片段混合物的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激膽囊收縮素(CCK)和胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)釋放活性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約30%至約50%的多肽具有大于約20kDa的分子量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物包含可溶性級(jí)份、不溶性級(jí)份、或它們的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物基本上由可溶性級(jí)份組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物為植物蛋白材料、動(dòng)物蛋白材料、或它們的組合的水解產(chǎn)物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物為植物蛋白材料的水解產(chǎn)物，并且其中所述植物蛋白材料為豆科或非豆科植物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述植物蛋白材料來(lái)源于大豆。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述植物蛋白材料為大豆蛋白分離物、大豆蛋白濃縮物、大豆粉、或它們的組合。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述植物蛋白材料為大豆蛋白分離物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物在用胃蛋白酶和胰酶消化后刺激CCK和GLP-1釋放活性。
11.包含蛋白水解產(chǎn)物組合物的食物產(chǎn)品，所述蛋白水解產(chǎn)物組合物包含多肽片段混合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK和GLP-1釋放活性。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的食物產(chǎn)品，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約30%至約50%的多肽具有大于約20kDa的分子量。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的食物產(chǎn)品，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物包含可溶性級(jí)份、不溶性級(jí)份、或它們的組合。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的食物產(chǎn)品，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物基本上由可溶性級(jí)份組成。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的食物產(chǎn)品，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物為植物蛋白材料、動(dòng)物蛋白材料、或它們的組合的水解產(chǎn)物。
16.根據(jù)權(quán)利要求11所述的食物產(chǎn)品，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物為植物蛋白材料的水解產(chǎn)物，并且其中所述植物蛋白材料為豆科或非豆科植物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的食物產(chǎn)品，其中所述植物蛋白材料來(lái)源于大豆。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的食物產(chǎn)品，其中所述植物蛋白材料為大豆蛋白分離物、大豆蛋白濃縮物、大豆粉、或它們的組合。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的食物產(chǎn)品，其中所述植物蛋白材料為大豆蛋白分離物。
20.根據(jù)權(quán)利要求11所述的食物產(chǎn)品，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物在用胃蛋白酶和胰酶消化后刺激CCK和GLP-1釋放活性。
21.誘發(fā)飽腹感的方法，包括攝入包含多肽片段混合物的蛋白水解產(chǎn)物組合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK和GLP-1釋放活性。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約30%至約50%的多肽具有大于約20kDa的分子量。
23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物包含可溶性級(jí)份、不溶性級(jí)份、或它們的組合。
24.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物基本上由可溶性級(jí)份組成。
25.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物為植物蛋白材料、動(dòng)物蛋白材料、或它們的組合的水解產(chǎn)物。
26.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物為植物蛋白材料的水解產(chǎn)物，并且其中所述植物蛋白材料為豆科或非豆科植物。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述植物蛋白材料來(lái)源于大豆。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述植物蛋白材料為大豆蛋白分離物、大豆蛋白濃縮物、大豆粉、或它們的組合。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述植物蛋白材料為大豆蛋白分離物。
30.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物在用胃蛋白酶和胰酶消化后刺激CCK和GLP-1釋放活性。
31.誘發(fā)飽腹感的方法，包括攝入包含蛋白水解產(chǎn)物組合物的食物產(chǎn)品，所述蛋白水解產(chǎn)物組合物包含多肽片段混合物，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物刺激CCK和GLP-1釋放活性。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物的可溶性級(jí)份中約30%至約50%的多肽具有大于約20kDa的分子量。
33.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物包含可溶性級(jí)份、不溶性級(jí)份、或它們的組合。
34.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物基本上由可溶性級(jí)份組成。
35.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物為植物蛋白材料、動(dòng)物蛋白材料、或它們的組合的水解產(chǎn)物。
36.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物為植物蛋白材料的水解產(chǎn)物，并且其中所述植物蛋白材料為豆科或非豆科植物。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述植物蛋白材料來(lái)源于大豆。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的方法，其中所述植物蛋白材料為大豆蛋白分離物、大豆蛋白濃縮物、大豆粉、或它們的組合。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述植物蛋白材料為大豆蛋白分離物。
40.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述蛋白水解產(chǎn)物組合物在用胃蛋白酶和胰酶消化后刺激CCK和GLP-1釋放活性。
【文檔編號(hào)】A61P3/04GK103561589SQ201280010910
【公開(kāi)日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2012年2月23日 優(yōu)先權(quán)日:2011年2月23日
【發(fā)明者】E.S.克魯爾, B.圖克, M.K.帕里克, J.F.洛姆巴迪 申請(qǐng)人:索萊有限責(zé)任公司