包括抗氧化劑的皮膚填充劑組合物的制作方法【專利摘要】本發(fā)明提供了包括綴合的維生素的可注射的、基于透明質酸的水凝膠組合物?！緦＠f明】包括抗氧化劑的皮膚填充劑組合物[0001]相關申請[0002]本申請要求2011年6月3日提交的美國臨時專利申請N0.61/493，309的優(yōu)先權和權益，該專利的全部公開內容通過引用并入本文。[0003]背景[0004]本發(fā)明一般整體涉及皮膚填充劑組合物，且更具體地涉及包括抗氧化劑的可注射皮膚填充劑組合物。[0005]皮膚衰老為一種漸進的現象，它隨著時間的推移而發(fā)生且可受生活方式因素(諸如飲酒、吸煙和日光照射)的影響。面部皮膚衰老的特征為萎縮、松弛和發(fā)胖。萎縮對應于皮膚組織厚度的大量減少。皮下組織的松弛導致皮膚過量和下垂并且導致面頰和眼瞼的外觀下垂。發(fā)胖是指通過面部和頸部的底部腫脹而過量重量的增加。這些變化通常與干燥、彈性的喪失和粗糙的紋理相關。[0006]透明質酸(hyaluronan),也稱為透明質酸(hyaluronicacid)(HA),為廣泛分布在人體的結締、上皮和神經組織中的非硫酸化的糖胺聚糖。透明質酸大量存在于皮膚的不同層中，在那里其具有多個功能諸如(如)確保良好的水合，有助于細胞外基質的組化，充當填充劑物質；并參與組織修復機制。然而，隨著年齡的增長，皮膚中存在的透明質酸、膠原蛋白、彈性蛋白和其它基質聚合物的量會減少。例如，反復暴露于紫外光(如來自太陽)引起皮膚細胞降低其透明質酸的產量以及增加透明質酸降解的速率。該透明質酸的喪失產生各種皮膚狀況諸如(如)患有缺陷、瑕疵、疾病和/或病癥等。例如，皮膚中的水含量和皮膚組織中透明質酸水平之間存在密切相關性。隨著皮膚衰老，皮膚中透明質酸的數量和質量減少。這些變化導致皮膚干燥并且產生皺紋。[0007]因為填充劑可替換喪失的內源性基質聚合物或增強/促進現有基質聚合物的功能，所以皮膚填充劑可用于治療軟組織病患以及用于其它皮膚治療以便治療這些皮膚狀況。在過去，已將此類組合物用于化妝品應用以填充皺紋、紋、褶皺、疤痕和增強皮膚組織，諸如(如)使薄唇豐滿或填充凹眼或淺頰。一種常見的用于皮膚填充劑組合物的基質聚合物為透明質酸。因為透明質酸對人體來說為天然的，它一般具有很好的耐受性并且對治療多種皮膚狀況具有相當低的風險。[0008]最初地，包含透明質酸的組合物由天然存在的聚合物制得，所述聚合物以未交聯(lián)的狀態(tài)存在。作為皮膚填充劑，天然存在的透明質酸盡管對水分子顯示出極好的生物相容性和親和力，但是顯示出弱的生物力學性質。一個主要的原因為該聚合物為未交聯(lián)的，所以其高度可溶且因此當將其施用于皮膚區(qū)域時，其被快速地清除。這種體內清除主要由聚合物的快速降解來實現，所述快速降解主要為經由透明質酸酶的酶降解和經由自由基的化學降解。因此，盡管仍具有商業(yè)用途，但是包含未交聯(lián)的透明質酸聚合物的組合物易于在施用之后幾天內進行降解且因此需要相當頻繁的再注入以維持其皮膚改善效果。[0009]為了使這些體內降解途徑的影響最小化，將基質聚合物彼此交聯(lián)以形成穩(wěn)定的水凝膠。因為包含交聯(lián)的基質聚合物的水凝膠為較多固體物質，所以包含此類水凝膠的皮膚填充劑在植入點處保持時間更長。此外，這些水凝膠更適于用作皮膚填充劑因為其較多固體的性質改善填充劑的機械性能，使填充劑更好的舉起并填充皮膚區(qū)域。透明質酸聚合物通常與交聯(lián)劑交聯(lián)以在透明質酸聚合物之間形成共價鍵。此類交聯(lián)的聚合物形成對降解更耐受的水溶性較小的水凝膠網絡，并因此比未交聯(lián)的透明質酸組合物需要較低頻率的再注入。[0010]維生素C，也稱為抗壞血酸或AsA，以抗氧化劑而熟知，其還原且因此中和活性氧物質(諸如過氧化氫)從而降低對各種臨床有益的氧化應激，包括治療心血管疾病、高血壓、慢性炎性疾病、糖尿病和具有重度燒傷的病患。例如，除了這些益處之外，維生素C充當抗炎劑并促進膠原蛋白生成和血管生成。已知維生素C通過在酶促反應中充當輔因子以促進膠原蛋白形成、生長并維持血管和軟骨來促進膠原蛋白生成和/或血管生成。已知維生素C抑制酪氨酸酶的生物學功能以預防黑色素形成或減輕黑色素沉著。由于這些原因，開發(fā)含有維生素C的皮膚填充劑組合物存在關注。[0011]維生素C在暴露于空氣、光和熱時一般為不穩(wěn)定的。在某些水平時,它也被認為具有細胞毒性。當將維生素C與透明質酸凝膠物理混合并注入皮膚時，所述維生素C在小于一周內從該混合物中完全釋放。[0012]期望提供具有維生素C或其它維生素的可注射的基于透明質酸的組合物，所述組合物具有持續(xù)釋放速率，即超過幾周甚至幾個月而非幾天的釋放速率。然而，已證明開發(fā)包含維生素的穩(wěn)定的、有效的、持續(xù)釋放的皮膚填充劑產品為困難的。本發(fā)明提供包括綴合的維生素(例如，維生素衍生物)的改善的基于透明質酸的皮膚填充劑組合物。[0013]概述[0014]本發(fā)明提供用于治療皮膚狀況的新型皮膚填充劑。更具體地說，本發(fā)明提供一般包含生物相容的聚合物(例如,透明質酸)和維生素(例如,維生素C，例如維生素C衍生物)的有效的、長效的、治療的皮膚填充劑組合物。[0015]在本發(fā)明的一個方面，聚合物為多糖，例如，透明質酸。所述透明質酸包括交聯(lián)的組分。維生素可包含維生素C，例如維生素C衍生物。更具體地說，維生素C為L-抗壞血酸2-葡糖苷(AA2G)、抗壞血酸基3-氨丙基磷酸酯(維他精)和抗壞血酸磷酸酯鈉(AA2P)中的至少一種。[0016]維生素一般被定義為對正常生長和營養(yǎng)是必需的并且由于它們不能通過身體來合成所以在飲食中需要量較小的任一組有機化合物。[0017]在本發(fā)明的一個方面，維生素為維生素衍生物且通過合適的反應過程，例如，醚化、酰胺化和酯化(estherification)共價綴合于聚合物。[0018]綴合度為至多約5mol%、至多約1Omol%、至多約15mol%、至多約2Omol%、至多約25mol%'至多約30mol%或至多約4Omol%。[0019]在本發(fā)明的另一方面，制備可注射皮膚填充劑組合物的方法包括交聯(lián)的透明質酸和綴合的維生素C，如所提供。[0020]在本發(fā)明的再另一方面，提供治療皮膚缺陷的方法，所述方法包括根據本發(fā)明將組合物引入皮膚。[0021]附圖簡述[0022]圖1表示L-抗壞血酸2-葡糖苷(AA2G)的結構。[0023]圖2表示抗壞血酸基3-氨丙基磷酸酯(維他精)的結構。[0024]圖3表示抗壞血酸磷酸酯鈉(AA2P)的結構。[0025]圖4表示1，4-丁二醇二縮水甘油醚(BDDE)的結構。[0026]圖5表示季戊四醇縮水甘油醚(Star-PEG環(huán)氧化物)的結構。[0027]圖6表示季戊四醇(3-氨丙基)醚(Star-PEG胺)的結構。[0028]圖7為示出根據本發(fā)明的各種皮膚填充劑組合物的綴合度和G’值的表。[0029]圖8為示出根據本發(fā)明的HA-AA2G(BDDE)皮膚填充劑組合物的綴合度、HA濃度和G’值的表。[0030]圖9為示出α-葡糖苷酶濃度對來自AA2G-PBS溶液的AsA釋放的影響的表。[0031]圖10示出表示根據本發(fā)明游離的AsA從綴合的皮膚填充物的釋放概況(持續(xù)釋放)(AA2G轉化(mol%)對比反應時間)。[0032]圖1lA和IlB示出根據本發(fā)明的各種皮膚填充劑的其它釋放數據。[0033]詳述[0034]在本發(fā)明的一個方面，提供皮膚填充劑組合物，所述組合物一般包含生物相容性聚合物，例如，多糖諸如交聯(lián)的透明質酸和共價綴合于所述聚合物的維生素C衍生物。組合物為皮膚新膠原蛋白合成以及其它治療或化妝益處提供持續(xù)釋放的維生素C。當(例如)經皮內注射引入皮膚時，所述組合物與體內的內源性酶反應，并隨著時間的推移，經由酶裂解體內生成生物活性維生素C。在為期幾周或幾月內，隨著維生素C從組合物中釋放，其伴隨的益處可被身體利用。[0035]所述聚合物可選自由以下組成的聚合物:蛋白質、肽和多肽、聚賴氨酸、膠原蛋白、前膠原蛋白、彈性蛋白和層粘蛋白。[0036]所述聚合物可選自由以下組成的聚合物的組:具有羥基、胺和羧基官能團的合成聚合物、聚(乙烯醇)、聚乙二醇、聚乙烯胺、聚丙烯胺、脫乙酰基聚丙烯酰胺、聚丙烯酸和聚甲基丙烯酸。所述聚合物可選自由樹枝狀或分枝狀聚合物包括樹枝狀多元醇和樹枝狀多胺組成的聚合物。所述聚合物可選自由具有羥基、胺和羧基官能團的固體表面組成的聚合物的組。[0037]多糖可為選自以下的多糖:包括淀粉及其衍生物；葡聚糖及其衍生物；纖維素及其衍生物；甲殼質和脫乙酰殼多糖和藻酸鹽及其衍生物。[0038]在本發(fā)明的示例性實施方案中，聚合物為糖胺聚糖。本文公開的水凝膠組合物可進一步包含兩種或多種不同的糖胺聚糖聚合物。如本文所用，術語“糖胺聚糖”與“GAG”和“粘多糖”同義且是指由重復二糖單元組成的長的無支鏈多糖。重復單元由連接于己糖胺(含有氮的六碳糖)及其藥學上可接受的鹽的己糖(六碳糖)或己糖醛酸組成。GAG家族的成員在己糖胺、己糖或己糖醛酸單元的類型中有差別，它們含有，諸如(如)葡糖醛酸、艾杜糖醛酸、半乳糖、半乳糖胺、葡糖胺且也可在糖苷鍵的幾何結構中有差別。任何糖胺聚糖聚合物可用于本文公開的水凝膠組合物條件是糖胺聚糖聚合物改善皮膚的狀況。糖胺聚糖的非限制性實例包括硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角質素、透明質酸。糖胺聚糖可接受鹽的非限制性實例包括鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽及其組合。本文公開的可用于水凝膠組合物及方法的糖胺聚糖及其所得聚合物描述于(如)Piron和Tholin,PolysaccharideCrosslinking,HydrogelPreparation,ResultingPolysaccharides(s)andHydrogel(s),usesThereof,美國專利公開2003/0148995；Lebreton,Cross-LinkingofLowandHighMolecularWeightPolysaccharidesPreparationofInjectableMonophaseHydrogels;Lebreton，ViscoelasticSolutionsContainingSodiumHyaluronateandHydroxypropylMethylCellulose,PreparationandUses，美國專利公開2008/0089918;Lebreton，HyaluronicAcid-BasedGelsIncludingLidocaine，美國專利公開2010/0028438;和PolysaccharidesandHydrogelsthusObtained，美國專利公開2006/0194758JfIDiNapoli，CompositionandMethodforIntradermalSoftTissueAugmentation，國際專利公開W02004/073759，其每一篇通過引用全文并入本文。本文公開的可用于水凝膠組合物的GAG可商購獲得，諸如(如)hyaluronan-baseddermalfillersJUVEDERM",JUVEDERMii30,JUVEDERMiiUltra,JUVEDERM"UltraPlus,JUVEDERM?UltraXC知JUVEDERM?UltraPlusXC(AllerganInc,Irvine,California)。表I列出代表性GAG。【權利要求】1.一種可注射皮膚填充劑，其包含:透明質酸；和共價綴合于所述透明質酸的維生素C衍生物；其中綴合度在約311101%和約4011101%之間。2.根據權利要求1所述的皮膚填充劑組合物，其中所述透明質酸與Star-PEG環(huán)氧化物交聯(lián)。3.根據權利要求1所述的皮膚填充劑組合物，其中所述透明質酸與Star-PEG胺交聯(lián)。4.根據權利要求1所述的皮膚填充劑組合物，其中所述透明質酸與BDDE交聯(lián)。5.根據權利要求4所述的皮膚填充劑，其中綴合度在約3m0l%和約15m0l%之間。6.根據權利要求1所述的皮膚填充劑，其中維生素C衍生物為AA2G。7.根據權利要求1所述的皮膚填充劑，其中所述維生素C衍生物為維他精。8.根據權利要求1所述的皮膚填充劑，其中所述維生素C衍生物為AA2P。9.在治療皮膚缺陷時使用的根據權利要求1所述的皮膚填充劑，其中當被引入人類皮膚時，將抗壞血酸釋放至人類保持至少約I個月且至多約20個月。10.一種可注射皮膚填充劑，其包含:與StarPEG胺交聯(lián)且綴合度在約311101%和約40mol%之間的透明質酸；和`共價綴合于所述透明質酸的AA2P其中當所述皮膚填充劑被引入人類皮膚時，釋放抗壞血酸至人類保持至少約I個月且至多約20個月。11.一種制備皮膚填充劑的方法，其包括以下步驟:提供透明質酸；使交聯(lián)劑與維生素C衍生物反應；將反應的交聯(lián)劑和維生素C衍生物添加至透明質酸以形成包括共價綴合于維生素C的交聯(lián)透明質酸組合物；和勻化且中和所述交聯(lián)透明質酸組合物以獲得綴合度在約3m0l%和約40mOl%之間的可注射凝膠。12.根據權利要求11所述的方法，其中所述反應步驟包括使維生素C衍生物與交聯(lián)劑預反應以實現由交聯(lián)劑、未反應的交聯(lián)劑和游離的AA2G封端的含有維生素C衍生物的組合物。13.根據權利要求12所述的方法，其中所述交聯(lián)劑為BDDE且維生素C衍生物為AA2G、維他精和SAP。14.根據權利要求12所述的方法，其中所述交聯(lián)劑為4-臂環(huán)氧化物且維生素C衍生物為AA2G、維他精和SAP。15.根據權利要求11所述的方法，其中所述交聯(lián)劑為Star-PEG環(huán)氧化物。16.根據權利要求11所述的方法，其中所述交聯(lián)劑為Star-PEG胺。17.根據權利要求11所述的方法，其中維生素C衍生物為AA2G。18.根據權利要求11所述的方法，其中所述維生素C衍生物為維他精。19.根據權利要求11所述的方法，其中所述維生素C衍生物為AA2P。20.一種處理皮膚狀況的方法，其包括將根據權利要求1所述的皮膚填充劑引入患者?！疚臋n編號】A61K8/67GK103702659SQ201280036621【公開日】2014年4月2日申請日期:2012年6月1日優(yōu)先權日:2011年6月3日【發(fā)明者】劉福田,N·J·馬內西斯,俞小杰,A·W·C·陳申請人:阿勒根公司