用于診斷和治療單純皰疹病毒1和2型的蛋白質抗原的方法和組合物的制作方法
【專利摘要】涵蓋的組合物、裝置和方法涉及來自單純皰疹病毒1型(HSV-1)和單純皰疹病毒2型(HSV-2)的多種抗原及其在疫苗、治療劑和各種診斷測試中的用途。在特別優(yōu)選的方面，抗原是免疫顯性的，并且就病原體感染的群體的血清而言具有量化且已知的相對反應性，和/或具有已知的與疾病參數的關聯。
【專利說明】用于診斷和治療單純皰疹病毒1和2型的蛋白質抗原的方法和組合物
[0001]本申請要求2011年7月I日提交的具有流水號61/503790的我們懸而未決的美國臨時申請的優(yōu)先權。
發(fā)明領域
[0002]本發(fā)明的領域是涉及單純皰疹的選擇抗原的組合物和方法，尤其由于它們涉及其在診斷、治療和治療性組合物中的用途。
[0003]發(fā)明背景
[0004]單純皰疹病毒I型(HSV-1)和單純皰疹病毒2型(HSV-2)是能夠感染哺乳動物和禽類兩者的病毒。HSVl和2型是人發(fā)病率的重大原因。HSV-2是性傳播的，并且是大多數復發(fā)性生殖器皰疹損傷的成因劑。HSV-2感染與升高的妊娠風險有關，所述妊娠風險包括自然流產，早產，和病毒對新生兒的先天性感染。另外，HSV-2的感染在暴露于HIV時也與升高的感染風險有關。不幸地，HSV-2感染經常是無癥狀的，并且大多數受感染的個體不知道他們被感染。對HSV-2狀態(tài)的這種無知是傳播給未感染配偶的主要促成因素。比較而言，HSV-1通常在童年期間傳播,并且主要與導致“感冒瘡(cold sores)”的口唇(orolabial)感染有關。然而，HSV-1可以引起角膜感染，其可以導致失明。不幸地，損傷的此種差別分布不足以區(qū)別HSV-1和HSV-2。
[0005]HSV-1和HSV-2兩者都在其宿主中建立終身的潛在性感染。這些感染以感染的周期性再活化和所得的病毒脫落為特征。由于HSV-1和HSV-2感染的不同天然史和后果，精確診斷HSV型對于患者管理和預后，以及對于控制潛在傳播是重要的。例如，知道特定的HSV型可以幫助患者采取適當的防范以防止疾病傳播給他人。具體地，未被認出的HSV-2感染的鑒定可以用于注意監(jiān)測妊娠期間的病毒脫落，由此使先天性感染的風險最小化。
[0006] 作為HSV定型(typing)的其它復雜情況，HSV-1和HSV-2顯示緊密的氨基酸序列同源性，因此展現出廣泛的抗原性交叉反應性。少數抗原是足夠趨異的，使得它們容許區(qū)別HSV-1和HSV-2感染，盡管僅HSV-1和-2的US4/糖蛋白G (gG)足夠趨異以提供有用的靈敏性和特異性參數。目前的診斷方法包括酶聯免疫測定法(ELISA)、熒光免疫測定法(FIA)，及類似的測試形式。一種此類測試記載于美國專利N0.6，265，176，其中表征了患者抗體對固定化HSV抗原的結合。此類測試一般表征患者對病毒的免疫應答，并且因此經常利用來自HSV-1和HSV-2的重組抗原。例如，EPl 982 993 A2描述了多聚體融合肽的用途，所述多聚體融合肽摻入糖蛋白G的部分以檢測HSV-1和HSV-2。本文中討論的這些和所有其它外來材料通過提及完整并入。在并入參考文獻中的定義或術語的使用與本文中提供的所述術語的定義不一致或矛盾的情況中，適用本文中提供的所述術語的定義，并且參考文獻中的所述術語的定義不適用。目前，得到FDA批準的唯一測試基于gG-Ι和gG-2反應性。含糊的結果在此類測試基于單一診斷性抗原的使用時是常見的，因為不同的感染患者可以具有不同水平的免疫應答。雖然基于gG的測試顯示卓越的特異性，就像任何單一抗原測試一樣，但是有風險從僅缺乏針對gG的抗體的感染個體獲得假陰性結果。因此，隨訪測試，諸如全病毒Western印跡可能是精確診斷需要的。不幸地，目前的測試方法僅產生部分有用的結果。此類部分表征的平臺上的測試性能廣泛變化，并且交叉反應性可以容易地從此類復雜混合物產生假陽性結果。
[0007]響應HIV感染的高流行性和潛在負面后果，已經嘗試開發(fā)疫苗。此類開發(fā)需要鑒定不僅對HSV特異性，而且還具有抗原性且能夠產生保護性免疫應答的抗原。例如，美國專利申請N0.2004/241182A1公開了 HSV-2蛋白，其鑒定為有抗原性且篩選T細胞活化以用于疫苗。類似地，EP2 272 859 A2描述了與佐劑一起使用HSV-2肽，所述佐劑選擇為誘導Thl型免疫應答。W02004/026265A2中描述了不同的辦法，其利用在引入哺乳動物中時導致肽表達的遺傳構建體。此類遺傳構建體從HSV-1序列文庫生成，以誘導免疫應答。后續(xù)用HSV-1對動物的攻擊用于鑒定產生保護性免疫應答的構建體。雖然此類辦法在鑒定免疫原性且保護性抗原中具有至少一些效用，然而，其必需限于生成已經經歷真核加工，例如糖基化和陪伴蛋白輔助折疊的肽和蛋白質。此類肽和蛋白質可能難以大規(guī)模生成，因為此類方法一般牽涉化學合成或使用容易培養(yǎng)的遺傳修飾細菌。
[0008]因此，仍然存在對提供與HSV相關的診斷和治療應用的抗原和抗體檢測和監(jiān)測的改善的組合物和方法的較大的、未滿足的需要。
[0009]發(fā)明概述
[0010]在解決與HSV相關的診斷和治療應用的抗原和抗體檢測和監(jiān)測的改善的組合物和方法的需要中，本發(fā)明人利用蛋白質組微陣列方法來對針對多種HSV蛋白的感染期間的抗體應答確定概況，以鑒定生成具有高親和力和特異性的抗體的抗原，所述抗體可以具有更精確的血清診斷和治療效果。
[0011 ] 生成蛋白質組微陣列，其展示由HSV-1和HSV-2編碼的每種蛋白質，如基于大腸桿菌(E.coli)的可讀框(ORF)體外轉錄/翻譯中表達的。用來自一組眼和/或生殖器皰疹感染患者的血清篩選如此生成的微陣列，所述血清已經使用基于gG-Ι和gG-2的商業(yè)HSV血清分型試劑盒測定血清型。令人驚訝地，此分析證明了雖然HSV-1血清陽性供體與陣列上的HSV-1抗原良好起反應，并且證明了與HSV-2抗原的最小活性，HSV-2血清陽性供體與HSV-2和HSV-1抗原兩者良好起反應。如此，雖然存在有由HSV-2血清陽性供體特異性識別的幾種HSV-2抗原，但是HSV-1血清陽性供體僅特異性識別HSV-1US8(糖蛋白E)。發(fā)現表征受感染的個體對HSV的抗體應答的多重蛋白質組學方法，其中與高度特異性抗原結合使用高度敏感性抗原。以發(fā)明人所知，表征對HSV感染的應答的此類多重方法先前尚未嘗試。利用本文中公開的多重測試，發(fā)明人發(fā)現了特定的且交叉反應性抗原，其對目前測試方法提供改善的靈敏性和特異性，所述目前測試方法僅依賴于類型特異性抗原，并且可以產生較高的假陰性率。另外，本文中公開的多重測試可以在單一測試中診斷HSV-1和HSV-2，其與需要針對HSV-1和HSV-2的分開測試的目前測試方法形成對比。
[0012]因此，這些結果提供了 HSV相關感染的改善的診斷，并且進一步為針對HSV和哺乳動物、禽類、和人中由HSV觸發(fā)的疾病和病癥的血清診斷、生物標志物、疫苗、和治療性產品開發(fā)提供了清楚的、截然不同的抗原靶物。另外，抗原可以在大腸桿菌中表達，這簡化其大規(guī)模生產。
[0013]如此，本發(fā)明主題提供了可以精確調查HSV誘發(fā)性疾病的新的且有用的工具。更具體地，本發(fā)明主題提供了用于鑒定、分析和監(jiān)測就各種哺乳動物、禽類和人疾病而言具有診斷、預后和治療價值的特定HSV抗原，或抗原組的工具、方法和組合物。
[0014]本發(fā)明主題可以用于鑒定與HSV和HSV相關感染和疾病相關的生物學相關抗原，抗原組，抗體和抗體組。發(fā)明主題也可以經由縱向監(jiān)測針對選擇的HSV抗原的抗體或抗體組的反應性實現治療效力的監(jiān)測和分析。本發(fā)明主題還提供檢測針對特定HSV蛋白抗原，或抗原組的抗體反應性，其在診斷和治療HSV觸發(fā)的疾病和病癥中是重要的，所述疾病和病癥包括但不限于生殖器皰疹損傷，自然流產，早產，先天性皰疹，口唇感染(感冒瘡)，皰疫性瘭疽(herpetic whitlow),和皰疫誘發(fā)性失明(herpes-1nduced blindness)。涵蓋的組合物、裝置和方法包含來自HSV的抗體反應性抗原，其可以用作疫苗，診斷性標志物，及治療劑。在特別優(yōu)選的方面，HSV抗原具有就受HSV感染的群體的血清而言量化且已知的相對反應性，并且具有已知的與疾病參數的關聯。
[0015]如此，本發(fā)明主題提供了針對特定HSV抗原或抗原組的抗體的鑒定、分析和監(jiān)測，其在各種HSV觸發(fā)的病癥和疾病的診斷和/或治療中是重要的。發(fā)明主題還提供了經由下列各項的組合精確調查HSV感染和疾病的工具和方法:抗體檢測和監(jiān)測，及表征血清樣品，尤其在它們涉及其在診斷和治療組合物和方法中的用途時。
[0016]發(fā)明概念的抗原組合物可以包括兩種或更多種與載體結合的抗原，其中至少兩種抗原與來自受HSV-1感染的個體的血清的抗體具有量化的且已知的相對反應性，且其中至少兩種抗原具有與疾病參數的關聯。此類抗原可以選自US3，US6, US8, US9, UL7, UL20, UL22,UL36,和UL44，和/或這些蛋白質/肽的片段。在發(fā)明概念的一些實施方案中，針對此類組合物的至少兩種抗原的抗體可以在較高百分比的暴露于抗原的群體中存在，例如約40%或更多。在此類實施方案中，抗體的平均結合親和力和/或平均數量可以在由患者生成的抗體的結合親和力和/或數量的上部三分位數(upper tertile)中。已知的相對反應性可以是與抗體反應性的親合力或強度和/或疾病的活性狀態(tài)。疾病參數可以是對病原體和/或HSV (諸如HSV-1)的暴露狀態(tài)(例如目前或先前的暴露)，病原體和/或HSV (諸如HSV-1)的感染狀態(tài)(例如急性，潛在性，或復發(fā)性)，和免疫狀態(tài)(例如，無，部分，或完全)。
[0017] 在發(fā)明概念的另一個實施方案中，抗原組合物可以包含兩種或更多種與載體結合的抗原，其中至少兩種抗原與來自受HSV-2感染的個體的血清的抗體具有量化的且已知的相對反應性，且其中至少兩種抗原具有與疾病參數的關聯。此類抗原可以選自UL1，UL3，UL5，UL6, UL7, UL10, UL14, UL17, UL18, UL23, UL26, UL26.5，UL27, UL28, UL32, UL34, UL41, UL42,UL44, UL45, UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7, US8, US9 和 US11，和 / 或這些蛋白質 / 肽的片段。在發(fā)明概念的一些實施方案中，針對此類組合物的至少兩種抗原的抗體可以在較高百分比的暴露于抗原的群體中存在，例如約40%或更多。在此類實施方案中，抗體的平均結合親和力和/或平均數量可以在由患者生成的抗體的結合親和力和/或數量的上部三分位數(upper tertile)中。已知的相對反應性可以是與抗體反應性的親合力或強度和/或疾病的活性狀態(tài)。疾病參數可以是對病原體和/或HSV(諸如HSV-2)的暴露狀態(tài)(例如目前或先前的暴露)，病原體和/或HSV (諸如HSV-2)的感染狀態(tài)(例如急性，潛在性，或復發(fā)性)，和免疫狀態(tài)(例如，無，部分，或完全)。
[0018]發(fā)明概念的另一種抗原組合物可以包含兩種或更多種與載體結合的抗原，其中至少兩種抗原與來自受HSV-1和HSV-2感染的個體的血清的抗體具有量化的且已知的相對反應性，且其中至少兩種抗原具有與疾病參數的關聯。此類抗原可以選自:對于HSV-1為US3，US6, US8, US9, UL7, UL20, UL22, UL36 和 UL44 和 / 或其片段，和對于 HSV-2 為 ULl, UL3, UL5,UL6, UL7, UL10, UL14, UL17, UL18, UL23, UL26, UL26.5，UL27, UL28, UL32, UL34, UL41, UL42, UL44，UL45, UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7, US8, US9 和 US11,和 / 或其片段。在發(fā)明概念的一些實施方案中，針對此類組合物的至少兩種抗原的抗體可以在較高百分比的暴露于抗原的群體中存在，例如約40%或更多。在此類實施方案中，抗體的平均結合親和力和/或平均數量可以在由患者生成的抗體的結合親和力和/或數量的上部三分位數(upper tertile)中。已知的相對反應性可以是與抗體反應性的親合力或強度和/或疾病的活性狀態(tài)。疾病參數可以是對病原體和/或HSV的暴露狀態(tài)(例如目前或先前的暴露)，病原體和/或HSV的感染狀態(tài)(例如急性，潛在性，或復發(fā)性)，和免疫狀態(tài)(例如，無，部分，或完全)。
[0019]在發(fā)明概念的一些實施方案中，載體可以是適合于用于疫苗的藥學可接受載體。在此類實施方案中，疫苗可以包括4種或更多種抗原和/或其片段；此類抗原或其片段可以是重組的和/或至少部分純化的。在發(fā)明概念的另一個實施方案中，載體可以是適合于用于診斷測定法的固體和/或不溶相，諸如例如陣列或微陣列，可以將抗原和/或其片段在此類載體上布置。在此類實施方案中，抗原或其片段可以是重組的，并且可以為至少60%的純度或者至少部分純化的。
[0020]本發(fā)明的各種目的、特征、方面和優(yōu)點從本發(fā)明優(yōu)選實施方案的以下詳細描述看會變得更加顯而易見。
[0021]附圖簡述
[0022]圖1描繪了通過PCR和重組克隆從HSV基因組(或ORFeome)衍生的可表達0RF。圖1A顯示了按預期大小安排的PCR擴增子文庫的凝膠。圖1B顯示了將PCR擴增子重組克隆入pXi中后相應DNA微量制備的凝膠。C-pXi=對照(非重組)pXi質粒。
[0023]圖2描繪了來自感染的和非感染的個體的人血清以及商業(yè)供應的血清對照材料的HSV-1和HSV-2抗體概況的熱圖。柱(column)對應于用于探查HSV和對照抗原陣列的血清樣品，在圖的底部顯示樣品大小。血清的血清型在圖的頂部顯示，并且用作樣品分類的參照。將患者血清在圖中分類成血清陰性，僅HSV-1血清陽性，僅HSV-2血清陽性，和HSV-1和-2血清陽性組。熱圖中的行對應于陣列上的抗原，并且分成HSV-1和HSV-2抗原-向右列出，通過按降序處理相應血清陽性群體的平均信號分級。
[0024]圖3描繪了 HSV-1或HSV-2血清陽性供體與血清陰性供體的比較結果。直方圖顯示血清陰性，HSV-1血清陽性和HSV-2血清陽性供體的陣列信號。通過T檢驗將HSV-1血清陽性供體(在圖3A中)和HSV-2血清陽性供體(在圖3B中)對每種抗原的應答與血清陰性供體的應答比較，并且顯示對直方圖上覆蓋的經Benjamin1-Hochberg校正的P值(pBH)。
[0025]圖4描繪了 HSV-1和HSV-2血清陽性供體之間的比較。比較HSV-1血清陽性供體對每種抗原的應答與HSV-2血清陽性供體的那些應答。
[0026]圖5描繪了識別頻率(FR)分析。對每種血清反應性抗原呈血清陽性的數目以群體的百分比顯示。圖5A顯示了由大于40%HSV-1血清陽性群體識別的血清反應性HSV-1抗原；抗原通過按降序處理HSV-1血清陽性群體頻率來分級。使US8/gE與UL22/gH和/或UL44/gC多重化的計算結果在插圖中以右側顯示。圖5B顯示了大于50%HSV-2血清陽性群體識別的血清反應性HSV-2抗原；抗原通過按降序處理HSV-2血清陽性群體頻率來分級。在兩幅小圖中以星號(*)標示最強區(qū)別性抗原。
[0027]發(fā)明詳述
[0028]本發(fā)明主題提供了鑒定、分析和監(jiān)測針對特定HSV抗原或抗原組的抗體反應性，其具有診斷、預后和治療價值，具體地就各種疾病和病癥而言。本發(fā)明主題還提供了經由下列各項的組合精確調查HSV誘導的感染、病癥和疾病的工具和方法:抗體反應性檢測和監(jiān)測,及表征血清樣品。
[0029]應當注意到，在以下描述中，可以通過編碼蛋白質抗原的基因的基因描述符和/或蛋白質抗原的名稱鑒定抗原。如此，應當理解，在上下文指示序列或抗原是蛋白質序列的情況中，所述序列或抗原的基因名稱表示所述基因的蛋白質產物。在發(fā)明概念的一些實施方案中，HSV抗原具有依照NCBI登錄號NC_001806和NC_001798的序列(分別對于HSV-1株17和HSV-2株333)。在提及抗體的情況中，公認的是雖然此類抗體可以稱為已經自血清獲得，所述抗體也可以源自其它來源，包括但不限于粘液、唾液、精液、淚液、尿液、糞、房水、膿液、腦脊液、淋巴液、和滑液。
[0030]本發(fā)明主題還涉及鑒定特定HSV抗原，其觸發(fā)與各種HSV疾病和病癥有關的抗體反應性，其中特定抗原具有來自HSV疾病或病癥患者群體的血清的預先確定的抗體反應性。如此，此類特定抗原可以具有在相對較大的HSV感染宿主組中引發(fā)抗體應答的統(tǒng)計學高概率。
[0031]在一個方面，本發(fā)明主題關注預測宿主被HSV-1，HSV_2，或HSV-1和HSV-2兩者感染(或者已經對其暴露)的可能性的方法，其通過至少部分測定自宿主獲得的血清樣品中針對一種或多種抗原或其變體的抗體反應性進行。在此類實施方案中，抗原可以選自下組:來自 HSV-1 的 ULl, UL3, UL6, UL7, UL10, UL14, UL16, UL20, UL21, UL22, UL24, UL26, UL26.5，UL30，UL36, UL38, UL39, UL42, UL44, UL46, UL49, UL49.5，UL50, UL51, USl.5，US2, US3, US4, US6,US8, US8.5，US9, USlO 和 USl I，和來自 HSV-2 的 ULl, UL3, UL5, UL6, UL7, UL10, ULl 1，UL14, UL16，UL17, UL18, UL23, UL26, UL26.5，UL27, UL28, UL32, UL34, UL36, UL41, UL42, UL44, UL45, UL46，UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7, US8, US8A, US9, US10,和 USlI。對下列一種或多種反應性的一種或多種抗體的存在指示宿主被HSV感染和/或已經暴露于HSV的可能性升高:來自 HSV-1 的 ULl, UL3, UL6, UL7, UL10, UL14, UL16, UL20, UL21, UL22, UL24, UL26, UL26.5，UL3O, UL36, UL38, UL39, UL42, UL44, UL46, UL49, UL49.5，UL50, UL51, USl.5，US2, US3, US4, US6, US8, US8.5，US9, USlO 和 USl I 和來自 HSV-2 的 ULl, UL3, UL5, UL6, UL7, UL10, ULl 1，UL14, UL16，UL17, UL18, UL23, UL26, UL26.5，UL27, UL28, UL32, UL34, UL36, UL41, UL42, UL44, UL45, UL46，UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7, US8, US8A, US9, US10,和 USlI。
[0032]在一個方面，本發(fā)明主題關注預測宿主被HSV-1而非HSV-2感染的可能性的方法，其包括從自宿主獲得的血清樣品測定針對一種或多種抗原或其變體的抗體反應性，其中抗原選自下組:來自 HSV-1 的 US3, US6, US8, US9, UL7, UL20, UL22, UL36 和 UL44。
[0033]在另一個方面，本發(fā)明主題關注預測宿主被HSV-2而非HSV-1感染的可能性的方法，其包括從自宿主獲得的血清樣品測定針對一種或多種抗原或其變體的抗體反應性，其中抗原選自下組:來自 HSV-2 的 ULl, UL3, UL5, UL6, UL7, UL10, UL14, UL17, UL18, UL23, UL26,UL26.5，UL27, UL28, UL32, UL34, UL41, UL42, UL44, UL45, UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7, US8US9 和 USlI。
[0034]在一個方面，本發(fā)明主題關注預測患者患有HSV誘導的感染、疾病或病癥的可能性的方法，其包括從自宿主獲得的血清樣品測定針對一種或多種HSV抗原或其變體的抗體反應性，其中抗原選自特定抗原組；其中針對一種或多種所述特定抗原的抗體反應性指示宿主患有HSV誘導的疾病或病癥的可能性升高。
[0035]在多個實施方案中，測定至少2，或至少5，或至少10，或至少15，或至少20，或至少25種抗體的反應性水平?？贵w與發(fā)明概念的抗原的反應性可以通過用合適的儀器表征放射、透射或反射光、酶活性、熒光、光散射、熒光偏振、磷光、化學發(fā)光、電化學發(fā)光、和/或電流計信號測定。例如，可以在微孔板中實施ELISA，并且在商業(yè)微板閱讀器中以比色法測量結果。在另一個例子中，測試條結果可以通過視覺檢查讀出或者可以插入掃描儀中。
[0036]雖然可以以本領域中公知的多種方式實施反應性測定，但是一般優(yōu)選的是，在多重形式中，并且尤其在陣列，ELISA，或條測定法或“量桿(dipstick)”形式中完成測定。陣列可以是基本上平面的，其中各個抗原以離散“點”在測試表面上固定。在此類平面陣列上的抗體反應性可以例如使用檢測測試點處的顏色變化的掃描儀或CCD照相機表征?；蛘撸嘀匦问娇梢园黧w陣列，其中對與抗原偶聯的懸浮微粒的離散群體測定抗體反應性水平?？梢允褂昧魇綑z測儀，諸如例如表征在其移動通過檢測儀時從懸浮微粒發(fā)出的熒光的細胞分選儀用此類流體陣列表征抗體反應性。如此，涵蓋具有至少I種，更通常至少2種，甚至更通常至少5種，或至少10種，或至少15種，或至少20種，或至少25種抗原的陣列或條測定法。也涵蓋具有至少I種，更通常至少3種的ELISA，或條測定法。
[0037]在另一個方面，本發(fā)明主題關注預測宿主具有HSV感染、疾病、或病癥的可能性的方法，其包括在自宿主獲得的血清樣品中測定針對一種或多種特定的HSV抗原或其變體的預后性抗體反應性，并且相對于作用為內部對照的血清樣品中一種或多種非預后性抗體反應性的水平標準化?；蛘?，可以利用參照試劑組，其提供可以用于標準化的一種或多種抗體反應性外部對照水平。在此類實施方案中，針對一種或多種所述特定HSV抗原的抗體反應性指示宿主具有疾病或病癥的可能性升高。
[0038] 在另一個方面，本發(fā)明主題關注預測宿主具有HSV感染、疾病或病癥的可能性的方法，其包括在自宿主獲得的血清樣品中測定針對上文呈現的一種或多種HSV抗原或其變體的預后性抗體反應性，并且相對于作用為內部對照的血清樣品中一種或多種非預后性抗體反應性的水平標準化?；蛘?，可以利用參照試劑組，其提供可以用于標準化的一種或多種抗體反應性外部對照水平。在此類實施方案中，針對一種或多種所述特定HSV抗原的抗體反應性指示宿主具有疾病或病癥的可能性升高。
[0039]在一個不同方面，發(fā)明主題包含在表面上固定化的上文呈現的兩種或更多種HSV抗原，其中HSV抗原可以與單一疾病或超過一種疾病有關。在發(fā)明概念的一些實施方案中，測試表面可以包含HSV抗原變體，包括融合肽，截短形式，綴合形式，非糖基化形式，多聚體形式，重組形式，嵌合形式，等等。
[0040]在一個實施方案中，發(fā)明主題關注預測患者被HSV感染的可能性的方法，其如下進行:
[0041](a)在自患者獲得的樣品中測定針對上文呈現的HSV抗原或其變體的抗體的反應性水平，任選地，相對于所述樣品中針對HSV抗原(或其變體)的其它抗體的反應性水平，或者相對于抗體反應性水平的參照組標準化測定的反應性水平；
[0042](b)將步驟(a)中獲得的數據進行統(tǒng)計學分析；并
[0043](c)測定所述患者被HSV感染的可能性。
[0044]在又一個方面，發(fā)明主題關注為HSV患者制備個人化蛋白質組學的抗體概況的方法，其如下進行:
[0045](a)將自患者獲得的血清或其它樣品進行蛋白質陣列分析；
[0046](b)測定樣品中針對HSV抗原或其變體的一種或多種抗體的反應性水平，其中任選地，相對于對照反應性水平標準化反應性水平；并
[0047](C)創(chuàng)建匯總通過分析獲得的數據的報告。
[0048]報告可以包括預測患者中HSV感染的嚴重性和/或可能階段的可能性。在發(fā)明概念的一些實施方案中，報告可以包括所述患者的治療形式的推薦。
[0049]在別的方面，發(fā)明主題關注用于檢測和/或表征患者中的一種或多種HSV抗體的方法。本發(fā)明主題還提供了經由下列各項的組合精確調查HSV感染的工具和方法:抗體檢測和檢測，和表征血清樣品。此類調查可以例如提供涉及個體中HSV疾病進行的信息，其對于臨床醫(yī)生在選擇合適的治療模式中可以是有價值的。或者，在應用于群體時，此類調查可以提供涉及群體內HSV株的流行病學的信息，由此提供可用于診斷和控制HSV感染擴散的有價值信息。
[0050]可以通過結合構成檢測反應的HSV抗原與載體促進患者樣品中HSV抗體的檢測和/或表征。在發(fā)明概念的此類實施方案中，載體可以是固體或不溶性(即顆粒)載體，并且在陣列中的載體上布置多種HSV抗原。進一步涵蓋的是，抗原或其片段可以在粗制表達提取物中，為部分純化形式(例如小于60%的純度)或者為高度純化的形式(至少95%的純度)。在發(fā)明概念的一些實施方案中，此類HSV抗原或其片段可以純化至約1%，2%, 5%, 10%,20%, 30%40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%,或99%或更大的純度。此類陣列中的抗原可以是重組的或天然的?；蛘?，固相不需要限于平面陣列，而且還可以包括微孔板，珠，微粒，磁性應答顆粒，柱，量桿型形式，微射流裝置，等等。
[0051]有利地，憑借使用來自感染個體的抗體的鑒定，本文中鑒定的抗原已經鑒定為既是免疫原性的，又能夠在人中產生保護性免疫應答。此外，此類抗原尚未經歷真核加工，諸如糖基化，因此適合于大規(guī)模生產。因而，本文中公開的抗原可以具有作為治療性和/或保護性疫苗的效用。因此，在發(fā)明主題的另一個方面，鑒定為觸發(fā)顯著抗體反應性的HSV抗原可以在抗原組合物中利用。在此類實施方案中，抗原組合物可以包含HSV誘導的感染、疾病或病癥的兩種或更多種反應性抗原，并且與載體結合，其中此類抗原就HSV感染的群體的血清而言具有量化的且已知的相對反應性，且其中抗原具有已知的與HSV疾病參數的關聯。在一個優(yōu)選的實施方案中，抗原是多肽或其片段。
[0052]發(fā)明概念的此類疫苗實施方案可以通過結合一種或多種抗原與載體促進。因此，在發(fā)明概念的此類實施方案中，載體可以是藥學可接受載體，并且此類組合物可以配制為疫苗。在此類實施方案中，一般優(yōu)選的是，疫苗包含多種抗原。在此類實施方案中，疫苗可以包含2，3，4，5，6，7，89，10，或更多種抗原。在發(fā)明概念的一個優(yōu)選的實施方案中，疫苗包含4種抗原?；蛘撸l(fā)明概念的疫苗可以包含單一抗原。根據具體的HSV誘導的疾病或病癥，涵蓋的是，HSV抗原或其片段是至少部分純化的和/或重組的。此類HSV抗原或其片段可以純化至約 10%, 20%, 30%40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%,或 99% 或更大的純度。實施例
[0053]發(fā)明人利用微陣列對來自受感染群體的血清樣品實施蛋白質組篩選已經發(fā)現了許多能夠從多種HSV感染類型和階段觸發(fā)抗體反應性的HSV抗原。本文中呈現了依照發(fā)明主題的抗原，并且涵蓋的是，此類抗原可以單獨或更優(yōu)選地與其它抗原組合用于制造診斷裝置、治療性組合物、和疫苗。
[0054]例示性方法
[0055]血清樣品。從健康供體及從上UCI醫(yī)學中心以診斷和治療皰疹感染的患者收集血液樣品。所有感染是潛伏的，并且沒有檢查急性病例。收集所有樣品作為具有同意且在地方IRB批準下的免疫學研究的一部分。對于本研究，將血清級分從每份血液樣品分離，并在使用前于 _80°C貯存。通過 FDA 批準的商業(yè) HSV-1 和 HSV_2ELISA( HerpeSelect?; FocusDiagnostics)依照制造商的用法說明書測定所有血清。代表與患者相同地理位置(OrangeCounty, CA)的一般成年群體的對照血清在同意的情況下并在地方IRB批準下由UCI —般臨床研究中心(GCRC)收集。
[0056]HSV-1和HSV-2蛋白質組微陣列的構建。如下制作蛋白質組微陣列，即PCR擴增基因組DNA中的編碼序列，并通過同源重組將擴增子插入T7表達載體中，接著在偶聯的體外轉錄-翻譯(IVTT)中表達，并直接打印到微陣列上(Davies, D.H.等2005.ProcNatl Acad Sci U S A102:547-52; Luevano, M.等 2010.Virology405:31-40)。PCR 引物設計的基因序列獲自NCBI (對于HSV-1株17和HSV-2株333分別為登錄號NC_001806和NC_001798)。使用的基因命名如發(fā)表于洛斯阿拉莫斯國家實驗室(Los Alamos Nat1nalLaboratory) (http ://www.0ralgen.lanl.gov/)的組織的口腔病原體基因組序列數據(OralPathogen Genome Sequence Databases, ORALGEN)的。模板 DNA 是來自 DaleCarpenter 和 Steve ffechsler,加利福利亞大學(University of California),歐文眼科學部(Irvine Department of Ophthalmology)的懷慨贈品。HSV-1 株 17DNA 以克隆入粘粒中的5個重疊基因組片段提供。HSV-2株333DNA從病毒體提取的DNA制備或者購自ATCC(Manassa, Virginia)。
[0057]用于PCR擴增的引物含有對每種基因特異性的20bp核苷酸及在5’端與線性pXT7載體末端互補的20bp延伸。對于PCR，使用AccuPrime?富含GC的DNA聚合酶(Invitrogen, Grand Island, New York)或具有添加 DMSO (終濃度 2%)和 8ng/μ I BSA的 GC 緩沖液的 Phus1n? 高保真性 PCR 主混合物(Thermo Scientific, Waltham, Massac
husetts)使用降落PCR以如下的循環(huán)條件擴增基因:于98°C的初始變性/I分鐘，接著是98°C /10秒，68°C /20秒其中遞減溫度為0.5°C /循環(huán)，和72°C持續(xù)30秒/kb的20個循環(huán)，接著是98 °C /10秒，58 °C /20秒和72 °C /30秒/kb的20個循環(huán)。在感受態(tài)DH5a細胞中在PCR產物和pXT7載體之間發(fā)生體內同源重組。使用QIApr印96Turbo試劑盒(Qiagen, Venlo, Netherlands)從此培養(yǎng)物分離重組質粒。通過QC-PCR將所有重組質粒確認為含有插入物，其中使用與初始PCR中使用的引物相同的引物從重組體擴增預期大小的條帶。還通過測序確認陣列上產生強信號的質粒。
[0058]對于陣列制作，使用基于大腸桿菌的體外轉錄/翻譯表達系統(tǒng)(InvitrogenExpressway?Cel1-Free Express1n System, Invitrogen, , Grand Island, New York)表達純化的DNA微量制備。在密封384孔微孔板中制備20 μ L反應，并將其在平臺搖動器上以250rpm于24°C溫育16小時。在打印前添加蛋白酶抑制劑混合物(Roche Complete,Roche, Penzberg, Germany)和 Tween-20 至終濃度 0.05%。以 1x4 子陣列形式使用 OmniGridAccentlOO 微陣列打印機(Genomic Solut1ns, Ann Arbor, Michigan)將表達的蛋白質反應在不進一步純化的情況下打印到8墊硝酸纖維素包被的Oncyte Nova載玻片(GraceB1-Labs, Bend, Oregon)上。每個子陣列包含多個陰性對照點，其包含缺乏DNA模板的假表達反應。每個子陣列還包含4個連續(xù)稀釋的小鼠、大鼠和人IgG混合物和2個連續(xù)稀釋的人IgM的陽性對照點。使用這些陽性和陰性對照來標準化來自不同陣列的數據。陣列還包括4個連續(xù)稀釋的純化的重組埃巴病毒核抗原-1 (EBNA-1;DevaTal Inc., Hamilton, NewJersey)作為血清質量的指導。
[0059]使用針對工程化改造到每種蛋白質中的N端多聚_His(克隆 His-1, Sigma-Aldrich, St.Louis, Missouri)和 C 端 HA(克隆3F10, Roche, Penzberg, Germany)標簽的抗體監(jiān)測每個點中的蛋白質表達。首先，將陣列在蛋白質陣列封閉緩沖液(Whatman, Little Chalfont, United Kingdom)中于周圍溫度封閉30分鐘，然后用在封閉緩沖液中以1/1，000稀釋的抗標簽抗體探查I小時。然后，將載玻片在含有0.05%(V/V)Tween20的三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)緩沖鹽水(T-TBS)中清洗 3 次，并與生物素化的二抗(Jackson ImmunoResearch, West Grove, Pennsylvania) 一起溫育。在T-TBS中將載玻片清洗3次后，通過與綴合有鏈霉抗生物素蛋白的SureLiglit?P-3 (Columbia B1sciences, Columbia, Maryland) 一起溫育檢測結合的抗體。然后，將載玻片在T-TBS中清洗3次，接著在TBS中清洗3次，并在蒸餾水中浸潰，之后通過短暫離心風干。將載玻片在Perkin Elmer ScanArray共焦激光掃描儀中掃描，并使用ScanArrayExpress 軟件(Waltham, Massachusetts)獲得數據。
[0060]由于在此類測定法中不控制每個點的蛋白質濃度，不同蛋白質可以具有不同濃度，并且在比較給定血清樣品的不同蛋白質的信號強度時必須小心。然而，由于將所有陣列打印在一起，給定蛋白質的濃度在不同陣列間是恒定的。如此，可以對不同血清間的給定蛋白質的信號強度進行比較，并且與抗體滴度直接相關聯。
[0061] 為了用人血清探查，將樣品在補充有終濃度10mg/ml蛋白質的大腸桿菌裂解物(Antigen Discovery, Inc., Irvine, California)的I倍蛋白質陣列封閉緩沖液中稀釋至1/100，以封閉抗大腸桿菌抗體，并且于37°C在恒定混合的情況中溫育30分鐘。同時，將陣列用蛋白質陣列封閉緩沖液封閉30分鐘。除去封閉緩沖液，并用預處理的血清于4°C在溫和搖動的情況下探查陣列過夜。然后，將載玻片在T-TBS中清洗3次，并在蛋白質陣列封閉緩沖液中以1/200稀釋的生物素化的抗人IgG Fe (Jackson Immuno Research, WestGrove, Pennsylvania) 一起溫育。將載玻片每次在T-TBS和TBS中清洗3次后,顯現結合的抗體，如上文描述的。類似地探查對照陣列，只是用補充有大腸桿菌裂解物的蛋白質陣列封閉緩沖液替換一抗。
[0062]陣列數據分析和統(tǒng)計學處理。原始數據以每個點的均值像素信號強度收集。使用陰性和陽性對照點(分別為“無DNA”和IgG點)來實施方差穩(wěn)定化標準化(VSN)，其使用來自 B1conductor 套件(http: //B1conductor.0rg/)的統(tǒng)計學環(huán)境 R 中的 “VSN” 包進行。在標準化的信號強度高于“無DNA”對照點的均值加兩個標準差(C+2SD)時反應性抗原定義為陽性。通過使用Bayes規(guī)則化t檢驗比較供體組對對照標準化數據計算P值。為了解決多重檢驗條件，通過 Benjamin1-Hochberg 法(Benjamini, Y., and Y.Hochberg.1995.J.Roy.Stat.Soc., B57:289-300)計算p值調節(jié)以給出BH p值。依照顯著性(BH p值〈0.05和>0.05)，陽性抗原分類為類型特異性或交叉反應性。通過測試每名供體的信號作為閾值截留用單一抗原的對照轉化/標準化陣列數據實施接受者算子特征(Receiver OperatorCharacteristic, ROC)分析以區(qū)別HSV-1和HSV-2感染進行。為了計算每種抗原的曲線下面積(AUC)，用標準化陣列數據實施接受者算子特征(ROC)分析以區(qū)別HSV-1和HSV-2感染。使用曲線下面積(AUC)作為每種抗原區(qū)別HSV-1和-2感染的能力的相對測量。對于識別頻率(FR)分析，使用標準化數據對陣列上的每種抗原限定截留，并且設為血清陰性群體的平均信號+3SD,如由 HerpeSelect ELISA (Focus Diagnostics, Cypress, California)限定的。測定每個血清陽性組中高于截留的個體數目，并且以百分比表示。
[0063]富集分析。依照www.uniprot.0rg的組織數據庫,對由HSV-1 (毒株17)編碼的每種蛋白質分配一種或多種基因本體論(GO)組分?；蚪M中及屬于每種GO分類的血清反應性抗原中的ORF數目以百分比定義，并且基因組對血清反應性的比率用于測定倍數富集。認為富集1.5倍或更多的GO分類相對于蛋白質組在血清反應性抗原間富集。在R環(huán)境中使用Fisher氏精確檢驗計算富集統(tǒng)計學分析的p值。
[0064]例示性結果
[0065]圖1中描繪了來自可表達HSV可讀框文庫(“ORFeome”)構建的例示性結果。圖1A顯示了來自按預期大小排列的PCR文庫的凝膠電泳的結果。一些基因不能在使用的任何PCR條件下擴增，如由相應凝膠道中的陰性結果顯示的。圖1B顯示了在將PCR擴增子重組克隆入PXi中后相應HSV-2和代表性HSV-1DNA微量制備的凝膠電泳的結果。所有質粒是環(huán)狀/非線性化的。在此圖中，C-pXi=對照(非重組)pXi質粒。不能克隆的基因一般對應于那些不能擴增的基因。
[0066] 圖2中顯示了來自與HSV-1和HSV-2抗原陣列起反應的人血清樣品的HSV-1和HSV-2抗體概況的熱圖概述。柱(column)對應于用于探查陣列的個別血清樣品，在圖的底部顯示樣品大小。在圖的指定行中還顯示使用HerpeSelect-1和-2IgG ELISA (FocusDiagnostics, Cypress, California)的血清分型的結果，并且用作樣品分類的參照。將患者血清分類為血清陰性(“neg”n=47) ,RHSV-1血清陽性(“I”n=32)，僅HSV-2血清陽性(“2”n=6)，和HSV-1和-2血清陽性(1/2，n=5)組。還在陣列上探查每種ELISA試劑盒(“試劑盒”，η=各4個)提供的對照血清，包括陰性，不確定和兩份陽性樣品。為了比較，將來自一般群體的血清合并(“群體”，η=21)。除了 ELISA結果外，熱圖中的行對應于陣列上的抗原。這些分成HSV-1和HSV-2抗原，并且在圖的右側列出。僅顯示了針對來自HSV-1或HSV-2血清陽性群體的血清有反應性的抗原的數據。在任一群體的平均信號強度大于由缺乏DNA模板的體外翻譯反應組成的對照點的平均值+2SD值時，如上文描述的(C+2SD)，抗原定義為反應性。顯示的其它抗原是:(1)純化的、滴度的人IgG，其被二抗識別，并且用于幫助監(jiān)測陣列間探查，和⑵純化的、滴度的埃巴核抗原-1 (EBNA-1)，其充當血清質量的對照，因為大多數個體在此抗原方面呈血清陽性。從扣除背景對照點的信號的原始陣列數據產生熱圖，并且通過按降序處理相應血清陽性群體的平均信號對抗原分級。還通過按升序處理平均信號在7組之每組內對血清分級。
[0067]ELISA血清陰性臨床樣品僅針對陣列上的HSV-1或HSV-2抗原顯示微弱的反應性。相反，大多數HSV-1血清陽性供體顯示相對于血清陰性供體升高的對HSV-1抗原的反應性，及與HSV-2抗原的最小交叉反應性。HSV-1血清陽性組的概況的寬度高度可變，其可以與臨床癥狀相關聯。與HSV-1血清陽性組(其對HSV-1抗原顯示非常特異性的反應性)形成對比，HSV-2血清陽性供體顯示升高的對HSV-2和HSV-1抗原兩者的反應性，這與對HSV-1的交叉反應性一致。如預期的，HSV-1/HSV-2雙重陽性供體的反應性在HSV-1和HSV-2抗原之間同等分布。最后，約一半的一般群體(以21份樣品表示)似乎對HSV-1呈血清陽性。一般群體中HSV-2的血清流行性略低，并且兩名個體顯示特別寬的概況。下文在識別頻率(FR)分析中呈現了與參照ELISA血清分型相比的陣列數據的一致性。
[0068]圖3描繪了 HSV-1或HSV-2血清陽性供體的抗體反應性概況和血清陰性供體的抗體反應性概況之間的比較。直方圖顯示了血清陰性(黑色填充)、HSV-1血清陽性(灰色填充)、和HSV-2血清陽性(無填充)供體的平均陣列信號+SEM。僅顯示了血清反應性抗原(即，平均信號超出C+2SD的那些血清反應性抗原)。圖3A顯示了來自HSV-1血清陽性供體的結果的比較，而圖3B顯示了使用T檢驗比較來自HSV-2血清陽性供體的結果與血清陰性供體的結果。顯示了對直方圖上覆蓋的經Benjamin1-Hochberg校正的P值(pBH),并且用于將抗原分類成顯著的和非顯著的應答(分別為pBH〈0.05和>0.05)。pBH線的缺口表示經校正的P指〈10-30。
[0069]HSV-1血清陽性和血清陰性供體之間的此比較揭示了幾種有意義的HSV-1抗原。無意義的抗原(即，那些在血清陰性和血清陽性中給出相似信號的抗原)都是低信號且接近截留(C+2SD)，并且可以使用更嚴格的標準消除。許多HSV-2抗原也是HSV-1血清陽性供體識別的，盡管信號相對較低，進一步確認來自僅HSV-1的群體的血清僅顯示適度的與HSV-2抗原的交叉反應性。HSV-2血清陽性和血清陰性供體之間的比較(圖3B)也揭示了幾種有意義的HSV-2抗原。然而，來自HSV-2供體的血清也顯示廣泛的與HSV-1抗原的交叉反應性。為了測定這些有意義的抗原之任一種是否具有區(qū)別HSV-1和HSV-2感染的潛在診斷效用，發(fā)現有必要比較HSV-1抗體概況與HSV-2抗體概況。
[0070]圖4描繪了 HSV-1血清陽性供體和HSV-2血清陽性供體的抗體反應性概況之間的比較。如在圖3中，實施T檢驗,并且顯示對直方圖上覆蓋的經Benjamin1-Hochberg校正的P值(PBH)。令人驚訝地，大多數反應性HSV-1抗原沒有意義，確認從熱圖產生的觀察，SP來自HSV-1和HSV-2血清陽性供體兩者的血清識別HSV-1抗原。在圖1中，將血清反應性HSV-1抗原列出，并且通過HSV-1和HSV-2血清陽性供體之間比較結果的T檢驗分類成有意義的或有差別的(ρΒΗ〈0.05)和無意義的或交叉反應性(ρΒΗ>0.05)，以與它們在圖4中顯示的相同次序。蛋白質身份獲自 Uniprot (http: / / www.uniprot.0rg/)和 Oralgen (http://www.0ralRen.lanl.rov/),別的注解來自目前的質譜術數據。
[0071]
【權利要求】
1.一種抗原組合物，其包含: 多種與載體結合的抗體反應性抗原，其中至少兩種所述抗原就受HSV-1感染的群體的血清而言具有量化且已知的相對抗體反應性； 其中所述至少兩種抗原具有已知的與疾病參數的關聯；且 其中所述多種抗原 選自下組:US3，US6, US8, US9, UL7, UL20, UL22, UL36和UL44，或其片段。
2.權利要求1的抗原組合物，其中所述已知反應性以反應性強度為特征。
3.權利要求1的抗原組合物，其中所述已知反應性以所述疾病的活性狀態(tài)為特征。
4.權利要求1的抗原組合物，其中所述參數選自下組:先前或目前對病原體的暴露，用病原體的急性感染，用病原體的潛在性或復發(fā)感染，和對用病原體感染的至少部分免疫。
5.權利要求1的抗原組合物，其中針對所述至少兩種抗原的抗體存在于暴露于所述至少兩種抗原的群體的至少40%中，且任選地，其中患者中生成的針對所述至少兩種抗原的抗體的平均結合親和力和平均數量中至少一項在所述患者中生成的抗體的結合親和力和數量的上部三分位數(upper tertile)中。
6.權利要求1的抗原組合物，其中所述疾病參數是HSV的先前感染，且其中所述多種抗原選自下組:US3, US6, US8, US9, UL7, UL20, UL22, UL36 和 UL44,或其片段。
7.權利要求1的抗原組合物，其中所述疾病參數是HSV的急性感染，且其中所述多種抗原選自下組:US3, US6, US8, US9, UL7, UL20, UL22, UL36 和 UL44,或其片段。
8.權利要求1的抗原組合物，其中所述疾病參數是HSV的潛在性感染，且其中所述多種抗原選自下組:US3, US6, US8, US9, UL7, UL20, UL22, UL36 和 UL44，或其片段。
9.權利要求1的抗原組合物，其中所述載體是藥學可接受載體，且其中所述組合物配制為疫苗。
10.權利要求9的抗原組合物，其中所述疫苗包含至少4種抗原。
11.權利要求9的抗原組合物，其中所述抗原或其片段是重組的。
12.權利要求9的抗原組合物，其中所述抗原或其片段是至少部分純化的。
13.權利要求1的抗原組合物，其中所述載體是固體載體，且其中所述多種抗原在陣列中的所述載體上布置。
14.權利要求13的抗原組合物，其中每種所述抗原以大于60%的純度存在。
15.權利要求13的抗原組合物，其中所述抗原或其片段是重組的。
16.權利要求13的抗原組合物，其中所述抗原或其片段是至少部分純化的。
17.—種抗原組合物，其包含: 多種與載體結合的抗體反應性抗原，其中至少兩種所述抗原就受HSV-2感染的群體的血清而言具有量化且已知的相對抗體反應性； 其中所述至少兩種抗原具有已知的與疾病參數的關聯；且
其中所述多種抗原選自下組:UL1, UL3, UL5, UL6, UL7, UL10, UL14, UL17, UL18, UL23, UL26，UL26.5，UL27, UL28, UL32, UL34, UL41, UL42, UL44, UL45, UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7,US8, US9和USl I，或其片段。
18.權利要求17的抗原組合物，其中所述已知反應性以反應性強度為特征。
19.權利要求17的抗原組合物，其中所述已知反應性以所述疾病的活性狀態(tài)為特征。
20.權利要求17的抗原組合物，其中所述參數選自下組:先前或目前對病原體的暴露，急性、潛在性或復發(fā)感染，和對用病原體感染的至少部分免疫。
21.權利要求17的抗原組合物，其中所述至少兩種抗原存在于暴露于所述至少兩種抗原的群體的至少40%中，且任選地，其中患者中生成的針對所述至少兩種抗原的抗體的平均結合親和力和平均數量中至少一項在所述患者中生成的抗體的結合親和力和數量的上部三分位數中。
22.權利要求17的抗原組合物，其中所述疾病參數是HSV的先前感染，且其中所述多種抗原選自下組:UL1, UL3, UL5, UL6, UL7, UL10, UL14, UL17, UL18, UL23, UL26, UL26.5，UL27, UL28, UL32, UL34, UL41, UL42, UL44, UL45, UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7, US8, US9 和 USlI，或其片段。
23.權利要求17的抗原組合物，其中所述疾病參數是HSV的急性感染，且其中所述多種抗原選自下組:UL1, UL3, UL5, UL6, UL7, UL10, UL14, UL17, UL18, UL23, UL26, UL26.5，UL27, UL28，UL32, UL34, UL41, UL42, UL44, UL45, UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7, US8, US9 和 USll 或其片段。
24.權利要求17的抗原組合物，其中所述疾病參數是HSV的潛在性感染，且其中所述多種抗原選自下組:UL1, UL3, UL5, UL6, UL7, UL10, UL14, UL17, UL18, UL23, UL26, UL26.5，UL27, UL28, UL32, UL34, UL41, UL42, UL44, UL45, UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7, US8, US9 和 USll或其片段。
25.權利要求17的抗原組合物，其中所述載體是藥學可接受載體，且其中所述組合物配制為疫苗。
26.權利要求25的抗原組合物，其中所述疫苗包含至少4種抗原。
27.權利要求25的抗原組合物，其中所述抗原或其片段是重組的。
28.權利要求25的抗原組合物，其中所述抗原或其片段是至少部分純化的。
29.權利要求17的抗原組合物，其中所述載體是固體載體，且其中所述多種抗原在陣列中的所述載體上布置。
30.權利要求25的抗原組合物，其中每種所述抗原以大于60%的純度存在。
31.一種抗原組合物，其包含: 多種與載體結合的抗體反應性抗原，其中至少兩種所述抗原就受HSV-1和HSV-2兩者感染的群體的血清而言具有量化且已知的相對抗體反應性； 其中所述至少兩種抗原具有已知的與疾病參數的關聯；且 其中所述多種抗原選自下組:對于HSV-1為US3，US6, US8, US9, UL7, UL20, UL22, UL36和UL44 或其片段，和對于 HSV-2 為 ULl, UL3, UL5, UL6, UL7, UL10, UL14, UL17, UL18, UL23, UL26,UL26.5，UL27, UL28, UL32, UL34, UL41, UL42, UL44, UL45, UL49, UL50, UL51, UL54, US6, US7, US.8，US9和USll或其片段。
【文檔編號】A61K39/395GK104080477SQ201280042725
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2012年6月29日 優(yōu)先權日:2011年7月1日
【發(fā)明者】D.H.戴維斯, X.梁, P.菲爾格納 申請人:因波特醫(yī)療股份有限公司