一種藥物組合物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含有蒺藜苷元與黃酮的藥物組合物及其制備方法和用途，該產(chǎn)物含有蒺藜苷元與黃酮的和達60-85%，其中皂苷元和黃酮的重量比例為2:1-10:1。本發(fā)明還公開了含有蒺藜苷元與黃酮的藥物的制備方法及其在治療心臟、腦動脈血管硬化或栓塞引起的心肌和腦組織缺血、缺氧及氧化脂質(zhì)升高的藥物中的用途。
【專利說明】一種藥物組合物及其制備方法和用途

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及含有蒺藜總皂苷粗提物水解產(chǎn)物的藥物及其制備方法，特別是所涉及的藥物在預防、治療人或動物心肌和腦組織缺血、缺氧中的應用。

【背景技術】
[0002]蔡藜Tribulus terrestris L.在植物分類學上屬于蔡藜科植物蔡藜屬植物。蒺藜果及莖葉均含有許多種留體皂苷，近幾年來對蒺藜的皂苷成分進行了一些研究，發(fā)現(xiàn)蒺藜皂苷具有廣泛的生物活性。
[0003]近年，人們對蒺藜的研究不斷深入，從蒺藜中分離鑒定了 60余種皂苷蒺藜果實含有甾體皂苷，皂苷經(jīng)水解得到已知的皂苷元:提果皂苷元、新提果皂苷元、芰脫皂苷元、新芰脫皂苷元?？稍碥赵?、新海可皂苷元、曼諾皂苷元、新曼諾皂苷元。從蒺藜全草中分得5種新皂苷元，25 (R)-螺甾烷-4-烯-3，12-二烯、25(R)_螺甾烷-4-烯-2β，3α 二羥基-12-麗、25 (R)_ 螺留燒-24-β 輕基-4 稀-3,12-_■麗，25(R)_ 螺留燒 _3，6，12-二酮，25 (R)-螺甾烷-4烯-3，6，12-三酮，和已知皂苷元，25 (R)-螺甾烷_3，12-二酮、25 (R)-螺留烷-3，6，12-三酮，25(1?)-螺留烷 _3，5-二酮，25 (R)-螺留烷-4-烯-3，12-二酮。本
【發(fā)明者】參與發(fā)明了“含有蒺藜果總皂苷的藥物組合物及其制備方法”專利(專利號ZL02132482.4)，闡述了一類新的具有藥用的以蒺藜果葉總皂苷的組合物為基本活性成分。經(jīng)過多年研究證明此專利存在如下缺點:有效成分為確定為螺留皂苷和呋留皂苷，他們的總和達到50%重量比，未明確有黃酮苷存在及其含量；總皂苷成分結(jié)構(gòu)在母核的3位和26位上含有多種糖，分子量比較大，一般在1000以上，不是體內(nèi)真正起到作用的物質(zhì)；藥效作用不強，用量較大。同時發(fā)明專利88103085.6及200710019035.X專利，均存在如上缺點。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供一種含有蒺藜苷元與黃酮的藥物及其制備方法，以解決蒺藜總皂苷粗提物存在的藥效作用不強，物質(zhì)不清楚，用量較大的問題。
[0005]我們近年研究分析了上述蒺藜總皂苷體外人腸內(nèi)菌代謝和大鼠體內(nèi)代謝，分析蒺藜果原形皂苷及代謝后產(chǎn)物的變化情況，分離鑒定蒺藜總皂苷的體外腸內(nèi)菌代謝產(chǎn)物及大鼠血清代謝產(chǎn)物，探索蒺藜留體皂苷結(jié)構(gòu)與代謝產(chǎn)物的相關性，為闡明蒺藜總皂苷在體內(nèi)代謝過程和真正起藥效作用的成分不是皂苷類成分，而是脫去糖分的皂苷元及黃酮成分，我們在蒺藜總皂苷粗提物人腸內(nèi)菌代謝產(chǎn)物及動物血清中檢測到9種皂苷元和3種黃酮，我們又對蒺藜總皂苷進行了水解，得到的水解成分與代謝成分相近，水解物中鑒定了 9種皂苷元和3種黃酮，與代謝產(chǎn)物一致，并對水解產(chǎn)物進行了了藥效學實驗，證明了蒺藜皂苷水解產(chǎn)物與體內(nèi)真正其藥效作用的物質(zhì)一致，有關蒺藜皂苷水解產(chǎn)物的系統(tǒng)成分分析及藥物功能開發(fā)未見報道。
[0006]本發(fā)明含有蒺藜苷元與黃酮的藥物是由如下方法制成的:
取蒺藜果或地上部分水提醇沉或水醇溶液提取物水溶液，經(jīng)過大孔吸附樹脂柱吸附，再用醇溶液洗脫，所得到的提取物，為蒺藜總皂苷粗提物。
[0007]取蒺藜總皂苷粗提物lg，溶于10-1000 ml 1-15%硫酸乙醇溶液中，恒溫60_100°C酸水解l-15h，放冷后，母液回收乙醇，至無醇味，用1-20%氫氧化鈉溶液調(diào)PH=5-9。濾過，即得。
[0008]本發(fā)明的另一個目的是提供制備含有蒺藜苷元與黃酮的藥物的方法。
[0009]本發(fā)明所述的含有蒺藜苷元與黃酮的藥物在制備治療心臟、腦動脈血管硬化或栓塞引起的心肌和腦組織缺血、缺氧及氧化脂質(zhì)升高的藥物中的應用。
[0010]本發(fā)明所述的含有蒺藜苷元與黃酮的藥物中含有的有效成分蒺藜皂苷元和蒺藜黃酮，是體內(nèi)真正其藥效作用的藥物，蒺藜皂苷元和蒺藜黃酮的含量達到60% 15% (w /w)，皂苷元和黃酮的比例為2:1-10:1，藥效最佳，藥效強于蒺藜總皂苷提取物2.5-5倍。
[0011]本發(fā)明的藥效組合物并含有一種或多種藥學上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物。
[0012]本發(fā)明的優(yōu)點是:所含有的藥效物質(zhì)為在體內(nèi)可檢測到真正起到藥效作用的物質(zhì)成分，蒺藜皂苷元和黃酮，且兩個組分比例2:1-10:1，可測有效成分含量達60% ^85% ;本發(fā)明的另一個優(yōu)點是本組合物的藥效作用強于原發(fā)明蒺藜總皂苷提取物的藥效作用。本組合物以20mg/kg、40mg/kg大鼠給藥,可明顯抑制大鼠血栓形成,作用強于100mg/Kg總阜苷提取物。本組合物以25mg/kg、50mg/kg大鼠給藥，明顯延長小鼠凝血時間，50mg/kg給藥組作用強于140mg/Kg總阜苷提取物組。本組合物以70mg/kg、35mg/kg大鼠給藥,能明顯減低小鼠耗氧量，延長小鼠缺氧條件下的存活時間，高劑量組優(yōu)于總皂苷提取物組。
[0013]臨床上平均人口服用量135mg，每日兩次，服用15_20天可用于治療腦梗塞及冠心病心絞痛。

【具體實施方式】
[0014]本發(fā)明以下實施例和實驗例中所稱蒺藜總皂苷粗提物或蒺藜果總皂苷均為采用“有蒺藜果總皂苷的藥物組合物及其制備方法”專利(專利號ZL 02132482.4)和88103085.6 及 200710019035.X 中所述方法獲得。
[0015]實施例1
取蒺藜果總皂苷粗提物lg，溶于1ml 1%硫酸乙醇溶液中，恒溫60°C酸水解lh，放冷后，母液回收乙醇，至無醇味，用1%氫氧化鈉溶液調(diào)pH=5，濾過，即得。
[0016]實施例2
取蒺藜果總皂苷粗提物lg，溶于500 ml 8%硫酸乙醇溶液中，恒溫80°C酸水解5.5 h，放冷后，母液回收乙醇，至無醇味，用10%氫氧化鈉溶液調(diào)pH=7，濾過，即得。
[0017]實施例3
取蒺藜地上部分總皂苷粗提物lg，溶于1000 ml 15%硫酸乙醇溶液中，恒溫100°C酸水解10 h,放冷后，母液回收乙醇，至無醇味，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)pH=9，濾過，即得。
[0018]實施例4:本發(fā)明蒺藜苷元與黃酮的膠囊劑
取實施例1、2或3所得藥物10g加入適量淀粉，混勻，60°C以下干燥，裝膠囊1000粒，即得本品膠囊制劑。
[0019]實施例5:本發(fā)明蒺藜苷元與黃酮的片劑取實施例1、2或3所得藥物10g加入適量淀粉、潤滑劑，混勻，60°C以下干燥，壓片，SP得1000片。
[0020]實施例6:本發(fā)明蒺藜苷元與黃酮的顆粒劑
取實施例1、2或3所得藥物10g加入適量淀粉，混勻，60°C以下干燥，制粒，即得1000袋顆粒劑。
[0021]實施例7本發(fā)明蒺藜苷元與黃酮藥物的成分分析
將按實施例1所述方法提取的蒺藜苷元與黃酮組合物20g溶解于10ml氯仿中，力口等量硅膠，進行硅膠柱層析，依次用石油醚、氯仿-石油醚、氯仿、氯仿-甲醇梯度洗脫，極性逐漸由小變大,每份為100 ml, TLC跟蹤檢測，A試劑噴霧加熱顯色，合并相同分，從Fr35-53得到化合物I，F(xiàn)r 56-65得到化合物II，從Fr 73-103得到化合物III，用制備液相從Fr 112-133得到化合物V- X，從Fr 134-175得到化合物IV。
[0022]結(jié)構(gòu)鑒定結(jié)果:
化合物I的主要數(shù)據(jù)
白色針狀結(jié)晶(氯仿)，熔點198-199°c, Liebermann-Burchard反應呈陽性，與Ehrlich試劑反應不顯色，香草醛-濃硫酸反應顯黃色。IR (KBr) CnT1:3524，1053，978，920，900，864 CnT1 ;APCI_MS正離子模式下，分子離子峰，417 [M+H]+,其他離子峰，399[M-H2CHHr51HNMR (δ, C5D5N)數(shù)據(jù):δ:0.58 (3Η, d, / = 5.2 Hz), 0.70 (3Η, s), 0.74(3Η, s), 1.03 (3Η, d, / = 6.8 Hz), 3.46, 3.41, 3.74 (lH，m)，4.44 (lH，m) ；13C NMR37.6,32.6,70.7,39.4,45.3,29.2,32.6,35.5,54.7,36.0,21.5,40.4,41.0,56.7,32.0,81.3，63.2，16.8，12.7,42.1，15.2，109.3,32.3,29.4,30.7,67.0,17.5，鑒定為替告皂苷元。
[0023]化合物II的主要數(shù)據(jù)
白色針狀結(jié)晶(氯仿)，熔點223-225°C, Liebermann-Burchard反應呈陽性，與Ehrlich試劑反應不顯色，香草醛-濃硫酸反應顯黃色。IR (KBr) CnT1:3397,1707,1058,981,919,899,863 CnT1 ;APC1-MS 正離子模式下，分子離子峰，431 [M+H]+ NMR (δ , C5D5N)數(shù)據(jù):δ:0.58 (3H, d, / = 5.6 Hz) ,0.72 (3H, s),0.99 (3H, s)，1.24 (3 H, d, /=6.8Hz)，3.48，3.36，3.68 (1H, m), 4.36 (1H, m) ;13C NMR 數(shù)據(jù) 37.0，31.9，70.4，39.1，45.1，28.8，32.3，34.6，55.8，36.5，38.2，212.9，55.5，56.2。化合物 II 為?？略碥赵?br> [0024]化合物III的主要數(shù)據(jù)
白色針狀結(jié)晶(氯仿)，熔點251-253°C, Liebermann-Burchard反應呈陽性,與Ehrlich試劑反應不顯色，香草醛-濃硫酸反應顯黃色。IR (KBr) cm_1 =3413,1058,981,923,899,868 ;APCI_MS正離子模式下，分子離子峰，433 [M+H]+,其他離子峰，415[M-H2CHHr51HNMR (δ , C5D5N)數(shù)據(jù):δ:0.58 (3Η, d, / = 4.8 Hz) ,0.72 (3H,s) ,0.74(3H, s), 1.01 (3H, ?, J = 6.8 Hz), 3.45, 3.38, 3.73 (1Η, m), 3.91 (1Η, m), 4.42 (1Η,m) ；13C NMR數(shù)據(jù)，化合物III為吉托皂苷元。
[0025]化合物IV的主要數(shù)據(jù)
白色針狀結(jié)晶(氯仿)，熔點241-243°C, Liebermann-Burchard反應呈陽性，與Ehrlich試劑反應不顯色，香草醛-濃硫酸反應顯黃色。IR (KBr) CnT1:3404，1707，1059，982，922，900,866 ;APC1-MS 正離子模式下，分子離子峰，447 [M+H]+; 1H NMR (δ , C5D5N)數(shù)據(jù):δ:0.57 (3H, d, / = 5.6 Hz)，0.76 (3H, s) ,0.97 (3H, s)，1.23 (3H, d, J = 6.8 Hz)，3.68，3.88，4.36 (1H, m) ；13C NMR 化合物IV為曼諾皂苷元。
[0026]化合物V的主要數(shù)據(jù)
化合物V為白色針狀結(jié)晶(氯仿)，Liebermann-Burchard反應呈陽性,與Ehrlich試劑反應不顯色，香草醛-濃硫酸試劑反應顯黃色。APC1-MS正離子模式下，準分子離子峰，
449 [Μ+Η]+，說明其分子量為 448。其他碎片離子峰431 [Μ_Η20+Η]+，413 [Μ_2Η20+Η]+。1H NMR (pyridine-1/5； 600 MHz) δ:1.26 (3H, d, / = 7.2 Hz) ,0.92 (3H, s) ,0.63 (3H,s), 1.10 (3H, d, / = 7.2 Hz), 3.39,4.01,3.72,4.51,13C NMR (pyridine-1/5, 150 MHz)?；衔?V 為(23S，24/?，257?) -5a-螺甾-3盧，23，24 三醇。
[0027]化合物VI的主要數(shù)據(jù)
化合物VI白色針狀結(jié)晶(氯仿)，Liebermann-Burchard反應呈陽性，與Ehrlich試劑反應不顯色，香草醛-濃硫酸試劑反應顯黃色。APC1-MS正離子模式下，準分子離子峰為431 [Μ+Η]+，說明其分子量為430，其他碎片離子峰為413 [Μ_Η20+Η]+，395[M-2H20+H] + o 1H NMR (pyridine-1/5； 600 MHz) δ:0.56 (3H, s) ,0.86 (3H, s) ,0.96(3H,s), 1.08 (3H, d, / = 6.6 Hz)，3.45，3.40，3.68，3.89，4.52，13C NMR (pyridine-1/5, 150MHz)，化合物 V I 為(257?)-螺甾-5 (6)-烯-3 兒 12 σ - 二醇。
[0028]化合物YD的主要數(shù)據(jù)
化合物Vn白色針狀結(jié)晶(氯仿)，Liebermann-Burchard反應呈陽性，與Ehrlich試劑反應不顯色，香草醛-濃硫酸試劑反應顯黃色。APC1-MS正離子模式下，準分子離子峰為431 [Μ+Η]+，說明其分子量為430，其他碎片離子峰為413 [Μ_Η20+Η]+，395[M-2H20+H]+o1H NMR (pyridine-1/5, 600 MHz) δ:0.57 (3H, m), 0.86 (3H, s), 0.96 (3Η,s)，1.08 (3Η, m), 3.45, 3.42, 3.89, 3.68,4.52,13C NMR (pyridine-1/5, 150 MHz)，化合物YD為(257?，S)-螺甾-5 (6)-烯-3兒 12 σ - 二醇。
[0029]化合物VDI的主要數(shù)據(jù)
化合物VDI白色針狀結(jié)晶(氯仿)，Liebermann-Burchard反應呈陽性，與Ehrlich試劑反應不顯色，香草醛-濃硫酸試劑反應顯黃色。APC1-MS正離子模式下，準分子離子峰為取Λ 433 [Μ+Η]+，說明其分子量為432，其他碎片離子峰為取Λ 415 [Μ_Η20+Η]+，397[Μ-2Η20+Η] +。1H NMR (pyridine-1/5, 600 MHz) δ:0.56 (3H, s) ,0.73 (3H, s) ,0.85(3H, d, /= 4.8 Hz)，1.09 (3H, d, / = 6.6 Hz), 3.41,3.47,3.68,3.84,4.53,1? NMR(pyridine-1/5, 150 MHz)，化合物VDI為(257?，5)-螺甾-3兒 12 σ 二醇。
[0030]化合物IX的主要數(shù)據(jù)
化合物IX白色針狀結(jié)晶(氯仿)，Liebermann-Burchard反應呈陽性，與Ehrlich試劑反應不顯色，香草醛-濃硫酸試劑反應顯黃色。APC1-MS正離子模式下，準分子離子峰為431 [Μ+Η]+，說明其分子量為430，其他碎片離子峰為413 [Μ_Η20+Η]+，395[Μ-2Η20+Η] +。1HNMR (600 MHz, pyridine-1/5) δ: δ 0.57 (3H, m), 0.80 (3Η, s)，1.23(3Η, s)，0.99 (3Η, d, / = 6.6 Hz), 3.35,4.43, 3.85,4.80,13C NMR (pyridine-1/5, 150MHz)，化合物IX魯斯可皂苷元。
[0031]實施例6.蒺藜皂苷元和蒺藜黃酮的含量的測定苷元測定
對照品溶液制備精密稱取?？略碥赵?.1 mg，用甲醇:氯仿(1:1)溶解并定容于25 ml容量瓶中，備用。
[0032]樣品溶液制備
精密稱取蒺藜苷元與黃酮的藥物組合物12.0 mg,甲醇:氯仿(I:1)定容至25 ml容量瓶中，備用。
[0033]測定方法
取樣品溶液，密量取1.0 ml，置帶塞試管中，揮干溶劑，另精密量取對照品溶液2.1 ml、2.3 ml，同法揮干溶劑，分別加入5%香草醛冰醋酸溶液0.6 ml，及高氯酸0.8 ml，搖勻，以
0.6 ml的香草醛冰醋酸溶液為空白對照，將裝有樣品、對照品及空白溶液置60°C水浴中加熱15分鐘，立即取出，流水冷卻，分別加入冰醋酸3 ml，搖勻，放置60分鐘，照分光光度法(中國藥典2010年一部附錄VA)，在波長520 nm處，測定吸收度值，按外標兩點法計算含量。
[0034]表1 樣品含量測定結(jié)果

【權利要求】
1.一種含有蒺藜總皂苷的提取物，是由如下方法制成的: 取蒺藜果或地上部分水提醇沉或水醇溶液提取物水溶液，經(jīng)過大孔吸附樹脂柱吸附，再用醇溶液洗脫，所得到的提取物，為蒺藜總皂苷粗提物。
2.一種含有蒺藜苷元與黃酮的藥物，是由如下方法制成的:取蒺藜總皂苷粗提物lg，溶于10-1000 ml 1-15%硫酸乙醇溶液中，恒溫60-100°C酸水解l_15h，放冷后，母液回收乙醇，至無醇味，用1-20%氫氧化鈉溶液調(diào)PH=5-9，濾過，即得。
3.如權利要求1所述的一種含有蒺藜苷元與黃酮的藥物，其特征在于:其中含有蒺藜阜苷兀和蔡藜黃酮的含量60%?85 %(w / W)。
4.如權利要求1所述的一種含有蒺藜苷元與黃酮的藥物，其特征在于:蒺藜皂苷元和蒺藜黃酮的重量比例為2:1-10:1。
5.如權利要求1所述的一種含有蔡藜苷兀與黃酮的藥物，其特征在于:其中含有如下九種單體皂苷元:替告皂苷元、?？略碥赵⒓性碥赵?、曼諾皂苷元、(23& 24/?，257?) -5a-螺甾-3盧，23，24 三醇、(257?)-螺甾-5 (6)-烯-3盧，12 σ - 二醇、(257?，S、-螺甾-5 (6)-烯-3盧，12 σ-二醇、(257?，5)-螺甾-3盧，12 σ 二醇、魯斯可皂苷元。
6.如權利要求1所述的一種含有蒺藜苷元與黃酮的藥物，其特征在于:其中含有如下三種單體黃酮:3，5，7，3' Λ'-五羥基黃酮、2' 3' Λ' 3，5-五羥基黃酮醇、山柰酚。
7.如權利要求1所述的一種含有蒺藜苷元與黃酮的藥物的制備方法，包括下列步驟: 取蒺藜總皂苷粗提物lg，溶于10-1000 ml 1-15%硫酸乙醇溶液中，恒溫60-100°C酸水解l_15h，放冷后，母液回收乙醇，至無醇味，用1-20%氫氧化鈉溶液調(diào)PH=5-9，濾過，即得。
8.如權利要求1所述的含有蒺藜苷元與黃酮的藥物在制備治療心臟、腦動脈血管硬化或栓塞引起的心肌和腦組織缺血、缺氧及氧化脂質(zhì)升高的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P39/00GK104127461SQ201310156625
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2013年5月2日 優(yōu)先權日:2013年5月2日
【發(fā)明者】徐東銘, 善體強 申請人:徐東銘