專利名稱：一種具有抑制黑色素合成活性的藍(lán)莓葉提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抑制黑色素合成活性的藍(lán)莓葉提取物。
背景技術(shù)：
黑色素細(xì)胞(MC)過度合成黑色素可引起色素障礙性皮膚病，導(dǎo)致膚色變暗、皮膚色素沉淀，引發(fā)黃褐斑等疾病，因此，研發(fā)一種可以抑制黑色素合成的提取物在美容美白應(yīng)用方面的市場前景會非常廣闊，但是，提取物不能影響黑色素細(xì)胞自身的活性和生長，生物安全性必須得到保障。本研究采用傳代B16鼠黑素瘤細(xì)胞系作模型，先觀察提取物對B16細(xì)胞生長的影響，再觀察其對酪氨酸酶活性的影響
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種抑制黑色素合成活性的藍(lán)莓葉提取物。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:將藍(lán)莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸提取三次，過濾后合并濾液并濃縮再用大孔樹脂富集有效成分，分別以去離子水和不同濃度的乙醇溶液洗脫，所得各分段溶液溶劑回收、冷凍干燥后保存，其中20%乙醇洗脫得到的部位即為本發(fā)明的提取物。本發(fā)明的提取物是將IOOg藍(lán)莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，過濾后合并濾液，濃縮提取液至400mL，先得到樣品溶液；樣品溶液加入DlOl大孔樹脂(IOOg)層析柱，分別以去離子水(2L)和不同濃度的乙醇溶液(各濃度2L)為洗脫劑，流速約為6mL/min ;將20%乙醇溶液洗脫得到的部位溶液溶劑回收，濃溶液冷凍干燥后，進(jìn)行稱重并密封保存，即為本發(fā)明的提取物。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明:實施例1 一種具有抑制黑色素合成活性的藍(lán)莓葉提取物的制備將IOOg藍(lán)莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，過濾后合并濾液，濃縮提取液至400mL，先得到樣品溶液；樣品溶液加入DlOl大孔樹脂(IOOg)層析柱，分別以去離子水(2L)和不同濃度的乙醇溶液(各濃度2L)為洗脫劑，流速約為6mL/min ;將20%乙醇溶液洗脫得到的部位溶液溶劑回收，濃溶液冷凍干燥后，進(jìn)行稱重并密封保存，即為本發(fā)明的提取物。實施例2提取物對B16細(xì)胞生長的影響取對數(shù)生長期的B16細(xì)胞，經(jīng)消化分散制備單細(xì)胞懸液，計數(shù)。將細(xì)胞接種至96孔Coring細(xì)胞培養(yǎng)板，接種密度為I X IO4個/孔，液體量為每孔100 u L。過夜，待細(xì)胞貼壁，吸去培養(yǎng)液，用含有不同濃度處理因素(濃度均為I X 10_5，I X 10_6，I X 10_7，I X 10_8，
IX IO-9,1 X 10,，I X IO-11,1 X 10_12g/ml的8種濃度三種待測樣品和陽性對照藥_熊果苷50 u g/ml)的新鮮培養(yǎng)基換液I次，空白對照組僅加入培養(yǎng)液和相應(yīng)溶媒，繼續(xù)培養(yǎng)72h，藥物處理結(jié)束時，每孔加500 u g/ml的MTT溶液，繼續(xù)置CO2孵箱培養(yǎng)4h。然后吸去培養(yǎng)液，每孔加150 ill DMS0，充分振搖培養(yǎng)板，用酶標(biāo)儀測定每孔吸光度A470nm值。細(xì)胞生長抑制率=(1-藥物處理組A47tl/空白對照組A47tl) X 100%。結(jié)果顯示如表1，提取物對B16鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖無顯著影響。在濃度為10_5g/ml時，藥物1-1，2-2，3-3對對B16鼠黑素瘤細(xì)胞增殖的抑制率分別為-5.15%,14.13%,24.39%，抑制率低于50%，且無明顯劑量依賴性關(guān)系，其對B16細(xì)胞的生長無顯著影響。表I提取物對B16鼠黑素瘤細(xì)胞生長的抑制率)
權(quán)利要求
1.本發(fā)明是一種具有抑制黑色素合成活性的藍(lán)莓葉提取物。
2.本發(fā)明的提取物是將IOOg藍(lán)莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，過濾后合并濾液，濃縮提取液至400mL，先得到樣品溶液；樣品溶液加入DlOl大孔樹脂(IOOg)層析柱，分別以去離子水(2L)和不同濃度的乙醇溶液(各濃度2L)為洗脫齊U，流速約為6mL/min ;將20%乙醇溶液洗脫得到的部位溶液溶劑回收，濃溶液冷凍干燥后，進(jìn)行稱重并密封 保存，即為本發(fā)明的提取物。
全文摘要
本發(fā)明是一種具有抑制黑色素合成活性的藍(lán)莓葉提取物，是由藍(lán)莓葉用水煎煮、大孔樹脂富集、乙醇洗脫所得，20％的乙醇洗脫部位有顯著抑制黑色素合成的活性。
文檔編號A61K36/45GK103211854SQ20131017241
公開日2013年7月24日 申請日期2013年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月9日
發(fā)明者於紅, 賀善安, 王天壽, 張劍 申請人:南京紫玉藍(lán)莓科技有限公司