狂犬疫苗凍干制劑的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了狂犬疫苗凍干制劑的制備方法，在制備過程中，加入了納米級的氫氧化鋁，配置含有麥芽糖、人血白蛋白、維生素C、半胱氨酸和尿素的磷酸鹽緩沖液作為穩(wěn)定劑，并對常規(guī)的凍干工藝路線和參數(shù)進(jìn)行修正優(yōu)化，通過預(yù)凍、一次干燥、二次干燥和解析干燥完成凍干制劑的生產(chǎn)。本發(fā)明與現(xiàn)有的狂犬疫苗相比，通過對凍干過程中的穩(wěn)定劑組分和保護(hù)劑的組分優(yōu)化，對狂犬疫苗的存儲過程起到了良好的防變性、失效功效，同時(shí)優(yōu)化了凍干工藝路線，設(shè)置了更為合理的凍干參數(shù)，使凍干制劑產(chǎn)品晶體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，外觀符合國家標(biāo)準(zhǔn)。
【專利說明】狂犬疫苗凍干制劑的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及狂犬疫苗的藥品制劑，具體涉及到人用狂犬疫苗的凍干制劑制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]狂犬病又名恐水癥，是由狂犬病毒所致的自然疫源性人畜共患急性傳染病。流行性廣，病死率極高，幾乎為100%?？袢θ嗣裆】翟斐蓢?yán)重威脅。人狂犬病通常由病獸以咬傷的方式傳給人人體而受到感染。臨床表現(xiàn)為特有的恐水、恐聲、怕風(fēng)、恐懼不安、咽肌痙攣、進(jìn)行性癱瘓等。
[0003]現(xiàn)有的狂犬病治療手段通常為，人被咬傷后立即注射狂犬疫苗，使其在人體內(nèi)形成有效抗體來防止發(fā)病?？袢呙缫话悴捎眉∪庾⑸浣o藥，通常有水針劑和粉針劑?？袢呙绲闹苽涔に噷ζ浔Ｙ|(zhì)期和效價(jià)有著巨大的影響?？袢呙鐑龈芍苿┰谥苽淝埃枰尤敕€(wěn)定劑、保護(hù)劑和賦形劑；上述添加劑的組分和含量對狂犬疫苗的熱穩(wěn)定性具有保護(hù)作用，同時(shí)，凍干工藝路線和凍干參數(shù)的選擇對疫苗的性質(zhì)也有明顯的影響?？袢呙绮粸槌Ｓ盟幤?，每年的消耗量較普藥相比，用量很少，因此急需增強(qiáng)其穩(wěn)定性，使其的保質(zhì)期更長。
[0004]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明提出了一種新的解決方案。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種狂犬疫苗的凍干制劑的制備方法，本發(fā)明通過對疫苗原液的穩(wěn)定劑和保護(hù)劑進(jìn)行優(yōu)化組合，改進(jìn)凍干工藝路線和參數(shù)，使凍干狂犬疫苗的保質(zhì)期更長的同時(shí)，疫苗效價(jià)符合 國家標(biāo)準(zhǔn)。
[0006]為達(dá)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:提供一種狂犬疫苗凍干制劑的制備方法，包括以下制備過程；
A、在經(jīng)過純化的疫苗原液中加入納米級氫氧化鋁佐劑，其質(zhì)量配比為100份疫苗原液中加入10份~15份、粒徑為50納米~90納米的氫氧化鋁佐劑，加入氫氧化鋁佐劑后將混合液置于4°C~6°C中吸附；
B、配置Ph為7.2~?.8的磷酸鹽緩沖液，在磷酸鹽緩沖液中加入磷酸鹽緩沖液質(zhì)量2%~5%的麥芽糖、1%~5%的人血白蛋白、3%的維生素C和5%的半胱氨酸和2%的尿素；
C、將步驟B中的磷酸鹽緩沖液加入至步驟A的溶液中混合，然后加入混合液總質(zhì)量的1%碳酸氫鈉溶液、1%右旋糖酐、2%甘露醇、2%輕甲基纖維素和0.1%~θ.5%亞硒酸鈉；將混合液凍干；
D、前述凍干工藝包括
預(yù)凍:將經(jīng)過步驟C處理的疫苗原液分裝入凍干瓶中，凍干瓶置于凍干機(jī)內(nèi)，使其在零下20°C中預(yù)凍4h，然后在零下35°C中預(yù)凍2h ;同時(shí)開啟真空機(jī)，使凍干機(jī)的真空度維持在8pa~12pa ；
一次干燥:調(diào)節(jié)隔板溫度，控制隔板溫 度維持在零下30°C~零下28°C，真空度維持在15Pa，保溫 IOh ；
二次干燥:調(diào)節(jié)隔板溫度，維持在零下28°C~零下25°C之間，真空度維持在15Pa，保溫
15h ；
解析干燥:隔板溫度升溫至15°C，真空度為15Pa，維持2h ;然后將隔板溫度升溫至30°C，真空度為10Pa，保溫5h。
[0007]其中，在步驟C中還加入了 0.5%的NaCl。
[0008]其中，疫苗原液加入氫氧化鋁佐劑吸附后，使用超聲波進(jìn)行分散，分散時(shí)間為20分鐘。
[0009]其中，在磷酸鹽緩沖溶液中還加入了磷酸鹽緩沖溶液總質(zhì)量5%的明膠。
[0010]綜上所述，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明與現(xiàn)有的狂犬疫苗相比，通過對凍干過程中的穩(wěn)定劑組分和保護(hù)劑的組分，對狂犬疫苗的存儲過程起到了良好的防變性、失效功效，同時(shí)優(yōu)化了凍干工藝路線，設(shè)置了更為合理的凍干參數(shù)，使凍干制劑產(chǎn)品晶體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，外觀符合國家標(biāo)準(zhǔn)。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1
狂犬疫苗凍干制劑的制備方法，包括以下`制備過程；
配置氫氧化鋁佐劑混合液:在經(jīng)過純化的疫苗原液中加入納米級氫氧化鋁佐劑，其質(zhì)量配比為100份疫苗原液中加入15份、粒徑為90納米的氫氧化鋁佐劑，加入氫氧化鋁佐劑后將混合液置于4°C飛。C中吸附，吸附是指讓疫苗原液和氫氧化鋁佐劑混合，讓疫苗原液與氫氧化鋁佐劑結(jié)合。疫苗原液加入氫氧化鋁佐劑吸附后，使用超聲波進(jìn)行分散，分散時(shí)間為20分鐘。上述納米氫氧化鋁佐劑可以采用化學(xué)方法制備，也可以采用物理方法制備。
[0012]磷酸鹽緩沖液穩(wěn)定劑的配置:配置Ph為7.2~?.8的磷酸鹽緩沖液，在磷酸鹽緩沖液中加入磷酸鹽緩沖液質(zhì)量2%的麥芽糖、1%的人血白蛋白、3%的維生素C和5%的半胱氨酸和2%的尿素；然后，在磷酸鹽緩沖溶液中加入磷酸鹽緩沖溶液總質(zhì)量5%的明膠。
[0013]將磷酸鹽緩沖液穩(wěn)定劑加入至氫氧化鋁佐劑混合液中混合，其混合比例為每100g氫氧化鋁佐劑混合液中加入20g磷酸鹽緩沖液穩(wěn)定劑。在混合時(shí)，先將磷酸鹽緩沖液在水浴中升溫至80°C ;然后加入總混合液質(zhì)量的1%碳酸氫鈉溶液、1%右旋糖酐、2%甘露醇、2%輕甲基纖維素、0.1%亞硒酸鈉和0.5%的NaCl ;將混合液凍干。
[0014]前述凍干工藝包括
預(yù)凍:將經(jīng)過處理的疫苗原液分裝入凍干瓶中，凍干瓶置于凍干機(jī)內(nèi)，使其在零下20°C中預(yù)凍4h，然后在零下35°C中預(yù)凍2h ;同時(shí)開啟真空機(jī)，使凍干機(jī)的真空度維持在8pa ；
一次干燥:調(diào)節(jié)隔板溫度，控制隔板溫度維持在零下30°C，真空度維持在15Pa，保溫
IOh ；
二次干燥:調(diào)節(jié)隔板溫度，維持在零下零下25°C之間，真空度維持在15Pa，保溫15h ；解析干燥:隔板溫度升溫至15°C，真空度為15Pa，維持2h ;然后將隔板溫度升溫至30°C，真空度為lOPa，保溫5h。
[0015]將狂犬疫苗凍干制劑產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)，其檢驗(yàn)項(xiàng)目包括初始效價(jià)、熱穩(wěn)定性試驗(yàn)后效價(jià)、外觀等。其檢驗(yàn)結(jié)果如表1。同時(shí)，對實(shí)施例1中的成品進(jìn)行藥物安全性的評價(jià)，進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)其安全性。將疫苗分別進(jìn)行疫苗腦內(nèi)注射實(shí)驗(yàn)、過敏性實(shí)驗(yàn)和注射部位刺激性試驗(yàn)，結(jié)果表明，小鼠未出現(xiàn)異常表現(xiàn)，連續(xù)觀察10天，實(shí)驗(yàn)小鼠全部健康。其中，將狂犬疫苗腹腔注射小鼠，并對其觀察7天。小鼠7天內(nèi)全部健存，體重正常增長。
[0016]實(shí)施例2
狂犬疫苗凍干制劑的制備方法，包括以下制備過程；
配置氫氧化鋁佐劑混合液:在經(jīng)過純化的疫苗原液中加入納米級氫氧化鋁佐劑，其質(zhì)量配比為100份疫苗原液中加入10份、粒徑為50納米的氫氧化鋁佐劑，加入氫氧化鋁佐劑后將混合液置于4°C飛。C中吸附，吸附是指讓疫苗原液和氫氧化鋁佐劑混合，讓疫苗原液與氫氧化鋁佐劑結(jié)合。疫苗原液加入氫氧化鋁佐劑吸附后，使用超聲波進(jìn)行分散，分散時(shí)間為20分鐘。上述納米氫氧化鋁佐劑可以采用化學(xué)方法制備，也可以采用物理方法制備。
[0017]磷酸鹽緩沖液穩(wěn)定劑的配置:配置Ph為7.2~?.8的磷酸鹽緩沖液，在磷酸鹽緩沖液中加入磷酸鹽緩沖液質(zhì)量5%的麥芽糖、5%的人血白蛋白、3%的維生素C和5%的半胱氨酸和2%的尿素；然后，在磷酸鹽緩沖溶液中加入磷酸鹽緩沖溶液總質(zhì)量5%的明膠。
[0018]將磷酸鹽緩沖液穩(wěn)定劑加入至氫氧化鋁佐劑混合液中混合，其混合比例為每100g氫氧化鋁佐劑混合液中加入20g磷酸鹽緩沖液穩(wěn)定劑。在混合時(shí)，先將磷酸鹽緩沖液在水浴中升溫至80°C ;然后加入總混合液質(zhì)量的1%碳酸氫鈉溶液、1%右旋糖酐、2%甘露醇、2%羥甲基纖維素、0.5%亞 硒酸鈉和0.5%的NaCl ;將混合液凍干。
[0019]前述凍干工藝包括
預(yù)凍:將經(jīng)過處理的疫苗原液分裝入凍干瓶中，凍干瓶置于凍干機(jī)內(nèi)，使其在零下20°C中預(yù)凍4h，然后在零下35°C中預(yù)凍2h ;同時(shí)開啟真空機(jī)，使凍干機(jī)的真空度維持在8pa ；
一次干燥:調(diào)節(jié)隔板溫度，控制隔板溫度維持在零下28°C，真空度維持在15Pa，保溫
IOh ；
二次干燥:調(diào)節(jié)隔板溫度，維持在零下零下25°C之間，真空度維持在15Pa，保溫15h ；解析干燥:隔板溫度升溫至15°C，真空度為15Pa，維持2h ;然后將隔板溫度升溫至30°C，真空度為10Pa，保溫5h。
[0020]將狂犬疫苗凍干制劑產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)，其檢驗(yàn)項(xiàng)目包括效價(jià)、熱穩(wěn)定性、外觀等。其檢驗(yàn)結(jié)果如表1。同時(shí)，對實(shí)施例2中的成品進(jìn)行藥物安全性的評價(jià)，進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)其安全性。將疫苗分別進(jìn)行疫苗腦內(nèi)注射實(shí)驗(yàn)、過敏性實(shí)驗(yàn)和注射部位刺激性試驗(yàn),結(jié)果表明，小鼠未出現(xiàn)異常表現(xiàn)，連續(xù)觀察10天，實(shí)驗(yàn)小鼠全部健康。其中，將狂犬疫苗腹腔注射小鼠，并對其觀察7天。小鼠7天內(nèi)全部健存，體重正常增長。疫苗的檢測按照藥典中的要求和方法進(jìn)行檢測。在實(shí)施例1和實(shí)施例2中，對疫苗的熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)采用加速實(shí)驗(yàn)，將實(shí)施例I和實(shí)施例2的疫苗分別置于38°C下，檢測其7天后、14天后、28天后的有效效價(jià)。分別按照現(xiàn)行版《中國生物制品規(guī)程》對凍干的試驗(yàn)樣品進(jìn)行效價(jià)測定，其效價(jià)不低于2.5IU/dose劑量為合格。
[0021]表1熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.狂犬疫苗凍干制劑的制備方法，包括以下制備過程； A、在經(jīng)過純化的疫苗原液中加入納米級氫氧化鋁佐劑，其質(zhì)量配比為100份疫苗原液中加入10份~15份、粒徑為50納米~90納米的氫氧化鋁佐劑，加入氫氧化鋁佐劑后將混合液置于4°C~6°C中吸附； B、配置Ph為7.2^7.8的磷酸鹽緩沖液，在磷酸鹽緩沖液中加入磷酸鹽緩沖液質(zhì)量2%~5%的麥芽糖、1%~5%的人血白蛋白、3%的維生素C和5%的半胱氨酸和2%的尿素； C、將步驟B中的磷酸鹽緩沖液加入至步驟A的溶液中混合，然后加入混合液總質(zhì)量的1%碳酸氫鈉溶液、1%右旋糖酐、2%甘露醇、2%輕甲基纖維素和0.1%~θ.5%亞硒酸鈉；將混合液凍干； D、前述凍干工藝包括 預(yù)凍:將經(jīng)過步驟C處理的疫苗原液分裝入凍干瓶中，凍干瓶置于凍干機(jī)內(nèi)，使其在零下20°C中預(yù)凍4h，然后在零下35°C中預(yù)凍2h ;同時(shí)開啟真空機(jī)，使凍干機(jī)的真空度維持在8pa~12pa ； 一次干燥:調(diào)節(jié)隔板溫度，控制隔板溫度維持在零下30°C~零下28°C，真空度維持在15Pa，保溫 IOh ； 二次干燥:調(diào)節(jié)隔板溫度，維持在零下28°C~零下25°C之間，真空度維持在15Pa，保溫15h ； 解析干燥:隔板溫度升溫至15°C，真空度為15Pa，維持2h ;然后將隔板溫度升溫至30°C，真空度為10Pa，保溫5h。
2.如權(quán)利要求1所述的狂犬疫苗凍干制劑的制備方法，其特征在于:在步驟C中加入7 0.5% 的 NaCl。
3.如權(quán)利要求1所述的狂犬疫苗凍干制劑的制備方法，其特征在于:疫苗原液加入氫氧化鋁佐劑吸附后，使用超聲波進(jìn)行分散，分散時(shí)間為20分鐘。
4.如權(quán)利要求1所述的狂犬疫苗凍干制劑的制備方法，其特征在于:在磷酸鹽緩沖溶液中加入了磷酸鹽緩沖溶液總質(zhì)量5%的明膠。
【文檔編號】A61K47/38GK103505723SQ201310430624
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月22日
【發(fā)明者】蔡勇, 楊剛強(qiáng) 申請人:成都康華生物制品有限公司