一種人干細(xì)胞組合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明為一種人干細(xì)胞組合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途。由包含離體的人干細(xì)胞和生理鹽水組成的所述干細(xì)胞組合物配置成的體積為10～80ml的干細(xì)胞懸液，每份所述干細(xì)胞懸液中含有的人干細(xì)胞的數(shù)量為1～8×108個(gè)。本發(fā)明可通過(guò)靜脈注射進(jìn)行阿爾茨海默癥的治療。靜脈輸入安全可靠，操作性強(qiáng)，副作用小，干細(xì)胞可以通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)細(xì)胞受損部位。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種人干細(xì)胞組合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種人干細(xì)胞組合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物的用途，進(jìn)一步地說(shuō)，是涉及一種人類(lèi)骨髓、臍帶血或外周血干細(xì)胞組合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]阿爾茨海默癥是一種進(jìn)行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為認(rèn)知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進(jìn)行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。該病多起病于老年期，潛隱起病，病程緩慢且不可逆，臨床上以智能損害為主。起病在65歲以前者舊稱(chēng)老年前期癡呆，或早老性癡呆，多有同病家族史，病情發(fā)展較快，顳葉及頂葉病變較顯著，常有失語(yǔ)和失用。
[0003]該病通常起病隱匿，為特點(diǎn)性、進(jìn)行性病程，無(wú)緩解，由發(fā)病至死亡平均病程約8 - 10年，但也有些患者病程可持續(xù)15年或以上。阿爾茨海默癥的臨床癥狀分為兩方面，即認(rèn)知功能減退癥狀和非認(rèn)知性精神癥狀。常伴有高級(jí)皮層功能受損，如失語(yǔ)、失認(rèn)或失用和非認(rèn)知性精神癥狀。根據(jù)疾病的發(fā)展和認(rèn)知功能缺損的嚴(yán)重程度，可分為輕度、中度和重度。
[0004]輕度
[0005]1、輕度語(yǔ)言功能受損；
[0006]2、日常生活中出現(xiàn) 明顯的記憶減退，特別是對(duì)近期事件記憶的喪失；
[0007]3、時(shí)間觀念產(chǎn)生混淆；
[0008]4、在熟悉的地方迷失方向；
[0009]5、做事缺乏主動(dòng)性及失去動(dòng)機(jī)；
[0010]6、出現(xiàn)憂(yōu)郁或攻擊行為；
[0011]7、對(duì)日常活動(dòng)及生活中的愛(ài)好喪失興趣。
[0012]中度
[0013]1、變得更加健忘，特別常常忘記最近發(fā)生的事及人名；
[0014]2、不能繼續(xù)獨(dú)立地生活；
[0015]3、不能獨(dú)自從事煮飯、打掃衛(wèi)生或購(gòu)物等活動(dòng)；
[0016]4、開(kāi)始變得非常依賴(lài)；
[0017]5、個(gè)人自理能力下降，需要他人的協(xié)助，如上廁所、洗衣服及穿衣等；
[0018]6、說(shuō)話(huà)越來(lái)越困難；
[0019]7、出現(xiàn)無(wú)目的的游蕩和其他異常行為；
[0020]8、在居所及駐地這樣熟悉的地方也會(huì)走失；
[0021]9、出現(xiàn)幻覺(jué)。
[0022]重度[0023]1、不能獨(dú)立進(jìn)食；
[0024]2、不能辨認(rèn)家人、朋友及熟悉的物品；
[0025]3、明顯地語(yǔ)言理解和表達(dá)困難；
[0026]4、在居所內(nèi)找不到路；
[0027]5、行走困難；
[0028]6、大、小便失禁；
[0029]7、在公共場(chǎng)合出現(xiàn)不適當(dāng)?shù)男袨椋?br> [0030]8、行動(dòng)開(kāi)始需要輪椅或臥床不起。
[0031]阿爾茨海默癥給患者帶來(lái)了很大的痛苦，現(xiàn)有技術(shù)的治療方法主要包括:
[0032]1.改善膽堿神經(jīng)傳遞藥物
[0033]老年癡呆的一個(gè)主要原因是膽堿不足，導(dǎo)致患者記憶減退、定向力喪失、行為和個(gè)性改變等。因此，具有增強(qiáng)膽堿能作用的藥物在老年癡呆癥的治療方面發(fā)揮了重要作用。目前常用的4種是乙酰膽堿酯酶抑制劑，包括他克林，安理申，艾斯能，加蘭他敏(另外一種是N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸(NMDA)受體拮抗劑，鹽酸美金剛)。
[0034]此類(lèi)藥物的主要副作用為肝毒性，靜注過(guò)快可引起頭痛、暈眩、乏力、視力模糊、惡心及心動(dòng)過(guò)速,劑量過(guò)大有可能導(dǎo)致癲癇樣發(fā)作、抽搐、呼吸抑制。
`[0035]2.改善腦血液循環(huán)和腦細(xì)胞代謝的藥物
[0036]老年癡呆患者存在糖、蛋白、核酸、脂質(zhì)等代謝障礙，同時(shí)其腦血液流量及耗氧量明顯低于同齡正常人。因此，腦代謝激活劑和腦循環(huán)改善劑，尤其是具有腦血管擴(kuò)張作用的腦代謝激活劑成為老年癡呆治療的一大類(lèi)可供選用的藥物。此類(lèi)藥物如腦復(fù)康、都可喜、喜得鎮(zhèn)、己酮可可堿、腦通等。
[0037]此類(lèi)藥物的主要副作用為多有消化道系統(tǒng)反應(yīng)和肝腎功能損害等不良反應(yīng)。
[0038]3.鈣拮抗劑
[0039]此類(lèi)藥物易于通過(guò)血腦屏障，選擇性擴(kuò)張腦血管，減少因鈣離子內(nèi)流造成的神經(jīng)細(xì)胞損傷或死亡，從而改善記憶和認(rèn)知功能。
[0040]此類(lèi)藥物的副作用和不良反應(yīng)較多，一般包括體位性低血壓，心動(dòng)過(guò)速，頭痛，多尿，便秘，心動(dòng)過(guò)緩或傳導(dǎo)阻滯，抑制心肌收縮力，皮疹和過(guò)敏反應(yīng)等。
[0041]4.激素類(lèi)藥物
[0042]使用雌激素治療老年癡呆癥可以緩解女性患者的癥狀，并可以延緩或防止患者病情發(fā)展。研究認(rèn)為，雌激素的這方面作用與其抗氧化，減少淀粉樣蛋白沉積對(duì)細(xì)胞的損傷，促進(jìn)神經(jīng)元的修復(fù)，防止神經(jīng)細(xì)胞死亡等有關(guān)。加拿大研究人員發(fā)現(xiàn)，男性睪丸素可以用來(lái)治療包括老年癡呆癥在內(nèi)的多神經(jīng)退化性疾病。
[0043]激素有少量高效的特點(diǎn)，因此臨床使用需嚴(yán)格控制用量，如過(guò)量會(huì)導(dǎo)致內(nèi)分泌失調(diào)，情緒失控等癥狀。激素類(lèi)藥物日常應(yīng)用不便，需要在醫(yī)生指導(dǎo)下應(yīng)用，且長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用易產(chǎn)生依賴(lài)性。
[0044]5.非甾體抗炎藥物
[0045]經(jīng)常服用阿斯匹林或消炎鎮(zhèn)痛藥物的老年人患老年癡呆和認(rèn)知障礙的危險(xiǎn)性明顯降低。小劑量阿司匹林可以減少老年癡呆癥惡化。這是因?yàn)榘⑺酒チ志哂性鰪?qiáng)腦血流量，防止血液凝固的作用。此外，正在研究的非留體抗炎藥布洛芬、雙氯芬酸、奈普生等都有可能成為治療老年癡呆癥的有效藥物。
[0046]此類(lèi)藥對(duì)胃腸道及腎臟的副作用較大。
[0047]6.自由基清除劑和抗氧劑
[0048]有人利用具有自由基清除作用的銀杏葉提取物EGB — 761治療老年癡呆患者，發(fā)現(xiàn)有明顯的認(rèn)知功能改善作用。維生素E是重要的抗氧化劑，具有自由基代謝的神經(jīng)保護(hù)作用，還可能通過(guò)抑制和清除腦內(nèi)β_淀粉樣蛋白沉積，產(chǎn)生延緩衰老的作用。其它自由基清除劑還有，退黑素、姜黃素、去鐵敏、艾地苯醌、甲磺酸替拉扎特等。維生素C具有清除自由基、抗氧化作用，能夠穩(wěn)定細(xì)胞膜。
[0049]該類(lèi)藥物需長(zhǎng)期定時(shí)服用，阿爾茨海默病患者短期記憶嚴(yán)重缺失，難以做到按時(shí)服用，需要家人給予長(zhǎng)期照顧和幫助。
[0050]7.毒蕈堿受體激動(dòng)劑
[0051]高劑量服用毒蕈堿Ml受體激動(dòng)劑占諾美林，可明顯改善老年癡呆患者的認(rèn)知功能和動(dòng)作行為能力。
[0052]但由于該藥在胃腸及心血管方面的嚴(yán)重副作用，許多患者不能繼續(xù)治療。
[0053]綜上所述，所有現(xiàn)有技術(shù)的治療阿爾茨海默癥的藥物都存在這樣那樣的毒副作用。因此開(kāi)發(fā)一種全新的、既能治療阿爾茨海默癥、而又能避免上述種種副作用的藥物，已成為該領(lǐng)域亟待解決的一個(gè)課題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0054]本發(fā)明的目的，就是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種人干細(xì)胞組合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途。
[0055]關(guān)于本文中有關(guān)干細(xì)胞的相關(guān)術(shù)語(yǔ)定義如下:
[0056]1.干細(xì)胞組合物:為本 申請(qǐng)人:的專(zhuān)利申請(qǐng)(201210017987.9)中提到的2_4mm厚的油狀干細(xì)胞層(詳見(jiàn)其說(shuō)明書(shū)中干細(xì)胞制備過(guò)程);
[0057]2.干細(xì)胞懸液:為該油狀干細(xì)胞層經(jīng)生理鹽水清洗及稀釋后得到的懸液，定容為10-80ml ；
[0058]3.干細(xì)胞懸液的稀釋液:由于懸液中的干細(xì)胞數(shù)量多，易吸附成團(tuán)，為了防止靜滴時(shí)不能通過(guò)濾網(wǎng)，因此靜滴前需再用100ml的生理鹽水進(jìn)一步稀釋?zhuān)吹玫礁杉?xì)胞懸液的稀釋液，此時(shí)的總?cè)萘繛?10-180ml。
[0059]注:自始至終，干細(xì)胞的數(shù)量并未發(fā)生變化，即溶質(zhì)為定量，只是增加了生理鹽水的量，即溶劑為變量，因此溶液的量也隨之變化，即有了三種不同的稱(chēng)呼。若不同，也只是溶液的密度不同，由于起效成分為干細(xì)胞，因此生理鹽水的多少并不會(huì)影響治療的效果。
[0060]干細(xì)胞是一類(lèi)具有自我更新，高度增殖和多向分化潛能的細(xì)胞群體，即這些細(xì)胞可以通過(guò)細(xì)胞分裂維持自身細(xì)胞群的大小，同時(shí)又可以進(jìn)一步分化成為各種不同的組織細(xì)胞，被醫(yī)學(xué)界稱(chēng)為“萬(wàn)用細(xì)胞”。
[0061]本發(fā)明就是基于干細(xì)胞具有的細(xì)胞替代作用，將干細(xì)胞植入體內(nèi)后，能自動(dòng)識(shí)別并移行至細(xì)胞損傷部位，然后分裂增殖成新的細(xì)胞，替代受損或病變細(xì)胞行使其功能。干細(xì)胞可于患病部位建立側(cè) 支循環(huán)，改善局部血供，修復(fù)受損細(xì)胞。
[0062]阿爾茨海默病是一種神經(jīng)退行性疾病，而干細(xì)胞具有細(xì)胞替代作用，干細(xì)胞植入體內(nèi)后，能自動(dòng)識(shí)別并移行至細(xì)胞損傷部位，然后分裂增殖成新的細(xì)胞，替代壞死的神經(jīng)細(xì)胞行使其功能。干細(xì)胞可于缺血病變部位的周?chē)?cè)支循環(huán)，恢復(fù)血運(yùn)，修復(fù)受損的腦神經(jīng)細(xì)胞，進(jìn)而逐漸恢復(fù)大腦功能。
[0063]另外，由于干細(xì)胞具有增殖和定向分化的能力，當(dāng)干細(xì)胞被趨化至腦細(xì)胞損傷局部后，其中部分細(xì)胞分泌大量小分子物質(zhì)，趨化受體干細(xì)胞，可促進(jìn)細(xì)胞增殖并定向分化，完成大腦皮層功能的修復(fù)。而且干細(xì)胞能釋放多種生物活性物質(zhì)，如可以釋放膜微粒，趨化并調(diào)節(jié)周?chē)?xì)胞的功能活性，喚醒處于休眠期的組織細(xì)胞，促進(jìn)其發(fā)揮其生物學(xué)特性；另由于其具有的免疫調(diào)節(jié)作用，可增強(qiáng)人體的免疫機(jī)能和修復(fù)受損的免疫系統(tǒng)，降低機(jī)體炎癥反應(yīng)，從而預(yù)防各種免疫因素及感染所致的相關(guān)疾病。
[0064]本發(fā)明的人干細(xì)胞組合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途是這樣實(shí)現(xiàn)的:
[0065]本發(fā)明所述的人干細(xì)胞選自人類(lèi)骨髓、臍帶血或外周血干細(xì)胞；
[0066]所述的干細(xì)胞組合物為按照本 申請(qǐng)人:的申請(qǐng)?zhí)枮?01210017987.9、名稱(chēng)為“一種人類(lèi)骨髓、臍帶血或外周血干細(xì)胞樣本密度分離液及干細(xì)胞分離方法”中的干細(xì)胞分離方法步驟(3)得到的“存在于整個(gè)離心管中間位置的約(2-4) _厚的油狀干細(xì)胞層”；
[0067]每份所述干細(xì)胞組合物經(jīng)(10-80) ml生理鹽水清洗及定容后，得到含有的人干細(xì)胞的數(shù)量為(1~8) X IO8個(gè)的干細(xì)胞懸液；
[0068]每份所述的干細(xì)胞懸液在使用前再用100ml的生理鹽水進(jìn)一步稀釋?zhuān)玫礁杉?xì)胞懸液中的個(gè)數(shù)密度為(0.125~8) X IO7個(gè)/ml、總?cè)萘繛?10_180ml的干細(xì)胞懸液的稀釋液。
[0069]在具體實(shí)施中，所述的用途采用以下方法實(shí)現(xiàn):
[0070]所述的干細(xì)胞懸液的稀釋液通過(guò)體表淺靜脈進(jìn)行靜脈點(diǎn)滴法注射到人體。
[0071]所述的靜脈點(diǎn)滴法的步驟為:
[0072](I)先用0.9%的氯化鈉溶液20_30ml沖管；
[0073](2)接著開(kāi)始靜脈點(diǎn)滴注射輸入干細(xì)胞懸液的稀釋液，保持20-30滴/分鐘，半小時(shí)后無(wú)不良反應(yīng)可增加到30-50滴/分鐘，細(xì)胞輸入過(guò)程中每15分鐘輕輕晃動(dòng)裝有所述干細(xì)胞懸液的稀釋液的細(xì)胞保存袋一次；
[0074](3)細(xì)胞輸入完畢后用0.9%的氯化鈉溶液20ml沖入細(xì)胞保存袋中輕輕晃動(dòng)，再用0.9%的氯化鈉溶液20-30ml沖凈即可將輸液器中細(xì)胞沖凈，得到的沖洗液也同樣注入患者體內(nèi)，以保證細(xì)胞輸入的數(shù)量；
[0075]靜滴時(shí)將細(xì)胞液搖勻，避免細(xì)胞貼壁。
[0076]所述的人干細(xì)胞優(yōu)選為人類(lèi)臍帶血干細(xì)胞。
[0077]當(dāng)用所述干細(xì)胞組合物用于治療阿爾茨海默癥選擇靜脈輸入治療時(shí)，由于干細(xì)胞具有增殖和定向分化的能力，當(dāng)干細(xì)胞被趨化至腦細(xì)胞損傷局部后，其中部分細(xì)胞分泌大量小分子物質(zhì)，趨化受體干細(xì)胞，可促進(jìn)細(xì)胞增殖并定向分化，完成內(nèi)膜結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)。而且干細(xì)胞能釋放多種生物活性物質(zhì)，如可以釋放膜微粒，趨化并調(diào)節(jié)周?chē)?xì)胞的功能活性，喚醒處于休眠期的組織細(xì)胞，促進(jìn)其發(fā)揮其生物學(xué)特性；另由于其具有的免疫調(diào)節(jié)作用，可增強(qiáng)人體的免疫機(jī)能和修復(fù)受損的免疫系統(tǒng)，降低機(jī)體炎癥反應(yīng)，從而預(yù)防各種免疫因素及感染所致的相關(guān)疾病。同時(shí)靜脈輸入安全可靠，操作性強(qiáng)，副作用小，干細(xì)胞可以通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)細(xì)胞受損部位。
[0078]綜上所述，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
[0079]1.臨床使用安全，內(nèi)毒素< 1EU,符合國(guó)家藥典規(guī)定的注射用標(biāo)準(zhǔn)。
[0080]2.獲取的細(xì)胞懸液體積小，可按醫(yī)生的需求配成臨床治療所需劑量。
[0081]3.靜脈輸入安全可靠，操作性強(qiáng)，治療損傷小，副作用小，干細(xì)胞可以通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)細(xì)胞受損部位。
[0082]4.另外使用本 申請(qǐng)人:的申請(qǐng)?zhí)枮?01210017987.9、名稱(chēng)為“一種人類(lèi)骨髓、臍帶血或外周血干細(xì)胞樣本密度分離液及干細(xì)胞分離方法”的方法制得的人造血干細(xì)胞，還具備以下優(yōu)勢(shì)
[0083](I)含有多種細(xì)胞因子，能夠使干細(xì)胞快速準(zhǔn)確的到達(dá)受損部位，并輔助其發(fā)揮生物學(xué)活性；
[0084](2)細(xì)胞數(shù)量大，特別是由人臍帶血分離提取的純化干細(xì)胞，每份臍帶血(80ml左右)分離出的干細(xì)胞數(shù)量皆可達(dá)到IO8以上；
[0085](3)細(xì)胞種類(lèi)全，分離全部的紅細(xì)胞，血小板，血漿物質(zhì)，去除部分成熟白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，純化有核細(xì)胞，保留所有干細(xì)胞；
[0086](4)細(xì)胞活性強(qiáng)，采自人體新鮮活細(xì)胞，經(jīng)分離純化后獲取干細(xì)胞。細(xì)胞活性達(dá)96%以上。
【具體實(shí)施方式】
[0087]下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
[0088]實(shí)施例1
[0089]用于治療阿爾茨海默癥的干細(xì)胞懸液的制備。
[0090]無(wú)菌紗布蘸75%的酒精，擦拭所有操作過(guò)程中所需物品及操作臺(tái)。(本操作中所涉及消毒步驟皆用75%酒精的無(wú)菌紗布擦拭，以下簡(jiǎn)稱(chēng)消毒)
[0091]1，將50mL含有枸櫞酸鈉的臍帶血血袋消毒，導(dǎo)入50mLl號(hào)液瓶中。將50mL2號(hào)液全部倒入I號(hào)液瓶中，蓋緊瓶蓋，充分搖勻。將I號(hào)液瓶置于超凈臺(tái)，松動(dòng)瓶蓋后靜置20-30min，待分層。12支離心管拆封，備用。
[0092]2，取3號(hào)液，消毒外壁，開(kāi)蓋，用新移液管取25mL3號(hào)液置于50mL新離心管中，一共移取3次，得到3支有試劑3號(hào)液的離心管，備用。
[0093]3,取步驟I靜置20_30min后的試劑I號(hào)液瓶中的上層液,用移液管移取分別置于離心管中每只45mL,蓋緊蓋置于離心機(jī)中設(shè)置速度為2500轉(zhuǎn)時(shí)間為5分鐘溫度為5°C。從離心機(jī)中取出離心管，消毒，開(kāi)蓋，棄上清液。
[0094]4，取新移液管，移取0.9%NaCl分別加入到離心管中至IOmL處，搖勻，得細(xì)胞混合液備用。取步驟2下裝有3號(hào)液的離心管，緩慢加入剛剛制備的細(xì)胞混合液，保持細(xì)胞混合液懸浮于3號(hào)液表面，加至45ml，輕放至試管架，即得到3支具有分層液的離心管，置于離心機(jī)中，設(shè)置速度為1800轉(zhuǎn)，時(shí)間為30分鐘，溫度為5°C。
[0095]5，從離心機(jī)中輕取出離心管，保持液面平穩(wěn)，消毒，開(kāi)蓋，用一次性膠頭滴管吸取離心管中間的絮狀液體，收集置三支新離心管中，用移液管加入0.9%NaCl至45ml處，搖勻，配平，離心，設(shè)置速度為2000轉(zhuǎn)時(shí)間為5分鐘溫度為5°C (注:第一次清洗)。[0096]6，取出具有細(xì)胞液的離心管，消毒，開(kāi)蓋，棄上清液后，用注射器先加入少量0.9%NaCl，搖勻后吸取至一支試管內(nèi)，加入0.9%NaCl至45ml處，再搖勻，配平，離心，速度為1800轉(zhuǎn)，時(shí)間為5分鐘溫度為5°C (注:第二次清洗)。[0097]7，取出具有細(xì)胞液的離心管，消毒，開(kāi)蓋，棄上清液，用注射器先加入少量0.9%NaCl，搖勻后加入0.9%NaCl至45ml處，再搖勻，配平，離心，設(shè)置速度為1600轉(zhuǎn)時(shí)間為5分鐘溫度為5°C (第三次清洗)。
[0098]8,取出具有細(xì)胞液的離心管，消毒，開(kāi)蓋,棄上清液后加入0.9%NaCl至所需要稀釋刻度處搖勻，用微量定量移液器取IOul用于細(xì)胞計(jì)數(shù)，其余細(xì)胞液密封，置于冰桶內(nèi)待用。
[0099]實(shí)施例2
[0100]藥理實(shí)驗(yàn)，臍帶血干細(xì)胞懸液的一般藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)
[0101]I 材料
[0102]1.1動(dòng)物:KM小鼠體質(zhì)量18~22g，雌雄各半。健康雜種家犬，體重12~18kg，雌雄皆用。動(dòng)物飼養(yǎng)于SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室條件下，室內(nèi)溫度19~22°C，相對(duì)濕度40%~50%，給予全價(jià)顆粒飼料，自由攝食、飲水。
[0103]1.2藥物:人類(lèi)臍帶血干細(xì)胞懸液，其中干細(xì)胞含量為8X IO7個(gè)/ml。
[0104]1.3上海欣曼公司SYS-G型小鼠自主活動(dòng)測(cè)頻儀，美國(guó)BIOPAC公司RM-6000型多導(dǎo)生理記錄儀。
[0105]2試驗(yàn)方法
[0106]2.1對(duì)精神神經(jīng)系統(tǒng)的影響
[0107]2.1.1對(duì)小鼠一般外觀行為的影響:取小鼠80只，隨機(jī)分為四組，每組20只，雌雄各半，給藥組分設(shè)0.5、1.0,2.0ul/kg三個(gè)劑量組，對(duì)照組給予5%葡萄糖注射液，均按
0.lml/10g體重尾靜脈注射給藥，給藥后lOmin，觀察小鼠的一般行為表現(xiàn)，步態(tài)、姿勢(shì)、肌肉緊張度、瞳孔變化、流涎、二便、皮毛等，同對(duì)照組比較，了解受試藥對(duì)動(dòng)物的影響。
[0108]2.1.2對(duì)小鼠協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)的影響:分組及給藥同前，采用傾斜板法，于給藥前及給藥后10min、30min及60min各進(jìn)行一次測(cè)定，計(jì)算各組小鼠從木板上跌落的百分率，按簡(jiǎn)化直接法統(tǒng)計(jì)。
[0109]2.1.3對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響:小鼠80只，分組及給藥同前，于尾靜脈注射給藥后IOmin,置小鼠于自發(fā)活動(dòng)測(cè)定儀中，穩(wěn)定5min后,測(cè)定IOmin內(nèi)自主活動(dòng)次數(shù),用組間t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。
[0110]2.2對(duì)呼吸系統(tǒng)及心血管系統(tǒng)的影響
[0111]家犬6只，雌雄各半，用戊巴比妥鈉30mg/kg，靜脈注射麻醉后，背位固定，分離右頸總動(dòng)脈，插管連接TP —101型壓力轉(zhuǎn)換能以多導(dǎo)生理記錄儀記錄收縮壓，舒張壓及平均動(dòng)脈壓；以針形電極刺入四肢皮下記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖，以立位轉(zhuǎn)換能器連接胸骨記錄呼吸頻率及幅度。實(shí)驗(yàn)設(shè)0.5、1.0、2.0ul/kg三個(gè)劑量組，對(duì)照組用5%葡萄糖注射液，給藥容積為lml/kg，由股靜脈插管給藥，注射速度為30s，分別在靜脈注射給藥后1、2、5、10、15、20及30min時(shí)記錄上述各項(xiàng)指標(biāo),觀察臍帶血干細(xì)胞懸液對(duì)呼吸,心電及血壓的作用，用t檢驗(yàn)法進(jìn)行用藥前后顯著性檢驗(yàn)分析。
[0112]3 結(jié)論[0113]3.1對(duì)小鼠一般行為表現(xiàn)的影響:實(shí)驗(yàn)各組動(dòng)物在用藥后60min內(nèi)的一般行為，步態(tài)、肌緊張度、活動(dòng)、飲食、皮毛及二便，均無(wú)顯著變化，未見(jiàn)有瞳孔大小改變，豎毛、倦伏、流涎等異常癥狀，同對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0114]3.2對(duì)協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)的影響:各組動(dòng)物于給藥前及給藥后各觀測(cè)點(diǎn)的跌落率均為0，表明在實(shí)驗(yàn)所用0.5,1.0,2.0ul/kg劑量下對(duì)小鼠協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)無(wú)明顯影響。
[0115]3.3對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響:臍帶血干細(xì)胞懸液各劑量組對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響見(jiàn)表1。
[0116]表1對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響
【權(quán)利要求】
1.一種人干細(xì)胞組合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途，其特征在于: 所述的人干細(xì)胞選自人類(lèi)骨髓、臍帶血或外周血干細(xì)胞； 所述的干細(xì)胞組合物為按照本 申請(qǐng)人:的申請(qǐng)?zhí)枮?01210017987.9、名稱(chēng)為“一種人類(lèi)骨髓、臍帶血或外周血干細(xì)胞樣本密度分離液及干細(xì)胞分離方法”中的干細(xì)胞分離方法步驟(3)得到的“存在于整個(gè)離心管中間位置的約(2-4) mm厚的油狀干細(xì)胞層”； 每份所述干細(xì)胞組合物經(jīng)(10-80) ml生理鹽水清洗及定容后，得到含有的人干細(xì)胞的數(shù)量為(I~8) X IO8個(gè)的干細(xì)胞懸液； 每份所述的干細(xì)胞懸液在使用前再用100ml的生理鹽水進(jìn)一步稀釋?zhuān)玫礁杉?xì)胞懸液中的個(gè)數(shù)密度為(0.125~8) X IO7個(gè)/ml、總?cè)萘繛?10_180ml的干細(xì)胞懸液的稀釋液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途，其特征在于，所述的用途采用以下方法實(shí)現(xiàn): 所述的干細(xì)胞懸液的稀釋液通過(guò)體表淺靜脈進(jìn)行靜脈點(diǎn)滴法注射到人體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途，其特征在于，所述的靜脈點(diǎn)滴法的步驟為: (1)先用0.9%的氯化鈉溶液20-30ml沖管； (2)接著開(kāi)始靜脈點(diǎn)滴注射輸入干細(xì)胞懸液的稀釋液，保持20-30滴/分鐘，半小時(shí)后無(wú)不良反應(yīng)可增加到30-50滴/分鐘，細(xì)胞輸入過(guò)程中每15分鐘輕輕晃動(dòng)裝有所述干細(xì)胞懸液的稀釋液的細(xì)胞保存袋一次； (3)細(xì)胞輸入完畢后用0.9%的氯化鈉溶液20ml沖入細(xì)胞保存袋中輕輕晃動(dòng)，再用0.9%的氯化鈉溶液20-30ml沖凈即可將輸液器中細(xì)胞沖凈，得到的沖洗液也同樣注入患者體內(nèi)，以保證細(xì)胞輸入的數(shù)量； 靜滴時(shí)將細(xì)胞液搖勻，避免細(xì)胞貼壁。
4.根據(jù)權(quán)利要求1~3之一的人干細(xì)胞組合物在制備用于治療阿爾茨海默癥的藥物中的用途，其特征在于: 所述的人干細(xì)胞為人類(lèi)臍帶血干細(xì)胞。
【文檔編號(hào)】A61K35/28GK103599129SQ201310551503
【公開(kāi)日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】唐明淇 申請(qǐng)人:唐明淇