一種紅花注射液的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種紅花注射液的制備方法，屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。為了解決現(xiàn)有紅花注射液有效成份含量少，雜質(zhì)多，臨床使用不良反應(yīng)多，副作用大的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種紅花注射液的制備方法，其包括如下步驟：將紅花藥材經(jīng)過(guò)超微粉碎，加60%乙醇，50℃保溫循環(huán)溫浸三次，濃縮成浸膏后，經(jīng)過(guò)兩次醇沉，一次水沉，電滲析除去金屬離子，最后采用中空纖維聯(lián)合復(fù)合卷式超濾膜超濾的方法除去大分子等無(wú)效成份。本發(fā)明所制備得到的紅花注射液具有藥品有效成份含量高、大分子雜質(zhì)少的優(yōu)點(diǎn)，用于臨床使用時(shí)更加安全有效。
【專利說(shuō)明】一種紅花注射液的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種紅花注射液的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紅花注射液為菊科植物紅花經(jīng)加工提取的中藥制劑，呈黃紅色或棕紅色，具有活血化瘀的作用。藥理實(shí)驗(yàn)表明，紅花注射液可增加冠脈流量及心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量，可直接或部分阻滯α腎上腺素受體使血管擴(kuò)張，有效擴(kuò)張血管，并降低血清中總體膽固醇、總酯、三硝酸甘油酯及酯化脂肪酸及抗血栓形成和抑制血小板聚集作用；并可對(duì)腦組織具有保護(hù)及鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、抗炎、興奮子宮、興奮平滑肌作用；還能改善細(xì)胞乏氧狀態(tài)和機(jī)體內(nèi)環(huán)境增加心腦肝等臟器的血流量，改善微循環(huán)。可用于治療閉塞性腦血管疾病、冠心病等疾病。閉塞性腦血管疾病，冠心病，脈管炎是一種臨床常見(jiàn)的疾病，紅花注射液以其活血化瘀之功效，廣泛應(yīng)用于治療閉塞性腦血管疾病、冠心病、脈管炎等疾病，是目前治療重大疾病心腦血管疾病藥物的首選藥品之一，被列入國(guó)家醫(yī)保用藥目錄。
[0003]但中藥注射液臨床上不良反應(yīng)較多,近年來(lái)紅花注射液的不良反應(yīng)也頻頻爆出，如2013年2月6日，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布第52期《藥品不良反應(yīng)信息通報(bào)》，提示關(guān)注紅花注射液和碘普羅胺注射液引起嚴(yán)重不良反應(yīng)的問(wèn)題。據(jù)最新通報(bào)，2012年，以紅花為主要成分的紅花注射液，在國(guó)家藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)中的病例報(bào)告數(shù)共計(jì)3306例，嚴(yán)重病例報(bào)告共計(jì)154例。其主要不良反應(yīng)表現(xiàn)為:呼吸困難、過(guò)敏性休克、心悸等。中藥注射液不良反應(yīng)較多，一方面是因?yàn)椴缓侠淼呐湮槭褂?，另一方面則是藥品本身工藝問(wèn)題導(dǎo)致的雜質(zhì)去除不干凈，有效成份含量不明確或者有效組份純度不高。2009年7月，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局出臺(tái)了“中藥注射劑安全性再評(píng)價(jià)質(zhì)量控制要點(diǎn)”，明確要求對(duì)于具體品種的工藝條件下可能存在 、而質(zhì)量研究中未檢出的大類成分，應(yīng)建立排除性檢查方法，必要時(shí)，應(yīng)建立高分子量物質(zhì)檢查項(xiàng)。正在制訂中的2015年版中國(guó)藥典編制大綱，將要求進(jìn)一步加強(qiáng)高風(fēng)險(xiǎn)中藥注射劑的安全性控制。提高中藥注射液中有效成分的含量并降低致敏原的含量已經(jīng)成為中藥注射液臨床使用亟需解決的問(wèn)題，其對(duì)于擴(kuò)大中藥注射液的影響力和臨床應(yīng)用也具有很好的社會(huì)意義。
[0004]中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00710164082公開(kāi)了一種紅花注射液及其制備方法，此發(fā)明的紅花注射液以紅花為主料，采用水提、醇沉、冷藏，超臨界萃取，超濾的方法使藥物的含量提高，雜質(zhì)減少，配以一定比例的乙二胺四乙酸二鈉、偏重亞硫酸鈉、氫氧化鈉等其他輔料，按重量份數(shù)配比制成注射劑。此法明未解決紅花主要成分的熱穩(wěn)定性問(wèn)題，紅花主要有效成分(羥基紅花黃色素Α)含量不確定。中國(guó)專利CN 1895317(申請(qǐng)?zhí)?00610012864.0)公開(kāi)了一種紅花注射液及其制備方法，其特征在于包括如下步驟:(I)提取:以紅花為原料，加所投紅花重量8~20倍的水，在40~90°C通入惰性氣體保護(hù)的條件下，提取30~90分鐘，提取液過(guò)濾，濾渣再加入所投紅花重量8~20倍的水，控制溫度在80~10(TC提取兩次，提取時(shí)間為30~90min，過(guò)濾，合并三次濾液，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.0~1.3，得第一次紅花濃縮液；(2)醇沉:第一次紅花濃縮液在不斷攪拌下,加入70wt%~ 95wt%藥用乙醇，使醇含量達(dá)IOwt %~30wt%，靜置10~30分鐘，再加入80wt%~95wt%乙醇使醇含量達(dá)50wt%~ 70wt%，冷藏靜置24~48小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀，濾液回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.0~1.2，再加乙醇使醇含量達(dá)60wt%~ 85wt%，冷藏靜置24~48h，過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.10~1.3，得到第二次紅花濃縮液；(3)水沉:第二次紅花濃縮液按體積比加入5~20倍量去離子水，冷藏靜置12~48小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀，控制溫度在60°C以下，減壓濃縮濾液至相對(duì)密度為1.0~1.05，得到第三次紅花濃縮液；(4)配液:第三次紅花濃縮液用20wt%~50被％氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.0~8.0，加注射用水使紅花溶液的最終體積與所投紅花重量比例為2升:I千克，過(guò)濾，灌封，滅菌，即得紅花注射液成品。此法明同樣未解決紅花主要成分的熱穩(wěn)定性問(wèn)題，紅花主要有效成分(羥基紅花黃色素A)含量并不確定。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述不足之處而提供一種具有活血化瘀的功效，用于治療閉塞性腦血管疾病、冠心病、脈管炎等疾病，有效成份含量明確且含量高，雜質(zhì)少，安全性好的紅花注射液的制備方法。
[0007]本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案解決上述技術(shù)問(wèn)題:
本發(fā)明一種紅花注射液的制備方法，其包括如下步驟:將紅花藥材超微粉碎，使用60%乙醇，50°C保溫循環(huán)溫浸三次后合并煎液并過(guò)濾，濾液濃縮成浸膏后，依次經(jīng)過(guò)兩次醇沉，一次水沉，電滲析除去金屬離子，最后采用中空纖維聯(lián)合復(fù)合卷式超濾膜超濾的方法除去大分子等無(wú)效成份。
[0008]作為本發(fā)明所優(yōu)選的一種實(shí)施方式，所述紅花注射液的制備方法包括如下步驟:
1、制備浸膏
取除去雜質(zhì)后的紅花后超微粉碎，適用60%乙醇，50°C保溫循環(huán)溫浸三次，第一次
0.5-3小時(shí)，第二次0.5-2小時(shí)，第三次10-60分鐘，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為
1.16 ~1.26 (50-600C)o
[0009]2、醇沉
向?yàn)V液濃縮液中加入乙醇使含醇量達(dá)50-80%，2-8°C冷藏，靜置12-60小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.10~1.14(50-60°C)，再加入乙醇使含醇量達(dá)60-90%，2-8°C冷藏，靜置12-60小時(shí)。
[0010]3、水沉
取二次醇沉液用(60.45 ilm濾膜過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.16~1.20，加5-15倍量水，冷藏，靜置16~24小時(shí)。
[0011]4、電滲析除去金屬離子
取水沉液用(60.45 濾 膜濾過(guò)，通過(guò)電滲析儀除去金屬離子，藥液流速保持在50-500L/小時(shí)，純化水流速保持在800-1200L/小時(shí)。
[0012]5、熱處理
電滲析液濃縮至相對(duì)密度為1.02~1.04 (50-60°C)，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值7.5~8.0，115-120°C熱處理40-60分鐘，2-8°C冷藏，靜置72-600小時(shí)，6、配料
取上清液先用0.45 μ m濾膜過(guò)濾，再用8000-10000道爾頓分子量的中空纖維膜超濾，最后用三級(jí)卷式超濾膜超濾，濾液加注射用水后濾過(guò)，充氮，灌封，115-121°C滅菌12-40分鐘，即得。
[0013]7、灌封滅菌
將安瓿瓶經(jīng)清洗滅菌后，裝入藥液，115-121°C滅菌12-40分鐘。
[0014]上述所述的紅花注射液的制備方法中，所述步驟1、步驟2、步驟3、步驟5中的濃縮溫度均為50-60°C。
[0015]上述所述的紅花注射液的制備方法中，所述紅花注射液為采用以下重量組份的原料藥制成的注射劑:紅花200-1000份，注射用水1000份。優(yōu)選為紅花500份、注射用水1000份。
[0016]本發(fā)明實(shí)施例7表明采用本發(fā)明制備工藝得到的紅花注射液中的羥基紅花黃色素A標(biāo)準(zhǔn)化濃度均顯著高于樣品6中羥基紅花黃色素A的標(biāo)準(zhǔn)化濃度，這表明采用本發(fā)明制備工藝中單位紅花藥材中有效成分的提取率更高，而這不僅可以顯著降低藥物的成本，更能增強(qiáng)紅花注射液的治療效果。本發(fā)明實(shí)施例8表明采用本發(fā)明制備工藝的紅花注射液中的大分子雜質(zhì)濃度在5.4-7.1之間,其濃度遠(yuǎn)低于樣品6中大分子雜質(zhì)濃度,這表明本發(fā)明制備工藝可以有效地去除紅花注射液中大分子雜質(zhì)，其對(duì)于降低紅花注射液在臨床使用中的不良反應(yīng)或過(guò)敏具有重要的意義。
[0017]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下所述的技術(shù)優(yōu)勢(shì):本發(fā)明中的紅花，活血通經(jīng)，散瘀止痛。用 于經(jīng)閉,痛經(jīng),惡露不行，(徵)瘕痞塊,跌撲損傷,瘡瘍腫痛。紅藥注射液活血化瘀。用于治療閉塞性腦血管疾病，冠心病，脈管炎。臨床療效確切。但由于原工藝簡(jiǎn)單，導(dǎo)致有效成份含量不高，雜質(zhì)太多，導(dǎo)致臨床使用副作用大，不良反應(yīng)多。針對(duì)這一缺陷，本發(fā)明優(yōu)化了紅花注射液的生產(chǎn)工藝，采用藥材超微粉碎、60%乙醇溫浸提取、電滲析除去金屬離子等氧化劑、延長(zhǎng)沉降時(shí)間、藥液分別采用8000-10000道爾頓分子量的中空纖維膜超濾，最后用三級(jí)卷式超濾膜超濾、改進(jìn)成品的滅菌參數(shù)，從而使用產(chǎn)品有效成份含量大大提高，大分子等無(wú)效成份幾乎除盡，無(wú)菌和熱原得到有效保證，從而消除臨床上的不良反應(yīng)和藥物的副作用。
[0018]
【具體實(shí)施方式】
[0019]以下通過(guò)【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步描述本發(fā)明，但本發(fā)明不僅僅限于以下實(shí)施例。在本發(fā)明的范圍內(nèi)或者在不脫離本發(fā)明的內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)，對(duì)本發(fā)明所述的制備方法進(jìn)行適當(dāng)改進(jìn)或替換，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0020]實(shí)施例1:本發(fā)明紅花注射液的制備方法 1、制備浸膏
取除去雜質(zhì)后的紅花藥材200g，超微粉碎后裝入棉布袋中，在多能提取罐中鋪平，加60%乙醇，50°C保溫循環(huán)溫浸三次，第一次2小時(shí)，第二次I小時(shí)，第三次40分鐘，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.16 (50-60°C)ο[0021]2、醇沉
加乙醇使含醇量達(dá)80 %，8°C冷藏，靜置60小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為.14 (50-60°C)，再加乙醇使含醇量達(dá)60%，8°C冷藏，靜置12小時(shí)。
[0022]3、水沉 取二次醇沉液用0 0.45 iim濾膜過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.16，加15倍量水，冷藏，靜置24小時(shí)。
[0023]4、電滲析除去金屬離子
取水沉液用(60.45 濾膜濾過(guò)，通過(guò)電滲析儀除去金屬離子，藥液流速保持在50-500L/小時(shí)，純化水流速保持在800-1200L/小時(shí)。
[0024]5熱處理
電滲析液濃縮至相對(duì)密度為1.04 (50-60°C)，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值8.0，120°C熱處理40分鐘，8°C冷藏，靜置400小時(shí)，
6配料
取上清液先用0.45 y m濾膜過(guò)濾，再用8000-10000道爾頓分子量的中空纖維膜超濾，最后用三級(jí)卷式超濾膜超濾,濾液加注射用水使成1000ml，濾過(guò)，充氮，灌封，115-121°C滅菌30分鐘。
[0025]7灌封滅菌
將安瓿瓶經(jīng)清洗滅菌后，裝入藥液，115-121°C滅菌30分鐘，即得。
[0026]實(shí)施例2:本發(fā)明紅花注射液的制備方法 1、制備浸膏
取除去雜質(zhì)后的紅花紅花500g，超微粉碎后裝入棉布袋中，在多能提取罐中鋪平，加60%乙醇，50°C保溫循環(huán)溫浸三次，第一次3小時(shí)，第二次0.5小時(shí)，第三次60分鐘，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.26 (50-60°C)o
[0027]2、醇沉
加乙醇使含醇量達(dá)80%，2°C冷藏，靜置12小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.10 (50-60°C)，再加乙醇使含醇量達(dá)90%，2-8°C冷藏，靜置24小時(shí)。
[0028]3、水沉
取二次醇沉液用(60.45 iim濾膜過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.20，加5倍量水，冷藏，靜置16小時(shí)。
[0029]4、電滲析除去金屬離子
取水沉液用(60.45 濾膜濾過(guò)，通過(guò)電滲析儀除去金屬離子，藥液流速保持在50-500L/小時(shí)，純化水流速保持在800-1200L/小時(shí)。
[0030]5熱處理
電滲析液濃縮至相對(duì)密度為1.02~1.04 (50-60°C)，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值7.5，115°C熱處理40分鐘，2°C冷藏，靜置72小時(shí)，
6配料
取上清液先用0.45 y m濾膜過(guò)濾，再用8000-10000道爾頓分子量的中空纖維膜超濾，最后用三級(jí)卷式超濾膜超濾,濾液加注射用水使成1000ml，濾過(guò)，充氮，灌封，115-121°C滅菌40分鐘。[0031]7灌封滅菌
將安瓿瓶經(jīng)清洗滅菌后，裝入藥液，115-121°C滅菌40分鐘，即得。
[0032]實(shí)施例3:本發(fā)明紅花注射液的制備方法 1、制備浸膏
取除去雜質(zhì)后的紅花400g，超微粉碎后裝入棉布袋中，在多能提取罐中鋪平，加60%乙醇，50°C保溫循環(huán)溫浸三次，第一次2小時(shí)，第二次I小時(shí)，第三次30分鐘，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20 (50-60°C)ο
[0033]2、醇沉
加乙醇使含醇量達(dá)60%，4°C冷藏，靜置40小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.12 (50-60°C)，再加乙醇使含醇量達(dá)70%，4°C冷藏，靜置36小時(shí)。
[0034]3、水沉
取二次醇沉液用Φ0.45μπι濾膜過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.18，加10倍量水，冷藏，靜置16~24小時(shí)。
[0035]4、電滲析除去金屬離子
取水沉液用Φ0.45 μ m濾膜濾過(guò)，通過(guò)電滲析儀除去金屬離子，藥液流速保持在50-500L/小時(shí)，純化水流速保持在800-1200L/小時(shí)。
[0036]5熱處理
電滲析液濃縮至相對(duì)密度為1.02 (50-60°C)，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值7.7，120°C熱處理50分鐘，6°C冷藏，靜置200小時(shí)，
6配料
取上清液先用0.45 μ m濾膜過(guò)濾，再用8000-10000道爾頓分子量的中空纖維膜超濾，最后用三級(jí)卷式超濾膜超濾,濾液加注射用水使成1000ml，濾過(guò)，充氮，灌封，12TC滅菌20分鐘。
[0037]7灌封滅菌
將安瓿瓶經(jīng)清洗滅菌后，裝入藥液，121°C滅菌20分鐘，即得。
[0038]實(shí)施例4:本發(fā)明紅花注射液的制備方法 1、制備浸膏
取除去雜質(zhì)后的紅花800g，超微粉碎后裝入棉布袋中，在多能提取罐中鋪平，加60%乙醇，50°C保溫循環(huán)溫浸三次，第一次2.5小時(shí)，第二次1.25小時(shí)，第三次10-60分鐘，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.24 (50-60°C)ο
[0039]2、醇沉
加乙醇使含醇量達(dá)65 %，6°C冷藏，靜置48小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.13 (50-60°C)，再加乙醇使含醇量達(dá)60-90%，6°C冷藏，靜置40小時(shí)。
[0040]3、水沉
取二次醇沉液用Φ0.45 μ m濾膜過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.20，加12倍量水，冷藏，靜置20小時(shí)。
[0041]4、電滲析除去金屬離子
取水沉液用Φ0.45 μ m濾膜濾過(guò)，通過(guò)電滲析儀除去金屬離子，藥液流速保持在50-500L/小時(shí)，純化水流速保持在800-1200L/小時(shí)。[0042]5熱處理
電滲析液濃縮至相對(duì)密度為1.02~1.04 (50-60°C)，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值7.5~8.0，115-120°C熱處理40-60分鐘，2-8°C冷藏，靜置72-600小時(shí)，
6配料
取上清液先用0.45 y m濾膜過(guò)濾，再用8000-10000道爾頓分子量的中空纖維膜超濾，最后用三級(jí)卷式超濾膜超濾，濾液加注射用水使成1000ml，濾過(guò)，充氮，灌封，115°C滅菌30分鐘。
[0043]7灌封滅菌
將安瓿瓶經(jīng)清洗滅菌后，裝入藥液，121°C滅菌30分鐘，即得。
[0044]實(shí)施例5:本發(fā) 明紅花注射液的制備方法
1、制備浸膏
取除去雜質(zhì)后的紅花lOOOg，超微粉碎后裝入棉布袋中，在多能提取罐中鋪平，加60%乙醇，50°C保溫循環(huán)溫浸三次，第一次3小時(shí)，第二次1.5小時(shí)，第三次30分鐘，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.16 (50-60°C)o
[0045]2、醇沉
加乙醇使含醇量達(dá)80 %，8°C冷藏，靜置60小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.12 (50-60°C)，再加乙醇使含醇量達(dá)60%，6°C冷藏，靜置60小時(shí)。
[0046]3、水沉
取二次醇沉液用(60.45 iim濾膜過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.20，加15倍量水，冷藏，靜置20小時(shí)。
[0047]4、電滲析除去金屬離子
取水沉液用(60.45 濾膜濾過(guò)，通過(guò)電滲析儀除去金屬離子，藥液流速保持在50-500L/小時(shí)，純化水流速保持在800-1200L/小時(shí)。
[0048]5熱處理
電滲析液濃縮至相對(duì)密度為1.04 (50-60°C)，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值8.0，115°C熱處理40分鐘，8°C冷藏，靜置300小時(shí)。
[0049]6 配料
取上清液先用0.45 y m濾膜過(guò)濾，再用8000-10000道爾頓分子量的中空纖維膜超濾，最后用三級(jí)卷式超濾膜超濾，濾液加注射用水使成1000ml，濾過(guò)，充氮，灌封，121°C滅菌25分鐘。
[0050]7灌封滅菌
將安瓿瓶經(jīng)清洗滅菌后，裝入藥液，121°C滅菌25分鐘，即得。
[0051]參比實(shí)施例:專利200610012864.0實(shí)施例1工藝制備得到的紅花注射液 取紅花20Kg，加10倍重量的水，通入氮?dú)庠?0°C條件下，提取80分鐘，過(guò)濾，濾渣再加
入所投紅花重量8倍量的水，90°C提取兩次，第一次提取50min，第二次提取30min，過(guò)濾，合并三次濾液，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20，得第一次紅花濃縮液；第一次紅花濃縮液在不斷攪拌下，加入80被％藥用乙醇，使醇含量達(dá)20wt%，靜置30分鐘，再加入95wt%乙醇使醇含量達(dá)70wt%，冷藏靜置48小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀，濾液回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.2，再加乙醇使醇含量達(dá)95wt%，冷藏靜置48h，過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.20，得到第二次紅花濃縮液；在第二次紅花濃縮液按體積比加入10倍量去離子水，冷藏靜置24小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀，控制溫度在60°C以下，減壓濃縮濾液至相對(duì)密度為
1.03，得到第三次紅花濃縮液；第三次紅花濃縮液用30Wt%氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.7，加注射用水使紅花溶液的最終體積為40升，過(guò)濾，灌封，滅菌，即得紅花注射液成品。
[0052]實(shí)施例6:本發(fā)明紅花注射液中羥基紅花黃色素A含量測(cè)定
6.1 色譜條件 Sinochrom 0DS-BP 柱(5 μ m, 150 mmX4.6 mm),流動(dòng)相:甲醇一乙臆一
0.7%磷酸溶液(26: 2: 72)，檢測(cè)波長(zhǎng)403 nm，柱溫25°C，流速1.0 ml/min。
[0053]6.2對(duì)照品溶液和供試液的制備對(duì)照品:精密稱取羥基紅花黃色素A對(duì)照品
0.003 45 g,置于25 ml容量瓶中，加25%甲醇定容，成為0.138 mg/ml的對(duì)照品溶液，經(jīng)
0.45 μ m微孔濾膜濾過(guò)，即得。供試液:待測(cè)紅花注射液(樣品1-5分別按照本發(fā)明實(shí)施例1-5制備得到，參比樣品為按照專利200610012864.0實(shí)施例1工藝制備得到的紅花注射液)，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定。
[0054]6.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別取對(duì)照品溶液5、10、15、20、25、30、35 μ 1，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程:Υ=2 722 613Χ-565 (r=0.999 9) [X為羥基紅花黃色素A的絕對(duì)進(jìn)樣量(μ g)，Y為峰面積]。羥基紅花黃色素A在進(jìn)樣量為0.69~4.83μg范圍內(nèi)具有良好的線性。
[0055]6.4精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液10 μ 1，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定記錄色譜峰面積，計(jì)算精密度。RSD為1.0%。
[0056]6.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液分別在0、2、4、6、8、10、24、36、48 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積值，計(jì)算精密度。RSD為1.0%。
[0057]6.6重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批樣品6份，按供試品制備方法制備，測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果平均值為1.02%, RSD為1.86%。
[0058]6.7回收率試驗(yàn)精密稱取9份已知含量的紅花粉末(含HSYA量為1.02%) 0.25g，置具塞錐形瓶中，分成3組，每組分別加入濃度為1.112 mg/ml的HSYA對(duì)照品儲(chǔ)備液3.0、5.0、7.0 ml,加入25%甲醇溶液使得溶劑總量為50 ml，按6.2項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理，進(jìn)樣10 μ 1，測(cè)定峰面積并計(jì)算回收率。平均收率100%，RSD為0.3%。
[0059]6.8采用不同制備工藝制備得到的紅花注射液中羥基紅花黃色素A的含量如表1所示。其中標(biāo)準(zhǔn)化濃度的計(jì)算方法為:標(biāo)準(zhǔn)化濃度=測(cè)得樣品的羥基紅花黃色素A濃度*紅花份數(shù)/注射用水份數(shù)。
[0060]表1采用不同工藝制備的紅花注射液中有效成分濃度
【權(quán)利要求】
1.一種紅花注射液的制備方法，其包括如下步驟:將紅花藥材超微粉碎，使用60%乙醇，50°C保溫循環(huán)溫浸三次后合并煎液并過(guò)濾，濾液濃縮成浸膏后，依次經(jīng)過(guò)兩次醇沉，一次水沉，電滲析除去金屬離子，最后采用中空纖維聯(lián)合復(fù)合卷式超濾膜超濾的方法除去大分子等無(wú)效成份。
2.如權(quán)利要求1所述的紅花注射液的制備方法，其特征在于，所述紅花注射液的制備方法包括如下步驟: I)制備浸膏:取除去雜質(zhì)后的紅花后超微粉碎，適用60%乙醇，50°C保溫循環(huán)溫浸三次，第一次0.5-3小時(shí)，第二次0.5-2小時(shí)，第三次10-60分鐘，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.16~1.26 (50-60。。); 2 )醇沉:向?yàn)V液濃縮液中加入乙醇使含醇量達(dá)50-80%，2-8°C冷藏，靜置12-60小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.10~1.14 (50-60°C)，再加入乙醇使含醇量達(dá)60-90 %，2-8 °C 冷藏，靜置 12-60 小時(shí)； 3)水沉:取二次醇沉液用(60.45 m濾膜過(guò)濾，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.16~1.20，加5-15倍量水，冷藏，靜置16~24小時(shí)； 4)電滲析除去金屬離子:取水沉液用(60.451!!!!濾膜濾過(guò)，通過(guò)電滲析儀除去金屬離子，藥液流速保持在50-500L/小時(shí)，純化水流速保持在800-1200L/小時(shí)； 5)熱處理:電滲析液濃縮至相對(duì)密度為1.02~1.04 (50-60°C)，用20%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值7.5~8.0，115-120°C熱處理40-60分鐘，2_8°C冷藏，靜置72-600小時(shí)； 6)配料:取上清液先用0.45 y m濾膜過(guò)濾，再用8000-10000道爾頓分子量的中空纖維膜超濾，最后用三級(jí)卷式超濾膜超濾，濾液加注射用水后濾過(guò)，充氮，灌封，115-121°C滅菌12-40分鐘； 7)灌封滅菌:將安瓿瓶經(jīng) 清洗滅菌后，裝入藥液，115-121°C滅菌12-40分鐘，即得。
3.如權(quán)利要求2所述的紅花注射液的制備方法，其特征在于，所述步驟1、步驟2、步驟3、步驟5中的濃縮溫度均為50-60°C。
4.如權(quán)利要求2所述的紅花注射液的制備方法，其特征在于，所述紅花注射液為采用以下重量組份的原料藥制成的注射劑:紅花200-1000份，注射用水1000份。
5.如權(quán)利要求4所述的紅花注射液的制備方法，其特征在于，所述紅花注射液為采用以下重量組份的原料藥制成的注射劑:紅花500份，注射用水1000份。
【文檔編號(hào)】A61P9/14GK103735592SQ201310702809
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年12月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月19日
【發(fā)明者】黃正軍, 何德茍, 肖作武, 石守剛 申請(qǐng)人:湖北武當(dāng)金鼎制藥有限公司